4. Thời gian và địa điểm nghiên cứu
3.4.4. Ảnh hưởng của pH ban đầu
pH môi trường tác động trực tiếp lên VSV, ảnh hưởng đến sự phát triển và khả năng sinh tổng hợp enzyme của VSV. Do đó pH là một trong những yếu tố quan trọng cần được nghiên cứu. TN nhằm xác định pH tối ưu giúp VSV tổng hợp enzyme protease có hoạt tính
74 0 50 100 150 200 250 5 6 7 8 9 10 11 12 pH môi trường H oạt tí nh pt ot eas e (U /g)
cao nhất. Chúng tôi tiến hành nuôi cấy chủng B.subtilis N18 trên MT tối ưu theo mục 3.3.3 với các pH khác nhau. Kết quả được thể hiện ở bảng 3.8 và hình 3.13.
Bảng 3.8. Ảnh hưởng của pH đến khả năng tổng hợp protease của chủng B.subtilis N18
STT pH Hoạt tính protease (U/g)
1 6 137,62d ± 0,22 2 7 190,31c ± 0,37 3 8 220,85b ± 0,94 4 9 230,31a ± 0,75 5 10 192,03c ± 0,86 6 11 72,68e ± 0,22 7 12 33,76g ± 0,22
* Trong cùng một cột, các giá trị được đánh dấu bởi các chữ cái giống nhau thì sự khác
nhau không có ý nghĩa về mặt thống kê theo phân tích ANOVA (α = 0,05)
Hình 3.13. Ảnh hưởng của pH đến khả năng tổng hợp protease của chủng B.subtilis N18
Nhận xét: Kết qủa trình bầy ở bảng 3.8 và hình 3.13 cho thấy trị số pH đầu tiên của MT có ảnh hưởng đến sinh tổng hợp protease của chủng B.subtilis N18. Với pH ban đầu là
75
6,0 thì hoạt tính protease thấp 137,62 U/g. Tại pH 11 và 12 thì hoạt tính protease cũng giảm mạnh, tương ứng là 72,68 U/g và 33,76 U/g. Hoạt tính enzyme có sự thay đổi như vậy có thể giải thích là khi pH quá cao hoặc quá thấp sẽ làm ức chế quá trình trao đổi chất do ion H+ trong canh trường có ảnh hưởng lớn đến hoạt động của VSV, chúng có khả năng làm thay đổi điện tích các chất của vỏ tế bào, làm tăng hay giảm mức độ thẩm thấu các chất dinh dưỡng cũng như chiều hướng của quá trình lên men, dẫn đến ảnh hưởng đến khả năng sinh trưởng và hoạt hóa enzyme. pH ban đầu thích hợp cho sự sinh trưởng cũng như tổng hợp protease của chủng B.subtilisN18 từ 8,0 – 10,0 và tối ưu ở pH 9 (đạt 230,31 U/g). Kết quả này cũng phù hợp với nghiên cứu của các tác giả khác. Saurabh S. et al., (2007)[50] đã kiểm tra sự phát triển và sinh tổng hợp protease của chủng Bacillus subtilis SBP 29. Hoạt tính tối đa protease đạt được trên MT có pH tối ưu là 9,5. Chang Jin Liu et al., (2004) [24] đã tối ưu hóa quá trình lên men sản xuất nattokinase ở chủng B.subtilis SBS (J). Điều kiện lên men tối ưu ở pH ban đầu 8,3. Nadeem et al.,(2008)[43] đã nghiên cứu sản xuất protease bằng chủng Bacillus licheniformis ưa kiềm trong môi trường tối ưu có pH 10. Nurullah et al.,(2011) [44] đã nghiên cứu sản xuất protease kiềm từ chủng B.subtilis RSKK96 bằng phương pháp lên men bán rắn. Hoạt tính enzyme đạt được cao nhất trên môi trường pH ban đầu 9.