3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4. Bước ựầu thử nghiệm chuyển gen INO-iaaM vàINO-rolB vào trụ trên lá
trên lá mầm giống cam Vinh và quýt đường Canh nhờ Agrobacterium tumefaciens
Từ kết quả thu ựược trong các thắ nghiệm nghiên cứu tối ưu hóa quy trình chuyển gen vào trụ trên lá mầm cây quýt đường Canh và Cam Vinh (Thắ nghiệm 1, 2, 3 và 4), chúng tôi xây dựng quy trình chuyển gen vào thân mầm của giống cam Vinh nhờ Agrobacterium tumefaciens.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 42
Sơ ựồ tóm tắt các bước tiến hành chuyển gen INO-iaaM và INO-rolB vào trụ trên lá mầm cây quýt đường Canh và cam Vinh nhờ Agrobacterium
tumefaciens
3. Cờm ụng mÉu, lẹy nhiÔm vộ ệăng nuềi cÊy
Mềi tr−êng ệăng nuềi cÊy, nhiỷt ệé vộ thêi gian ệăng nuềi cÊy ệ−ĩc xẹy dùng dùa vộo kạt quờ cựa cịc thÝ nghiỷm 1, 2, 3 vộ 4.
5. Chản lảc cẹy chuyÓn gen vộ kiÓm tra gen GUS
- Mềi tr−êng chản lảc: MS+1-2mg/l BA +50mg/l kanamycin - GUS+
: cã mộu xanh lam ệẳc tr−ng
4. Rỏa khuÈn vộ tịi sinh chăi
- dd rỏa khuÈn: 500mg/l cef
- Mềi tr−êng tịi sinh chăi: MS+1-2mg/l BA + 400mg/l cef
1.TỰo vẺt liỷu chuyÓn gen
- Khử trùng: dd Johnson 10%, 10 phút
- Mềi tr−êng gieo hỰt MS
- ậoỰn epicotyl dội 1cm lộm mÉu
2. TỰo dỡch huyÒn phỉ vi khuÈn
- Nuềi trến LB ệẳc - Nuềi trến LB láng - OD600=0,7
6. KĐo dội chăi
MS+1mg/l NAA + 0,1mg/l GA3
7. Tịi sinh rÔ hoặc vi ghép
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 43 Sau ựó tiến hành thử nghiệm chuyển gen sinh auxin và mẫn cảm với auxin hoạt ựộng ựặc thù bầu nhụy vào trụ trên lá mầm của cây quýt đường Canh và cam Vinh nhờ Agrobacterium tumefaciens, qua ựó sẽ kiểm nghiệm ựược tắnh hiệu quả của quy trình, cũng như phần nào ựánh giá ựược tỉ lệ chuyển gen INO-iaaM và INO-rolB thông qua kiểm tra gen GUS.