2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.12. Những nghiên cứu về môitrường tái sinh chồi, chọn lọc chồi chuyển
gen, kéo dài chồi và tái sinh rễ
Môi trường tái sinh chồi, chọn lọc chồi chuyển gen, kéo dài chồi và tái sinh rễ trong nghiên cứu của các tác giả nước ngoài là môi trường MT + 30 g/l sucarose + hormon + kháng sinh + 8 g/l agar, pH=5,8. Bốn tuần ựầu nuôi cấy trong tối, ựến khi tái sinh chồi thì ựể ra ngoài sáng với chế ựộ chiếu sáng là 16 h/ngày, nhiệt ựộ 270C và ựộ ẩm 60%.
Kháng sinh ựược sử dụng ựể diệt Agrobacterium thường là cefotaxime. Cefotaxim là kháng sinh nhóm cephalosporin thế hệ III, có phổ kháng khuẩn rộng. So với các cephalosporin thuộc thế hệ I và II, thì cefotaxime có tác dụng lên vi khuẩn G- mạnh hơn, bền hơn ựối với tác dụng thủy phân của enzym β- lactamase. Nhưng tác dụng lên các vi khuẩn G+ lại yếu hơn các cephalosporin thuộc thế hệ I. Trong các nghiên cứu của Li, Shi, Deng , 2003 [41, 42] trên cây cam ngọt Bingtang và cam ngọt Valencia ựều sử dụng cefotaxime nồng ựộ 400 mg/l. Còn Pena et al (2004) lại sử dụng môi trường có 500 mg/l Cefetaxime ựối với giống cam carrizo Citrange [51].
Chất kháng sinh ựược sử dụng ựể chọn lọc tế bào mang gen biến nạp thường là kanamycine (với Ti-plasmid có chứa Kmr). Trong các nghiên cứu của Yan-Xin Duan (2006) trên ựối tượng là ựoạn epicotyl của cây cam ngọt Bingtang và của cam ngọt Valencia, hay của Deng (2003) với giống cam ngọt Valencia ựều sử dụng kanamycine ở nồng ựộ 50 mg/l.
Theo Phan Hữu Tôn (2010) ựã chỉ ra môi trường tái sinh chồi thắch hợp nhất cho giống cam Vinh là 1mg/l BA, còn môi trường ra rễ chứa 1mg/l NAA+ 0,5mg/l IAA.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 35