III. NỘI DUNG, NGUYấN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
3.4. Phương phỏp nghiờn cứu
3.4.2.1. Phương phỏp kiểm tra vi khuẩn cú trong nước sử dụng cho giết mổ
Sử dụng phương phỏp lấy mẫu và xột nghiệm vi khuẩn nguồn nước theo quy trỡnh của Viện y học lao ủộng và vệ sinh mụi trường (2002) và tiờu chuẩn Việt Nam 2680 (TCVN, 1978) [36].
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦẦẦ 36
* Phương phỏp lấy mẫu
- Lấy mẫu nước mỏy tại vũi nước mỏy: Cần mở nước chảy hết cỡ trong vũi 2 - 3 phỳt. đúng vũi và khử khuẩn kỹ vũi nước bằng nhiệt ủộ bụng cồn. Mở vũi nước cho chảy mạnh 1 - 2 phỳt rồi ủiều chỉnh chảy vừa ủủ ủể lấy mẫu vào chai nỳt mài 500ml ủó ủược hấp, sấy tiệt trựng. Thao tỏc lấy mẫu cần phải ủảm bảo vụ trựng, mẫu phải bảo quản lạnh sau ủú chuyển về phũng thớ nghiệm.
- Lấy mẫu tại bể chứa: Khử trựng giỏ cõy Inox bằng cồn 70o, sau ủú ủặt chai nỳt mài 500ml (ủó ủược hấp, sấy tiệt trựng) cú buộc dõy ở nắp vào cõy giỏ treo. Thả chai lấy mẫu xuống ủộ sõu khoảng 0,3 - 0,5m, dật dõy nỳt mài ủể nước chảy vào ủầy chai thỡ kộo lờn, nghiờng cõy giỏ ủổ bớt phần nước trong chai mẫu, ủậy nỳt mài và ghi nhón lấy mẫu. Bao gúi, bảo quản lạnh và ủưa mẫu về phũng thớ nghiệm.
* Phương phỏp xỏc ủịnh vi khuẩn hiếu khớ
Sử dụng phương phỏp rút thạch ủể xỏc ủịnh vi khuẩn. Mẫu nước ủược pha loóng ở cỏc ủậm ủộ khỏc nhau: 10-1, 10-2, 10-3,Ầ Tuỳ theo ủộ sạch bẩn ủể quyết ủịnh mức ủộ pha loóng. Sử dụng pipet vụ trựng chuyển 1ml nước mẫu pha loóng vào giữa ủĩa Petri, mỗi ủộ pha loóng cấy vào hai ủĩa. Rút vào mỗi ủĩa pha loóng 12 - 15ml mụi trường thạch thường 45oC, xoay trũn ủĩa theo chiều kim ủồng hồ, sau ủú xoay ngược lại ủể trộn ủều mụi trường với mẫu nước kiểm tra. để ủĩa thạch ủụng tự nhiờn, ỳp ủĩa Petri chuyển vào tủ ấm 37oC trong 24 giờ.
đếm số khuẩn lạc mọc trờn bề mặt ủĩa thạch. để trỏnh nhầm lẫn cần ủưa ủĩa thạch lờn giỏ kớnh chia ụ ủể ủếm. Nếu vượt quỏ 300 khuẩn lạc/ủĩa Petri thỡ loại bỏ vào mẫu cần ủược pha loóng tiếp.
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦẦẦ 37 N (vk/1ml) = n D C B A+10 +100 +1000
Trong ủú: N: số lượng vi khuẩn trong 1ml nước
A: số lượng lạc trong 1ml nước nguyờn khụng pha loóng B: Số khuẩn lạc trong 1ml nước ở ủộ pha loóng 10-1 C: Số khuẩn lạc trong 1ml nước ở ủộ pha loóng 10-2 D: Số khuẩn lạc trong 1ml nước ở ủộ pha loóng 10-3 n: độ ủậm pha loóng
* Phương phỏp xỏc ủịnh vi khuẩn E.coli
- Sử dụng phương phỏp lờn men nhiều ống và tớnh kết quả số lượng E.coli bằng cỏch tra bảng tỡm số gần ủỳng MPN (Most Probable Number).
- Mẫu pha ở cỏc ủộ ủậm khỏc nhau: 10-1, 10-2, 10-3,Ầ Tuỳ theo ủộ sạch bẩn. Thụng thường một mẫu nuụi cấy ở 3 ủậm ủộ liờn tiếp.
- Mỗi ủộ pha loóng phải nuụi cấy 5 ống mụi trường canh thang CLP, ủể tủ ấm 42oC trong 24 giờ. Sau ủú cỏc ống mụi trường chuyển màu từ hồng ủỏ sang màu vàng và sinh hơi trong ống Durham thỡ ria cấy chuyển sang thạch Endo ủể tủ ấm 42oC trong 24 giờ.
Trờn mụi trường Endo khuẩn lạc xuất hiện màu ỏnh kim, ủú cú thể là khuẩn lạc E.coli cú nguồn gốc từ phõn. Làm phản ứng IMVIC ủể xỏc ủịnh vi khuẩn.
Tớnh kết quả: Ghi chộp số lượng cỏc ống dương tớnh, tra bảng MPN tớnh số E.coli trong một lớt nước (Coliindex).