4. Thời gian và địa điểm nghiên cứu
2.3.21. Khảo sát một số đặc tính của chế phẩm enzyme protease thu nhận bằng ethanol
ethanol
2.3.21.1. pH hoạt động tối ưu
- Tiến hành phản ứng enzyme trên cơ chất casein 1,5%, ở nhiệt độ 370C, tỉ lệ enzyme ở các mẫu là như nhau.
- Chuẩn bị các dung dịch đệm có pH khác nhau.
- Thay đổi pH các mẫu ở các mức khác nhau: 5,0; 6,0; 7,0; 8,0; 9,0; 10,0; 11,0. - Tiến hành xác định hoạt tính protease của CPE theo Anson cải tiến.
- Xác định pH tối ưu cho hoạt tính protease cao nhất.
2.3.21.2. Nhiệt độ hoạt động tối ưu
- Khảo sát hoạt tính protease của CPE trong MT có pH 8,cơ chất là casein 1,5%, các mẫu được bố trí thí nghiệm ở các mức nhiệt độ 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 600
C. - Sau thời gian phản ứng, tiến hành xác định hoạt tính của CPE protease. - Xác định nhiệt độ tối ưu cho hoạt động của protease.
2.3.21.3. Nồng độ cơ chất tối ưu
- Tiến hành phản ứng enzyme ở nhiệt độ 400
C, pH 8,
- Thay đổi nồng độ cơ chất casein ở các mức khác nhau: 0,5%; 1,0%; 1,5%; 2,0%; 2,5%; 3,0%.
- Tiến hành xác định hoạt tính protease của CPE theo Anson cải tiến. - Xác định nồng độ cơ chất tối ưu cho hoạt tính protease cao nhất.
2.3.22. Phương pháp xử lí số liệu
Các thí nghiệm được tiến hành lặp lại 3 lần. Kết quả được trình bày bằng giá trị trung bình ± sai số được tính bằng phần mềm Microsoft Excel 2010. Sử dụng phần mềm Statgraphics Plus 3.0 để phân tích thống kê số liệu thí nghiệm và đánh giá sự khác biệt giữa các mẫu.
Có hai thí nghiệm tối ưu hóa MT được thực hiện theo mô hình tối ưu hóa các yếu tố trực giao bậc 2, cấu trúc có tâm, sử dụng phần mềm Modde 5.0 để thiết kế và xử lý số liệu thực nghiệm, đó là:
59
- Tối ưu hóa ảnh hưởng của nồng độ glucose và tween 80 đến hoạt tính protease. - Tối ưu hóa ảnh hưởng của cám mì, cám gạo và bột đậu nành đến hoạt tính protease.
60
CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN