Đánh giá sự biến đổi thành phần hóa học của fucoidan được phân lập từ rong nâu sargassum mcclurei theo các phương pháp chiết khác nhau

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Trần Bảo Huy ĐÁNH GIÁ SỰ BIẾN ĐỔI THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA FUCOIDAN ĐƯỢC PHÂN LẬP TỪ RONG NÂU SARGASSUM MCCLUREI THEO CÁC PHƯƠNG PHÁP CHIẾT KHÁC NHAU Chuyên ngành: Mã số: Hố phân tích 44 01 18 LUẬN VĂN THẠC SĨ HOÁ HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Phạm Đức Thịnh PGS.TS Trần Thị Thanh Vân Hà Nội - 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi hướng dẫn TS Phạm Đức Thịnh PGS.TS Trần Thị Thanh Vân Các số liệu nêu luận văn trung thực Những kết luận khoa học luận văn chưa công bố cơng trình khác Nha Trang - 2021 Tác giả Nguyễn Trần Bảo Huy LỜI CẢM ƠN Trong q trình nghiên cứu hồn thành luận văn này, nhận quan tâm giúp đỡ quý báu thầy cô, bạn bè đồng nghiệp Đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc đến TS Phạm Đức Thịnh PGS.TS Trần Thị Thanh Vân tận tình hướng dẫn tạo điều kiện tốt giúp tơi hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ TS Cao Thị Thúy Hằng; ThS Đinh Thành Trung CN Nguyễn Thị Khánh Vy tận tình giúp đỡ, động viên tơi hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ tạo điều kiện mặt quý thầy cô, anh chị học viên cao học lớp CHE18 CHE19 công tác học tập Viện Nghiên cứu Ứng dụng công nghệ Nha Trang Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban lãnh đạo Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, Ban lãnh đạo Viện Nghiên cứu Ứng dụng công nghệ Nha Trang Ban lãnh đạo Khoa Hóa học tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thành học phần luận văn thủ tục cần thiết Tôi xin cảm ơn Sở Giáo dục Đào tạo Khánh Hòa, Ban lãnh đạo trường THPT Lý Tự Trọng, anh chị em đồng nghiệp tạo điều kiện công việc, động viên trợ giúp để dành thời gian chuyên tâm học tập hồn thành luận văn Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, người thân bạn bè quan tâm, động viên giúp đỡ tơi suốt q trình học tập hoàn thành luận văn Nha Trang - 2021 Tác giả Luận văn Nguyễn Trần Bảo Huy DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT NMR IR HPLC Nuclear Magnetic Resonance Infrared Spectroscopy desorption/ionization High Performance Liquid Chromatography Cộng hưởng từ hạt nhân Phổ hồng ngoại Sắc ký lỏng hiệu cao Tế bào sống sót CS Cell Survival IC50 Inhibitory Concentration 50% MeOH Methanol Methanol EtOH Ethanol Ethanol TFA Trifluoroacetic acid Axit trifluoroacetic DPPH 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl Man Mannose Đường mannose Fuc Fucose Đường fucose Gal Galactose Đường galactose Gluc Glucose Đường glucose Xyl Xylose Đường xylose GluA Glucuronic Acid Axit glucuronic ManA Mannuronic Acid Axit mannuronic GuluA Guluronic Acid Axit guluronic Nồng độ ức chế 50% tăng trưởng đối tượng thử DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 1 Bản đồ vị trí khu vực điều tra phân bố số chi rong nâu 10 Hình Phân tử Alginic acid 12 Hình Cấu trúc Laminaran 13 Hình Một đoạn cấu trúc Fucoidan 13 Hình Cấu trúc fucoidan có sunfat vị trí C-4 liên kết 3-O-linked từ lồi rong E Kurome mô tả vào năm 1991 17 Hình Cấu trúc fucoidan từ Fucus serratus 18 Hình Cấu trúc fucoidan từ Sargassum polycystum 30 Hình Mảnh cấu trúc fucoidan chiết từ rong T decurrens 32 Hình Sơ đồ cấu trúc deS-2, deS-4, deS-6 rong Sargassum aquifolium 34 Hình Rong khô S mcclurei 36 Hình 2 Sơ đồ chiết fucoidan từ rong nâu nước nóng 38 Hình Sơ đồ chiết fucoidan từ rong nâu theo Bản quyền Nga (Patent WO 2005/014657) 39 Hình Sơ đồ chiết fucoidan từ rong nâu dung dịch CaCl2 2% 40 Hình Sơ đồ chiết fucoidan từ rong nâu có hỗ trợ enzyme 41 Hình Cơ chế hịa tan xenlulose BmimCl 41 Hình Sơ đồ chiết fucoidan từ rong nâu chất lỏng ion 42 Hình Mơ hình cấu trúc thành tế bào rong nâu 50 Hình 3 Hình điện di C-PAGE fucoidan chiết phương pháp chiết khác 53 Hình Phổ hồng ngoại IR mẫu fucoidan thô chiết từ TN1 62 Hình Phổ hồng ngoại IR mẫu fucoidan thơ chiết từ TN2 63 Hình Phổ hồng ngoại IR mẫu fucoidan thô chiết từ TN3 64 Hình Phổ hồng ngoại IR mẫu fucoidan thô chiết từ TN4 65 Hình Phổ hồng ngoại IR mẫu fucoidan thô chiết từ TN5 65 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1 Thành phần hóa học số loài rong 11 Bảng Thành phần hóa học số fucoidan 16 Bảng Cấu trúc hóa học fucoidan từ số loài rong nâu 26 Bảng Hàm lượng, thành phần hóa học KLPT trung bình mẫu fucoidan phân lập từ loài rong nâu Việt Nam 32 Bảng Hoạt tính gây độc tế bào mẫu fucoidan dòng tế bào ung thư gan Hep-G2 ung thư mô liên kết RD 33 Bảng Các đỉnh phổ đặc trưng fucoidan phổ hồng ngoại 45 Bảng Kết phân tích thành phần hóa học rong nguyên liệu 49 Bảng Hiệu suất thu nhận fucoidan từ phương pháp chiết 52 Bảng 3 Hàm lượng fucoidan thu nhận từ loài rong 55 Bảng Thành phần hóa học fucoidan thu nhận 56 Bảng Nhận xét số thành phần hóa học fucoidan thu nhận 57 Bảng Thành phần đường đơn fucoidan thu nhận 58 Bảng Kết phân tích phổ hồng ngoại mẫu 61 Bảng Hàm lượng hoạt tính oxy hóa tổng fucoidan thu nhận 67 Bảng Khả bắt gốc DPPH fucoidan chiết từ rong nâu 68 DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC Phụ lục Đường chuẩn carbohydrate tổng số 79 Phụ lục Đường chuẩn Fucose 80 Phụ lục Đường chuẩn Galactose 81 Phụ lục Đường chuẩn Glucose 82 Phụ lục Đường chuẩn Sulfate 83 Phụ lục Đường chuẩn Uronic acid 84 Phụ lục Đường chuẩn Poly phenol 85 Phụ lục Đường chuẩn Protein 86 Phụ lục Đường chuẩn Hoạt tính chống oxy hóa tổng số 87 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ RONG BIỂN 1.1.1 Giới thiệu rong biển 1.1.2 Giới thiệu rong nâu 1.1.3 Một số thành phần hóa học rong nâu 10 1.1.3.1 Polysaccharide 12 1.1.3.2 Hợp chất Phenolic 14 1.1.3.3 Hợp chất Carotenoid 14 1.1.3.4 Hợp chất Terpenoid 14 1.1.3.5 Protein 14 1.2 TỔNG QUAN VỀ FUCOIDAN 15 1.2.1 Thành phần hóa học fucoidan 15 1.2.2 Đa dạng cấu trúc fucoidan 16 1.2.3 Hoạt tính sinh học fucoidan 18 1.2.3.1 Hoạt tính kháng khuẩn kháng virus 18 1.2.3.2 Hoạt tính chống oxy hóa 19 1.2.3.3 Hoạt tính kháng u điều hòa miễn dịch 19 1.2.3.4 Hoạt tính chống đơng tụ máu chống huyết khối 20 1.2.3.5 Chống lại bệnh gan 21 1.2.3.6 Giảm lipid máu 21 1.2.4 Ứng dụng fucoidan 22 1.3 TỔNG QUAN MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP CHIẾT FUCOIDAN 23 1.3.1 Phương pháp chiết fucoidan axit pH 2-3 23 1.3.2 Phương pháp chiết fucoidan nước nóng 23 1.3.3 Phương pháp chiết fucoidan dung dịch CaCl2 2% 23 1.3.4 Phương pháp chiết fucoidan ethanol 24 1.3.5 Phương pháp chiết fucoidan chất lỏng ion 24 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU FUCOIDAN TRÊN THẾ GIỚI VÀ Ở VIỆT NAM 26 1.4.1 Tình hình nghiên cứu fucoidan giới 26 1.4.2 Tình hình nghiên cứu fucoidan Việt Nam 28 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 35 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 35 2.1.1 Rong nâu Sargassum mcclurei 35 2.1.2 Chuẩn bị hóa chất thiết bị 36 2.1.2.1 Hóa chất 36 2.1.2.2 Thiết bị 37 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.2.1 Phương pháp chiết fucoidan 37 2.2.1.1 Phương pháp chiết fucoidan nước nóng 37 2.2.1.2 Phương pháp chiết fucoidan dung dịch HCl (pH:2-3) 38 2.2.1.3 Phương pháp chiết fucoidan dung dịch CaCl2 2% 39 2.2.1.4 Phương pháp chiết fucoidan có hỗ trợ enzyme 40 2.2.1.5 Phương pháp chiết fucoidan chất lỏng ion 41 2.2.2 Phương pháp xác định thành phần hóa học fucoidan 42 2.2.2.1 Phương pháp phân tích hàm lượng tổng carbohydrate 42 2.2.2.2 Phương pháp phân tích thành phần đường đơn 43 2.2.2.3 Phương pháp phân tích hàm lượng sulfate 43 2.2.2.4 Phương pháp phân tích hàm lượng uronic acid 43 2.2.2.5 Phương pháp phân tích hàm lượng polyphenol 44 2.2.2.6 Phương pháp phân tích hàm lượng protein 44 2.2.2.7 Phương pháp phân tích vị trí nhóm sulfate fucoidan 44 2.2.2.8 Phương pháp điện di gel carbonhydrate-polyacrilamide 45 2.2.3 Phương pháp thử hoạt tính chống oxy hóa fucoidan 46 2.2.3.1 Phương pháp xác định hoạt tính oxy hóa tổng số 46 2.2.3.2 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính chống oxy hóa DPPH 46 2.3 THỰC NGHIỆM 47 2.3.1 Thu thập xử lý rong nâu Sargassum mcclurei 47 2.3.2 Chiết fucoidan rong nâu Sargassum mcclurei 47 2.3.3 Xác định thành phần hóa học fucoidan 48 2.3.4 Xác định hoạt tính chống oxy hóa fucoidan 48 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 49 3.1 XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN 49 3.2 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN RONG NGUYÊN LIỆU 49 3.3 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH HIỆU SUẤT CHIẾT FUCOIDAN TỪ RONG SARGASSUM MCCLUREI BẰNG CÁC PHƯƠNG PHÁP KHÁC NHAU 51 3.4 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH ẢNH HƯỞNG CỦA PHƯƠNG PHÁP CHIẾT LÊN THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA FUCOIDAN CHIẾT TỪ RONG NÂU SARGASSUM MCCLUREI 55 3.5 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH ẢNH HƯỞNG CỦA PHƯƠNG PHÁP CHIẾT LÊN VỊ TRÍ CỦA NHĨM SULFATE TRÊN FUCOIDAN CHIẾT TỪ RONG NÂU SARGASSUM MCCLUREI 60 73 [22] Hồ Đức Cường, 2014, Nghiên cứu cấu trúc khảo sát hoạt tính sinh học Fucoidan alginate từ hai loài rong nâu Sargassum henslowianun Sargassum swartzii Việt Nam, Luận án tiến sĩ Hóa học, Đại học Bách Khoa, Hà Nội [23] Tơn Nữ Ngọc Minh, 2020, Xác định thành phần hóa học đặc điểm cấu trúc Polysaccharide Sulfate phân lập từ rong nâu Sargassum microcystum, Luận văn thạc sĩ hóa học, Viện Hóa học, Hà Nội [24] Nguyễn Duy Nhứt, Bùi Minh Lý, Thành Thị Thu Thủy, Nguyễn Mạnh Cường, Trần Văn Sung, 2009, Nghiên cứu Fucoidan có hoạt tính gây độc tế bào tách từ rong nâu Sargasum swartzii phương pháp phổ khối nhiều lần, Tạp chí Hóa học, 47(3), 300–307 [25] Li B., Lu F., Wei X., Zhao R., 2008, Fucoidan: Structure and bioactivity, Molecules, 13(8), 1671–1695 [26] Bilan M.I., Grachev A.A., Ustyuzhanina N.E., 2002, Structure of a Fucoidan from the brown seaweed Fucus evanescens C Ag, Carbohydr Res., 337, 238–245 [27] Bilan M.I., Grachev A.A., Shashkov A.S., Nifantiev N.E., Usov A.I., 2006, Structure of a Fucoidan from the brown seaweed Fucus serratus L., Carbohydr Res., 341, 238–245 [28] Percival E., McDowell R., 1967, Chemistry and enzymology of marine algal polysaccharides, Acad Press London New York, 6–28 & 73– 96 &157–174 [29] Percival E., Ross A., 1950, Fucoidin Part I: The isolation and purification of fucoidin from brown seaweeds, J Chem Soc., 717–720 [30] Nishino T., Aizu Y., Nagumo T., 1991, The influence of sulfate content and molecular weight of a fucan sulfate from the brown seaweed Ecklonia kurome on its antithrombin activity, Thromb Res., 64, 723–731 [31] Bilan M.I., Grachev A.A., Ustyuzhanina N.E., Shashkov A.S., Nifantiev N.E., Usov A.I., 2004, A Highly regular fraction of a Fucoidan 74 from the brown seaweed Fucus distichus L, Carbohydr Res., 339, 511–517 [32] Dohura K., Kuge T., Uomoto M., Nishizawa K., Kawasaki Y., Iha M., 2007, Prophylactic effect of dietary seaweed Fucoidan against enteral prion infection, Antimicrob Agents Chemother, 51, 2274–2277 [33] Nishino T., Yokoyama G., Dobahi K., 1989, Isolation, purification and characterization of fucose-containing sunphated polysaccharides from the brown seaweed Ecklonia kurome and their blood-anticoagulant activities, Carbohydr Res., 186, 119–129 [34] Zhang Q.B., Yu P.Z., Zhou G.F., Li Z.E., Xu Z.H., 2003, Studies on antioxidant activities of fucoidan from Laminaria japonica, Chin Trad Herb Drugs, 34, 824–826 [35] Noda H., Amano H., Arashima K., Nisizawa K., 1990, Antitumor activity of marine algae, Hydrobiologia, 204, 577–584 [36] Hiroko I., Hiroyuki N., Amano H., Zhuaug C., Mizuno T., Ito H., 1993, Antitumor activity and immunological properties of marine algal polysaccharides, especially fucoidan, prepared from Sargassum thunbergii of Phaeophyceae, Anticancer Res, 13(6A), 2045–2052 [37] Kobayashi T., Honke K., Miyazaki T., Matsumoto K., Nakamura T., Ishizuka I., Makita A., 1994, Hepatocyte growth factor (HGF) specifically binds to sulfoglycolipids, J.Biol chem, 269(13), 9817–9821 [38] Administration Washington DC, 2000, Public Heath service Food and drug, 14 [39] Sharmila G., Anna Sheba L., Ilakkia A., 2018, Determination of in vitro antioxidant activity of crude fucoidan extracted from Sargassum wightii by different methods, Int J Res Pharm Sci., 9(3), 984–989 [40] Bilan M.I., Klochkova N.G., Shashkov A.S., Usov A.I., 2018, Polysaccharides of Algae 71* Polysaccharides of the Pacific brown alga Alaria marginata, Russ Chem Bull., 67(1), 137–143 [41] Endres F., Abedin S.Z.E., 2006, Air and water stable ionic liquids 75 in physical chemistry, Endres F S.Z.E Abedin, 8, 2101–2116 [42] Seddon K.R., 1997, Ionic Liquids for Clean Technology, J Chem Technol Biotechnol., 68, 351–356 [43] Stark A., 2011, Ionic liquids in the biorefinery: a critical assessment of their potential., Energy Environ Sci., 4, 19–32 [44] Passos H., Freire M.G., Coutinho J.A.P., 2014, Ionic liquid solutions as extractive solvents for value-added compounds from biomass., Green Chem., 16, 4786–4815 [45] Canales R.I., Brennecke J.F., 2016, Comparison of Ionic Liquids to Conventional Organic Solvents for Extraction of Aromatics from Aliphatics., J Chem Engeneering data, 81, 1685–1699 [46] Teixeira R.E., 2012, Energy-Efficient Extraction of Fuel and Chemical Feedstocks from Algae., Green Chem., 14, 419–427 [47] Kim Y.H., Choi Y.K., Park J., Lee S., Yang Y.H., Kim H.J., Park T.J., Kim Y.H., Lee S.H., 2012, Ionic Liquid-Mediated Extraction of Lipids from Algal Biomass., Bioresour Technol., 109, 312–315 [48] Fujita K., Kobayanshi D., Nakamura N., Ohno H., 2013, Direct Dissolution of Wet and Saliferous Marine Mi-croalgae by Polar Ionic Liquids without Heating., Enzyme Microbial Technology, 52, 199-202 [49] Tushar J., Trivedi A.K., 2014, Efficient Extraction of Agarose from Red Algae Using Ionic Liquids, Green Sustain Chem., 4, 190–201 [50] Pezoa-Conte R., Leyton A., Anugwom I., von Schoultz S., Paranko J., Mäki-Arvela P., Willför S., Muszyński M., Nowicki J., Lienqueo M.E., Mikkola J.P, 2015, Deconstruction of the green alga Ulva rigida in ionic liquids: Closing the mass balance, Algal Res., 12, 265–273 [51] Thuy T.T.T., Van T.T.T., Yuguchi Y., Bui L.M., Nguyen T.T., 2013, Structure of fucoidan from brown seaweed Turbinaria ornata as Studied by Electrospray ionization Mass spectrometry (MSIMS) and Small Angle X-ray Scattering (SAXS) Techniques, Mar.Drugs, 11, 2431–2443 76 [52] Maria I Bilan, Nadezhda E Ustyuzhanina, Alexander S Shashkov, Thi Thu Thuy Thanh, Minh Ly Bui, Thi Thanh Van Tran, Van Nguyen Bui, Anatolii I Usov, 2017, Sulfated polysaccharides of the Vietnamese brown alga Sargassum aquifolium (Fucales, Sargassaceae), Carbohydr Res., 449, 23–31 [53] Nguyễn Hữu Dinh, Huỳnh Quang Năng, 2001, Năm loài thuộc chi rong Mơ - Sargassum ven biển Việt Nam., Tạp chí Sinh học, 23(1), 1–10 [54] Maria I Bilan, Nadezhda E Ustyuzhanina, Alexander S Shashkov, Thi Thu Thuy Thanh, Minh Ly Bui, Thi Thanh Van Tran, Van Nguyen Bui, Nikolay E Nifantiev, Anatolii I Usov, 2018, A sulfated galactofucan from the brown alga Hormophysa cuneiformis (Fucales, Sargassaceae), Carbohydr Res., 469, 48–54 [55] Thuan Thi Nguyen, Mikkelsen Maria Dalgaard, Vy Ha Nguyen Tran, Dieu Trang Vo Thi, Rhein-Knudsen Nanna, Holck Jesper, Rasin Anton B., Thuy Cao Hang Thi, Thanh Van Tran Thi, Meyer Anne S., 2020, Enzymeassisted fucoidan extraction from brown macroalgae fucus distichus subsp Evanescens and saccharina latissima, Mar Drugs, 18, 296 [56] Pinker A., Marsh K.N., Pang S., Staiger M.P., 2009, Ionic Liquids and Their Interaction with Cellulose., Chem Rev., 109, 6712–6728 [57] Dubois M., Gilles K.A., Hamilton J.K., Rebers P.A., Smith F., 1956, Colorimetric method for determination of sugars and related substances., Anal Chem, 28, 350–356 [58] Vishchuk O.S., Ermakova S.P., Zvyagintseva T.N., 2011, Sulfated polysaccharides from brown seaweeds Saccharina japonica and Undaria pinnatifida: isolation, structural characteristics, and antitumor activity., Carbohydr Res., 346, 2769–2776 [59] Dodgson K.S., Price R.G., 1962, A Note on the Determination of the Ester Sulfate Content of Sulfated Polysaccharides., Biochem J., 84, 106– 110 77 [60] Bitter T., Muir H.M., 1962, A modified uronic acid carbazole reaction., Anal Biochem, 4, 330–334 [61] Velioglu Y.S., Mazza G., Gao L., Oomah B D., 1998, Antioxidant activity and total phenolics in selected fruits, vegetables and grain products., J Agric Food Chem., 46(10), 4113–4117 [62] Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J., 1951, Protein measurement with the Folin phenol reagent., J biol Chem., 193, 265–275 [63] Chizhov A.O., Dell A., Morris H.R., 1999, A study of fucoidan from the brown seaweed Chorda filum., Carbohydr Res., 320, 108–119 [64] Hang T T Cao, Maria D Mikkelsen, Mateusz J Lezyk, Ly M Bui, Van T T Tran, Artem S Silchenko, Mikhail I Kusaykin, Thinh D Pham, Bang H Truong, Jesper Holck and Anne S Meyer, 2018, Novel Enzyme Actions for Sulphated Galactofucan Depolymerisation and a New Engineering Strategy for Molecular Stabilisation of Fucoidan Degrading Enzymes, Mar.Drugs, 16, 422 [65] Prieto P., Pineda M., Aguilar M., 1999, Spectrophotometric quantitation of antioxidant capacity through the formation of a phosphomolybdenum complex: Specifi c application to the determination of vitamin E., Anal Biochem., 269, 337–341 [66] Nguyễn Thị Cúc, Nguyễn Công Thùy Trâm, Đỗ Thị Phương, Vũ Thị Thu Phương, Thị Nguyễn Nga, Truan Gilles, Đỗ Thị Thảo, 2017, Nghiên cứu hoạt tính chống oxy hóa bảo vệ gan in vitro dịch chiết từ phèn đen (phyllanthus reticulates poir.), Tạp chí Công nghệ Sinh học, 15, 251–258 [67] Deniaud-Bouët E., Kervarec N., Michel G., Tonon T., Kloareg B., Hervé C., 2014, Chemical and enzymatic fractionation of cell walls from Fucales: Insights into the structure of the extracellular matrix of brown algae., Ann Bot., 114(6), 1203–1216 [68] Zhang Q., Yu P., Li Z., Zhang H., Xu Z., Li P., 2003, Antioxidant 78 activities of sulfated polysaccharide fractions from Porphyra haitanesis., J Appl Phycol., 15, 305–310 [69] Yoshizawa Y., Ametani A., Tsunehiro J., Nomura K., Itoh M., 1995, Macrophage stimulation activity of the polysaccharide fraction from a marine alga (Prophyra yezoensis): Structure-function relationships and improved solubility., Biosci Biotechnol Biochem., 59, 1933–1937 79 PHỤ LỤC Phụ lục Đường chuẩn carbohydrate tổng số Bảng: Giá trị mật độ quang OD tương ứng với nồng độ D-glucose Nồng độ OD 490nm D-glucose Lần Lần Lần Trung bình 20 0,175 0,173 0,178 0,175 ± 0,003 40 0,338 0,331 0,344 0,338 ± 0,007 80 0,665 0,656 0,671 0,664 ± 0,008 120 0,902 0,887 0,904 0,898 ± 0,009 160 1,170 1,183 1,164 1,172 ± 0,010 200 1,513 1,502 1,501 1,505 ± 0,007 (µg/ml) 1.600 y = 0.0073x + 0.0294 R² = 0.9975 1.400 1.200 OD 490 1.000 0.800 0.600 0.400 0.200 0.000 -50 50 100 150 200 250 Nồng độ D-glucose (µg/ml) Đồ thị đường chuẩn xác định hàm lượng carbohydrate tổng số Phương trình: D = 0,0073C + 0,0294 tuyến tính khoảng 0-200µg/ml Với giá trị R2= 0,9975   Có thể áp dụng Trong đó: C: nồng độ (µg/ml) D: mật độ quang 80 Phụ lục Đường chuẩn Fucose Bảng: Giá trị diện tích pic tương ứng với nồng độ fucose Nồng độ fucose (µmol/L) Diện tích pic 250 56,95 500 113,33 1000 223,73 2000 437,32 5000 1001,17 Đồ thị đường chuẩn xác định hàm lượng fucose Phương trình có dạng: D = 0,1979C + 20,203 Với giá trị R2= 0,9987   Có thể áp dụng Trong đó: C: nồng độ (µmol/mL) D: Diện tích pic 81 Phụ lục Đường chuẩn Galactose Bảng: Giá trị diện tích pic tương ứng với nồng độ galactose Nồng độ galactose (µmol/L) Diện tích pic 250 124,10 500 247,88 1000 494,49 2000 984,46 5000 2308,26 Đồ thị đường chuẩn xác định hàm lượng galactose Phương trình có dạng: D = 0,4587C + 29,042 Với giá trị R2= 0,9993   Có thể áp dụng Trong đó: C: nồng độ (µmol/mL) D: Diện tích pic 82 Phụ lục Đường chuẩn Glucose Bảng: Giá trị diện tích pic tương ứng với nồng độ glucose Nồng độ galactose (µmol/L) Diện tích pic 250 103,86 500 206,57 1000 408,01 2000 800,50 5000 1812,18 Đồ thị đường chuẩn xác định hàm lượng glucose Phương trình có dạng: D = 0,358C + 39,759 Với giá trị R2= 0,9983   Có thể áp dụng Trong đó: C: nồng độ (µmol/mL) D: Diện tích pic 83 Phụ lục Đường chuẩn Sulfate Bảng: Giá trị mật độ quang OD tương ứng với nồng độ K2SO4 Nồng độ OD 360nm K2SO4 Lần Lần Lần Trung bình 100 0,030 0,031 0,031 0,031 ± 0,001 250 0,095 0,097 0,996 0,096 ± 0,001 500 0,190 0,195 0,199 0,195 ± 0,005 750 0,274 0,275 0,265 0,271 ± 0,006 1000 0,365 0,363 0,366 0,365 ± 0,002 1250 0,445 0,444 0,469 0,453 ± 0,014 1500 0.519 0.512 0,521 0.517 ± 0,005 (µg/ml) 0.600 y = 0.0004x + 0.0057 R² = 0.9974 0.500 OD 360 0.400 0.300 0.200 0.100 0.000 -500 500 1000 1500 2000 Nồng độ chuẩn K2SO4 (µg/ml) Đồ thị đường chuẩn xác định hàm lượng sulfate Phương trình: D = 0,0004C+0,0057, tuyến tính khoảng 0-1500µg/ml Với giá trị R2 = 0,9974   Có thể áp dụng Trong đó: C: nồng độ (µg/mL) D: mật độ quang 84 Phụ lục Đường chuẩn Uronic acid Bảng: Giá trị mật độ quang OD tương ứng với nồng độ D-glucuronic acid Nồng độ D-glucuronic acid OD 525nm Lần Lần Lần Trung bình 0,042 0,055 0,044 0,047 ± 0,007 10 0,076 0,087 0,078 0,080 ± 0,006 20 0,139 0,148 0,155 0,147 ± 0,008 40 0,260 0,267 0,253 0,260 ± 0,007 50 0,321 0,326 0,317 0,321 ± 0,005 100 0,594 0,599 0,575 0,589 ± 0,013 (µg/ml) Đồ thị đường chuẩn xác định hàm lượng uronic acid Phương trình: D = 0,0058C+0,0198, tuyến tính khoảng 0-100µg/ml Với giá trị R2= 0,9966   Có thể áp dụng Trong đó: C: nồng độ (µg/mL) D: mật độ quang 85 Phụ lục Đường chuẩn Poly phenol Bảng: Giá trị mật độ quang OD tương ứng với nồng độ phloroglucinol Nồng độ OD 750nm phloroglucinol A1 A2 A3 Atb 10 0,110 0,113 0,118 0,114 ± 0,004 20 0,233 0,238 0,232 0,234 ± 0,003 40 0,541 0,544 0,561 0,549 ± 0,011 60 0,840 0,842 0,847 0,843 ± 0,004 80 1,156 1,166 1,179 1,167 ± 0,012 100 1,389 1,382 1,389 1,387 ± 0,004 (µg/ml) Đồ thị đường chuẩn xác định hàm lượng poly phenol Phương trình: D = 0,0144C-0,0228 tuyến tính khoảng - 100µg/ml Với giá trị R2= 0,9978   Có thể áp dụng Trong đó: C: nồng độ (µg/mL) D: mật độ quang 86 Phụ lục Đường chuẩn Protein Bảng: Giá trị mật độ quang OD tương ứng với nồng độ BSA Nồng độ BSA OD 750nm Lần Lần Lần Trung bình 20 0,037 0,035 0,037 0,036 ± 0,001 40 0,095 0,093 0,096 0,095 ± 0,002 60 0,153 0,150 0,152 0,152 ± 0,002 80 0,221 0,226 0,224 0,224 ± 0,003 100 0,285 0,282 0,289 0,285 ± 0,004 120 0,347 0,350 0,359 0,352 ± 0,006 (µg/ml) y = 0.003x - 0.0169 R² = 0.9939 OD 750 0.400 0.350 0.300 0.250 0.200 0.150 0.100 0.050 0.000 -20 -0.050 20 40 60 80 100 Nồng độ chuẩn BSA (µg/ml) 120 Đồ thị đường chuẩn xác định hàm lượng protein Phương trình: D = 0,003C-0,0169 tuyến tính khoảng 0-120µg/ml Với giá trị R2= 0,9939   Có thể áp dụng Trong đó: C: nồng độ (µg/mL) D: mật độ quang 140 87 Phụ lục Đường chuẩn Hoạt tính chống oxy hóa tổng số Bảng: Giá trị mật độ quang OD tương ứng với nồng độ ascobic acid Nồng độ OD 490nm Ascorbic acid Lần Lần Lần Trung bình 10 0,037 0,343 0,339 0,040 ± 0,003 20 0,081 0,076 0,079 0,079 ± 0,003 40 0,181 0,192 0,186 0,186 ± 0,006 60 0,303 0,310 0,314 0,309 ± 0,006 80 0,430 0,425 0,413 0,423 ± 0,009 100 0,538 0,547 0,546 0,544 ± 0,005 (µg/ml) 0.600 0.500 y = 0.0055x - 0.0185 R² = 0.9965 OD 695 0.400 0.300 0.200 0.100 0.000 -20 -0.100 20 40 60 80 100 120 Nồng độ chuẩn Ascorbic Acid (µg/ml) Đồ thị đường chuẩn xác định Hoạt tính chống oxy hóa tổng số Phương trình: D = 0,0055C-0,0185 tuyến tính khoảng 0-100 µg/ml Với giá trị R2= 0,9965   Có thể áp dụng Trong đó: C: nồng độ (µmol/mL) D: mật độ quang ... PHƯƠNG PHÁP CHIẾT LÊN THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA FUCOIDAN CHIẾT TỪ RONG NÂU SARGASSUM MCCLUREI 55 3.5 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH ẢNH HƯỞNG CỦA PHƯƠNG PHÁP CHIẾT LÊN VỊ TRÍ CỦA NHÓM SULFATE TRÊN FUCOIDAN. .. việc chiết để thu nhận sản phẩm fucoidan có hoạt tính [11][12][13][14] Vì vậy, tơi chọn đề tài "Đánh giá biến đổi thành phần hóa học fucoidan phân lập từ rong nâu Sargassum mcclurei theo phương pháp. .. TRÊN FUCOIDAN CHIẾT TỪ RONG NÂU SARGASSUM MCCLUREI 60 3.6 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH ẢNH HƯỞNG CỦA PHƯƠNG PHÁP CHIẾT LÊN HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA FUCOIDAN CHIẾT TỪ RONG NÂU SARGASSUM MCCLUREI