Phân lập, định danh virus viêm gan vịt ở một số tỉnh đồng bằng sông Cửu Long và sản xuất kháng thể phòng bệnh.

Phân lập, định danh virus viêm gan vịt ở một số tỉnh đồng bằng sông Cửu Long và sản xuất kháng thể phòng bệnh.Phân lập, định danh virus viêm gan vịt ở một số tỉnh đồng bằng sông Cửu Long và sản xuất kháng thể phòng bệnh.Phân lập, định danh virus viêm gan vịt ở một số tỉnh đồng bằng sông Cửu Long và sản xuất kháng thể phòng bệnh.Phân lập, định danh virus viêm gan vịt ở một số tỉnh đồng bằng sông Cửu Long và sản xuất kháng thể phòng bệnh.Phân lập, định danh virus viêm gan vịt ở một số tỉnh đồng bằng sông Cửu Long và sản xuất kháng thể phòng bệnh.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ PHẠM CÔNG UẨN PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH VIRUS VIÊM GAN VỊT Ở MỘT SỐ TỈNH ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG VÀ SẢN XUẤT KHÁNG THỂ PHÒNG BỆNH LUẬN ÁN TIẾN SỸ CHUYÊN NGÀNH: VI SINH VẬT HỌC NĂM 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ PHẠM CÔNG UẨN PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH VIRUS VIÊM GAN VỊT Ở MỘT SỐ TỈNH ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG VÀ SẢN XUẤT KHÁNG THỂ PHÒNG BỆNH LUẬN ÁN TIẾN SỸ CHUYÊN NGÀNH: VI SINH VẬT HỌC MÃ NGÀNH: 62 42 01 07 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGS.TS.HỒ THỊ VIỆT THU LỜI CẢM TẠ Tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến: PGS.TS.Hồ Thị Việt Thu tận tình bảo, hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi suốt thời gian thực hoàn thành luận án PGS.TS.Trần Nhân Dũng, PGS.TS.Nguyễn Văn Thành, PGS.TS.Nguyễn Minh Chơn, TS.Dương Thị Hương Giang, TS.Bùi Thị Minh Diệu động viên tạo điều kiện thuận lợi cho thực nội dung nghiên cứu phịng thí nghiệm Sinh học Phân tử, Cơng nghệ Enzyme suốt trình thực luận án Các Sinh viên, Học viên Cao học chuyên ngành thú y giúp đỡ tơi q trình thực nội dung nghiên cứu luận án Cán phịng thí nghiệm Virus Miễn dịch học Bộ môn Thú y, Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng; phịng thí nghiệm Sinh học phân tử, Cơng nghệ Enzyme Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học, trường Đại học Cần thơ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận án Q Thầy Cô anh chị em đồng nghiệp Bộ môn Thú y, trường Đại học Cần thơ Quý Thầy Cơ giảng dạy Chương trình Nghiên cứu sinh chun ngành Vi sinh vật học, truyền đạt cho kiến thức quý báu thời gian học tập Xin chân thành cảm ơn tất người thân giúp đỡ động viên thời gian thực hoàn thành luận án Tác giả Phạm Cơng Uẩn CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan kết trình bày luận án cơng trình nghiên cứu NCS Phạm Công Uẩn với hướng dẫn PGS.TS.Hồ Thị Việt Thu Tất số liệu, kết trình bày luận án hồn tồn trung thực chưa công bố riêng lẻ cơng trình trước Người hướng dẫn khoa học PGS.TS.Hồ Thị Việt Thu Tác giả luận án NCS.Phạm Công Uẩn MỤC LỤC Trang Lời cảm tạ i Lời cam đoan ii Mục lục iii Danh sách bảng… ix Danh sách hình… .xi Danh mục từ viết tắt xiii Tóm tắt… xv Abstract xvii Chương Giới thiệu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu đề tài 1.3 Những đóng góp khoa học .2 Chương Lược khảo tài liệu .3 2.1 Lịch sử phát bệnh viêm gan vịt virus 2.2 Bệnh viêm gan vịt virus 2.2.1 Đặc điểm tác nhân gây bệnh .4 2.2.2 Sự xâm nhập đường lây lan 2.2.3 Cơ chế sinh bệnh 2.2.4 Đặc điểm dịch tễ 2.2.5 Triệu chứng bệnh tích 2.2.5.1 Triệu chứng .6 2.2.5.2 Bệnh tích 2.2.6 Chẩn đốn phịng bệnh 2.2.6.1 Chẩn đoán 2.2.6.2 Phòng bệnh 2.3 Sinh học phân tử virus viêm gan vịt 2.3.1 Hình thái cấu tạo virus viêm gan vịt type I 2.3.2 Thành phần hệ gen virus viêm gan vịt type I 10 2.3.3 Cấu trúc hệ gen protein virus viêm gan vịt type I .10 2.3.4 Đặc tính kháng nguyên khả gây bệnh virus 12 2.3.5 Xếp loại virus viêm gan vịt 12 2.4 Đặc tính sinh học virus viêm gan vịt 13 2.4.1 Nuôi cấy phôi trứng 13 2.4.2 Nuôi cấy môi trường tế bào 14 2.4.3 Nuôi cấy động vật cảm thụ .14 2.4.4 Sức đề kháng virus viêm gan vịt .15 2.5 Tình hình nghiên cứu bệnh viêm gan vịt virus nước giới thời gian gần 15 2.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 15 2.5.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 16 2.6 Kháng thể IgY gà 17 2.6.1 Tính chất phân tử kháng thể IgY .18 2.6.2 Đặc tính hóa lý kháng thể IgY 19 2.6.3 Sự truyền kháng thể IgY từ máu gà mẹ sang lòng đỏ trứng 20 2.7 Phương pháp sản xuất kháng thể từ lòng đỏ trứng gà 20 2.7.1 Gây tối miễn dịch cho gà mái 20 2.7.2 Đường tiêm chủng cho gà mái 21 2.7.3 Tần số khoảng cách lần tiêm chủng cho gà mái 21 2.7.4 Chiết xuất kháng thể IgY 21 2.7.5 Các phương pháp tinh kháng thể IgY 22 2.7.5.1 Phương pháp kết tủa muối ammonium sulphat 22 2.7.5.2 Phương pháp thẩm tích 22 2.7.5.3 Sắc ký trao đổi ion 23 2.8 Những ứng dụng kháng thể IgY phòng trị bệnh gia cầm 23 2.9 Thành tựu phòng trị bệnh viêm gan vịt virus Việt Nam 26 Chương Vật liệu phương pháp nghiên cứu 28 3.1 Nội dung nghiên cứu 28 3.2 Phương tiện nghiên cứu 28 3.2.1 Thởi gian địa điểm 28 3.2.2 Vật liệu nghiên cứu 29 3.2.3 Hóa chất môi trường 29 3.3 Phương pháp nghiên cứu 30 3.3.1 Phân lập định danh virus viêm gan vịt số tỉnh đồng sông Cửu Long .30 3.3.1.1 Phương pháp lấy mẫu 30 3.3.1.2 Phương pháp xử lý mẫu 31 3.3.1.3 Phương pháp phân lập virus viêm gan vịt môi trường phôi trứng vịt .31 3.3.1.4 Phương pháp cấy truyền virus viêm gan vịt môi trường tế bào xơ phôi vịt sơ cấp 31 3.3.1.5 Định danh virus viêm gan vịt sinh học phân tử 32 3.3.2 Nghiên cứu di truyền virus viêm gan vịt type I genotype 33 3.3.2.1 Giải trình tự nucleotide sản phẩm RT-PCR 33 3.3.2.2 Nghiên cứu di truyền chủng virus viêm gan vịt type I genotype phân lập 34 3.3 Khảo sát độc lực 01 chủng virus viêm gan vịt type I genotype phôi vịt vịt 34 3.3.3.1 Xác định liều gây nhiễm 50% tế bào xơ phôi vịt 01 chủng virus viêm gan vịt type I genotype 34 3.3.3.2 Xác định liều gây chết 50% phôi vịt khảo sát bệnh tích biểu phơi 01 chủng virus viêm gan vịt type I genotype .35 3.3.3.3 Xác định liều gây chết 50% vịt thí nghiệm khảo sát đặc điểm bệnh lý 01 chủng virus viêm gan vịt type I genotype 36 3.3.3.4 Khảo sát bệnh tích vi thể từ mẫu bệnh phẩm vịt khảo sát LD50 38 3.3.4 Sản xuất kháng thể kháng virus viêm gan vịt type I genotype công nghệ tạo kháng thể IgY gà mái ứng dụng phòng, trị bệnh .38 3.3.4.1 Tạo miễn dịch cho gà mái .38 3.3.4.2 Tách chiết kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà 40 3.3.4.3 Kiểm tra hiệu giá kháng thể IgY huyết gà mái lòng đỏ trứng gà 40 3.3.4.4 Xác định liều an tồn dịch kháng thể IgY lịng đỏ trứng gà tế bào xơ phôi vịt 41 3.3.4.5Khảo sát hoạt tính kháng virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY lòng đỏ trứng gà tế bào xơ phôi vịt 24 trước gây nhiễm .43 3.3.4.6Khảo sát hoạt tính kháng virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY lịng đỏ trứng gà tế bào xơ phơi vịt 24 sau gây nhiễm 44 3.3.4.7 Xác định liều bảo hộ 50% phôi vịt 12 ngày tuổi kháng thể IgY lòng đỏ trứng gà phản ứng trung hòa virus 44 3.3.4.8Thử nghiệm hiệu phòng bệnh virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY lòng đỏ trứng gà vịt con… 46 3.3.4.9 Thử nghiệm hiệu trị bệnh virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY lòng đỏ trứng gà vịt 47 3.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 50 Chương Kết thảo luận 51 4.1 Kết phân lập định danh virus gây bệnh viêm gan vịt số tỉnh đồng sông Cửu Long 51 4.1.1 Kết phân lập virus viêm gan vịt môi trường phôi vịt .51 4.1.2 Kết cấy truyền virus viêm gan vịt môi trường tế bào xơ phôi vịt sơ cấp 53 4.1.3 Kết định danh virus viêm gan vịt kỹ thuật sinh học phân tử 55 4.2Kết khảo sát đặc điểm di truyền phân tử chủng virus viêm gan vịt type I genotype phân lập 57 4.2.1 Kết giải trình tự nucleotide sản phẩm RT-PCR 57 4.2.2 Tìm kiếm tương đồng với virus viêm gan vịt type I genotype khác đăng ký Ngân hàng gen Thế giới .60 4.2.3So sánh tỷ lệ tương đồng nucleotide axít amin chủng phân lập với chủng khác Ngân hàng gen Thế giới 60 4.3 Kết khảo sát độc lực virus viêm gan vịt type I genotype phôi vịt vịt 65 4.3.1 Kết khảo sát độc lực tính gây bệnh virus viêm gan vịt type I genotype phôi vịt .65 4.3.1.1 Kết xác định liều gây chết 50% phơi vịt thí nghiệm 65 4.3.1.2 Kết khảo sát thời gian chết phơi trung bình theo nồng độ 66 4.3.1.3 Biểu bệnh tích phơi vịt thí nghiệm 69 4.3.2 Kết khảo sát độc lực tính gây bệnh virus viêm gan vịt type I genotype vịt 71 4.3.2.1 Kết xác định liều gây chết 50% vịt 71 4.3.2.2 Khảo sát thời gian vịt chết trung bình theo nồng độ virus khác .72 4.3.2.3 Khảo sát triệu chứng lâm sang vịt thí nghiệm 74 4.3.2.4 Khảo sát bệnh tích đại thể vịt thí nghiệm qua mổ khám 76 4.3.2.5 Khảo sát bệnh tích vi thể vịt thí nghiệm 79 4.4 Sản xuất kháng thể kháng virus viêm gan vịt type I genotype công nghệ tạo kháng thể IgY gà mái 83 4.4.1 Kết phân tích hiệu giá kháng thể IgY huyết gà mái 83 4.4.2 Mối tương quan hàm lượng kháng thể IgY máu gà trứng gà sau gây miễn dịch… 90 4.4.3 Trích ly kháng thể IgY từ lịng đỏ trứng gà phương pháp tủa phân đoạn muối Amonium sulphat 40% .91 4.4.4Khảo sát độc tính dịch kháng thể IgY lòng đỏ trứng gà tế bào xơ phơi vịt tính kháng virus viêm gan vịt type I genotype tế bào xơ phôi vịt 93 4.4.4.1 Kết xác định liều gây nhiễm 50% tế bào xơ phôi vịt virus viêm gan vịt type I genotype 93 4.4.4.2 Kết xác định liều an toàn dịch kháng thể IgY lòng đỏ tế bào xơ phôi vịt .94 4.4.4.3 Hoạt tính kháng virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY lịng đỏ tế bào xơ phơi vịt 24 trước gây nhiễm 96 4.4.4.4 Hoạt tính kháng virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY lòng đỏ tế bào xơ phôi vịt 24 sau gây nhiễm .97 4.4.5 Ứng dụng dịch kháng thể IgY lòng đỏ phòng trị bệnh viêm gan vịt virus type I genotype 99 4.4.5.1 Kết xác định liều bảo hộ 50% phôi vịt 12 ngày tuổi dịch kháng thể IgY lòng đỏ .99 4.4.5.2Kết phòng bệnh viêm gan vịt virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY lòng đỏ vịt ngày tuổi… 101 4.4.5.3 Kết trị bệnh viêm gan vịt virus type I genotype dịch kháng thể IgY long đỏ vịt ngày tuổi 102 Chương Kết luận đề nghị .106 5.1 Kết luận… 106 5.2 Đề nghị .106 Tài liệu tham khảo… .108 Phụ lục……………………………………………………………………… DANH SÁCH BẢNG Bảng 3.1 Số lượng mẫu thu thập tỉnh Đồng sông Cửu Long………………………………………………… 30 Bảng 3.2 Các trình tự mồi sử dụng phản ứng RT-PCR… 33 Bảng 3.3 Bố trí thí nghiệm vịt………… 36 Bảng 3.4 Bố trí thí nghiệm gây nhiễm vịt con……………… 37 Bảng 3.5 Bố trí thí nghiệm gây miễn dịch gà mái……………… 39 Bảng 3.6 Bố trí thí nghiệm xác định liều bảo hộ 50% phôi vịt kháng thể IgY………………………………… 45 gây nhiễm phôi ĐPL = X/10 subtracted from: ĐPL X/100 X/1000 Lower Center Upper -0.03103 -0.03148 -0.00690 -0.00735 0.01723 0.01678 + - + -+ -+ -+ -0.120 + + -0.060 0.000 ( -* -) ( -* -) + 0.060 ĐPL = X/100 subtracted from: ĐPL X/1000 Lower Center Upper -0.02458 -0.00045 0.02368 + -+ -+ + - + + ( -*- -) + + -0.120 -0.060 0.000 0.060 Bảng 4.22 Hiệu phòng bệnh DHAV-3 dịch kháng thể IgY So sánh liều kháng thể qua đường uống Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 10PD50 30PD50 Total 19 counts Sống Chết Total 15 9.50 5.50 0.026 0.045 10 9.50 0.026 5.50 0.045 11 30 15 Chi-Sq = 0.144, DF = 1, P-Value = 0.705 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 10PD50 50PD50 Total 22 counts Sống Chết Total 15 11.00 4.00 0.364 1.000 13 11.00 0.364 4.00 1.000 15 30 Chi-Sq = 2.727, DF = 1, P-Value = 0.099 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Sống Chết Total 15 10PD50 10.00 5.00 0.100 K.T.V Total 11 10.00 0.100 20 0.200 15 5.00 0.200 10 30 Chi-Sq = 0.600, DF = 1, P-Value = 0.439 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Sống 12.00 0.750 10PD50 ĐC(-) 15 12.00 0.750 Total 24 Chết Total 15 3.00 3.000 15 3.00 3.000 30 Chi-Sq = 7.500, DF = 1, P-Value = 0.006 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Sống Chết Total 15 5.00 10.00 3.200 1.600 10PD50 ĐC(+) Total 5.00 3.200 10 20 10.00 1.600 14 15 30 Chi-Sq = 9.600, DF = 1, P-Value = 0.002 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 30PD50 50PD50 Sống 10 11.50 0.196 Chết Total 15 3.50 0.643 13 11.50 0.196 3.50 0.643 15 Total 23 30 Chi-Sq = 1.677, DF = 1, P-Value = 0.195 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 30PD50 K.T.V Total counts Sống Chết Total 10 15 10.50 4.50 0.024 0.056 11 10.50 0.024 21 4.50 0.056 15 30 Chi-Sq = 0.159, DF = 1, P-Value = 0.690 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 30PD50 ĐC(-) Total counts Sống Chết Total 10 15 12.50 2.50 0.500 2.500 15 12.50 0.500 25 2.50 2.500 15 30 Chi-Sq = 6.000, DF = 1, P-Value = 0.014 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 30PD50 ĐC(+) Total Sống 10 5.50 3.682 Chết Total 15 9.50 2.132 14 15 5.50 9.50 3.682 2.132 11 19 30 Chi-Sq = 11.627, DF = 1, P-Value = 0.001 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 50PD50 K.T.V Total Sống 13 12.00 0.083 Chết Total 15 3.00 0.333 11 12.00 0.083 24 3.00 0.333 15 30 Chi-Sq = 0.833, DF = 1, P-Value = 0.361 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 50PD50 ĐC(-) Total counts Sống Chết Total 13 15 14.00 1.00 0.071 1.000 15 14.00 0.071 28 1.00 1.000 15 30 Chi-Sq = 2.143, DF = 1, P-Value = 0.143 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 50PD50 ĐC(+) Total Sống 13 7.00 5.143 Chết Total 15 8.00 4.500 14 15 7.00 8.00 5.143 4.500 14 16 30 Chi-Sq = 19.286, DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts K.T.V Sống 11 Chết Total 15 13.00 0.308 ĐC(-) Total 15 13.00 0.308 26 2.00 2.000 15 2.00 2.000 30 Chi-Sq = 4.615, DF = 1, P-Value = 0.032 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Sống 11 6.00 4.167 K.T.V ĐC(+) Total Chết Total 15 9.00 2.778 14 15 6.00 9.00 4.167 2.778 12 18 30 Chi-Sq = 13.889, DF = 1, P-Value = 0.000 So sánh liều kháng thể qua đường tiêm Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 10PD50 30PD50 Total 22 counts Sống Chết Total 10 15 11.00 4.00 0.091 0.250 12 11.00 0.091 4.00 0.250 15 30 Chi-Sq = 0.682, DF = 1, P-Value = 0.409 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 10PD50 50PD50 counts Sống Chết Total 10 15 12.00 3.00 0.333 1.333 14 12.00 0.333 3.00 1.333 15 Total 24 30 Chi-Sq = 3.333, DF = 1, P-Value = 0.068 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Sống 10 11.50 0.196 10PD50 K.T.V Total 13 11.50 0.196 23 Chết Total 15 3.50 0.643 3.50 0.643 15 30 Chi-Sq = 1.677, DF = 1, P-Value = 0.195 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 10PD50 ĐC(-) Total counts Sống Chết Total 10 15 12.50 2.50 0.500 2.500 15 12.50 0.500 25 2.50 2.500 15 30 Chi-Sq = 6.000, DF = 1, P-Value = 0.014 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 10PD50 ĐC(+) counts Sống Chết Total 10 15 5.50 9.50 3.682 2.132 14 15 5.50 9.50 3.682 2.132 Total 11 19 30 Chi-Sq = 11.627, DF = 1, P-Value = 0.001 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 30PD50 50PD50 Total 26 counts Sống Chết Total 12 15 13.00 2.00 0.077 0.500 14 13.00 0.077 2.00 0.500 15 30 Chi-Sq = 1.154, DF = 1, P-Value = 0.283 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 30PD50 K.T.V Total counts Sống Chết Total 12 15 12.50 2.50 0.020 0.100 13 12.50 0.020 25 2.50 0.100 15 30 Chi-Sq = 0.240, DF = 1, P-Value = 0.624 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 30PD50 ĐC(-) Total counts Sống Chết Total 12 15 13.50 1.50 0.167 1.500 15 13.50 0.167 27 15 1.50 1.500 30 Chi-Sq = 3.333, DF = 1, P-Value = 0.068 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Sống 12 6.50 4.654 30PD50 ĐC(+) Total Chết Total 15 8.50 3.559 14 15 6.50 8.50 4.654 3.559 13 17 30 Chi-Sq = 16.425, DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 50PD50 K.T.V Total counts Sống Chết Total 14 15 13.50 1.50 0.019 0.167 13 13.50 0.019 27 1.50 0.167 15 30 Chi-Sq = 0.370, DF = 1, P-Value = 0.543 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 50PD50 ĐC(-) Total counts Sống Chết Total 14 15 14.50 0.50 0.017 0.500 15 14.50 0.017 29 0.50 0.500 15 30 Chi-Sq = 1.034, DF = WARNING: cells with expected counts less than Chi-Square approximation probably invalid cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Sống 50PD50 Chết Total 14 7.50 7.50 15 5.633 ĐC(+) Total 5.633 14 15 7.50 7.50 5.633 5.633 15 15 30 Chi-Sq = 22.533, DF = 1, P-Value = 0.000 So sánh liều kháng thể đường uống đường tiêm Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 10PD50 10PD50 Total Sống 9.50 0.026 Chết Total 15 5.50 0.045 10 9.50 0.026 5.50 0.045 11 30 19 15 Chi-Sq = 0.144, DF = 1, P-Value = 0.705 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 10PD50 30PD50 Total 21 counts Sống Chết Total 15 10.50 4.50 0.214 0.500 12 10.50 0.214 4.50 0.500 15 30 Chi-Sq = 1.429, DF = 1, P-Value = 0.232 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 10PD50 50PD50 counts Sống Chết Total 15 11.50 3.50 0.543 1.786 14 11.50 0.543 3.50 1.786 15 Total 23 30 Chi-Sq = 4.658, DF = 1, P-Value = 0.031 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 10PD50 K.T.V Total Sống 11.00 0.364 13 11.00 0.364 22 Chết Total 15 4.00 1.000 4.00 1.000 15 30 Chi-Sq = 2.727, DF = 1, P-Value = 0.099 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 30PD50 30PD50 Total 22 counts Sống Chết Total 10 15 11.00 4.00 0.091 0.250 12 11.00 0.091 4.00 0.250 15 30 Chi-Sq = 0.682, DF = 1, P-Value = 0.409 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 30PD50 50PD50 Total 24 counts Sống Chết Total 10 15 12.00 3.00 0.333 1.333 14 12.00 0.333 3.00 1.333 15 30 Chi-Sq = 3.333, DF = 1, P-Value = 0.068 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 30PD50 K.T.V Total counts Sống Chết Total 10 15 11.50 3.50 0.196 0.643 13 11.50 0.196 23 3.50 0.643 15 30 Chi-Sq = 1.677, DF = 1, P-Value = 0.195 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 50PD50 50PD50 Total 27 counts Sống Chết Total 13 15 13.50 1.50 0.019 0.167 14 13.50 0.019 1.50 0.167 15 30 Chi-Sq = 0.370, DF = 1, P-Value = 0.543 cells with expected counts less than Bảng 4.23 Hiệu trị bệnh virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY So sánh liều kháng thể thời điểm cấp 12 sau công cường độc Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 10PD50 30PD50 Total 23 counts Sống Chết Total 11 15 11.50 3.50 0.022 0.071 12 11.50 0.022 3.50 0.071 15 30 Chi-Sq = 0.186, DF = 1, P-Value = 0.666 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 10PD50 50PD50 Total 24 counts Sống Chết Total 11 15 12.00 3.00 0.083 0.333 13 12.00 0.083 3.00 0.333 15 30 Chi-Sq = 0.833, DF = 1, P-Value = 0.361 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 10PD50 K.T.V Total counts Sống Chết Total 11 15 11.50 3.50 0.022 0.071 12 11.50 0.022 23 15 3.50 0.071 30 Chi-Sq = 0.186, DF = 1, P-Value = 0.666 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 10PD50 ĐC(-) Total 26 Sống 11 13.00 0.308 Chết Total 15 2.00 2.000 15 13.00 0.308 15 2.00 2.000 30 Chi-Sq = 4.615, DF = 1, P-Value = 0.032 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 30PD50 ĐC(-) Total 27 counts Sống Chết Total 12 15 15 13.50 1.50 15 1.50 0.167 1.500 13.50 0.167 1.500 30 Chi-Sq = 3.333, DF = 1, P-Value = 0.068 cells with expected counts less than So sánh liều cấp kháng thể sau công cường độc 24 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 10PD50 50PD50 Total Sống 10.00 0.400 Chết Total 15 5.00 0.800 12 10.00 0.400 5.00 0.800 10 30 20 15 Chi-Sq = 2.400, DF = 1, P-Value = 0.121 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 30PD50 Sống 10 12.50 0.500 ĐC(-) Total 15 12.50 0.500 25 Chết Total 15 2.50 2.500 2.50 2.500 15 30 Chi-Sq = 6.000, DF = 1, P-Value = 0.014 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts So sánh 12 24 50PD50 0.595 10.50 0.595 10PD50 Total Sống 21 Chết Total 13 10.50 15 4.50 1.389 4.50 1.389 30 Chi-Sq = 3.968, DF = 1, P-Value = 0.046 cells with expected counts less than 15 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Sống Chết Total 13 15 11.50 3.50 0.196 0.643 50PD50 30PD50 Total 10 11.50 0.196 23 3.50 0.643 15 30 Chi-Sq = 1.677, DF = 1, P-Value = 0.195 cells with expected counts less than PHỤ LỤC Bảng mã di truyền sử dụng cho virus The Bacterial Genetic Code TTT TTC TTA TTG CTT CTC CTA CTG ATT ATC ATA ATG F Phe F Phe L Leu L Leu L Leu L Leu L Leu L Leu I Ile I Ile I Ile M Met GTT GTA GTG TCT TCC TCA TCG CCT CCC CCA CCG ACT ACC ACA ACG S Ser S Ser S Ser S Ser P Pro P Pro P Pro P Pro T Thr T Thr T Thr T Thr GTC V Val GCT A Ala V Val GCC A Ala V Val GCA A Ala V Val GCG A Ala XXX: Protential initiation codon (always encodes fMet) TAA, TAG, TGA: Termination codon TAT TAC TAA TAG CAT CAC CAA CAG AAT AAC AAA AAG Y Tyr Y Tyr *STOP H His H His Q Gln Q Gln N Asn N Asn K Lys K Lys TGT TGC TGA TGG CGT CGC CGA CGG AGT AGC AGA AGG C Cys C Cys *STOP W Trp R Arg R Arg R Arg R Arg S Ser S Ser R Arg R Arg GAT GAC GAA GAG D Asp D Asp E Glu E Glu GGT GGC GGA GGG G Gly G Gly G Gly G Gly *STOP Ký hiệu quốc tế theo cặp ba nucleotide ( The DNA degenerate alphabet) A C Adenosine Cytidine R= A or G Y= C or T PuRin PYrimidine B= C, G or T D= A, G or T not A not C G Guanosine T Thymidine K= G or T Keto (in large groove) M= A or C aMino (in large groove) H= A, C or T N= A, C, G or T (aNy) V= A, C or G S= G or C Strong (3 H bonds) W= A or T Weak (2 H bonds) not G not T Bảng ký hiệu 20 axit amin thong thường Glycin Alanin Valin Leucin Isoleucin Prolin Serin Threonin Cystein Methionin G A V L I P S T C M Gly Ala Val Leu Ile Pro Ser Thr Cys Met Asparagin Glutamin Phenylalanin Tyrosin Tryptophan Aspartat Glutamat Lysin Arginin Histidin N Q F Y W D E K R H Asn Glu Phe Tyr Trp Asp Glu Lys Arg His ... tài: ? ?Phân lập, định danh virus viêm gan vịt số tỉnh Đồng sông Cửu Long sản xuất kháng thể phòng bệnh” thực cách phân lập virus viêm gan vịt từ ổ dịch ngồi tự nhiên tỉnh Đồng sơng Cửu Long (Kiên...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ PHẠM CÔNG UẨN PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH VIRUS VIÊM GAN VỊT Ở MỘT SỐ TỈNH ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG VÀ SẢN XUẤT KHÁNG THỂ PHÒNG BỆNH LUẬN ÁN TIẾN... ? ?Phân lập, định danh virus viêm gan vịt số tỉnh đồng sơng Cửu Long sản xuất kháng thể phịng bệnh” thực 1.2 Mục tiêu nghiên cứu đề tài Mục tiêu đề tài phân lập, định danh virus gây bệnh viêm gan