- Mỗi tác giả hoặc mỗi loại giống nấm khi phân lập giống gốc ng−ời ta th−ờng có bí quyết riêng tạo ra môi tr−ờng thích hợp nhất để mô nấm, sợi
16
nấm, bào tử nấm sinh tr−ởng, có thể thêm các yếu tố vi l−ợng hoặc chất chiết hữu cơ từ cây chủ mà nấm đó đang sống, với một số loại nấm rễ (nấm phải sống có cây chủ nh− nấm thông, việc bổ sung dịch chiết là bắt buộc.
Còn lại đa số các chủng giống nấm ăn khác th−ờng sử dụng môi tr−ờng đơn giản là môi tr−ờng PDA (Potato - Dextroza - Agar) nếu không có Dextrara ng−ời ta có thể dùng Glucore để thay thế.
- Cách làm môi tr−ờng PDA (PGA). + Khoai tây rửa sạch gọt vỏ hoặc không.
+ Khoai tây (không bị mọc mầm) 200 gam thái nhỏ vuông nh− con xúc sắc cách khoảng 1cm. Cho khoai tây vào trong 1 lít n−ớc sạch đun sôi. Thời gian sôi 15 phút (khoai vừa chín) không bị nhừ quá. Dùng vải 3 - 5 lọc lấy phần n−ớc luộc khoai.
+ Đun n−ớc lọc từ khoai tây cho vào đó 20 gam Glucose (hoặc Dextrose) và 20 gam thạch. Dùng đũa khuấy cho tan đều thạch và đ−ờng. Nếu n−ớc bị cạn hoặc đặc cho thêm n−ớc cất nóng cho đủ 1lít, đun sôi thêm 3 - 5 phút, sau đó rót môi tr−ờng PGA vào các ống nghiệm hoặc đĩa thuỷ tinh, chai thuỷ tinh. Thao tác rót thạch, làm nút bông cũng giống nh− làm môi tr−ờng cấp 1 để nhân giống gốc sang cấp 1. (tốt nhất glucôza cho vào môi tr−ờng đang đun sau khi đã vớt hết bọt)
- Hấp khử trùng các ống môi tr−ờng, để nghiêng tạo thành ống thạch nghiêng. Một lần có thể làm nhiều hay ít tuỳ nhu cầu sản xuất, số ch−a dùng đến bọc giấy sạch hoặc li non cho vào tủ lạnh để dùng dần.
- Môi tr−ờng để phân lập giống gốc th−ờng đ−ợc chuẩn bị trong các ống nghiệm rộng 2cm dài 20cm.
- Chế độ hấp khử trùng ống thạch + áp suất: 0,9 -11 atm
+ Thời gian: 110 phút - 120 phút + Nhiệt độ: 1000C - 110oC
Sau khi chuẩn bị đầy đủ các điều kiện về trang thiết bị, dụng cụ, vật t− môi tr−ờng nuôi cấy ta có thể tiến hành phân lập giống gốc, nấm trong phòng cấy. Có những tr−ờng hợp ta phải phân lập ở bên ngoài, khi đi dã ngoại hoặc điều tra, s−u tập giống nấm dài ngày. Lúc đó phải chú ý chọn địa điểm sạch, kín gió để tiến hành phân lập giống nấm.