III- Phân lập giống gốc nấm mỡ (Agaricus bisporus)
2. Các b−ớc tiến hành:
2.6 Nuôi sợi giống cấp 2:
- Sau khi hoàn thành cấy truyền từ giống cấp 1 sang môi tr−ờng cấp 2, chuyển các chai giống cấp 2 sang phòng nuôi sợi giống nấm.
- Tuỳ theo từng loại giống nấm cấp 2, bố trí phòng nuôi sợi giống theo chế độ: Phòng nuôi giống nhiệt độ bình th−ờng; phòng nuôi giống nhiệt độ lạnh...
- Định kỳ sau khi cấy giống 3 ngày; 6 ngày; 9 ngày; 12 ngày kiểm tra loại bỏ những chai giống bị nhiễm khuẩn, nhiễm nấm tạp hoặc sợi nấm mọc yếu không đạt yêu cầu.
Thời gian nuôi sợi giống nấm cấy 2 kéo dài tuỳ theo loại giống nấm. Khi sợi giống nấm ăn kín đáy chai giống sau 3 - 5 ngày là thời điểm tốt nhất để cấy chuyển sang giống cấp 3 hoặc sử dụng trực tiếp để đ−a ra nuôi trồng nấm hàng hoá. Nếu ch−a sử dụng giống cấp 2 thì cần phải tiến hành bảo quản, l−u giữ giống nấm trong điều kiện nhiệt độ lạnh từ 3oc đến 8oc (trừ giống nấm rơm chỉ đ−ợc bảo quản ở nhiệt độ mát từ 18oc trở lên). Thời gian bảo quản cũng không nên để quá lâu, nếu thấy hiện t−ợng chai giống nấm cấp 2 bị chuyển mầu hoặc chảy n−ớc thì không nên dùng để nhân giống hoặc nuôi trồng.
- Trong thực tế sản xuất số l−ợng giống nấm cấp 2 phải đ−ợc chọn lọc kỹ tr−ớc khi cấy truyền thành giống nấm cấp 3.
Quy Trình công nghệ
nhân giống nấm cấp 2 Nấm Mộc nhĩ 1. Khái niệm chung:
- Giống nấm cấp 2 là giống nấm đ−ợc truyền từ giống nấm cấp 1 sang môi tr−ờng dinh d−ỡng khác môi tr−ờng cấp 1.
- Tuỳ theo yêu cầu và sở tr−ờng, tập quán của mỗi tác giả, mỗi quốc gia ng−ời
ta sử dụng môi tr−ờng giống nấm cấp 2 khác nhau nh− hạt đậu, hạt đại mạch, hạt thóc polyetylen cứng vv… và dùng l−ợng môi tr−ờng trong một chai, 1 túi sẽ khác
nhau: 200g/ chai; 500g/ chai vv…
- Thông th−ờng từ giống nấm cấp 1 khi nhân truyền sang giống cấp 2 ng−ời ta chỉ nhân theo tỷ lệ 1/1; 1/2…(1 ống nghiệm giống cấp 1 chỉ cấy truyền sang 1 hoặc 2 chai môi tr−ờng giống nấm cấp 2)
41
là hạt thóc luộc trong các chai thuỷ tinh, chai nhựa có dung tích 250 ml hoặc 600 ml.
2. Các b−ớc tiến hành:
2.1. Chuẩn bị môi tr−ờng nhân giống cấp 2.
- Sử dụng thóc tẻ đ−ợc bảo quản tốt có thời gian l−u kho từ 6 tháng đến 12 tháng (thóc cũ) thóc đều, hạt không bị ẩm, mốc.
- Ngâm thóc trong n−ớc sạch, gạn bỏ hạt bị lép, nổi, thay n−ớc tới khi n−ớc trong.Thời gian ngâm từ 12 – 14 giờ.
- Sau khi ngâm thóc đủ thời gian, tiến hành đãi thóc và vào luộc thóc, đun vừa lửa, vừa luộc, vừa đảo thóc chín đều. L−ợng n−ớc phải luôn ngập thóc kể cả sau khi thóc nở, chín và nứt đều. Thời gian sôi tuỳ thuộc vào từng loại thóc.
- Đổ thóc đã luộc sang khay, rá để ráo và nguội
2.2. Bổ sung và trộn phụ gia CaCo3:
Sau khi luộc thóc và để nguội, bổ sung CaCO3 (bột nhẹ) tỷ lệ 1 - 1,5% và trộn đều đảm bảo các hạt thóc đều tơi và không bị dính nát.
2.3. Đóng chai môi tr−ờng giống nấm cấp 2
- Cho thóc đã trộn bột nhẹ vào chai thuỷ tinh, chai nhựa dung tích 600ml hoặc chai tam giác 250ml làm bao bì. L−ợng thóc vừa phải nh− hình vẽ sơ đồ minh hoạ.
Hình vẽ:
- Tạo nút bông bằng bông sạch và bịt đầu chai bằng mảnh polyetylen
2.4. Hấp khử trùng môi tr−ờng giống nấm cấp 2:
- Hấp khử trùng ngay sau khi đóng chai không để lâu sẽ bị chua, mốc môi tr−ờng.
- Thời gian hấp: 150 phút - 180 phút tuỳ theo dung tích chai cấp 2 là 250ml hoặc 600ml. Hấp khử trùng ở áp suất 1,15 - 1,4atm trong autoclave hoặc các thiết bị hấp khử trùng công nghiệp.
42
* Chú ý:
+ Môi tr−ờng hạt thóc phải đảm bảo đ−ợc khử trùng tốt, không bị caramen hoá, giữ đ−ợc dinh d−ỡng và một số loại vitamin.
+ Môi tr−ờng giống nấm cấp 2 sản xuất theo tiến độ đ−ợc sử dụng ngay, không để lâu quá 72 giờ sẽ ảnh h−ởng tới sự phát triển của sợi nấm.
2.5. Cấy truyền giống cấp 2:
- Các thao tác cấy truyền giống cấp 1 trong ống thạch nghiêng sang chai môi tr−ờng giống cấp 2 đ−ợc thực hiện trong các phòng cấy giống vô trùng có điều
hoà nhiệt độ và theo đúng quy trình kỹ thuật sau:
+ Bật đèn cực tím khử trùng box cấy giống. Thời gian 30phút đến 60 phút
+ Sau khi tắt đèn cực tím khoảng 60 phút tiến hành sử dụng box cấy. - Thao tác cấy truyền chuyển hệ sợi giống nấm cấp I từ ống thạch nghiêng sang chai thóc môi tr−ờng cấp 2 đ−ợc tiến hành xung quanh ngọn lửa đèn cồn đảm bảo vô trùng tuyệt đối. Theo hình vẽ sơ đồ minh hoạ.
* Chú ý:
+ Tuỳ theo yêu cầu và mật độ sợi giống nấm cấp 1 có thể tiến hành nhân sang giống cấp 2 theo tỷ lệ 1/1 hoặc 1/2. Nếu sản xuất cấp 1 trên chai to có thể tiến hành nhân cấp 2 tới tỷ lệ 1/10; 1/15.
Hình vẽ:
2.6 Nuôi sợi giống cấp 2:
- Sau khi hoàn thành cấy truyền từ giống cấp 1 sang môi tr−ờng cấp 2, chuyển các chai giống cấp 2 sang phòng nuôi sợi giống nấm.
- Tuỳ theo từng loại giống nấm cấp 2, bố trí phòng nuôi sợi giống theo chế độ: Phòng nuôi giống nhiệt độ bình th−ờng; phòng nuôi giống nhiệt độ lạnh...
3 4
43
- Định kỳ sau khi cấy giống 3 ngày; 6 ngày; 9 ngày; 12 ngày kiểm tra loại bỏ những chai giống bị nhiễm khuẩn, nhiễm nấm tạp hoặc sợi nấm mọc yếu không đạt yêu cầu.
Thời gian nuôi sợi giống nấm cấy 2 kéo dài tuỳ theo loại giống nấm. Khi sợi giống nấm ăn kín đáy chai giống sau 3 - 5 ngày là thời điểm tốt nhất để cấy chuyển sang giống cấp 3 hoặc sử dụng trực tiếp để đ−a ra nuôi trồng nấm hàng hoá. Nếu ch−a sử dụng giống cấp 2 thì cần phải tiến hành bảo quản, l−u giữ giống nấm trong điều kiện nhiệt độ lạnh từ 3oc đến 8oc (trừ giống nấm rơm chỉ đ−ợc bảo quản ở nhiệt độ mát từ 18oc trở lên). Thời gian bảo quản cũng không nên để quá lâu, nếu thấy hiện t−ợng chai giống nấm cấp 2 bị chuyển mầu hoặc chảy n−ớc thì không nên dùng để nhân giống hoặc nuôi trồng.
- Trong thực tế sản xuất số l−ợng giống nấm cấp 2 phải đ−ợc chọn lọc kỹ tr−ớc khi cấy truyền thành giống nấm cấp 3.
Quy Trình công nghệ nhân giống nấm cấp 2 Nấm Rơm 1. Khái niệm chung:
- Giống nấm cấp 2 là giống nấm đ−ợc truyền từ giống nấm cấp 1 sang môi tr−ờng dinh d−ỡng khác môi tr−ờng cấp 1.
- Tuỳ theo yêu cầu và sở tr−ờng, tập quán của mỗi tác giả, mỗi quốc gia ng−ời ta sử dụng môi tr−ờng giống nấm cấp 2 khác nhau nh− hạt đậu, hạt đại mạch, hạt thóc polyetylen cứng vv… và dùng l−ợng môi tr−ờng trong một chai, 1 túi sẽ khác
nhau: 200g/ chai; 500g/ chai vv…
- Thông th−ờng từ giống nấm cấp 1 khi nhân truyền sang giống cấp 2 ng−ời ta chỉ nhân theo tỷ lệ 1/1; 1/2…(1 ống nghiệm giống cấp 1 chỉ cấy truyền sang 1 hoặc 2 chai môi tr−ờng giống nấm cấp 2)
- ở Việt Nam chúng ta th−ờng dùng cơ chất làm môi tr−ờng giống nấm cấp 2 là hạt thóc luộc trong các chai thuỷ tinh, chai nhựa có dung tích 250 ml hoặc 600 ml.
44
2.1. Chuẩn bị môi tr−ờng nhân giống cấp 2.
- Sử dụng thóc tẻ đ−ợc bảo quản tốt có thời gian l−u kho từ 6 tháng đến 12 tháng (thóc cũ) thóc đều, hạt không bị ẩm, mốc.
- Ngâm thóc trong n−ớc sạch, gạn bỏ hạt bị lép, nổi, thay n−ớc tới khi n−ớc trong.Thời gian ngâm từ 12 – 14 giờ.
- Sau khi ngâm thóc đủ thời gian, tiến hành đãi thóc và vào luộc thóc, đun vừa lửa, vừa luộc, vừa đảo thóc chín đều. L−ợng n−ớc phải luôn ngập thóc kể cả sau khi thóc nở, chín và nứt đều. Thời gian sôi tuỳ thuộc vào từng loại thóc.
- Đổ thóc đã luộc sang khay, rá để ráo và nguội
2.2. Bổ sung và trộn phụ gia CaCo3:
Sau khi luộc thóc và để nguội, bổ sung CaCO3 (bột nhẹ) tỷ lệ 1 - 1,5% và trộn đều đảm bảo các hạt thóc đều tơi và không bị dính nát.
2.3. Đóng chai môi tr−ờng giống nấm cấp 2
- Cho thóc đã trộn bột nhẹ vào chai thuỷ tinh, chai nhựa dung tích 600ml hoặc chai tam giác 250ml làm bao bì. L−ợng thóc vừa phải nh− hình vẽ sơ đồ minh hoạ.
Hình vẽ:
- Tạo nút bông bằng bông sạch và bịt đầu chai bằng mảnh polyetylen
2.4. Hấp khử trùng môi tr−ờng giống nấm cấp 2:
- Hấp khử trùng ngay sau khi đóng chai không để lâu sẽ bị chua, mốc môi tr−ờng.
- Thời gian hấp: 150 phút - 180 phút tuỳ theo dung tích chai cấp 2 là 250ml hoặc 600ml. Hấp khử trùng ở áp suất 1,15 - 1,4atm trong autoclave hoặc các thiết bị hấp khử trùng công nghiệp.
* Chú ý: Môi tr−ờng hạt thóc phải đảm bảo đ−ợc khử trùng tốt, không bị caramen hoá, giữ đ−ợc dinh d−ỡng và một số loại vitamin.
45
Môi tr−ờng giống nấm cấp 2 sản xuất theo tiến độ đ−ợc sử dụng ngay, không để lâu quá 72 giờ sẽ ảnh h−ởng tới sự phát triển của sợi nấm.
2.5. Cấy truyền giống cấp 2:
- Các thao tác cấy truyền giống cấp 1 trong ống thạch nghiêng sang chai môi tr−ờng giống cấp 2 đ−ợc thực hiện trong các phòng cấy giống vô trùng có điều hoà nhiệt độ và theo đúng quy trình kỹ thuật sau:
+ Bật đèn cực tím khử trùng box cấy giống. Thời gian 30phút đến 60 phút + Sau khi tắt đèn cực tím khoảng 60 phút tiến hành sử dụng box cấy.
- Thao tác cấy truyền chuyển hệ sợi giống nấm cấp I từ ống thạch nghiêng sang chai thóc môi tr−ờng cấp 2 đ−ợc tiến hành xung quanh ngọn lửa đèn cồn đảm bảo vô trùng tuyệt đối. Theo hình vẽ sơ đồ minh hoạ.
* Chú ý:
+ Tuỳ theo yêu cầu và mật độ sợi giống nấm cấp 1 có thể tiến hành nhân sang giống cấp 2 theo tỷ lệ 1/1 hoặc 1/2. Nếu sản xuất cấp 1 trên chai to có thể tiến hành nhân cấp 2 tới tỷ lệ 1/10; 1/15.
Hình vẽ:
2.6 Nuôi sợi giống cấp 2:
- Sau khi hoàn thành cấy truyền từ giống cấp 1 sang môi tr−ờng cấp 2, chuyển các chai giống cấp 2 sang phòng nuôi sợi giống nấm.
- Tuỳ theo từng loại giống nấm cấp 2, bố trí phòng nuôi sợi giống theo chế độ: Phòng nuôi giống nhiệt độ bình th−ờng; phòng nuôi giống nhiệt độ lạnh...
- Định kỳ sau khi cấy giống 3 ngày; 6 ngày; 9 ngày; 12 ngày kiểm tra
3 4
46
loại bỏ những chai giống bị nhiễm khuẩn, nhiễm nấm tạp hoặc sợi nấm mọc yếu không đạt yêu cầu.
Thời gian nuôi sợi giống nấm cấy 2 kéo dài tuỳ theo loại giống nấm. Khi sợi giống nấm ăn kín đáy chai giống sau 3 - 5 ngày là thời điểm tốt nhất để cấy chuyển sang giống cấp 3 hoặc sử dụng trực tiếp để đ−a ra nuôi trồng nấm hàng hoá. Nếu ch−a sử dụng giống cấp 2 thì cần phải tiến hành bảo quản, l−u giữ giống nấm trong điều kiện nhiệt độ lạnh từ 3oc đến 8oc (trừ giống nấm rơm chỉ đ−ợc bảo quản ở nhiệt độ mát từ 18oc trở lên). Thời gian bảo quản cũng không nên để quá lâu, nếu thấy hiện t−ợng chai giống nấm cấp 2 bị chuyển mầu hoặc chảy n−ớc thì không nên dùng để nhân giống hoặc nuôi trồng.
- Trong thực tế sản xuất số l−ợng giống nấm cấp 2 phải đ−ợc chọn lọc kỹ tr−ớc khi cấy truyền thành giống nấm cấp 3.
Quy Trình công nghệ nhân giống nấm cấp 2 Nấm mỡ 1. Khái niệm chung:
- Giống nấm cấp 2 là giống nấm đ−ợc truyền từ giống nấm cấp 1 sang môi tr−ờng dinh d−ỡng khác môi tr−ờng cấp 1.
- Tuỳ theo yêu cầu và sở tr−ờng, tập quán của mỗi tác giả, mỗi quốc gia ng−ời ta sử dụng môi tr−ờng giống nấm cấp 2 khác nhau nh− hạt đậu, hạt đại mạch, hạt thóc polyetylen cứng vv… và dùng l−ợng môi tr−ờng trong một chai, 1 túi sẽ khác
nhau: 200g/ chai; 500g/ chai vv…
- Thông th−ờng từ giống nấm cấp 1 khi nhân truyền sang giống cấp 2 ng−ời ta chỉ nhân theo tỷ lệ 1/1; 1/2…(1 ống nghiệm giống cấp 1 chỉ cấy truyền sang 1 hoặc 2 chai môi tr−ờng giống nấm cấp 2)
- ở Việt Nam chúng ta th−ờng dùng cơ chất làm môi tr−ờng giống nấm cấp 2 là hạt thóc luộc trong các chai thuỷ tinh, chai nhựa có dung tích 250 ml hoặc 600 ml.
2. Các b−ớc tiến hành:
2.1. Chuẩn bị môi tr−ờng nhân giống cấp 2.
- Sử dụng thóc tẻ đ−ợc bảo quản tốt có thời gian l−u kho từ 6 tháng đến 12 tháng (thóc cũ) thóc đều, hạt không bị ẩm, mốc.
- Ngâm thóc trong n−ớc sạch, gạn bỏ hạt bị lép, nổi, thay n−ớc tới khi n−ớc trong.Thời gian ngâm từ 12 – 14 giờ.
- Sau khi ngâm thóc đủ thời gian, tiến hành đãi thóc và vào luộc thóc, đun vừa lửa, vừa luộc, vừa đảo thóc chín đều. L−ợng n−ớc phải luôn ngập thóc
47
kể cả sau khi thóc nở, chín và nứt đều. Thời gian sôi tuỳ thuộc vào từng loại thóc.
- Đổ thóc đã luộc sang khay, rá để ráo và nguội
2.2. Bổ sung và trộn phụ gia CaCo3:
Sau khi luộc thóc và để nguội, bổ sung CaCO3 (bột nhẹ) tỷ lệ 1 - 1,5% và trộn đều đảm bảo các hạt thóc đều tơi và không bị dính nát.
2.3. Đóng chai môi tr−ờng giống nấm cấp 2
- Cho thóc đã trộn bột nhẹ vào chai thuỷ tinh, chai nhựa dung tích 600ml hoặc chai tam giác 250ml làm bao bì. L−ợng thóc vừa phải nh− hình vẽ sơ đồ minh hoạ.
Hình vẽ:
- Tạo nút bông bằng bông sạch và bịt đầu chai bằng mảnh polyetylen
2.4. Hấp khử trùng môi tr−ờng giống nấm cấp 2:
- Hấp khử trùng ngay sau khi đóng chai không để lâu sẽ bị chua, mốc môi tr−ờng.
- Thời gian hấp: 150 phút - 180 phút tuỳ theo dung tích chai cấp 2 là 250ml hoặc 600ml. Hấp khử trùng ở áp suất 1,15 - 1,4atm trong autoclave hoặc các thiết bị hấp khử trùng công nghiệp.
* Chú ý:
+ Môi tr−ờng hạt thóc phải đảm bảo đ−ợc khử trùng tốt, không bị caramen hoá, giữ đ−ợc dinh d−ỡng và một số loại vitamin.
+ Môi tr−ờng giống nấm cấp 2 sản xuất theo tiến độ đ−ợc sử dụng ngay, không để lâu quá 72 giờ sẽ ảnh h−ởng tới sự phát triển của sợi nấm.
2.5. Cấy truyền giống cấp 2:
- Các thao tác cấy truyền giống cấp 1 trong ống thạch nghiêng sang chai môi tr−ờng giống cấp 2 đ−ợc thực hiện trong các phòng cấy giống vô trùng có điều hoà nhiệt độ và theo đúng quy trình kỹ thuật sau:
48
+ Bật đèn cực tím khử trùng box cấy giống. Thời gian 30 hút đến 60 phút + Sau khi tắt đèn cực tím khoảng 60 phút tiến hành sử dụng box cấy. - Thao tác cấy truyền chuyển hệ sợi giống nấm cấp I từ ống thạch nghiêng sang chai thóc môi tr−ờng cấp 2 đ−ợc tiến hành xung quanh ngọn lửa đèn cồn đảm bảo vô trùng tuyệt đối. Theo hình vẽ sơ đồ minh hoạ.
* Chú ý:
+ Tuỳ theo yêu cầu và mật độ sợi giống nấm cấp 1 có thể tiến hành nhân sang giống cấp 2 theo tỷ lệ 1/1 hoặc 1/2. Nếu sản xuất cấp 1 trên chai to có thể tiến hành nhân cấp 2 tới tỷ lệ 1/10; 1/15.
Hình vẽ:
2.6 Nuôi sợi giống cấp 2:
- Sau khi hoàn thành cấy truyền từ giống cấp 1 sang môi tr−ờng cấp 2,