6. Thời gian và địa điểm nghiên cứu
2.2.3. Phương pháp quan sát hình thái NS
Quan sát đại thể nấm
NS sau khi nuôi cấy trong các ống thạch nghiêng 5 – 7 ngày, ta tiến hành tạo KL khổng lồ như sau:
- Cho vào ống nghiệm 5 ml nước cất vô trùng.
- Dùng que cấy lấy một ít BT từ ống giống thạch nghiêng cho vào ống nghiệm. Lắc đều tạo dung dịch huyền phù.
- Dùng que cấy chấm vào dung dịch huyền phù rồi nhanh chóng chấm điểm vào mặt thạch ở giữa hộp petri. Làm 2-3 hộp.
- Ủ ấm trong một tuần để tạo KL. Hàng ngày lấy ra quan sát: + Hình thái, kích thước KL.
+ Màu sắc mặt phải, mặt trái và sự thay đổi màu sắc của KL. + Màu sắc của MT do sắc tố NS tạo ra.
+ Dạng sợi nấm mọc ở mặt trên MT, đặc điểm của mép KL. + Giọt nước đọng, chất hữu cơ kết tinh trên bề mặt KL……
Quan sát vi thể NS bằng phương pháp phòng ẩm
- Chuẩn bị MT thích hợp, đổ một lớp mỏng (khoảng 1mm) trong các đĩa petri. - Dùng khoan nút chai vô trùng có d = 9mm, khoan các khối thạch.
trùng.
- Đặt 1 hoặc 2 khối thạch trên mỗi phiến kính. Cấy một ít BT lên bề mặt xung quanh khối thạch. Đặt lá kính vô trùng lên trên bề mặt các khối thạch.
- Các phiến kính có khối thạch cấy NS nghiên cứu được đặt trong các hộp petri có sẵn một ít bông thấm nước được làm ẩm bằng nước cất vô trùng. Các hộp petri này được bao và giữ trong tủ ấm 3 - 4 ngày.
- Khẽ gỡ lá kính ra, úp lên một phiến kính sạch có một giọt dung dịch lactophenol, ta được tiêu bản thứ nhất.
- Gỡ bỏ lớp thạch và để nguyên phần NS trên phiến kính, nhỏ giọt lactophenol, đậy lá kính lên trên ta được tiêu bản thứ hai.
- Dùng kính hiển vi quan sát và vẽ mô tả các đặc điểm: + Hình dạng cuống sinh BT.
+ Hình dạng thể bình.
+ Sợi nấm có hay không có sự phân nhánh và vách ngăn. + Đặc điểm BT đính, màu sắc, kích thước BT…