14
1. Nồi hấp vô trùng (Autoclave)
Tuỳ theo điều kiện có thể sử dụng nồi khử trùng bằng Inox; bằng hộp kim, đun bằng điện, than hoặc ga...
Nồi hấp có chế độ điều chỉnh đ−ợc áp suất và nhiệt độ (có chế độ tự động càng tốt). Công suất của nồi tuỳ theo quy mô sản xuất có thể dùng nồi hấp xách tay đến những loại nồi hiện đại hẹn giờ, đặt tr−ớc chế độ hấp.
Thông th−ờng để hấp khử trùng môi tr−ờng làm giống gốc, ng−ời ta chỉ để nồi hoạt động ở áp suất 0,9 - 1,1 atmatphen, thời gian hấp từ 90 phút đến 110 phút. Tuy nhiên theo kinh nghiệm ta phải quan sát màu sắc của môi tr−ờng không bị sẫm màu quá (đây là dấu hiệu của đ−ờng bị cháy - Caramen hoá) làm cho môi tr−ờng thạch bị nghèo dinh d−ỡng. (Môi tr−ờng có mầu nâu sáng là tốt)
Quy trình vận hành nồi hấp phải theo đúng trình tự thao tác mới đảm bảo áp suất và nhiệt độ trong môi tr−ờng t−ơng ứng. Để thể hiện mối t−ơng quan giữa nhiệt độ và áp suất trong nồi hấp ng−ời ta đã tính và thể hiện trên bảng 1
Vì vậy khi hấp khử trùng các môi tr−ờng nuôi cấy sợi nấm ta phải tiến hành b−ớc đầu là: Đuổi không khí (xả air) để tạo ra môi tr−ờng trong nồi bão hoà hơi n−ớc, có áp suất và nhiệt độ thích hợp với chế độ hấp.
Bảng 1: Mối t−ơng quan giữa áp suất và nhiệt độ trong quá trình hấp môi tr−ờng. áp lực Pound/inch áp suất (atm) Nhiệt độ khi loại hết không khí (0c) Nhiệt độ khi loại 2/3 không khí (0c) Nhiệt độ khi loại 1/2 không khí (0c) Nhiệt độ khi loại 1/3 không khí (0c) Nhiệt độ khi ch−a loại không khí (0c) 5 0.35 109oc 100 94 90 72 10 0.70 115oc 109 105 100 90 15 1.05 121oc 115 112 109 100 20 1.40 126oc 121 118 115 109 25 1.76 130oc 126 124 121 115 30 2.11 135oc 130 128 126 121
2. Tủ cấy vô trùng (Box cấy - Laminer)
- Sử dụng các tủ cấy vi sinh vật bình th−ờng dễ lau chùi vệ sinh.
- Tủ có hệ thống đèn cực tím khử trùng (Nhtra-violet) đèn chiếu sáng, quạt hút gió, màng lọc bụi vi khuẩn)
15
- Tr−ớc khi sử dụng và sau khi phân lập giống đều phải vệ sinh tủ bằng cách thu dọn hết các đầu mẩu nấm v−ơng vãi, lau bằng n−ớc sạch, bằng cồn, định kỳ phải xông box cấy bằng foocmol. Nồng độ 0.5%.
- Tr−ớc khi phân lập giống phải bật đèn tím tr−ớc 2 - 2,5 giờ, sau đó tắt đèn đợi khoảng 30 phút mới bắt đầu thao tác cấy trong tủ cấy vô trung.
Tuyệt đối tuân thủ các trình tự về kỹ thuật và an toàn lao động, tránh để đổ cồn gây bỏng, phải bình tĩnh xử lý khi có sự cố , dùng vải −ớt dấp n−ớc trùm lên khu vục bị cháy.
3. Các dụng cụ khác
- Kim khêu (que cấy giống gốc) - Dao lam hoặc dao dọc giấy - Kéo Inox
- Đèn cồn - Bật lửa
- Chai đựng cồn
- Cách sắp xếp dụng cụ trong box nh− sau ( nếu thuận tay phải) Hình vẽ:
- Ngoài môi tr−ờng làm trong ống nghiệm, tổ thạch nghiêng th−ờng dùng trong sản xuất. Trong nghiên cứu ng−ời ta th−ờng dùng hộp lồng (đĩa petri) hoặc các chai bịt miệng lệch để dễ quan sát vòng phóng xạ của sợi nấm khi mọc thành khuẩn lạc hình tròn.
- Tất cả các dụng cụ nh− dao, kéo ... đều đ−ợc hấp hoặc luộc khử trùng, sau đó sấy khô (vô trung ở nhiệt độ 170 - 175oC trong 2 giờ)
Sau mỗi lần sử dụng đều phải cọ rửa sạch sẽ. Có thể hấp, sấy khử trùng 1 lần rồi dùng dần.