2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.10.1. Sàng lọc cây chuyển gen bằng hóa chất chọn lọc
Sàng lọc sau khi chuyển gen bằng hóa chất chọn lọc ựặc hiệu, ựược xem là bước ựi ựầu tiên ựể xác ựịnh ựược tế bào mang gen chuyển, ựồng thời
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 27 giúp làm giảm ựược công sức cho các phân tắch tiếp theo. Muốn vậy cần thiết phải tìm ra ựược nồng ựộ ngưỡng của chất chọn lọc thắch hợp nhằm vừa loại bớt các tế bào không mang gen chuyển, ựồng thời chưa ựủ ựộ gây ựộc ựối với các tế bào mang gen biến nạp, khi ựó sẽ ựảm bảo giữ lại ựược hầu hết các tế bào này trong một khoảng thời gian ngắn.
để chọn lọc các tế bào mang gen biến nạp, trong vector biến nạp thường phải chứa các gen chọn lọc như: nptII- gen kháng kanamycine, hyg- gen kháng hygromycine, str/spc- gen kháng streptomycine và spectinomycine, bar- gen kháng thuốc trừ cỏ PPT (phosphinothricine),Ầ Các loại vector này ựã ựược ứng dụng và mang lại thành công trong việc chọn lọc các tế bào mang gen chuyển ở nhiều ựối tượng cây trồng như: lúa, cam, quýt, bưởi, thuốc lá, bông, ngôẦ[24].
Hiện nay, với mục tiêu an toàn sinh học, an toàn thực phẩm và thân thiện với môi trường, người ta ựã ựưa vào vector chuyển gen các gen chỉ thị chọn lọc ắt ựộc hơn như: gen pmi Ờ mã hóa cho enzyme phosphomannos isomerase, hệ thống chọn lọc sử dụng ựường mannose. Hệ thống chọn lọc này ựã mang lại thành công trên các ựối tượng như : táo, cam quýt, lúa ,Ầ
để sử dụng ựược các chất chọn lọc như kháng sinh, thuốc diệt cỏ hay ựường trong hệ thống chọn lọc tế bào chuyển gen cần xác ựịnh ựược ngưỡng nồng ựộ chọn lọc thắch hợp với từng loại tế bào, mô hay loài cây. Các thắ nghiệm này cần thiết phải tiến hành trước khi thực hiện chuyển gen vào một ựối tượng cây trồng nào ựó [2].