Đang tải... (xem toàn văn)
(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd)
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC NGUYỄN THỊ TRANG NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY THỔ NHÂN SÂM (Talinum crassifolium Willd) LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC THÁI NGUYÊN - 2016 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC NGUYỄN THỊ TRANG NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY THỔ NHÂN SÂM (Talinum crassifolium Willd) Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGUYỄN THỊ TÂM THÁI NGUYÊN - 2016 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi thực hiê ̣n dưới sự hướng dẫn của PGS.TS Nguyễn Thị Tâm Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận văn Nguyễn Thị Trang Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ii LỜI CẢM ƠN Lời tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Thị Tâm, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư Phạm Thái Nguyên tận tình hướng dẫn, bảo giúp đỡ suốt thời gian thực hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn thầy cô giáo anh chi ̣ kỹ thuật viên phịng thí nghiệm Cơng nghệ tế bào thực vật, Khoa Sinh học trường đại học Sư Phạm Thái Nguyên tạo điều kiện giúp đỡ trình làm luận văn thạc sĩ Trong thời gian thực luận văn thạc sĩ phịng thí nghiệm Công nghệ sinh học, Viện Nghiên cứu Phát triển Lâm Nghiệp - Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, nhận sự giúp đỡ Ban lãnh đạo Viện, kỹ thuật viên phịng thí nghiệm Cơng nghệ sinh học tận tình giúp đỡ hướng dẫn tơi làm thí nghiệm luận văn thạc sĩ Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Trường Đại học Khoa học Đại học Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm khoa Khoa ho ̣c sự số ng thầ y cô giáo, cán Khoa, đặc biệt sự quan tâm, giúp đỡ anh chị kỹ th ̣t viên phịng thí nghiệm khoa Khoa ho ̣c sự số ng Tôi xin cảm ơn gia đình bạn bè ln bên cạnh ủng hộ, khuyến khích, động viên tạo động lực để tơi hồn thành luận văn Trong q trình làm luận văn khơng tránh khỏi sai sót, tơi mong nhận sự đóng góp q báu từ phía thầy bạn bè để tơi làm tốt Tác giả luận văn Nguyễn Thị Trang Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn iii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục từ chữ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu Thổ nhân sâm 1.1.1 Đặc điểm phân loại hình thái Thổ nhân sâm 1.1.2 Đặc điểm phân bố Thổ nhân sâm 1.1.3 Đặc điểm sinh thái, trồng trọt Thổ nhân sâm 1.1.4 Thành phần hóa học giá trị dược liệu Thổ nhân sâm 1.2 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.1 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.2 Vai trò số chất kích thích sinh trưởng ni cấy mô tế bào thực vật 11 1.3 Các giai đoạn quy trình nhân giống vơ tính in vitro 15 1.3.1 Giai đoạn I - Cấy gây 15 1.3.2 Giai đoạn II - Nhân nhanh 15 1.3.3 Giai đoạn III - Chuẩn bị đưa đất 16 1.4 Một số thành tựu nhân giống dược liệu phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 16 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn iv Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Vật liệu, hoá chất, thiết bị, địa điểm nghiên cứu 21 2.1.1 Vật liệu nghiên cứu 21 2.1.2 Hoá chất, thiết bị 21 2.1.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 21 2.2 Phương pháp nghiên cứu 21 2.2.1 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy 21 2.2.2 Phương pháp nuôi cấy in vitro 22 2.2.3 Đưa môi trường tự nhiên 24 2.3 Điều kiện thí nghiệm 26 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 26 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Kết nghiên cứu khử trùng hạt 27 3.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến hiệu khử trùng 27 3.1.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng dung dịch javel 60% đến hiệu khử trùng 28 3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất điều hòa sinh trưởng đến khả nhân nhanh sự sinh trưởng chồi Thổ nhân sâm ống nghiệm 31 3.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng BAP đến khả nhân chồi Thổ nhân sâm 31 3.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng BAP kết hợp kinetin đến khả nhân chồi Thổ nhân sâm 34 3.2.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng sự kết hợp BAP IBA tới khả nhân chồi Thổ nhân sâm 36 3.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ chồi Thổ nhân sâm 38 3.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng giá thể đến tỉ lệ sống, sinh trưởng phát triển in vitro vườn ươm 39 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO 43 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn v PHỤ LỤC 47 DANH MỤC CÁC TỪ VÀ CHỮ VIẾT TẮT DNA : Deoxyribonucleic acid BAP : - benzyl amino purine CT : Công thức CS : Cộng sự ĐC : Đối chứng IAA : - indol acetic acid IBA : - indol butyric acid Kinetin : - furfuryl- aminopurine MS : Murashighe Skoog, 1962 NAA : α - naphthalene acetic acid 2,4 - D : 2,4 - dichlorophenoxy acetic acid Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn vi DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Kết khử trùng hạt Thổ nhân sâm HgCl2 0,1% 28 Bảng 3.2 Kết khử trùng hạt Thổ nhân sâm javen 60% 29 Bảng 3.3 Ảnh hưởng hàm lượng BAP đến khả nhân chồi Thổ nhân sâm 32 Bảng 3.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng BAP kết hợp kinetin đến khả nhân chồi Thổ nhân sâm 34 Bảng 3.5 Ảnh hưởng hàm lượng BAP kết hợp với IBA đến khả nhân nhanh chồi Thổ nhân sâm 36 Bảng 3.6 Ảnh hưởng của IBA đến khả rễ chồi Thổ nhân sâm 38 Bảng 3.7 Kết ảnh hưởng giá thể đến tỉ lệ sống, sinh trưởng phát triển in vitro vườn ươm 40 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn vii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Cây Thổ nhân sâm tự nhiên Hình 3.1: Kết khử trùng hạt HgCl2 0,1% dung dịch javel 60% 30 Hình 3.2: Ảnh hưởng hàm lượng BAP đến khả nhân nhanh chồi Thổ nhân sâm 33 Hình 3.3: Ảnh hưởng hàm lượng BAP kết hợp kinetin đến khả nhân nhanh chồi Thổ nhân sâm 36 Hình 3.4: Ảnh hưởng hàm lượng BAP kết hợp với IBA đến khả nhân chồi Thổ nhân sâm 37 Hình 3.5: Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ chồi Thổ nhân sâm 39 Hình 3.6: Cây trồng giá thể khác sau 30 ngày 41 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Theo lịch sử y học cổ truyền Trung Quốc từ 3000 năm trước Công nguyên, nhân sâm nói đến thần dược “Thần nông thảo” vua Thần Nông Sâm tên gọi khái quát số loại thân thảo mà củ rễ sử dụng làm thuốc từ lâu đời nhiều nước châu Á, thuộc nhiều chi họ khác chủ yếu loại thuộc chi Sâm [2] Cây nhân sâm có tên khoa học Panax Gingseng C.A Mey Củ sâm có nhiều hình dạng, tư giống người, gọi nhân sâm Nhân sâm thuộc họ Araliaceae loại dược phẩm quý có nhiều nơi như: Nhật Bản, Trung Quốc, Hoa Kỳ đặc biệt Hàn Quốc Dân Hàn Quốc coi nhân sâm tặng phẩm trời đất Đông y coi nhân sâm vị thuốc đứng đầu vị thuốc theo thứ tự: Sâm, Nhung, Quế, Phụ Có nhiều loại sâm, để phân biệt thường người ta gọi thêm tên địa phương màu sắc vào tên gọi [2] Ở Việt Nam có giống sâm như: Sâm Ngọc Linh, Sâm Bố Chính, Đảng Sâm, Tây Dương Sâm [2] Thổ nhân sâm (Talinum crassifolium Willd) gọi Thổ cao ly sâm hay Đông dương sâm, sâm thảo, thuộc họ rau sam - Portulacaceae [2] Thổ nhân sâm gồm nhiều thành phần hóa học khác nhau, có saponin tetracyclic nhóm Damavan gọi chung gingsenosid Ngồi ra, cịn có saponin với aglicon acid oleanolic, vitamin B1, vitamin B2, phytosterol, tinh dầu, đường, tinh bột Thổ nhân sâm có tác dụng bổ dưỡng toàn thân, suy nhược thần kinh, thể hao tổn, tăng sức lực cho người già, Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 41 Đất thịt trung bình + trấu hun (2:1) Đất thịt trung bình + Cát (2:1) Đất thịt trung bình Hình 3.6 Cây trồng giá thể khác sau 30 ngày Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 42 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Công thức khử trùng phù hợp hạt Thổ nhân sâm là: Trong cồn 70% phút rửa nước cất vơ trùng Sau khử trùng javen 60% 15 phút rửa lại nhiều lần nước cất vô trùng trước cấy lên mơi trường Mơi trường thích hợp cho sự nhân chồi sinh trưởng Thổ nhân sâm ống nghiệm là: MS + đường sucrose 30g/l + agar 6,0g/l + BAP 1,5mg/l + kinetin 0,5 mg/l Mơi trường thích hợp cho sự tạo rễ chồi Thổ nhân sâm ống nghiệm là: MS + đường sucrose 30g/l + agar 6/l + IBA 1,5 mg/l Giá thể thích hợp cho sau in vitro đất thịt trung bình + trấu hun (2:1) cho tỷ lệ sống đạt 87,52% Đề nghị - Tiếp tục nghiên cứu thêm ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng khác đến khả nhân nhanh chồi Thổ nhân sâm - Nghiên cứu thêm giá thể thích hợp cho sự sinh trưởng phát triển in vitro - Ứng dụng mơi trường thích hợp vào nhân giống Thổ nhân sâm kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật để nhân nhanh Thổ nhân sâm Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Nguyễn Việt Cường, Hồ Thanh Tâm, Nguyễn Bá Nam, Hà Thị Mỹ Ngân, Lê Kim Cương, Nguyễn Phúc Huy, Dương Tấn Nhựt (2013), “Nghiên cứu ảnh hưởng số chất hữu bạc nitrat (AgNO 3) lên sự sinh trưởng phát triển sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha ET Grushv.) nuôi cấy in vitro”, Báo cáo khoa học - Hội nghị khoa học cơng nghệ sinh học tồn quốc, NXB Khoa học tự nhiên công nghệ, tr 727-731 Nguyễn Thúy Dần (2007), Giáo trình dược liệu, NXB Hà Nội Trịnh Đình Đạt (2009), Cơng nghệ sinh học (cơng nghệ di truyền), tập 4, NXB giáo dục Nguyễn Thế Đặng, Đặng Văn Minh, Nguyễn Thế Hùng (2007), Giáo trình vật lý đất, NXB Nơng nghiệp Hà Nội Nguyễn Hồng Lộc (2007), Giáo trình nhập mơn cơng nghệ sinh học, NXB Đại học Huế Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học Nguyễn Hoàng Nghĩa (1997), Bảo tồn nguồn gen trồng, NXB Nông nghiệp Hà Nội Minh Phúc (2013), Thảo dược quý phương thuốc chủ trị, NXB Y học Vũ Thị Bạch Phượng, Quách Ngô Diễm Phương, Bùi văn Lệ (2013), “Nghiên cứu nuôi cấy in vitro nguồn ngun liệu có hoạt tính oxi hóa Thổ tam thất (Gynura pseudochina (L) DC)”, Báo cáo khoa học Hội nghị khoa học cơng nghệ sinh học tồn quốc, NXB Khoa học tự nhiên công nghệ, tr.1006 - 1010 10 Hoàng Văn Sỹ (2010), Cẩm nang lý luận chẩn trị y học cổ truyền phương Đơng, NXB Y học Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 44 11 Ngô Thanh Tài, Nguyễn Bá Nam, Hồ Thanh Tâm, Hà Thị Mỹ Ngân, Dương Tấn Nhựt (2013), “Nghiên cứu tác động ánh sáng đèn LED lên khả tăng sinh mô sẹo sự hình thành hồn chỉnh từ phơi vơ tính sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha ET Grushv.)”, Báo cáo khoa học - Hội nghị khoa học công nghệ sinh học toàn quốc, NXB Khoa học tự nhiên cơng nghệ, tr 1038 - 1042 12 Trần Tế, Đồn Nhân Ái, Trương Thị Bích Phượng (2008), “Nghiên cứu sản xuất hoa Đồng Tiền kỹ thuật nhân giống in vitro”, Tạp chí Cơng nghệ sinh học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, 6(4B), tr.905 -913 13 Nguyễn Đức Tồn (2002), Thuốc đơng y - cách sử dụng - chế biến - bảo quản, NXB Y học, Hà Nội 14 Nguyễn Hải Tuất, Ngô Kim Khôi (1996), Xử lí thống kê kết nghiên cứu thực nghiệm nơng lâm ngư nghiệp máy vi tính, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 15 Nguyễn Thanh Tùng, Phạm Thi Diễm Thi, Trương Thị Bích Phượng (2010), “Nghiên cứu nhân giống in vitro Qua lâu (Trichosanthes kirilowii)”, Tạp chí công nghệ sinh học, (3B), Đại Học Huế, tr 1231 - 1239 16 Nguyễn Quang Thạch (2009), Cơ sở Công nghệ sinh học - Tập 3, NXB Giáo dục 17 Nguyễn Thị Kim Thanh, Dương Huyền Trang (2008), “Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống vơ tính Lơ hội phương pháp ni cấy in vitro”, Tạp chí khoa học phát triển, NXB Nông nghiệp Hà Nội, 6(6), tr 514 - 521 18 Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật ứng dụng, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 19 Nguyễn Việt Thắng, Ngô Đức Thiện (2000), Kỹ thuật trồng khoai tây, NXB Nông nghiệp Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 45 20 Bùi Thị Tường Thu, Trần Văn Minh, Nguyễn Văn Uyển, “Vi nhân giống đu đủ”, Báo cáo khoa học 2002, NXB Khoa học Kỹ thuật 21 Lê Tiến Vinh, Ninh Thị Thảo, Lã Hoàng Anh, Nguyễn Thị Thủy, Nguyễn Thị Phương Thảo (2014), “Quy trình nhân giống in vitro Đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge)”, Tạp chí khoa học phát triển 22 Đỗ Năng Vịnh, Lê Thị Thu Về (1999), “Nhân giống hoa Loa Kèn mới”, Báo cáo khoa học toàn quốc, NXB Khoa học Kỹ thuật, tr 889 - 895 23 Vũ Văn Vụ (1999), Sinh lý thực vật, NXB Giáo dục, Hà Nội TIẾNG ANH 24 Behera K K., Pani D and Shahoo S (2010), “Effect of plant growth regulator on in vitro multiplucation of turmeric (Curcumar longa L.cv.Ranga)”, International Journal of Biological Technology, 1(1): 16 - 23 25 Duong Tan Nhut, Nguyen Phuc Huy, Vu Quoc Luan, Nguyen Van Binh, Nguyen Ba Nam, Le Nu Minh Thuy, Dang Thi Ngoc Ha, Hoang Xuan Chien, Trinh Thi Huong, Hoang Van Cuong, Le Kim Cuong and Vu Thi Hien (2011), “Shoot regeneration and micropropagation of Panax vietnamensis Ha et Grushv from ex vitro leaf-derived callus”, African Journal of Biotechnology, 10(84):19499 - 19504 26 Jala A and Patchpoonporn W (2012), “Effect of BA, NAA and 2,4-D on micropropagation of Jiaogulan (Gynostemma pentaphyllum makino)”, International Transaction Journal of Enginneering, Management, Applied Sciences & Technologies, 3(4): 363 - 370 27 Nayak S., Parida R and Mohanty S (2011), “Evaluation of genetic fidelity of in vitro propagated greater Galangal (Alpinia galanga L.) using DNA based markers”, International Journal of Plant, Animal and Environmental Sciences, 1(3): 124 - 133 28 Sen A., Goyal A.K., Ganguly K and Mishra T (2010), “In vitro multiplication of Curcuma Longa Linn.- an important medicinal zingiber”, Journal of Plant Science, 4: 21 - 24 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 46 29 Sharma G.J., Sinha S.K and Chirangini P (2005), “In vitro propagation and microrhizome induction in Kaempferia galanga Linn and Kaempferia rotunda Linn.”, Indian Journal of Biotechnology, 4: 404 - 408 30 Shahinozzaman M., Faruq M O., Azad M A K and Amin M N (2013), “Studies on in vitro propagation of an important medicinal plant - Curcuma zedoaria Roscoe using rhizome explants”, Persian Gulf Crop Protection Available online, 2( 4): 1- TRANG WEB 31 http://sotayyhoc.com/tin-tuc-y-hoc/cay-tho-cao-ly-sam.html 32 https://vi.wikipedia.org/wiki/Cytokinin 33 https://vi.wikipedia.org/wiki/Auxin 34 http://yduochoaviet.com/thuoc-bo-nguon-goc-thao-moc/891-cay-tho-caoly-sam.html Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 47 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Thành phần môi trường MS (Murashige Skoog,1962) Thành phần khoáng đa lượng NH-4NO3 KNO3 Nồng độ (mg/l) 1650 1900 CaCl2.2H2O MgSO4.7H2O KH2PO4 Thành phần khoáng vi lượng MnSO4.H2O ZnSO4.7H2O H3BO3 KI Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 440 370 170 Nồng độ (mg/l) 23,3 8,6 6,2 0,83 0,25 0,025 0,025 Na2EDTA FeSO47H2O 37,3 27,8 Nồng độ (mg/l) 0,1 0,5 0,5 2,0 Vitamin Thiamin HCl Nicotinic Axit Pyridoxine HCl Glyxine Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 48 Phụ lục 2: Kết xử lí số liệu Nghiên cứu ảnh hưởng HgCl2 0,1% đến khả khử trùng hạt Thổ nhân sâm Anova: Single Factor SUMMARY Groups CT CT CT CT CT ANOVA Source of Variation Count 5 5 Sum 229,7 358,9 297,1 271,1 Average 45,94 71,78 59,42 54,22 Variance df MS F SS 29,508 8,722 15,362 16,852 Between Groups Within Groups 15139,53 281,776 3784,8836 268,644853 20 14,0888 Total 15421,31 24 P-value F crit 4,48689E17 2,866081 Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên thời gian xử lý HgCl2 0,1% ảnh hưởng đến kết khử trùng hạt Thổ nhân sâm Nghiên cứu ảnh hưởng javen 60% đến khả khử trùng hạt Thổ nhân sâm Anova: Single Factor SUMMARY Groups CT CT CT CT CT ANOVA Source of Variation Count 5 5 Sum 218,7 350,1 292,3 257,8 SS df Between Groups Within Groups 14382,4776 267,424 20 Total 14649,9016 24 Average Variance 0 43,74 29,778 70,02 1,357 58,46 15,678 51,56 20,043 MS F 3595,619 13,3712 268,9078 P-value F crit 4,44E17 2,866081 Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên thời gian xử lý javen 60% ảnh hưởng đến kết khử trùng hạt Thổ nhân sâm Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 49 Nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến khả nhân chồi sinh trưởng chồi Thổ nhân sâm 3.1 Phân tích tiêu số chồi/ mẫu Anova: Single Factor SUMMARY Groups CT CT CT CT CT CT Count 5 5 5 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 4,239507 5,08164 Total 9,321147 Sum 7,3 9,11 9,69 13 9,89 7,55 Average Variance 1,46 0,433 1,822 0,15942 1,938 0,14152 2,6 0,25105 1,978 0,17492 1,51 0,1105 df MS 0,847901 24 0,211735 F 4,00454 P-value 0,008772196 F crit 2,6206541 29 Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên số chồi/mẫu khác sự khác hàm lượng BAP khác 3.2 Phân tích tiêu chiều cao chồi Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum CT 12,33 CT 11,05 CT 9,9 CT 9,3 CT 5 8,13 CT 7,45 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 3,29330667 3,18664 Total 6,47994667 Average Variance 2,466 0,08378 2,21 0,4905 1,98 0,002 1,86 0,043 1,626 0,10438 1,49 0,073 df MS F P-value F crit 0,658661 4,960671 0,002932 2,620654 24 0,132777 29 Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên chiều cao chồi khác sự khác hàm lượng BAP khác Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 50 Nghiên cứu ảnh hưởng BAP kết hợp với kinetin đến khả nhân chồi sinh trưởng chồi Thổ nhân sâm 4.1 Phân tích tiêu số chồi/ mẫu Anova: Two-Factor Without Replication SUMMARY Count Sum Average Variance BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l 10,5 11,8 11,32 10,48 10,38 2,1 2,36 2,264 2,096 2,076 0,34 0,348 0,45548 0,41708 0,60788 Kinetin 0,0 mg/l Kinetin 0,25 mg/l Kinetin 0,50 mg/l Kinetin 1,0 mg/l Kinetin 1,5 mg/l 5 5 1,76 1,912 3,18 2,14 1,904 0,063 0,00652 0,022 0,098 0,40108 8,8 9,56 15,9 10,7 9,52 ANOVA Source of Variation Rows Columns SS 0,3186 6,63 Error 2,0438 16 Total 8,9924 24 df 4 MS F 0,07966 0,623599 1,6575 12,97595 P-value F crit 0,652364098 3,0069173 6,76053E-05 3,0069173 0,12774 Qua kết phân tích cho thấy: F rows (BAP) < F crit (BAP) nên hàm lượng BAP không ảnh hưởng tới số chồi/ mẫu F colum (kinetin) > F crit (kinetin) nên hàm lượng kinetin ảnh hưởng tới số chồi/ mẫu 4.2 Phân tích tiêu chiều cao chồi Anova: Two-Factor Without Replication SUMMARY BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l Kinetin 0,0 mg/l Kinetin 0,25 mg/l Kinetin 0,50 mg/l Kinetin 1,0 mg/l Kinetin 1,5 mg/l Count 5 5 Sum Average 10,1 2,02 10,5 2,1 10,3 2,06 9,8 1,96 10,9 2,18 13 10,5 10,25 9,05 8,8 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 2,6 2,1 2,05 1,81 1,76 Variance 0,062 0,05 0,35175 0,133 0,237 0,055 0,05 0,07 0,083 0,053 http://www.lrc.tnu.edu.vn 51 ANOVA Source of Variation Rows Columns Error SS 0,1376 2,2286 1,1064 Total 3,4726 df MS F 0,0344 0,49746927 0,55715 8,0571222 16 0,06915 P-value 0,737937735 0,000931169 F crit 3,00691728 3,00691728 24 Qua kết phân tích cho thấy: F rows (BAP) < F crit (BAP) nên hàm lượng BAP không ảnh hưởng tới chiều cao chồi F colum (kinetin) > F crit (kinetin) nên hàm lượng kinetin ảnh hưởng tới chiều cao chồi Nghiên cứu ảnh hưởng BAP kết hợp với IBA đến khả nhân chồi sinh trưởng chồi Thổ nhân sâm 5.1 Phân tích tiêu số chồi/ mẫu Anova: Two-Factor Without Replication SUMMARY BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l IBA 0,0 mg/l IBA 0,5 mg/l IBA 1,0 mg/l IBA 1,5 mg/l Count 4 4 Sum 7,4 6,92 8,1 6,75 7,6 Average 1,85 1,73 2,025 1,6875 1,9 Variance 0,836666667 0,0236 0,249166667 0,057291667 0,246666667 5 5 6,8 9,55 11,8 8,6 1,36 1,91 2,364 1,72 0,228 0,0155 0,18748 0,047 ANOVA Source of Variation SS df MS F P-value F crit Rows 0,29308 0,07327 0,543129648 0,70737376 3,259166727 Columns 2,62134 0,873778333 6,477070001 0,0074447 3,490294821 Error 1,61884 12 0,134903333 Total 4,53326 19 Qua kết phân tích cho thấy: F rows (BAP) < F crit (BAP) nên hàm lượng BAP không ảnh hưởng tới số chồi/ mẫu F colum (IBA) > F crit (IBA) nên hàm lượng IBA ảnh hưởng tới số chồi/ mẫu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 52 5.2 Phân tích tiêu chiều cao chồi Anova: Two-Factor Without Replication SUMMARY BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l BAP 1,5 mg/l Count Sum 8,1 8,02 9,15 9,5 7,7 IBA 0,0 mg/l IBA 0,5 mg/l IBA 1,0 mg/l IBA 1,5 mg/l 5 5 11,9 10,9 10,3 9,35 Average 2,025 2,005 2,2875 2,375 1,925 Variance 0,0025 0,1601 0,577292 0,229167 0,009167 2,38 2,18 2,064 1,87 0,332 0,087 0,21248 0,0845 ANOVA Source of Variation Rows Columns Error SS 0,61318 0,68394 2,25074 df MS F 0,153295 0,817305 0,227978 1,215485 12 0,187562 Total 3,54786 19 P-value 0,538273 0,346339 F crit 3,259167 3,490295 Qua kết phân tích cho thấy: F rows (BAP) < F crit (BAP) nên hàm lượng BAP không ảnh hưởng tới chiều cao chồi F colum (IBA) < F crit (IBA) nên hàm lượng IBA không ảnh hưởng tới chiều cao chồi Nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả rễ chồi Thổ nhân sâm 6.1 Phân tích tiêu tỷ lệ chồi rễ Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT 151,9 30,38 0,832 CT 300,3 60,06 0,018 CT 326,8 65,36 8,648 CT 400,8 80,16 3,228 CT 5 274,5 54,9 0,55 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 53 ANOVA Source of Variation SS df MS F P-value F crit 1,13EBetween Groups Within Groups Total 6609,026 1652,257 53,104 20 6662,13 24 622,272 20 2,866081402 2,6552 Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên nồng độ IBA ảnh hưởng đến tỷ lệ chồi rễ 6.2 Phân tích tiêu số rễ trung bình Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT 8,1 1,62 0,057 CT 11,7 2,34 0,263 CT 14,6 2,92 0,012 CT 20,1 4,02 0,047 CT 5 13,53 2,706 0,04308 df MS ANOVA Source of Variation SS F P-value F crit 8,76EBetween Groups Within Groups Total 15,42294 1,68832 17,11126 3,855736 45,67542 10 2,866081 20 0,084416 24 Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên nồng độ IBA ảnh hưởng đến số rễ trung bình chồi Thổ nhân sâm Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 54 6.3 Phân tích tiêu chiều dài rễ Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT 7,9 1,58 0,017 CT 9,3 1,86 0,01675 CT 10,38 2,076 0,09888 CT 12,8 2,56 0,023 CT 5 9,57 1,914 0,00048 df MS ANOVA Source of Variation SS Between Groups 2,6138 Within Groups 0,6244 20 Total 3,2382 24 F 0,6534 20,928832 P-value 6,4E-07 F crit 2,866081 0,0312 Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên nồng độ IBA ảnh hưởng đến chiều dài rễ chồi Thổ nhân sâm Nghiên cứu ảnh hưởng giá thể đến tỉ lệ sống, sinh trưởng phát triển in vitro vườn ươm 7.1 Phân tích tiêu tỷ lệ sống Anova: Single Factor SUMMARY Groups CT CT CT Count Sum 320,9 379,9 437,6 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups 1361,945333 80,284 12 Total 1442,229333 14 SS df Average 64,18 75,98 87,52 Variance 4,577 1,502 13,992 MS F Pvalue 680,9726667 6,690333333 101,78456 3E-08 F crit 3,885293835 Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên giá thể ảnh hưởng đến tỷ lệ sống Thổ nhân sâm Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 55 7.2 Phân tích tiêu chiều cao Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum CT 63,8 CT 68,3 CT 70,6 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 4,79748 38,87968 Total 43,67716 Average 12,76 13,66 14,122 Variance 3,313 2,278 4,12892 df MS F P-value 2,39874 0,7403579 0,49752 12 3,23997333 F crit 3,885293835 14 Qua kết phân tích cho thấy F< F crit nên giá thể không ảnh hưởng đến chiều cao Thổ nhân sâm Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ... trọng Thổ nhân sâm nên việc nhân giống chúng cần thiết Xuất phát từ lý trên, lựa chọn đề tài: ? ?Nghiên cứu nhân giống in vitro Thổ nhân sâm” (Talinum crassifolium Willd) Mục tiêu nghiên cứu Xác... NGUYỄN THỊ TRANG NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY THỔ NHÂN SÂM (Talinum crassifolium Willd) Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Người... http://www.lrc.tnu.edu.vn 17 nhân giống in vitro, nhiều nhà nghiên cứu công bố nhiều thành tựu nhân giống thuốc quý, nghiên cứu kỹ thuật nhân giống vơ tính Lơ hội phương pháp nuôi cấy in vitro tác giả Nguyễn