Phân lập, định danh virus viêm gan vịt ở một số tỉnh đồng bằng sông cửu long và sản xuất kháng thể phòng bệnh

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ PHẠM CÔNG UẨN PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH VIRUS VIÊM GAN VỊT Ở MỘT SỐ TỈNH ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG VÀ SẢN XUẤT KHÁNG THỂ PHÒNG BỆNH LUẬN ÁN TIẾN SỸ CHUYÊN NGÀNH: VI SINH VẬT HỌC NĂM 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ PHẠM CÔNG UẨN PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH VIRUS VIÊM GAN VỊT Ở MỘT SỐ TỈNH ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG VÀ SẢN XUẤT KHÁNG THỂ PHÒNG BỆNH LUẬN ÁN TIẾN SỸ CHUYÊN NGÀNH: VI SINH VẬT HỌC MÃ NGÀNH: 62 42 01 07 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGS.TS.HỒ THỊ VIỆT THU NĂM 2019 LỜI CẢM TẠ Tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến: PGS.TS.Hồ Thị Việt Thu tận tình bảo, hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi suốt thời gian thực hoàn thành luận án PGS.TS.Trần Nhân Dũng, PGS.TS.Nguyễn Văn Thành, PGS.TS.Nguyễn Minh Chơn, TS.Dương Thị Hương Giang, TS.Bùi Thị Minh Diệu động viên tạo điều kiện thuận lợi cho thực nội dung nghiên cứu phòng thí nghiệm Sinh học Phân tử, Cơng nghệ Enzyme suốt q trình thực luận án Các Sinh viên, Học viên Cao học chuyên ngành thú y giúp đỡ tơi q trình thực nội dung nghiên cứu luận án Cán phòng thí nghiệm Virus Miễn dịch học Bộ môn Thú y, Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng; phòng thí nghiệm Sinh học phân tử, Công nghệ Enzyme Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học, trường Đại học Cần thơ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận án Quý Thầy Cô anh chị em đồng nghiệp Bộ môn Thú y, trường Đại học Cần thơ Q Thầy Cơ giảng dạy Chương trình Nghiên cứu sinh chuyên ngành Vi sinh vật học, truyền đạt cho kiến thức quý báu thời gian học tập Xin chân thành cảm ơn tất người thân giúp đỡ động viên thời gian thực hoàn thành luận án Tác giả Phạm Cơng Uẩn i CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết trình bày luận án cơng trình nghiên cứu NCS Phạm Công Uẩn với hướng dẫn PGS.TS.Hồ Thị Việt Thu Tất số liệu, kết trình bày luận án hồn tồn trung thực chưa công bố riêng lẻ cơng trình trước Người hướng dẫn khoa học Tác giả luận án PGS.TS.Hồ Thị Việt Thu NCS.Phạm Công Uẩn ii MỤC LỤC Trang Lời cảm tạ………………………………………………………………… ….i Lời cam đoan……………………………………… ii Mục lục……………………………………………………………………… iii Danh sách bảng…………………………………… ix Danh sách hình…………………………………………………………… .xi Danh mục từ viết tắt……………………………………………………… xiii Tóm tắt……………………………………………………………………….xv Abstract …………………………………………………………………….xvii Chương Giới thiệu……………………………………………………… 1.1 Đặt vấn đề………………………………………………………………… 1.2 Mục tiêu nghiên cứu đề tài…………………………………………… 1.3 Những đóng góp khoa học…………………………………………2 Chương Lược khảo tài liệu……………………………………………… 2.1 Lịch sử phát bệnh viêm gan vịt virus … 2.2 Bệnh viêm gan vịt virus 2.2.1 Đặc điểm tác nhân gây bệnh.……………… 2.2.2 Sự xâm nhập đường lây lan 2.2.3 Cơ chế sinh bệnh 2.2.4 Đặc điểm dịch tễ 2.2.5 Triệu chứng bệnh tích 2.2.5.1 Triệu chứng 2.2.5.2 Bệnh tích 2.2.6 Chẩn đốn phòng bệnh 2.2.6.1 Chẩn đoán 2.2.6.2 Phòng bệnh 2.3 Sinh học phân tử virus viêm gan vịt …………………………………….9 2.3.1 Hình thái cấu tạo virus viêm gan vịt type I ………………………9 iii 2.3.2 Thành phần hệ gen virus viêm gan vịt type I ………………………10 2.3.3 Cấu trúc hệ gen protein virus viêm gan vịt type I ………………10 2.3.4 Đặc tính kháng nguyên khả gây bệnh virus ……………….12 2.3.5 Xếp loại virus viêm gan vịt …………………………………………… 12 2.4 Đặc tính sinh học virus viêm gan vịt 13 2.4.1 Nuôi cấy phôi trứng 13 2.4.2 Nuôi cấy môi trường tế bào 14 2.4.3 Nuôi cấy động vật cảm thụ 14 2.4.4 Sức đề kháng virus viêm gan vịt 15 2.5 Tình hình nghiên cứu bệnh viêm gan vịt virus nước giới thời gian gần ……………………………………… 15 2.5.1 Tình hình nghiên cứu giới …………………………………… 15 2.5.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam …………………………………….16 2.6 Kháng thể IgY gà ……………………………… .17 2.6.1 Tính chất phân tử kháng thể IgY ……………………………… .18 2.6.2 Đặc tính hóa lý kháng thể IgY …………………………………… 19 2.6.3 Sự truyền kháng thể IgY từ máu gà mẹ sang lòng đỏ trứng 20 2.7 Phương pháp sản xuất kháng thể từ lòng đỏ trứng gà ….…………….20 2.7.1 Gây tối miễn dịch cho gà mái 20 2.7.2 Đường tiêm chủng cho gà mái 21 2.7.3 Tần số khoảng cách lần tiêm chủng cho gà mái .21 2.7.4 Chiết xuất kháng thể IgY 21 2.7.5 Các phương pháp tinh kháng thể IgY 22 2.7.5.1 Phương pháp kết tủa muối ammonium sulphat 22 2.7.5.2 Phương pháp thẩm tích 22 2.7.5.3 Sắc ký trao đổi ion 23 2.8 Những ứng dụng kháng thể IgY phòng trị bệnh gia cầm 23 2.9 Thành tựu phòng trị bệnh viêm gan vịt virus Việt Nam ……26 iv Chương Vật liệu phương pháp nghiên cứu 28 3.1 Nội dung nghiên cứu 28 3.2 Phương tiện nghiên cứu 28 3.2.1 Thởi gian địa điểm 28 3.2.2 Vật liệu nghiên cứu 29 3.2.3 Hóa chất mơi trường 29 3.3 Phương pháp nghiên cứu 30 3.3.1 Phân lập định danh virus viêm gan vịt số tỉnh đồng sông Cửu Long 30 3.3.1.1 Phương pháp lấy mẫu 30 3.3.1.2 Phương pháp xử lý mẫu 31 3.3.1.3 Phương pháp phân lập virus viêm gan vịt môi trường phôi trứng vịt 31 3.3.1.4 Phương pháp cấy truyền virus viêm gan vịt môi trường tế bào xơ phôi vịt sơ cấp 31 3.3.1.5 Định danh virus viêm gan vịt sinh học phân tử 32 3.3.2 Nghiên cứu di truyền virus viêm gan vịt type I genotype 33 3.3.2.1 Giải trình tự nucleotide sản phẩm RT-PCR 33 3.3.2.2 Nghiên cứu di truyền chủng virus viêm gan vịt type I genotype phân lập được… ………………………………… 34 3.3.3 Khảo sát độc lực 01 chủng virus viêm gan vịt type I genotype phôi vịt vịt con….……………………………………… 34 3.3.3.1 Xác định liều gây nhiễm 50% tế bào xơ phôi vịt 01 chủng virus viêm gan vịt type I genotype …………………………………34 3.3.3.2 Xác định liều gây chết 50% phôi vịt khảo sát bệnh tích biểu phơi 01 chủng virus viêm gan vịt type I genotype ……… 35 3.3.3.3 Xác định liều gây chết 50% vịt thí nghiệm khảo sát đặc điểm bệnh lý 01 chủng virus viêm gan vịt type I genotype … …………….36 3.3.3.4 Khảo sát bệnh tích vi thể từ mẫu bệnh phẩm vịt khảo sát LD50 .38 v 3.3.4 Sản xuất kháng thể kháng virus viêm gan vịt type I genotype công nghệ tạo kháng thể IgY gà mái ứng dụng phòng, trị bệnh 38 3.3.4.1 Tạo miễn dịch cho gà mái …………… .38 3.3.4.2 Tách chiết kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà 40 3.3.4.3 Kiểm tra hiệu giá kháng thể IgY huyết gà mái lòng đỏ trứng gà 40 3.3.4.4 Xác định liều an toàn dịch kháng thể IgY lòng đỏ trứng gà tế bào xơ phôi vịt 41 3.3.4.5 Khảo sát hoạt tính kháng virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY lòng đỏ trứng gà tế bào xơ phôi vịt 24 trước gây nhiễm……………………………………………………43 3.3.4.6 Khảo sát hoạt tính kháng virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY lòng đỏ trứng gà tế bào xơ phôi vịt 24 sau gây nhiễm…………………………………………………… 44 3.3.4.7 Xác định liều bảo hộ 50% phôi vịt 12 ngày tuổi kháng thể IgY lòng đỏ trứng gà phản ứng trung hòa virus 44 3.3.4.8 Thử nghiệm hiệu phòng bệnh virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY lòng đỏ trứng gà vịt con…….46 3.3.4.9 Thử nghiệm hiệu trị bệnh virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY lòng đỏ trứng gà vịt con…… 47 3.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 50 Chương Kết thảo luận 51 4.1 Kết phân lập định danh virus gây bệnh viêm gan vịt số tỉnh đồng sông Cửu Long 51 4.1.1 Kết phân lập virus viêm gan vịt môi trường phôi vịt 51 4.1.2 Kết cấy truyền virus viêm gan vịt môi trường tế bào xơ phôi vịt sơ cấp 53 4.1.3 Kết định danh virus viêm gan vịt kỹ thuật sinh học phân tử 55 4.2 Kết khảo sát đặc điểm di truyền phân tử chủng virus viêm gan vịt type I genotype phân lập 57 4.2.1 Kết giải trình tự nucleotide sản phẩm RT-PCR 57 vi 4.2.2 Tìm kiếm tương đồng với virus viêm gan vịt type I genotype khác đăng ký Ngân hàng gen Thế giới 60 4.2.3 So sánh tỷ lệ tương đồng nucleotide axít amin chủng phân lập với chủng khác Ngân hàng gen Thế giới ……………… 60 4.3 Kết khảo sát độc lực virus viêm gan vịt type I genotype phôi vịt vịt con…………………………………………… 65 4.3.1 Kết khảo sát độc lực tính gây bệnh virus viêm gan vịt type I genotype phôi vịt…………………………………………65 4.3.1.1 Kết xác định liều gây chết 50% phơi vịt thí nghiệm…………….65 4.3.1.2 Kết khảo sát thời gian chết phôi trung bình theo nồng độ……….66 4.3.1.3 Biểu bệnh tích phơi vịt thí nghiệm………………………….69 4.3.2 Kết khảo sát độc lực tính gây bệnh virus viêm gan vịt type I genotype vịt con………………………………………… 71 4.3.2.1 Kết xác định liều gây chết 50% vịt con…………………… 71 4.3.2.2 Khảo sát thời gian vịt chết trung bình theo nồng độ virus khác nhau………………………………………………………………… 72 4.3.2.3 Khảo sát triệu chứng lâm sang vịt thí nghiệm …………………… 74 4.3.2.4 Khảo sát bệnh tích đại thể vịt thí nghiệm qua mổ khám ……… 76 4.3.2.5 Khảo sát bệnh tích vi thể vịt thí nghiệm …………………………79 4.4 Sản xuất kháng thể kháng virus viêm gan vịt type I genotype công nghệ tạo kháng thể IgY gà mái………………………… 83 4.4.1 Kết phân tích hiệu giá kháng thể IgY huyết gà mái……… 83 4.4.2 Mối tương quan hàm lượng kháng thể IgY máu gà trứng gà sau gây miễn dịch…………………………………………90 4.4.3 Trích ly kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà phương pháp tủa phân đoạn muối Amonium sulphat 40% 91 4.4.4 Khảo sát độc tính dịch kháng thể IgY lòng đỏ trứng gà tế bào xơ phôi vịt tính kháng virus viêm gan vịt type I genotype tế bào xơ phôi vịt………………………………………93 4.4.4.1 Kết xác định liều gây nhiễm 50% tế bào xơ phôi vịt virus viêm gan vịt type I genotype 3……………………………… 93 vii 4.4.4.2 Kết xác định liều an toàn dịch kháng thể IgY lòng đỏ tế bào xơ phơi vịt……………………………………………………94 4.4.4.3 Hoạt tính kháng virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY lòng đỏ tế bào xơ phơi vịt 24 trước gây nhiễm……… 96 4.4.4.4 Hoạt tính kháng virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY lòng đỏ tế bào xơ phôi vịt 24 sau gây nhiễm…………………………………………………………… 97 4.4.5 Ứng dụng dịch kháng thể IgY lòng đỏ phòng trị bệnh viêm gan vịt virus type I genotype 3……………………………… 99 4.4.5.1 Kết xác định liều bảo hộ 50% phôi vịt 12 ngày tuổi dịch kháng thể IgY lòng đỏ………………………………………………99 4.4.5.2 Kết phòng bệnh viêm gan vịt virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY lòng đỏ vịt ngày tuổi………………………………………………………………… 101 4.4.5.3 Kết trị bệnh viêm gan vịt virus type I genotype dịch kháng thể IgY long đỏ vịt ngày tuổi……………… 102 Chương Kết luận đề nghị…………………………………………….106 5.1 Kết luận………………………………………………………………….106 5.2 Đề nghị………………………………………………………………… 106 Tài liệu tham khảo………………………………………………………….108 Phụ lục……………………………………………………………………… viii ĐPL = X/10 subtracted from: ĐPL X/100 X/1000 - Lower -0.03103 Center -0.00690 Upper + - + - + 0.01723 ( - * - ) -0.03148 -0.00735 0.01678 + -0.120 ( - * - ) + - + -0.060 0.000 + +-0.060 ĐPL = X/100 subtracted from: ĐPL X/1000 - Lower Center -0.02458 -0.00045 Upper + - + - + 0.02368 + -0.120 ( - * + - + -0.060 0.000 Bảng 4.22 Hiệu phòng bệnh DHAV-3 dịch kháng thể IgY So sánh liều kháng thể qua đường uống Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 Sống 9.50 0.026 30PD50 10 Total Chết Total 15 5.50 0.045 15 9.50 0.026 5.50 0.045 11 30 19 Chi-Sq = 0.144, DF = 1, P-Value = 0.705 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 Sống 11.00 0.364 50PD50 13 11.00 0.364 Total 22 Chết Total 15 4.00 1.000 15 4.00 1.000 30 Chi-Sq = 2.727, DF = 1, P-Value = 0.099 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 158 +-) +-0.060 10PD50 Sống 10.00 0.100 K.T.V 11 10.00 0.100 Total 20 Chết Total 15 5.00 0.200 15 5.00 0.200 10 30 Chi-Sq = 0.600, DF = 1, P-Value = 0.439 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 Sống 12.00 0.750 ĐC(-) 15 12.00 0.750 Total Chết Total 15 3.00 3.000 15 3.00 3.000 24 30 Chi-Sq = 7.500, DF = 1, P-Value = 0.006 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 Sống Chết Total 15 5.00 10.00 3.200 1.600 ĐC(+) 5.00 14 10.00 3.200 1.600 10 20 Total 15 30 Chi-Sq = 9.600, DF = 1, P-Value = 0.002 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 30PD50 Sống 10 11.50 0.196 50PD50 13 11.50 0.196 Chết Total 15 3.50 0.643 15 3.50 0.643 159 Total 23 30 Chi-Sq = 1.677, DF = 1, P-Value = 0.195 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 30PD50 Sống 10 10.50 0.024 K.T.V 11 10.50 0.024 Total Chết Total 15 4.50 0.056 4.50 0.056 21 15 30 Chi-Sq = 0.159, DF = 1, P-Value = 0.690 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 30PD50 Sống 10 12.50 0.500 ĐC(-) 15 12.50 0.500 Total 25 Chết Total 15 2.50 2.500 15 2.50 2.500 30 Chi-Sq = 6.000, DF = 1, P-Value = 0.014 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 30PD50 Sống 10 5.50 3.682 Chết Total 15 9.50 2.132 ĐC(+) 14 5.50 3.682 9.50 2.132 19 30 Total 11 15 Chi-Sq = 11.627, DF = 1, P-Value = 0.001 160 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 50PD50 Sống 13 12.00 0.083 Chết Total 15 3.00 0.333 K.T.V 11 12.00 0.083 Total 24 15 3.00 0.333 30 Chi-Sq = 0.833, DF = 1, P-Value = 0.361 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 50PD50 Sống 13 14.00 0.071 ĐC(-) 15 14.00 0.071 Total 28 Chết Total 15 1.00 1.000 15 1.00 1.000 30 Chi-Sq = 2.143, DF = 1, P-Value = 0.143 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 50PD50 Sống 13 7.00 5.143 Chết Total 15 8.00 4.500 ĐC(+) 14 7.00 5.143 8.00 4.500 16 30 Total 14 15 Chi-Sq = 19.286, DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts Sống K.T.V 11 Chết Total 15 161 13.00 2.00 0.308 2.000 ĐC(-) 15 15 13.00 2.00 0.308 2.000 Total 26 30 Chi-Sq = 4.615, DF = 1, P-Value = 0.032 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts K.T.V Sống 11 6.00 4.167 Chết Total 15 9.00 2.778 ĐC(+) 14 6.00 4.167 9.00 2.778 18 30 Total 12 15 Chi-Sq = 13.889, DF = 1, P-Value = 0.000 So sánh liều kháng thể qua đường tiêm Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 Sống 10 11.00 0.091 30PD50 12 11.00 0.091 Total 22 Chết Total 15 4.00 0.250 15 4.00 0.250 30 Chi-Sq = 0.682, DF = 1, P-Value = 0.409 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 Sống 10 12.00 0.333 50PD50 14 12.00 0.333 Chết Total 15 3.00 1.333 15 3.00 1.333 162 Total 24 30 Chi-Sq = 3.333, DF = 1, P-Value = 0.068 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 K.T.V Sống 10 11.50 0.196 13 11.50 0.196 Total 23 Chết Total 15 3.50 0.643 15 3.50 0.643 30 Chi-Sq = 1.677, DF = 1, P-Value = 0.195 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 ĐC(-) Sống 10 12.50 0.500 15 12.50 0.500 Total 25 Chết Total 15 2.50 2.500 15 2.50 2.500 30 Chi-Sq = 6.000, DF = 1, P-Value = 0.014 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 Sống 10 5.50 3.682 ĐC(+) 5.50 3.682 Chết Total 15 9.50 2.132 14 15 9.50 2.132 163 Total 11 19 30 Chi-Sq = 11.627, DF = 1, P-Value = 0.001 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 30PD50 Sống 12 13.00 0.077 50PD50 14 13.00 0.077 Total 26 Chết Total 15 2.00 0.500 15 2.00 0.500 30 Chi-Sq = 1.154, DF = 1, P-Value = 0.283 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 30PD50 Sống 12 12.50 0.020 K.T.V 13 12.50 0.020 Total 25 Chết Total 15 2.50 0.100 15 2.50 0.100 30 Chi-Sq = 0.240, DF = 1, P-Value = 0.624 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 30PD50 Sống 12 13.50 0.167 Chết Total 15 1.50 1.500 ĐC(-) 15 13.50 0.167 1.50 1.500 Total 27 15 30 Chi-Sq = 3.333, DF = 1, P-Value = 0.068 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết 164 Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 30PD50 Sống 12 6.50 4.654 Chết Total 15 8.50 3.559 ĐC(+) 14 6.50 4.654 8.50 3.559 17 30 Total 13 15 Chi-Sq = 16.425, DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 50PD50 Sống 14 13.50 0.019 K.T.V 13 13.50 0.019 Total 27 Chết Total 15 1.50 0.167 15 1.50 0.167 30 Chi-Sq = 0.370, DF = 1, P-Value = 0.543 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 50PD50 Sống 14 14.50 0.017 Chết Total 15 0.50 0.500 ĐC(-) 15 14.50 0.017 Total 29 15 0.50 0.500 30 Chi-Sq = 1.034, DF = expected counts less than Chi-Square approximation WARNING: cells with probably invalid counts less than cells with expected Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts Sống Chết Total 165 50PD50 14 7.50 5.633 ĐC(+) 14 7.50 5.633 Total 15 7.50 5.633 15 15 7.50 5.633 15 30 Chi-Sq = 22.533, DF = 1, P-Value = 0.000 So sánh liều kháng thể đường uống đường tiêm Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 Sống 9.50 0.026 10PD50 10 Total Chết Total 15 5.50 0.045 15 9.50 0.026 5.50 0.045 11 30 19 Chi-Sq = 0.144, DF = 1, P-Value = 0.705 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 Sống 10.50 0.214 30PD50 12 10.50 0.214 Total 21 Chết Total 15 4.50 0.500 15 4.50 0.500 30 Chi-Sq = 1.429, DF = 1, P-Value = 0.232 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 Sống 11.50 0.543 50PD50 14 11.50 0.543 Chết Total 15 3.50 1.786 15 3.50 1.786 166 Total 23 30 Chi-Sq = 4.658, DF = 1, P-Value = 0.031 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 K.T.V Sống 11.00 0.364 13 11.00 0.364 Total 22 Chết Total 15 4.00 1.000 15 4.00 1.000 30 Chi-Sq = 2.727, DF = 1, P-Value = 0.099 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 30PD50 Sống 10 11.00 0.091 30PD50 12 11.00 0.091 Total 22 Chết Total 15 4.00 0.250 15 4.00 0.250 30 Chi-Sq = 0.682, DF = 1, P-Value = 0.409 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 30PD50 Sống 10 12.00 0.333 50PD50 14 12.00 0.333 Total 24 Chết Total 15 3.00 1.333 15 3.00 1.333 30 Chi-Sq = 3.333, DF = 1, P-Value = 0.068 cells with expected counts less than 167 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 30PD50 K.T.V Sống 10 11.50 0.196 13 11.50 0.196 Total 23 Chết Total 15 3.50 0.643 15 3.50 0.643 30 Chi-Sq = 1.677, DF = 1, P-Value = 0.195 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 50PD50 Sống 13 13.50 0.019 50PD50 14 13.50 0.019 Total 27 Chết Total 15 1.50 0.167 15 1.50 0.167 30 Chi-Sq = 0.370, DF = 1, P-Value = 0.543 cells with expected counts less than Bảng 4.23 Hiệu trị bệnh virus viêm gan vịt type I genotype dịch kháng thể IgY So sánh liều kháng thể thời điểm cấp 12 sau công cường độc Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 Sống 11 11.50 0.022 30PD50 12 11.50 0.022 Total 23 Chết Total 15 3.50 0.071 15 3.50 0.071 30 Chi-Sq = 0.186, DF = 1, P-Value = 0.666 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts 168 Chi-Square contributions are printed below expected counts 10PD50 Sống 11 12.00 0.083 50PD50 13 12.00 0.083 Total 24 Chết Total 15 3.00 0.333 15 3.00 0.333 30 Chi-Sq = 0.833, DF = 1, P-Value = 0.361 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 K.T.V Sống 11 11.50 0.022 12 11.50 0.022 Total 23 Chết Total 15 3.50 0.071 15 3.50 0.071 30 Chi-Sq = 0.186, DF = 1, P-Value = 0.666 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 Sống 11 13.00 0.308 Chết Total 15 2.00 2.000 ĐC(-) 15 13.00 0.308 Total 26 15 2.00 2.000 30 Chi-Sq = 4.615, DF = 1, P-Value = 0.032 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 30PD50 Sống Chết 12 13.50 0.167 1.50 1.500 Total 15 169 ĐC(-) 15 15 13.50 1.50 0.167 1.500 Total 27 30 Chi-Sq = 3.333, DF = 1, P-Value = 0.068 cells with expected counts less than So sánh liều cấp kháng thể sau công cường độc 24 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 10PD50 Sống 10.00 0.400 50PD50 12 Chết Total 15 5.00 0.800 10.00 0.400 Total 20 15 5.00 0.800 10 30 Chi-Sq = 2.400, DF = 1, P-Value = 0.121 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 30PD50 ĐC(-) Sống 10 12.50 0.500 15 Chết Total 15 2.50 2.500 12.50 0.500 Total 25 15 2.50 2.500 30 Chi-Sq = 6.000, DF = 1, P-Value = 0.014 cells with expected counts less than Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts So sánh 12 24 50PD50 10PD50 Total 21 Sống 13 10.50 0.595 10.50 0.595 Chết Total 15 4.50 1.389 15 4.50 1.389 30 Chi-Sq = 3.968, DF = 1, P-Value = 0.046 cells with expected counts less than 170 Chi-Square Test: Sống, Chết Expected counts are printed below observed counts ChiSquare contributions are printed below expected counts 50PD50 Sống 13 11.50 0.196 30PD50 10 11.50 0.196 Total 23 Chết Total 15 3.50 0.643 15 3.50 0.643 30 Chi-Sq = 1.677, DF = 1, P-Value = 0.195 cells with expected counts less than PHỤ LỤC Bảng mã di truyền sử dụng cho virus The Bacterial Genetic Code TTT TTC TTA TTG F Phe F Phe L Leu L Leu TCT TCC TCA TCG S Ser S Ser S Ser S Ser TAT TAC TAA TAG Y Tyr Y Tyr *STOP CTT CTC CTA CTG L Leu L Leu L Leu L Leu CCT CCC CCA CCG P Pro P Pro P Pro P Pro ATT I Ile I Ile I Ile ACT ACC ACA ACG T Thr T Thr T Thr T Thr ATC ATA ATG M Met GTT V Val GCT A Ala GTC V Val GCC A Ala GTA V Val GCA A Ala GTG V Val GCG A Ala XXX: Protential initiation codon (always encodes fMet) TAA, TAG, TGA: Termination codon *STOP TGT TGC TGA TGG C Cys C Cys *STOP W Trp CAT CAC CAA CAG H His H His Q Gln Q Gln CGT CGC CGA CGG R Arg R Arg R Arg R Arg AAT AAC AAA AAG N Asn N Asn K Lys K Lys AGT AGC AGA AGG S Ser S Ser R Arg R Arg GAT GAC GAA GAG D Asp D Asp E Glu E Glu GGT GGC GGA GGG G Gly G Gly G Gly G Gly Ký hiệu quốc tế theo cặp ba nucleotide ( The DNA degenerate alphabet) 171 A Adenosine R= A or G PuRin B= C, G or T C Cytidine Y= C or T PYrimidine D= A, G or T G Guanosine H= A, C or T T Thymidine N= A, C, G or T (aNy) V= A, C or G K= G or T Keto (in large groove) S= G or C Strong (3 H bonds) M= A or C aMino (in large groove) W= A or T Weak (2 H bonds) not A not C not G not T Bảng ký hiệu 20 axit amin thong thường Glycin Alanin Valin Leucin Isoleucin Prolin Serin Threonin Cystein Methionin G A V L I P S T C M Gly Ala Val Leu Ile Pro Ser Thr Cys Met Asparagin Glutamin Phenylalanin Tyrosin Tryptophan Aspartat Glutamat Lysin Arginin Histidin 172 N Q F Y W D E K R H Asn Glu Phe Tyr Trp Asp Glu Lys Arg His ... Đề tài: Phân lập, định danh virus viêm gan vịt số tỉnh Đồng sông Cửu Long sản xuất kháng thể phòng bệnh thực cách phân lập virus viêm gan vịt từ ổ dịch tự nhiên tỉnh Đồng sông Cửu Long (Kiên... định danh virus viêm gan vịt số tỉnh đồng sông Cửu Long sản xuất kháng thể phòng bệnh thực 1.2 Mục tiêu nghiên cứu đề tài Mục tiêu đề tài phân lập, định danh virus gây bệnh viêm gan vịt đàn vịt. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ PHẠM CÔNG UẨN PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH VIRUS VIÊM GAN VỊT Ở MỘT SỐ TỈNH ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG VÀ SẢN XUẤT KHÁNG THỂ PHÒNG BỆNH LUẬN ÁN TIẾN SỸ