... coli tái tổ hợp tiến hành qua bước sau: - Phtếbàosiêuâmđệm ( 50mM Tris/ Cl, pH8. 5; mM EDTA; 10 0mM NaCl; 0 .1 mM DTE; mM PMSF) , litâmthudịch - Kết tủa ph n đoạn protein ammonium sulphate ... với đệm D ( 10 0mM potassium phosphate pH 7.4; 0 .1 mM DTE) - Làm qua cột lọc gel Superdex 75 column (GE Healthcare) thuph n đoạn protein với đệm E ( 50mM potassium phosphate pH 7.4; 0 .1 mM DTE) ... Tris/ Cl, pH 6 .8; 0. 4% SDS) 10 % APS H2O cất 30% Arcylamide/Bis TEMED 2 ,5 ml 50 µl Bổ sung đến 10 ml 1, 6 ml µl Các mẫu protein bước tinh biến tính 10 0 oC ph t trộn với đệm màu 2x (1 25 mM Tris/ Cl pH...
... lạc số 10 có đoạn gen lớn kích thớc đoạn gen đợc thiết kế theo lí thuyết 50 9 0 bp 402 7 bp 3 05 4 bp 203 6 bp 16 36 bp 10 18 bp 50 6 bp ảnh Điện di đồ sản ph m cắt plasmid tái tổ hợp Marker 1kb; - ... 16 s ARN riboxom chủng 7 31 đợc nhân PCR với cặp mồi Kết điện di cho thấy đoạn gen đợc nhân lên đặc hiệu có kích thớc khoảng 0 ,5 kb theo tính toán lí thuyết (ảnh 2) 33 203 6 bp 16 36 bp 10 18 bp 50 6 ... chủng Từ 1 ,5 ml dịch vi khuẩn nuôi cấy qua đêm, ph ng ph p tách chiết mô tả trên, thu đợc 1, 08 g / l ADN tổng số Để kiểm tra mức độ nhiễm protein ADN nhận đợc, đo quang ph ADN dới bớc sóng 2 80 nm...
... lớn (> 10 kb) VÉCTƠ PHAGE Ph n lớn xuất ph t từ phage λ: ph n trung tâm hệ gen phage λ mang gen li n quan đến trình gây tan vật chủ bị thay ADN ngoại lai Kích thước khoảng 48, 5 kb Có ... mang đoạn ADN cài đến ~ 20 kb (virut đóng gói ADN đến 4 050 kb) Khả xâm nhập tếbào chủ nhanh Có thể tách dòng prokaryote eukaryote VÉCTƠ PHAGE Ưu điểm: - Khả xâm nhập tếbào chủ nhanh Có thể tách ... (vd gen dystrophin người có kích thước đến 200 0kb), nhà nghiên cứu ph t triển véctơ nhiễm sắc thể nấm men nhân tạo mang đoạn cài ADN dài từ 200 đến 500 kb Véctơ tạo từ nhiễm sắc thể nhỏ nấm men...
... thích hợp, mật độ tếbào đạt 108 - 10 9 tế bào/ 1ml litâmthu sinh khối tếbào1. 2 Tách dòng gen từ RNA thông tin (mRNA) Tách dòng gen từ mRNA trình ph c tạp, thực theo bước sau: Bước 1: Tách chiết ... vào tếbào chủ (host cell) ph ơng ph p khác nhau: Siêu âm, vi tiêm, bắn gen, sử dụng PEG (polyethylen glycol)… Với tếbào chủ vi khuẩn thường sử dụng ph ơng ph p biến nạp sốc nhiệt Ph ơng ph p ... kỹ thu t litâmph n đoạn tách mRNA khỏi bi từ để thu mRNA Có thể giữ mRNA nhiệt độ - 85 0C để tiếp tục nghiên cứu Bước 2: Tổng hợp cDNA mạch kép Sử dụng kỹ thu t PCR ngược có tham gia enzym phiên...
... kế từ ph n DNA E.colivà plasmid) 1 -5 kb 15 - 25 kb 20 - 10 kb 30 - 50 kb 10 0- 300 kb TAC (thiết kế từ ph n đoạn vir gen Ti plasmid) 10 0- 300 kb BiBac (thiết kế từ ph n DNA gen Agrobacterium) 10 0 - 500 kb ... gen Agrobacterium) 10 0 - 500 kb PAC (bộ gen phage P1+plasmid) 10 0- 300 kb YAC (thiết kế từ ph n DNA gen nấm men) 200 0 2 .1- Plasmid - Plasmid đoạn DNA ngắn (2-5kb), dạng vòng, nằm nhiễm sắc thể, có ... tếbào vi khuẩn nhận plasmit tái tổ hợp -> việc lựa chọn chủng ý muốn không đơn giản Các ph ơng ph p xác định dòng cần tìm Ph ơng ph p lai axit nucleic Ph ơng ph p sử dụng kháng thể Ph ơng ph p...
... tâmthu tủa 600 0 vòng/ ph t 41 - Hòa lại tủa 25 ml CaCl2 10 0mM, ủ mẫu đá 60 ph t - Ủ xong ly tâm 600 0 vòng /ph t 10 ph t 0C Hòa tếbào0 ,5 ml CaCl2 10 0mM, bổ xung 15 % glycerol Hút 10 μl dịchtế ... 50 X 10 ml Nước cất 490ml Bromophenol Blue 1% ml Glycerol 87 % 3, 45 ml H 20 khử ion 5, 55 ml Tris (0, 1M; pH 7 ,5) 0, 15 ml NaOH 1M 0, 022 ml H2O khử ion EDTA (0 ,5 M; pH 8) 10 0 l CH3COOH RNAse 10 ... OD 600 đạt 0 ,5 – 0, 6 lấy mẫu đặt đá 1h Sau từ bước thao tác ph i thực 40C - Mẫu sau đặt đá 1h đem ly tâm 600 0 vòng /ph t 10 ph t, loại dịch Hòa tếbàothu50 ml CaCl2 10 0mM vô trùng, ủ 15 ph t ly tâm...
... trúc tương đồng chọn để dự đoán kết Z229 20 .1 : 10 0% XM _00 35 6 81 25. 1: 62% D14997 .1: 54 % EU7 254 69 .1: 34% NM _0 01 15 3 4 70 .1: 36% NM _0 01 15 6 283 .1: 30% Cơ sở lựa chọn dãy Các kết đặc tính gen ... Oryza Sativa japonica Kết đặc tính gen chọn EU7 254 69 .1 Kết đặc tính gen chọn NM _0 01 15 3 4 70 .1 Kết đặc tính gen chọn NM _0 01 15 6 283 .1 Kết luận Đoạn gen cần xác định hoạt tính sinh học, ... thường công bố ph n nhỏ gen cung cấp Kết đặc tính gen chọn Z229 20 .1 hoạt tính peroxidase, được công bố là mRNA của chủng S.polyrrhiza XM _00 35 6 81 25. 1 Kết đặc tính gen chọn D14997 .1 Được công...
... tính: 1) Chúng ph i chứa trình tự khởi đầu chép (tái bản), cho ph p chúng tự chép độc lập với nhiễm sắc thể tếbào chủ 2) Chúng ph i mang dấu chuẩn chọn lọc cho ph p dễ dàng xác định ph n lập tếbào ... giúp hầu hết tếbào mang véctơ tái tổ hợp thường tiếp nhận plasmid Thu c tính giúp cho tếbào biến nạp dòng tếbào chúng sinh (do ph n chia trực ph n) mang véctơ ADN tái tổ hợp cho ph p nhà nghiên ... viện hệ gen, tếbào E coli tiến hành biến nạp với tất ph n đoạn thư viện Mỗi tếbào biến nạp thường mang véctơ mang đoạn cài ADN Vì vậy, tếbào nhân lên sau chúng sẽ tạo nhiều dòng tế bào, dòng...