+ Nước muối tinh khiết 75g.
+ Peptone 5g.
+ Đường Manitol 20g.
+ Phenol red 0,5% 5ml.
+ Beef extract 5g.
+ PH 7,5.
+ Nước trao đổi ion 1000ml.
+ Cách pha: cân thật chính xác các chất trên cho vào becher. Cho vào 1 lit nước trao đổi ion. Dùng muỗng inox hay đũa thủy tinh khuấy nhẹ cho các chất tan hoàn toàn. Điều chỉnh pH = 7,5. Dùng dụng cụ phân phối cho vào mỗi ống nghiệm 5ml. Dùng bông không thấm nhét kín ống nghiệm lại, xếp vào hộp nhựa, sau đó ghi tên môi trường và ngày pha. Hấp thanh trúng 1210C/15 – 20 phút. Để nguội và bảo quản trong ngăn mát của tủ lạnh.
d) Chuẩn bị mẫu
Mẫu đông lạnh được bảo quản ở nhiệt độ dưới 00C. Đối với mẫu thường bảo quản nơi khô ráo thoáng mát, sạch sẽ ở nhiệt độ phòng.
Lượng lấy mẫu phân tích có trọng lượng không dưới 200g. Mẫu được mã hoá dựa vào số thứ tự trong sổ nhận mẫu.
Xếp mẫu gọn gàng ra khay theo thứ tự, thị trường. Mẫu đông lạnh được rã đông tự nhiên trước khi phá mẫu trong khoảng nhiệt độ từ 00C – 40C.
e) Chuẩn bị dụng cụ
Bao dập mẫu (vô trùng). Dùng bút lông ghi rõ ràng mã số lên giữa bao dập mẫu. Đĩa petri (vô trùng). Dùng bút lông ghi rõ thông tin sau: số mã hóa, ngày thực hiện, tên môi trường (hay tên chỉ tiêu), nồng độ pha loãng.
f) Chuẩn bị môi trường
Định tính: môi trường MSB đã được chuẩn bị sẵn, phân phối vào mỗi ống nghiệm 5ml.
Định lượng: môi trường BP thanh trùng được đun tan chảy và để nguội đến khoảng 450C, bổ sung 10ml dung dịch lòng đỏ trứng gà 20% và 2ml dung dịch telluritte de potassium 1%.
g) Tiến hành phân tích
Cắt mẫu: dùng kéo vô trùng cắt sát trên miệng bao mẫu tránh đụng mẫu bên trong. Dùng kéo vô trùng khác cắt ít nhất 10 điểm đại diện trên mẫu với trọng lương 10+0.1g, cho vào bao dập mẫu vô trùng lường 90ml dung dịch pha loãng mẫu đổ vào bao dập mẫu và đồng nhất mẫu trên máy dập mẫu trong thời gian 30 giây, ta được dung dịch mẫu có nồng độ pha loãng 10-1.
Pha loãng mẫu: dùng pipette ( thường loại 5ml có chia độ ) vô trủng hút 1ml dung dịch mẫu có nồng độ 10-1 ở trên cho vào ống nghiệm có sẵn 9ml dung dịch nước muối sinh lý ( 0,85% NaCl ) vô trùng, lắc đồng nhất trên máy lắc ta được dung dịch mẫu có nồng độ pha loãng 10-2.
Cấy mẫu: