Nghiên cứu quy trình công nghệ tách chiết và tinh chế mangostin trong vỏ quả măng cụt garcinia mangostnan l làm thuốc hỗ trợ điều trị ung thư

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - MAI THỊ HIÊN NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ TÁCH CHIẾT VÀ TINH CHẾ MANGOSTIN TRONG VỎ QUẢ MĂNG CỤT GARCINIA MANGOSTANA L LÀM THUỐC HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ UNG THƯ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2011 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - MAI THỊ HIÊN NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ TÁCH CHIẾT VÀ TINH CHẾ MANGOSTIN TRONG VỎ QUẢ MĂNG CỤT GARCINIA MANGOSTANA L LÀM THUỐC HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ UNG THƯ Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS ĐỖ THỊ TUYÊN Đề tài thực phòng CNSH Enzyme, Viện CNSH Hà Nội - 2011 Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC BẢNG CÁC CHỮ VIẾT TẮT MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới th 1.1.1 1.1.2 1.2 Các hợ 1.2.1 1.2.2 1.3 Hoạt tí 1.3.1 1.3.2 1.3.3 1.3.4 1.3.5 1.4 Peroxi 1.5 Peroxy 1.6 Giới th 1.6.1 1.6.2 1.6.3 1.7 Tình h 1.7.1 1.7.2 CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP Mai Thị Hiên ii Luận văn thạc sĩ 2.1 Sinh học thực nghiệm Nguyên liệu hóa chất 18 2.1.1 Nguyên liệu 18 2.1.1.1 Chủng vi sinh vật 18 2.1.1.2 Động vật thí nghiệm 18 2.1.1.3 Nguyên liệu thực vật 18 2.1.2 Hóa chất 18 2.2 Các thiết bị thí nghiệm 20 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 20 2.3.1 Tách chiết -mangostin xác định cấu trúc 20 2.3.2 Tối ƣu điều kiện tách chiết 21 2.3.2.1 Tối ƣu dung môi 21 2.3.2.2 Tối ƣu tỷ lệ dung môi chiết 21 2.3.2.3 Tối ƣu thời gian tách chiết 22 2.3.2.4 Tối ƣu nhiệt độ tách chiết 22 2.3.3 Các phƣơng pháp tinh 22 2.3.3.1 Tinh tách phân đoạn 22 2.3.3.2 Tinh sắc kí cột 22 2.3.4 Sắc kí mỏng 23 2.3.5 Xác định làm lƣợng malondialdehyde 23 2.3.6 Xác định hoạt độ peroxidase 24 2.3.7 Định lƣợng protein 24 2.3.8 Xác định khả ức chế vi sinh vật 25 2.3.9 Phƣơng pháp thử nghiệm hoạt tính chống oxi hóa mangostin…………… 26 2.3.9.1 Phƣơng pháp thử nghiệm chuột 26 2.3.9.2 Phƣơng pháp lấy mẫu gan 27 2.3.10 Xử lý số liệu 27 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 3.1 Tách chiết tinh -mangostin từ vỏ măng cụt .28 3.1.1 Tối ƣu điều kiện tách chiết 28 3.1.1.1 Tối ƣu dung môi chiết 28 Mai Thị Hiên iii Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm 3.1.1.2 Tối ƣu tỷ lệ dung môi 29 3.1.1.3 Tối ƣu thời gian chiết 29 3.1.1.4 Tối ƣu nhiệt độ tách chiết 30 3.1.2 Tinh -mangostin 31 3.2 Hoạt tính kháng khuẩn -mangostin 33 3.2.1 Hoạt tính kháng S aureus 33 3.2.2 Hoạt tính ức chế sinh trƣởng P aeruginosa 34 3.2.3 Hoạt tính ức chế Candida albicans 34 3.3 Hoạt tính chống oxi hóa -mangostin 35 3.3.1 Trọng lƣợng thể chuột nhóm nghiên cứu 35 3.3.2 Khả bảo vệ gan α-mangostin dƣới tác dụng CCl 37 3.3.3 Ảnh hƣởng mangostin lên hoạt độ peroxidase gan chuột……………… 39 3.3.4 Ảnh hƣởng -mangostin lên hàm lƣợng MDA gan chuột………… 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHỤ LỤC 48 Mai Thị Hiên iv Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Quả măng cụt Hình 1.2 Cấu trúc khung xương phân tử xanthone Hình 1.3 Cấu tạo hóa học số xanthone từ vỏ măng cụt Hình 1.4 Cơ chế xúc tác phản ứng peroxidase 10 Hình 1.5 Cấu trúc nhân hem peroxidase 11 Hình 1.6 Hình dạng vi khuẩn Staphylococcus aureus 13 Hình 1.7 Hình dạng vi khuẩn P aeruginosa 14 Hình 1.8 Hình dạng nấm C albicans 14 Hình 2.1 Qui trình tách chiết tinh chế -mangostin 21 Hình 2.2 Đường chuẩn peroxidase 24 Hình 2.3 Đường chuẩn Bradford với BSA làm chuẩn 25 Hình 3.1 Tối ưu dung mơi chiết 28 Hình 3.2 Tối ưu tỷ lệ dung mơi chiết 29 Hình 3.3 Tối ưu thời gian chiết 30 Hình 3.4 Tối ưu nhiệt độ tách chiết 30 Hình 3.5 Kiểm tra độ sản phẩm -mangostin tinh 31 Hình 3.6 Hoạt tính kháng S aureus -mangostin 33 Hình 3.7 Hoạt tính ức chế sinh trưởng P aeruginosa 34 Hình 3.8 Hoạt tính ức chế nấm C albicans -mangostin 35 Hình 3.9 Sự thay đổi trọng lượng thể chuột trình thí nghiệm 36 Hình 3.10 Hình ảnh thể gan nhóm chuột nghiên cứu 37 Hình 3.11 Sự thay đổi trọng lượng gan chuột nhóm nghiên cứu 38 Hình 3.12 Hoạt độ peroxidase gan chuột tác dụng -mangostin 39 Hình 3.13 Sự thay đổi hàm lượng MDA gan tác động -mangostin 41 Mai Thị Hiên v Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Danh sách hóa chất sử dụng thí nghiệm 19 Bảng 2.2 Thành phần loại đệm dung dịch 19 Bảng 2.3 Thành phần môi trường nuôi cấy vi sinh vật 19 Bảng 2.4 Các thiết bị thí nghiệm 20 Bảng 2.5 Các nhóm chuột xử lí hóa chất 26 Bảng 3.1 Tỷ lệ sản phẩm tách chiết so với nguyên liệu thô 32 Bảng 3.2 Trọng lượng chuột trước sau thí nghiệm 36 Bảng 3.3 Ảnh hưởng -mangostin lên tỷ lệ trọng lượng gan/trọng lượng thể 38 Bảng 3.4 Hoạt độ peroxidase gan chuột 39 Bảng 3.5 Hàm lượng MDA gan chuột tác dụng -mangostin 41 Mai Thị Hiên vi Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm CÁC CHỮ VIẾT TẮT DMSO Dimethyl sulfoxide ĐC Đối chứng EDTA Ethylenediamine tetraacetic acid EP Ether petroleum EtOAC Ethyl acetate EtOH Ethanol HPLC High-performance liquid chromatography LB Luria broth LDL Low density lipoprotein MDA Malondialdehyde MeOH Methanol MIC Minimum inhibitory concentration OD Optical density Rf Retention factor SD Standard deviation SDS Sodium dodecyl sulfate SOD Superoxide dismutase TB Trung bình TBA Thiobarbituric acid TL Trọng lượng TLC Thin layer chromatography TMB 3,3´-5,5´-tetramethyl benzidine TN Thí nghiệm TT Thể trọng v/v Volume/volume v/w Volume/weight w/v Weight/volume Mai Thị Hiên vii Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm MỞ ĐẦU Ung thư mối nguy hiểm kiểm sốt xã hội lồi người Cuộc chiến chống ung thư thức bắt đầu cách 40 năm Cho đến nay, Viện ung thư quốc gia Mỹ dùng đến 90 tỉ USD cho chiến phòng chống ung thư [11] Theo dự đoán Tổ chức Y tế Thế giới, từ năm 2007 đến 2030 số ca tử vong tăng từ 7,5 triệu người lên đến 11,5 triệu người, số người mắc ung thư giai đoạn tăng từ 11,3 triệu người lên đến 15,5 triệu người Ở Việt Nam, tỷ lệ người mắc ung thư cao Theo Nguyễn Bá Đức cộng sự, giai đoạn từ 1/1/2001 đến 31/12/2004 có 32,944 ca ung thư mắc ghi nhận tỉnh: Hải Phòng, Hà Nội, Thái Nguyên, Thừa Thiên Huế, Cần Thơ (http://benhvienk.com) Hiện nay, nhà khoa học tập trung nghiên cứu, tìm hợp chất có khả ngăn chặn tác dụng tác nhân gây ung thư, giúp loại bỏ nguy ung thư Trong đó, hợp chất từ tự nhiên, chủ yếu từ thực vật quan tâm đặc biệt nhờ ưu điểm gây tác dụng phụ hợp chất hóa học tổng hợp Các hợp chất có nguồn gốc tự nhiên vinblastine từ dừa cạn (Catharanthus roseus), taxol thông đỏ (Taxus brevifolia), colchicine từ tỏi độc (Colchicum autunale), scutebalcaletone từ bán chi liên (Scutellaria barbata), số hoạt chất từ chè xanh (Camellia sinensis), sử dụng để điều trị cho bệnh nhân ung thư Trong đó, măng cụt Garcinia mangostana L ăn trồng nhiều miền Nam, Việt Nam Theo kinh nghiệm dân gian, vỏ măng cụt cịn dùng để điều trị nhiều loại bệnh nhiễm trùng Tuy nhiên việc khai thác ứng dụng hoạt chất sinh học từ vỏ măng cụt nước ta chưa quan tâm nhiều Xuất phát từ thực tế đề tài “Nghiên cứu quy trình cơng nghệ tách chiết tinh chế mangostin vỏ măng cụt Garcinia mangostana L làm thuốc hỗ trợ điều trị ung thư” thực với mục tiêu: tách chiết tinh chế mangostin từ vỏ măng cụt nghiên cứu số hoạt tính sinh học mangostin Mai Thị Hiên Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu măng cụt 1.1.1 Sự phân bố măng cụt Măng cụt có tên khoa học Garcinia mangostana L thuộc họ Bứa (Clusiaceae), loại ăn trồng vùng khí hậu nhiệt đới, đặc biệt phổ biến vùng Đông Nam Á, Ấn Độ, Sri Lanka Ở Việt Nam măng cụt chủ yếu trồng vùng đồng sông Cửu Long với tổng diện tích lên tới 4900 ha, cho sản lượng khoảng 4500 Theo dự án phát triển sản xuất xuất rau, hoa tươi Việt Nam, dự kiến phát triển diện tích trồng măng cụt vùng đồng sông Cửu Long lên khoảng 11300 ha, cho sản lượng 24000 Trong tập trung trồng chủ yếu tỉnh Bến Tre, Vĩnh Long, Trà Vinh Bình Dương Măng cụt địi hỏi điều kiện thổ nhưỡng khắt khe, khí hậu nóng ẩm Do đó, măng cụt phân bố vùng có khí hậu ấm áp, khơng tiến xa vùng khí hậu lạnh phía bắc mà dừng lại Huế Hình 1.1 Quả măng cụt 1.1.2 Đặc điểm sinh học măng cụt Măng cụt thuộc loại thân gỗ vừa có chiều cao 12-25 m, thân có nhiều nhánh đối chéo nằm ngang, nhựa màu vàng Thân non màu xanh lục, thân già màu nâu đen sẫm, sần sùi có nhiều rãnh nứt dọc, tiết diện trịn Lá đơn, mọc đối, khơng có kèm Phiến bóng, dày dai, hình elip thn dài, gốc gần tròn, mũi Mai Thị Hiên Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm nhóm đối chứng, giảm 60% so với nhóm nhiễm độc CCl4 Kết nghiên cứu cho thấy cho thấy -mangostin khơng có tác dụng bảo vệ gan khỏi bị nhiễm độc ngoại sinh mà cịn bảo vệ gan khỏi gốc oxi hóa nội sinh Khả bảo vệ phân tử có chất lipid khỏi công gốc tự do, tác nhân oxi hóa -mangostin khơng xảy điều kiện in vivo mà xảy điều kiện in vitro Trong nghiên cứu Williams cộng (1995) chứng minh mangostin có khả bảo vệ phân tử hàm lượng thấp có chất lipoprotein (LDL) tránh khỏi oxi hóa ion kim loại 2+ (Cu ) nồng độ 100 mM thời điểm giờ, điều kiện in vitro [44] Tương tự, Mahabusarakam cộng (2000) chứng minh -mangostin dẫn xuất tổng hợp ngăn chặn oxi hóa phân tử LDL Sự thay đổi cấu trúc -mangostin, thay C3 C4 dẫn xuất aminoethyl làm tăng cường hoạt hoạt động chống oxi hóa, thay gốc methyl acetate làm giảm hoạt động chống oxi hóa [24] Mai Thị Hiên Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Hoạt chất -mangostin tinh tách chiết từ bột vỏ măng cụt chiếm 0,13% khối lượng nguyên liệu thô ban đầu có độ 98,5%, với thơng số kĩ thuật sau: dung môi chiết ethanol, tỷ lệ dung môi : nguyên liệu 3:1, 60C, Hoạt chất -mangostin có khả kháng lại số vi khuẩn nấm gây bệnh người S aureus, P aeruginosa, C albicans Diệt 100% vi khuẩn S aureus nồng độ 15 g/ml; ức chế 70% phát triển P aeruginosa nồng độ 1000 g/ml, 50% phát triển nấm C albicans nồng độ 1500 g/ml Hoạt chất -mangostin có khả chống oxi hóa, bảo vệ gan khỏi cơng chất độc có tính oxi hóa mạnh CCl Thể tác dụng làm tăng hoạt độ peroxidase làm giảm hàm lượng MDA gan chuột nhóm nghiên cứu, đặc biệt hai nhóm nghiên cứu: nhóm chuột uống -mangostin liều 0,1 mg/10 g thể trọng, hoạt độ peroxidase gan tăng 45% so với nhóm đối chứng, 57% so với nhóm nhiễm độc CCl4; nhóm chuột uống -mangostin liều 0,2 mg/10 g thể trọng, hàm lượng MDA gan chuột giảm 6% so với nhóm đối chứng, giảm 60% so với nhóm nhiễm độc CCl4 Thử nghiệm hoạt tính chống ung thư -mangostin số dòng tế bào ung thư từ chuột Sản xuất -mangostin qui mô pilot để làm thuốc hỗ trợ phòng chống điều trị ung thư chống oxi hóa Mai Thị Hiên Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Trương Văn Châu, Trần Hồng Quang, Đỗ Ngọc Liên (2004), "Đặc tính kháng khuẩn hợp chất phenolic số loài thuộc chi Garcinia L " Tạp chí Sinh học 26(4): pp 59-62 Đào Hùng Cường, Đỗ Thị Thuý Vân (2010), "Nghiên cứu chiết tách xác định xanthone từ vỏ Măng cụt (Garcinia mangostin L)", Tạp chí Khoa học cơng nghệ, Đại học Đà nẵng, 5(40): pp 167-173 Nguyễn Thị Ngọc Dao, Đỗ Thị Hồng Cẩm (1997), "Hoạt độ peroxidase số tổ chức thực vật", Tạp chí Y học Việt Nam, 6: pp 39-43 Hoàng Văn Huấn (1998), "Nghiên cứu biến đổi hệ thống enzyme cytochrome P450 vài thơng số hóa sinh có liên quan nhiễm độc thực nghiệm nhiên liệu lỏng tên lửa", Luận văn thạc sỹ y học, Học viện Quân Y, Bộ Giáo dục Đào tạo - Bộ Quốc Phòng Đỗ Tất Lợi (2000), Những thuốc vị thuốc Việt Nam NXB Y học Hà Nội 567-568 Hồng Cơng Minh (2001), "Nghiên cứu ảnh hưởng hỗn hợp dichlorodiethyl sulfide với chlorovinyl dichlorarsine lên số tiêu độc học, hóa sinh, huyết học động vật thực nghiệm tác dụng thuốc điều trị", Luận án tiến sỹ y học, Học viện Quân y, Bộ Giáo dục Đào tạo Bộ Quốc phòng Nguyễn Mai Phương, Nguyễn Thị Thịnh, Nguyễn Diệu Linh, Phan Tuấn Nghĩa (2010), "Thu nhận tìm hiểu tác dụng sinh học chế phẩm chứa xanthone từ vỏ măng cụt (Garcinia Mangostin L.)", Tạp chí cơng nghệ sinh học, 8: pp 717-735 Nguyễn Thị Mai Phương, Phan Tuấn Nghĩa, Nguyễn Thị Ngọc Dao, Đỗ Ngọc Liên (2004), "Thành phần polyphenol vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L) tác dụng ức chế sinh axit vi khuẩn sâu Streptococcus mutans", Tạp chí Dược học, 44: pp 18-21 Đỗ Thị Tuyên , Nguyêñ Thu Thùy , Nguyêñ Ngoc ̣ Hanḥ , Nguyêñ Thi ẠẠ́nh Tuyết, Phùng Văn Trung , Quyền Đinh ̀ Thi , Nguyêñ Thi Maị Phương , Nguyêñ Thi Ngọc ̣ Dao (2010), "Nghiên cứu quy trình tách chiết hoạt tính kháng khuẩn alpha-mangostin từ vỏ Măng cụt Garcinia mangostana L", Hội nghị Khoa học kỉ niệm 35 năm viện Công nghệ Khoa học Việt Nam, pp 136-143 Tiếng Anh 10 Anderson, J B (2005), "Evolution of antifungal-drug resistance: mechanisms and pathogen fitness", Nat Rev Microbiol, 3(7): pp 547-556 11 Balaram, P (2011), "Cancer: human mortality and cellular immortality", Curr Sci, 100(12): pp 1761-1762 Mai Thị Hiên Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm 12 Bumrungpert, K., Kalpravidh, R W., Chia-Chi Chuang, C C., Overman, A., Martinez, K., Kennedy, A., McIntosh, M (2010), "Xanthones from Mangosteen inhibit inflammation in human macrophages and in human adipocytes exposed to macrophage-conditioned media", J Nutr, 140: pp 842–847 13 Cohen, R J., Shannon, B A., McNeal, J E., Shannon, T., Garrett, K L (2005), "Propionibacterium acnes associated with inflammation in radical prostatectomy specimens: a possible link to cancer evolution", J Urol, 173(6): pp 1969-1974 14 Daniel, M B., Michael, D R., Stuart, J E (1996), Protein methods, ed Wiley-Liss, New York 15 Devi Sampath, P., Vijayaraghavan, K (2007), "Cardioprotective effect of alpha-mangostin, a xanthone derivative from mangosteen on tissue defense system against isoproterenol-induced myocardial infarction in rats", J Biochem Mol Toxicol, 21(6): pp 336-339 16 Ee, G C., Daud, S., Taufiq-Yap, Y H., Ismail, N H., Rahmani, M (2006), "Xanthones from Garcinia mangostana (Guttiferae)", Nat Prod Res, 20(12): pp 1067-1073 17 Favari, L., Perez-Alvarez, V (1997), "Comparative effects of colchicine and silymarin on CCl 4-chronic liver damage in rats", Arch Med Res, 28(1): pp 11-17 18 Gopalakrishnan, G., Banumathi, B., Suresh, G (1997), "Evaluation of the antifungal activity of natural xanthones from Garcinia mangostana and their synthetic derivatives", J Nat Prod, 60(5): pp 519-524 19 Iinuma, M., Tosa, H., Tanaka, T., Asai, F., Kobayashi, Y., Shimano, R., Miyauchi, K (1996), "Antibacterial activity of xanthones from guttiferaeous plants against methicillin-resistant Staphylococcus aureus", J Pharm Pharmacol, 48(8): pp 861-865 20 Jakab, E., Zbinden, R., Gubler, J., Ruef, C., von Graevenitz, A., Krause, M (1996), "Severe infections caused by Propionibacterium acnes: an underestimated pathogen in late postoperative infections", Yale J Biol Med, 69(6): pp 477-482 21 Josephy, P D., Eling, T., Mason, R P (1982), "The horseradishperoxidase catalyzed oxidation of 3,5,3'5'-tetramethylbenzidine Free radical and charge-transfer complex intermediates", J Biol Chem, 257: pp 36693675 22 Jung, H A., Su, B N., Keller, W J., Mehta, R G., Kinghorn, A D (2006), "Antioxidant xanthones from the pericarp of Garcinia mangostana (Mangosteen)", J Agric Food Chem, 54(6): pp 2077-2082 23 Kaomongkolgit, R., Jamdee, K., Chaisomboon, N (2009), "Antifungal activity of alpha-mangostin against Candida albicans", J Oral Sci, 51(3): pp 401-406 Mai Thị Hiên Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm 24 Mahabusarakam, W., Proudfoot, J., Taylor, W., Croft, K (2000), "Inhibition of lipoprotein oxidation by prenylated xanthones derived from mangostin", Free Radic Res, 33(5): pp 643-659 25 Matsumoto, K., Akao, Y., Yi, H., Ohguchi, K., Ito, T., Tanaka, T., Kobayashi, E., Iinuma, M., Nozawa, Y (2004), "Preferential target is mitochondria in alpha-mangostin-induced apoptosis in human leukemia HL60 cells", Bioorg Med Chem, 12(22): pp 5799-5806 26 McAlester, G., O'Gara, F., Morrissey, J P (2008), "Signal-mediated interactions between Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans", J Med Microbiol, 57(5): pp 563-569 27 Misra, H., Dwivedi, B K., Mehta, D., Mehta, B K., Jain, D C (2009 ), "Development and validation of high performance thin-layer chromatographic method for fetermination of α-mangostin in fruit pericarp of mangosteen plant (Garcinia mangostana L.) using ultraviolet visible detection ", Rec Nat Prod, 3(4): pp 178-186 28 Molero, G., Diez-Orejas, R., Navarro-Garcia, F., Monteoliva, L., Pla, J., Gil, C., Sanchez-Perez, M., Nombela, C (1998), "Candida albicans: genetics, dimorphism and pathogenicity", Int Microbiol, 1(2): pp 95-106 29 Nakagawa, Y., Iinuma, M., Naoe, T., Nozawa, Y., Akao, Y (2007), "Characterized mechanism of alpha-mangostin-induced cell death: caspaseindependent apoptosis with release of endonuclease-G from mitochondria and increased miR-143 expression in human colorectal cancer DLD-1 cells", Bioorg Med Chem, 15(16): pp 5620-5628 30 Nakatani, K., Atsumi, M., Arakawa, T., Oosawa, K., Shimura, S., Nakahata, N., Ohizumi, Y (2002), "Inhibitions of histamine release and prostaglandin E2 synthesis by mangosteen, a Thai medicinal plant", Biol Pharm Bull, 25(9): pp 1137-1141 31 Ohkawa, H., Ohishi, N., Yagi, K (1979), "Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction", Anal Biochem, 95(2): pp 351-358 32 Pedraza-Chaverri, J., Cardenas-Rodriguez, N., Orozco-Ibarra, M., Perez-Rojas, J M (2008), "Medicinal properties of Mangosteen (Garcinia mangostana)", Food Chem Toxicol, 46(10): pp 3227-3239 33 Peres, V., Nagem, T J., de Oliveira, F F (2000), "Tetraoxygenated naturally occurring xanthones", Phytochemistry, 55(7): pp 683-710 34 Pothitirat, W., Chomnawang, T M., Gritsanapan, W (2009), "Antiacne inducing bacteria activity and alpha-mangostin content of Garcinia mangostana fruit rind extracts from different provenience", Songklanakarin J Sci Technol, 31(1): pp 41-47 Mai Thị Hiên Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm 35 Pothitirat, W., Gritsanapan, W (2008), "Quantitative analysis of total mangostins in Garcinia mangostana fruit rind", J Health Res, 22(4): pp 161166 36 Rachel, J G., Franklin, D L (2008), "Pathogenesis of methicillinresistant Staphylococcus aureus infection", Clin Infect Dis, 46(5): pp 350359 37 Sakagami, Y., Iinuma, M., Piyasena, K G., Dharmaratne, H R (2005), "Antibacterial activity of alpha-mangostin against vancomycin resistant Enterococci (VRE) and synergism with antibiotics", Phytomedicine, 12(3): pp 203-208 38 Sen, K A., Sarkar, K K., Mazumder, C P., Banerji, N., Uusvuori, R., Hase, T A (1980), "A xanthone from Garcinia mangostana", Phytochemistry, 14(10): pp 2223-2225 39 Shankaranarayan, D., Gopalakrishnan, C., Kameswaran, L (1979), "Pharmacological profile of mangostin and its derivatives", Arch Int Pharmacodyn Ther, 239(2): pp 257-269 40 Shibata, M A., Iinuma, M., Morimoto, J., Kurose, H., Akamatsu, K., Okuno, Y., Akao, Y., Otsuki, Y (2011), "alpha-Mangostin extracted from the pericarp of the mangosteen (Garcinia mangostana Linn) reduces tumor growth and lymph node metastasis in an immunocompetent xenograft model of metastatic mammary cancer carrying a p53 mutation", BMC Med, 9: pp 69 41 Steinberg, D (1997), "Low density lipoprotein oxidation and its pathobiological significance", J Biol Chem, 272(34): pp 20963-20966 42 Sun, D., Zhang, S., Wei, Y., Yin, L (2009), "Antioxidant activity of mangostin in cell-free system and its effect on K562 leukemia cell line in photodynamic therapy", Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai), 41(12): pp 1033-1043 43 Szymonik-Lesiuk, S., Czechowska, G., Stryjecka-Zimmer, M., Slomka, M., Madro, A., Celinski, K., Wielosz, M (2003), "Catalase, superoxide dismutase, and glutathione peroxidase activities in various rat tissues after carbon tetrachloride intoxication", J Hepatobiliary Pancreat Surg, 10(4): pp 309-315 44 Williams, P., Ongsakul, M., Proudfoot, J., Croft, K., Beilin, L (1995), "Mangostin inhibits the oxidative modification of human low density lipoprotein", Free Radic Res, 23(2): pp 175-184 45 Yates, P., Stout, G H (1958), "The structure of mangostin", J Am Chem Soc, 80: pp 1691-1700 46 Yu, L., Zhao, M., Yang, B., Qiangzhong, Z., Jiang, Y (2007), "Phenolics from hull of Garcinia mangostana fruit and their antioxidant activities", Food Chemistry, 104: pp 176-181 Mai Thị Hiên Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm PHỤ LỤC Bảng P.1 Ảnh hưởng dung môi chiết lên khối lượng cao chiết Dung môi chiết EP EtOAC EtOH MeOH Bảng P.2 Ảnh hưởng thời gian chiết lên khối lượng cao chiết Thời gian chiết (giờ) Bảng P.3 Ảnh hưởng nhiệt độ chiết lên khối lượng cao chiết Nhiệt độ chiết (C) 30 40 50 60 Bảng P.4 Ảnh hưởng tỷ lệ dung môi : nguyên liệu lên khối lượng cao chiết Tỷ lệ dung môi : nguyên liệu Mai Thị Hiên Luận văn thạc sĩ Bảng P.5 Khả ức chế nấm S aureus -mangostin Nồng độ -mangostin (g/ml) Bảng P.6 Khả ức chế P aeruginosa -mangostin Nồng độ -mangostin (g/ml) Mai Thị Hiên Sinh học thực nghiệm Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm Bảng P.7 Khả ức chế nấm C albicans -mangostin Nồng độ -mangostin (g/ml) Bảng P.8 Ảnh hưởng -mangostin lên hoạt độ peroxidase gan chuột TT Lô ĐC 10 11 12 TB +SD % so với đối chứng Mai Thị Hiên Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm Bảng P.9 Ảnh hưởng -mangostin lên hàm lượng MDA gan chuột TT Nhóm Đc 48,6 21,0 49,2 35,2 42,7 51,1 53,3 50,1 53,3 10 62,0 11 24,2 12 TBSD % so với đối chứng Mai Thị Hiên Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm Hình P.1 Hình ảnh chuột trước nghiên cứu Hình P.2 Hình ảnh chuột sau nghiên cứu Mai Thị Hiên Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm Hình P3 Phổ carbon C13 Mai Thị Hiên Luận văn thạc sĩ Sinh học thực nghiệm Hình P3 Phổ Hidro Mai Thị Hiên ... HIÊN NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ TÁCH CHIẾT VÀ TINH CHẾ MANGOSTIN TRONG VỎ QUẢ MĂNG CỤT GARCINIA MANGOSTANA L LÀM THUỐC HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ UNG THƯ Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: LUẬN... tinh chế mangostin vỏ măng cụt Garcinia mangostana L làm thuốc hỗ trợ điều trị ung thư? ?? thực với mục tiêu: tách chiết tinh chế ? ?mangostin từ vỏ măng cụt nghiên cứu số hoạt tính sinh học ? ?mangostin. .. 3.1 Tách chiết tinh  -mangostin từ vỏ măng cụt 3.1.1 Tối ưu điều kiện tách chiết Khối l? ?ợng cao chiết (g) 3.1.1.1 Tối ưu dung môi chiết (A) (A): Sự phụ thuộc l? ?ợng cao chiết vào loại dung môi chiết