- Vật phẩm được cố định trong dung dịch glutaraldehyt 4% trong dung dịch đệm cacodylat thời gian 5 giờ ở
3.3.3.Hình thái siêu cấu trúc phôi ngày 5 trước đông lạnh và sau rã đông
A. Phôi tươi B Phôi sống nguyên vẹn sau rã đông
3.3.3.Hình thái siêu cấu trúc phôi ngày 5 trước đông lạnh và sau rã đông
3.3.3.1. Hình thái bề mặt phôi ngày 5 quan sát trên ảnh SEM.
Quan sát phôi tươi ngày 5 dưới kính hiển vi điện tử quét thấy phôi có hình cầu, trên bề mặt có thể quan sát thấy các tơ collagen mảnh của màng ZP (ảnh 3.19; 3.20). Sau rã đông thấy phôi nào sống thì có bề mặt căng tròn đều, tuy nhiên trên bề mặt màng ZP thấy ít thô ráp hơn, không quan sát rõ các tơ collagen như phôi tươi (ảnh 3.21; 3.22). Những phôi thoái hóa sau rã đông có bề mặt lồi lõm không đều do các phôi bào bên trong thoái hóa nên hình ảnh phôi bị co rúm (ảnh 3.23)
Ảnh 3.19. Phôi tươi ngày 5 (SEM - 1500×)
Phôi có hình cầu, bề mặt nhìn rõ phần lồi lên do các phôi bào bên trong màng trong suốt
85
Ảnh 3.20. Bề mặt màng trong suốt phôi tươi ngày 5 (SEM - 5000×)
Độ phóng đại lớn hơn, bề mặt phôi nhìn rõ các glycoprotein dạng sợi trên bề mặt màng trong suốt
Ảnh 3.21. Phôi ngày 5 sau rã đông (SEM - 1000×)
Phôi có hình cầu, bề mặt nhìn rõ phần lồi lên do các phôi bào bên trong màng trong suốt
86
3.3.3.2. Hình thái siêu cấu trúc phôi ngày 5 qua ảnh TEM
* Phôi ngày thứ 5 trước đông lạnh (phôi tươi) quan sát dưới kính hiển vi điện tử ở độ phóng đại 800× thấy rõ màng trong suốt, các tế bào lá nuôi dẹt mỏng nằm sát phía trong màng trong suốt, có thể thấy khoang dịch và một phần của tế bào ICM (ảnh 3.24).
Ảnh 3.22. Bề mặt màng trong suốt của phôi ngày 5 sau rã đông (SEM - 5000×)
Độ phóng đại lớn hơn, bề mặt phôi khó quan sát các glycoprotein dạng sợi trên bề mặt màng trong suốt
Ảnh 3.23. Phôi ngày 5 thoái hóa sau rã đông (mũi tên) (SEM - 1000×)
Hình ảnh phôi thoái hóa bị biến dạng, phôi bào bên trong thoái hóa co rúm làm giảm kích thước phôi, bề mặt phôi nhăn nhúm
87
- Quan sát ở độ phóng đại lớn 10.000× chúng tôi thấy màng trong suốt của phôi ngày 5 tươi cũng giống như phôi ngày thứ 3 tức là có thể nhìn rất rõ các glycoprotein dạng sợi và hướng của các sợi glycoprotein này (ảnh 3.25).
- Quan sát phôi tươi ngày 5 ở độ phóng đại 3000× chúng tôi thấy rõ màng trong suốt, tế bào lá nuôi với các bào quan, sự liên kết chặt chẽ giữa các tế bào lá nuôi với nhau và với tế bào trong phôi (ảnh 3.26)
- Quan sát hình ảnh tế bào trong phôi và tế bào lá nuôi phôi của phôi tươi ngày 5 ở độ phóng đại 4000× thấy tế bào có màng, bào tương, nhân và hạt nhân rõ, trong bào tương thấy các bào quan như ti thể, lưới nội bào, các hạt glycogen…(ảnh 3.27, 3.28)
Ảnh 3.24. Phôi tươi ngày 5 (TEM - 800×)
1. Màng trong suốt; 2. Tế bào lá nuôi; 3. Tế bào ICM; 4. Khoang phôi nang.
1
2
4
88
Ảnh 3.25. Màng trong suốt của phôi tươi ngày 5 (TEM – 10.000×)
1. Ranh giới màng ZP; 2. Glycoprotein dạng sợi
Ảnh 3.26. Phôi tươi ngày 5 (TEM – 3.000×)
1. Màng ZP; 2. Tế bào lá nuôi; 3. Tế bào trong phôi
2
1
3 2 2
89
Ảnh 3.27. Tế bào nụ phôi của phôi tươi ngày 5 (TEM – 5.000×)
1. Nhân tế bào; 2. Màng nhân; 3. Ty thể; 4. Lưới nội bào.
Ảnh 3.28. Tế bào lá nuôi của phôi tươi ngày 5 (TEM - 4000×)
1. Hạt nhân; 2. Màng nhân; 3. Ty thể; 4. Lưới nội bào.
3 2 2 1 1 2 4 3 4
90
* Quan sát phôi ngày 5 sống nguyên vẹn sau rã đông dưới kính hiển vi điện tử truyền qua thấy rõ màng trong suốt, tế bào lá nuôi nằm sát màng trong suốt và tế bào nụ phôi, liên kết giữa các tế bào này rất chặt chẽ (ảnh 3.29).
- Quan sát màng trong suốt của phôi ngày 5 sau rã đông ở độ phóng đại 10.000× thấy màng trong suốt cũng bị giảm mật độ điện tử hơn so với trước đông lạnh, không quan sát thấy rõ các glycoprotein dạng sợi như phôi trước đông lạnh (ảnh 3.30).
- Quan sát tế bào lá nuôi phôi và tế bào nụ phôi của phôi ngày 5 sống sau rã đông ở độ phóng đại 1500×, chúng tôi thấy tế bào đều có màng, bào tương, nhân, hạt nhân rõ ràng, màng nhân và màng tế bào không thay đổi, trong bào tương có đầy đủ các bào quan như ti thể, lưới nội bào …giống như phôi trước đông. Tuy nhiên, quan sát thấy mật độ điện tử ở những tế bào này giảm, có xuất hiện những không bào trong bào tương (ảnh 3.31; 3.32).
Ảnh 3.29. Phôi ngày 5 sau rã đông (TEM - 1500×)
1. Màng trong suốt; 2. Tế bào lá nuôi; 3. Khoang phôi nang; 4. Tế bào ICM
3
4
2
91
Ảnh 3.30. Màng trong suốt của phôi ngày 5 sau rã đông (TEM – 10.000×)
1. Ranh giới màng ZP; 2. Glycoprotein dạng sợi
Ảnh 3.31. Tế bào nụ phôi của phôi ngày 5 sống sau rã đông (TEM – 2.000×)
1. Nhân tế bào; 2. Hạt nhân; 3. Ty thể; 4. Túi không bào.
3 1 1
2
2 1
92