6. Thời gian và địa điểm nghiên cứu
2.2.12. Phương pháp khảo sát khả năng kìm hãm sự tăng sinh khối vi nấm gây bệnh bở
Nguyên tắc: khảo sát khả năng kìm hãm tăng sinh khối vi nấm gây bệnh cây trồng dựa trên việc định lượng sinh khối nấm bệnh sau khi cho CPE chitinase và các thuốc trừ nấm đặc hiệu tiếp xúc với hệ sợi nấm bệnh.
Tiến hành
Chuẩn bị dịch vi nấm gây bệnh: Dùng que cấy lấy các bản thạch mỏng có tơ nấm cho vào bình tam giác có sẵn 20 ml nước cất vô trùng . Lắc dung dịch trên máy lắc 1000 vòng/phút trong 15 phút.
Chuẩn bị dung dịch CPE chitinase 4%, enzyme β-glucanase 4%, dịch Vi-ĐK 4%, dịch thuốc trừ nấm 4%: Cân 2 g CPE, 2 g tác nhân kháng nấm khác (hoặc 2 ml đối với thuốc trừ nấm dạng lỏng) hòa tan trong 50 ml nước cất vô trùng.
Chuẩn bị các bình tam giác, mỗi bình chứa 10 ml MT dịch thể CYA .
Bảng 2.1. Cách tiến hành bố trí TN khảo sát khả năng kìm hãm sự tăng khối vi nấm gây bệnh bởi CPE chitinase và các tác nhân kháng nấm khác
Lô TN Dịch huyền phù
nấm bệnh Liều lượng các tác nhân kháng nấm
1 0,5 ml 0 (đối chứng)
3 0,5 ml 1,0 ml enzyme β-glucanase 4% 4 0,5 ml 1,0 ml dịch chế phẩm Vi-ĐK 4% 5 0,5 ml 1,0 ml dung dịch Anvil 4% 6 0,5 ml 1,0 ml dung dịch COC85 4%
7 0,5 ml 0,5 ml CPE 4% + 0,5 ml enzyme β-glucanase 4% 8 0,5 ml 0,5 ml CPE 4% + 0,5 ml dịch Vi-ĐK 4%
9 0,5 ml 0,5 ml CPE 4% + 0,5 ml dung dịch Anvil 4% 10 0,5 ml 0,5 ml CPE 4% + 0,5 ml dung dịch COC85 4%
Đánh giá kết quả:
Tiến hành nuôi cấy tĩnh các chủng vi nấm Fusarium sp., Phytophthora sp.; sau 5 ngày, thu sinh khối bằng giấy lọc (đã tính bì). Rửa nhẹ bằng nước cất và sấy khô ở nhiệt độ 80 – 100oC đến trọng lượng không đổi. Cân trọng lượng sinh khối nấm (trừ đi phần bì) và so sánh khả năng kìm hãm sự tăng sinh khối gây bệnh cây trồng bởi CPE và các tác nhân kháng nấm khác với đối chứng [19].
2.2.13. Phương pháp khảo sát khả năng làm giảm độ nảy mầm của BT vi nấm gây bệnh cây trồng bởi CPE và các tác nhân kháng nấm khác