6. Thời gian và địa điểm nghiên cứu
2.2.13. Phương pháp khảo sát khả năng làm giảm độ nảy mầm của BT vi nấm gây bệnh
Nguyên tắc
BT vi nấm thường chỉ cấu tạo bởi một tế bào và chỉ có một nhân. Vách BT có thành phần cấu tạo là chitin, cellulose, hemicellulose, các hợp chất pectin, protein và các sắc tố,… Dưới tác dụng của các nhân tố kháng nấm (chitinase, thuốc trừ nấm đặc hiệu…), BT vi nấm gây bệnh cây trồng sẽ bị tiêu hủy. Quá trình tiêu hủy BT xảy ra khi vách BT bị phá vỡ bởi các enzyme phân giải, nguyên sinh chất thoát ra ngoài MT hoặc khi BT bắt đầu nảy mầm, các tác nhân trừ nấm sẽ ngăn chặn quá trình hình thành vách bảo vệ của sợi tơ nấm tạo điều kiện cho các enzyme phân giải phá vỡ sợi tơ nấm mới hình thành và BT nảy mầm bị tiêu hủy. So sánh số lượng BT trước và sau khi cho các tác nhân kháng nấm tác dụng sẽ xác định được khả năng tiêu hủy BT vi nấm gây bệnh cây trồng của tác nhân đó.
Tiến hành
Chuẩn bị dịch vi nấm gây bệnh: Dùng que cấy lấy các bản thạch mỏng có tơ nấm cho vào bình tam giác có sẵn 20 ml nước cất vô trùng . Lắc dung dịch trên máy lắc 1000 vòng/phút trong 15 phút.
Chuẩn bị dung dịch chitinase 4% và các tác nhân kháng nấm khác 4%: Cân 2 g CPE, 2 g tác nhân kháng nấm khác (hoặc 2 ml đối với thuốc trừ nấm dạng lỏng) hòa tan trong 50 ml nước cất vô trùng.
Bảng 2.2. Cách tiến hành bố trí TN khảo sát khả năng làm giảm độ nảy mầm của BT vi nấm gây bệnh cây trồng bởi CPE và các tác nhân kháng nấm khác
Số lô
TN Dịch BT nấm bệnh Liều lượng các tác nhân kháng nấm
1 0,5 ml 0,5 ml nước cất vô trùng (đối chứng) 2 0,5 ml 0,5 ml dung dịch CPE 4% 3 0,5 ml 0,5 ml dịch Vi-ĐK 4% 4 0,5 ml 0,5 ml β-glucanase 4% 5 0,5 ml 0,5 ml Anvil 4% 6 0,5 ml 0,5 ml COC85 4% 7 0,5 ml 0,25 ml CPE 4% + 0,25 ml β-glucanase 4% 8 0,5 ml 0,25 ml CPE 4% + 0,25 ml dịch Vi-ĐK 4% 9 0,5 ml 0,25 ml CPE 4% + 0,25 ml Anvil 4% 10 0,5 ml 0,25 ml CPE 4% + 0,25 ml COC 85 4% Cách tính:
Số lượng KL vi nấm (tương ứng với số lượng BT có khả năng nảy mầm) được tính theo công thức: Số lượng KL(CFU) = Ai x Di/V (với Ai là số KL đếm được trên đĩa, Di là độ pha loãng, V là dung tích huyền phù BT cho vào mỗi đĩa (ml)) [19].