- Nước (Rinsing Water RW)
3.3.7. Phương pháp xác ựịnh mức ựộ kháng kháng sinh ựối với các chủng vi khuẩn phân lập ựược.
vi khuẩn phân lập ựược.
Xác ựịnh tắnh kháng kháng sinh theo phương pháp khuếch tán trên thạch dựa theo nguyên lý của Kirby Ờ Bauer (Bauer, 1966).
Phương pháp: Vi khuẩn ựược nuôi trong các môi trường ựặc hiệu (vi khuẩn E.coli nuôi trong môi trường MacConkey, vi khuẩn Salmonella nuôi trong môi trường XLT4), ựể tủ ấm 37ỨC/18 - 24h.
Chuẩn bị môi trường: Môi trường Mueller Ờ Hinton pha chế theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Hấp tiệt trùng ựể nguội ựến 45 Ờ 50oC rót môi trường ra ựĩa petri (khoảng 25ml/1 ựĩa). Các ựĩa thạch ựể nằm trên mặt phẳng ngang và ựược bảo quản ở 2 Ờ 8oC.
Từ một ựĩa khuẩn lạc thuần ựã ựược nuôi cấy, dùng tăm bông vô trùng ựã ựược thấm ướt bằng nước thịt hoặc nước sinh lý chọn một khuẩn lạc ựiển hình trên môi trường ựặc hiệu của vi khuẩn ria cấy ựều trên môi trường thạch
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 40
Mueller - Hinton. đợi 15 phút cho ráo mặt thạch.
Dùng kẹp vô trùng ựặt các khoanh giấy tẩm kháng sinh lên trên bề mặt thạch sao cho khoảng cách giữa các khoanh giấy với nhau tối thiểu là 2,4cm. Mỗi ựĩa thạch có thể ựặt ựược 6 khoanh kháng sinh, một khoanh ở giữa và 5 khoanh ở xung quanh. Khoảng cách giữa các khoanh kháng sinh là ựều nhau. để các ựĩa thạch ở nhiệt ựộ phòng khoảng 30 phút ựể kháng sinh trong khoanh giấy khuếch tán ra một cách ựồng ựều ở thạch. Sau ựó cho các ựĩa thạch ựã ựặt giấy tẩm kháng sinh vào tủ ấm 37ỨC/18 - 24h.
đọc kết quả: đo ựường kắnh vòng vô khuẩn, ựường kắnh của vòng ức chế ựược ựo bằng thước ựo từ phắa mặt sau của ựĩa. Nếu cạnh của vòng ức chế không rõ nét, phải ựọc khu vực ức chế xấp xỉ 80% sự ức chế. Nếu có hiện tượng mọc vòng cao ở bờ ức chế (thành bờ cao) thì khu vực ức chế ựược ựo từ bờ này tới bờ kia. đường kắnh vòng vô khuẩn ựược tắnh theo mm và ựược ựánh giá theo bảng ựánh giá ựường kắnh vòng vô khuẩn (mẫn cảm cao (H), mẫn cảm trung bình (I), kháng (R)). Nếu có khuẩn lạc mọc trong vùng ức chế thì phải làm lại.