luận văn thạc sĩ nghiên cứu đánh giá và xây dựng quy trình nhân giống cho loài sâm núi dành (callerya speciosa (champ ex benth) schot) phân bố trên địa bàn tỉnh bắc giang

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Thanh Loan ĐỀ TÀI: “ NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ VÀ XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CHO LỒI SÂM NÚI DÀNH (CALLERYA SPECIOSA (CHAMP.EX BENTH) SCHOT) PHÂN BỐ TRÊN ĐỊA BÀN TỈNH BẮC GIANG” LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Thanh Loan ĐỀ TÀI: “ NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ VÀ XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CHO LỒI SÂM NÚI DÀNH (CALLERYA SPECIOSA (CHAMP.EX BENTH) SCHOT) PHÂN BỐ TRÊN ĐỊA BÀN TỈNH BẮC GIANG” Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : Hướng dẫn 1: TS Đồng Thị Kim Cúc Hướng dẫn 2: TS Nguyễn Thị Thanh Hương Hà Nội - 2019 Lời cam đoan Tôi xin cam đoan trực tiếp thực nghiên cứu luận văn Mọi kết thu nguyên bản, không chỉnh sửa chép từ nghiên cứu khác Các số liệu chưa công bố luận án, luận văn trước Mọi liệu trích dẫn tham khảo luận văn thu thập sử dụng từ nguồn liệu mở với đồng ý tác giả Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm với lời cam đoan trên! Tác giả Nguyễn Thanh Loan i Lời cảm ơn Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể thầy cô cán công tác Học viện Khoa học Công nghệ giảng dạy tạo điều kiện thuận lợi cho suốt q trình học tập Học viện Đặc biệt, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới TS Đồng Thị Kim Cúc TS Nguyễn Thị Thanh Hương tận tình hướng dẫn, giúp đỡ cho tơi q trình cơng tác thời gian học tập, nghiên cứu thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới tập thể cán bộ, anh chị em, bạn bè, đồng nghiệp Trung Tâm thực nghiệm Sinh học Nông nghiệp Công nghệ cao thuộc Viện Di truyền Nông nghiệp giúp đỡ đóng góp ý kiến q báu để tơi hồn thành luận văn Luận văn thực cho phép Viện Di truyền Nông nghiệp, Trung tâm Thực nghiệm sinh học Nông nghiệp Công nghệ cao thực từ nguồn kinh phí đề tài “Nghiên cứu đánh giá, bảo tồn nguồn gen Sâm Núi Dành phân bố địa bàn Tỉnh Bắc Giang” Luận văn có động viên giúp đỡ gia đình tơi Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng 10 năm 2019 Tác giả Nguyễn Thanh Loan ii Danh mục ký hiệu chữ viết tắt Viết đầy đủ Viết tắt DNA Deoxyribonucleic acid PCR Polymerase Chain Reaction (phản ứng chuỗi polymerase) Cs Cộng BA Benzyladenine (6-Benzyladenine) CT Công thức ĐC Đối chứng Ki Kinetin IBA Indole-3-butyric acid MS Murashige Skoog (1962) NAA Naphthaleneacetic acid TB Trung bình TN Thí nghiệm CV% Hệ số biến động (Correlation ò Variance) LSD0,05 Sai khác tối thiểu có ý nghĩa P = 0,05 (Leant Significant Difference) MTN L Mg Mơi trường lít miligram iii MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1.TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI Ý NGHĨA CỦA ĐỀ TÀI CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.NGUỒN GỐC VÀ ĐẶC ĐIỂM CỦA SÂM NÚI DÀNH 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC MỘT SỐ LOÀI THUỘC CHI CALLERYA 1.3.TỔNG QUAN PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU PHÂN LOẠI THỰC VẬT DỰA TRÊN CHỈ THỊ PHÂN TỬ 1.3.1 Tổng quan trình tự bảo tồn gene thực vật 1.3.2 Bộ gene lục lạp 1.3.3 Các trình tự bảo tồn gene nhân 1.3.4 Kết nghiên cứu ADN mã vạch kiểm định giống nhân sâm 1.4 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ NHÂN GIỐNG VƠ TÍNH TRÊN CÂY SÂM NGỌC LINH 10 1.5 TÌNH HÌNH NHÂN GIỐNG LỒI CELLERYA SPECIOSA CHAMP 11 1.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 11 1.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 12 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1.ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, ĐỊA ĐIỂM VÀ THƠI GIAN NGHIÊN CỨU 14 2.1.1.Đối tượng 14 2.1.2.Vật liệu nghiên cứu .14 2.1.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 14 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 14 2.2.1 Nội dung 1: Thu thập, lấy mẫu phân loại xác lồi Sâm Núi Dành marker phân tử số mẫu Sâm thu thập địa bàn tỉnh Bắc Giang 14 2.2.2 Nội dung 2: Phân tích định tính số nhóm chất củ Sâm Núi Dành 15 2.2.3 Nội dung 3: Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống vơ tính cho lồi Sâm Núi Dành phương pháp giâm hom phương pháp nuôi cấy invitro 15 2.3.PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.3.1.Phương pháp thu mẫu lấy mẫu thực địa .15 2.3.2 Phương pháp đánh giá đa dạng di truyền giống/loài marker đặc trưng-Barcode 16 iv 2.3.3 Phương pháp phân tích định tính số nhóm hoạt chất có dược tính lồi Sâm Núi Dành 19 2.3.4 Phương pháp nhân giống vơ tính cho lồi Sâm Núi Dành 20 2.3.5 Phương pháp bố trí thí nghiệm 25 2.3.6.Phương pháp xử lý số liệu 25 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 THU THẬP, LẤY MẪU VÀ PHÂN LOẠI CHÍNH XÁC LỒI SÂM NÚI DÀNH BẰNG MARKER PHÂN TỬ TRONG SỐ CÁC MẪU SÂM THU THẬP ĐƯỢC TRÊN ĐỊA BÀN TỈNH BẮC GIANG 26 3.1.1 Thu thập, lấy mẫu số loài Sâm địa bàn tỉnh Bắc Giang 26 3.1.2 Nghiên cứu xác định marker đặc trưng-Barcode (trình tự ITS gen ribosom nhân) để nhận dạng xác lồi Sâm Núi Dành 28 3.2 PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH MỘT SỐ NHĨM CHẤT TRONG CỦ SÂM NÚI DÀNH 32 3.3 NHÂN GIỐNG VƠ TÍNH CHO LỒI SÂM NÚI DÀNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP GIÂM HOM VÀ PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY IN-VITRO 36 3.3.1 Phương pháp nhân giống loài Sâm Núi Dành vùng địa phương pháp giâm hom 36 3.3.2 Xây dựng quy trình nhân giống vơ tính cho lồi Sâm Núi Dành phương pháp nuôi cấy in-vitro .40 3.3.2.5 Nghiên cứu ảnh hưởng loại giá thể đến tỷ lệ sống Sâm Núi Dành in-vitro vườn ươm .51 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 4.1 KẾT LUẬN 54 4.2 KIẾN NGHỊ 55 v DANH MỤC BẢNG Bảng Danh sách mồi ITS .14 Bảng 3.1 Danh sách kí hiệu mẫu Sâm .28 Bảng 3.2 Thành phần bốn loại nucleotide mẫu Sâm nghiên cứu 30 Bảng 3 Hệ số tương đồng mẫu Sâm nghiên cứu 31 Bảng 3.4 Kết phân tích định tính mẫu Sâm Núi Dành năm tuổi 32 Bảng 3.5 Kết phân tích định tính mẫu Sâm Núi Dành từ 3-5 năm tuổi .33 Bảng 3.6 Kết phân tích định tính mẫu Sâm Núi Dành năm tuổi .33 Bảng 3.7 Một số hình ảnh phản ứng định tính số nhóm chất 34 Bảng Ảnh hưởng IBA tới khả hình thành rễ hom giâm .36 Bảng 3.9 Ảnh hưởng giá thể tới phát triển hom Sâm Núi Dành 37 Bảng 3.10 Ảnh hưởng chất khử trùng thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu bệnh 40 Bảng 11 Ảnh hưởng Ki đến khả tái sinh chồi 42 Bảng 12 Ảnh hưởng BA IBA đến khả nhân nhanh chồi Sâm Núi Dành .45 Bảng 13 Ảnh hưởng MS nồng độ NAA đến hình thành rễ 46 Bảng 14 Ảnh hưởng ½MS nồng độ NAA đến hình thành rễ 46 Bảng 15 Ảnh hưởng mơi trường MS IBA đến hình thành rễ 47 Bảng 16 Ảnh hưởng mơi trường ½MS IBA đến hình thành rễ 48 Bảng 17 Ảnh hưởng than hoạt tính tới chất lượng rễ 50 Bảng 18 Ảnh hưởng giá thể tới phát triển Sâm Núi Dành in-vitro 51 Bảng 3.19 Kết Blast trình tự nucleotid vùng gen ITS mẫu S1 NCBI 64 Bảng 3.20 Kết Blast trình tự nucleotid vùng gen ITS mẫu S2 NCBI 65 Bảng 3.21 Kết Blast trình tự nucleotid vùng gen ITS mẫu S3 NCBI 66 Bảng 3.22 Kết Blast trình tự nucleotid vùng gen ITS mẫu S4 NCBI 67 vi DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 a) Cây Sâm Núi Dành , b) Cây Sâm Đắng 26 Hình 3.2 Củ Sâm Núi Dành củ Sâm Ngọt (Sâm Nam) 27 Hình 3.3 Các dạng Sâm thu tỉnh Bắc Giang 27 Hình 3.4 a) Quả Sâm Núi Dành b) Quả Sâm Đắng 27 Hình Hom Sâm Núi Dành xử lý qua công thức thí nghiệm 37 Hình 3.6 Động thái tăng trưởng số chồi/hom .38 Hình 3.7 Động thái tăng trưởng chiều dài chồi hom giâm 39 Hình 3.8 Động thái tăng trưởng số lá/chồi 39 Hình Mẫu Sâm Núi Dành sau tuần môi trường tái sinh 42 Hình 10 Chồi Sâm Núi Dành CT mơi trường nhân nhanh 44 Hình 11 Ảnh hưởng môi trường nồng độ hoocmon tăng trưởng đến khả hình thành rễ 49 Hình 12 Chồi Sâm rễ mơi trường có bổ sung mg/l IBA + 0,4 mg/l THT 50 Hình 13 Cây Sâm Núi Dành in-vitro hoàn chỉnh 51 Hình 3.14 Cây Sâm Núi Dành in-vitro công thức giá thể 52 vii MỞ ĐẦU 1.TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Ở Việt Nam, tổng số 3.948 lồi thuốc có khoảng 87,1% loài mọc tự nhiên, tập trung chủ yếu quần xã rừng, số lại trồng Mỗi năm ngành Y dược tiêu thụ 30-50 dược liệu loại phục vụ chữa bệnh làm nguyên liệu cho công nghiệp dược xuất Trong số đó, 2/3 lượng dược liệu khai thác từ nguồn thuốc mọc tự nhiên trồng nước, nhu cầu thuốc nước lớn Năm 2016, Viện Dược liệu công bố tổng số 5117 loài thuốc phát [1] Sâm Núi Dành loài thuốc phân bố chân Núi dành thuộc huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang Hiện cho thấy nhu cầu sử dụng dược liệu tăng mạnh thời gian gần nên Sâm Núi Dành bị khai thác ạt, dẫn đến nguồn nguyên liệu trở nên cạn kiệt Theo Sách đỏ Việt Nam (2007), loài xếp mức độ bị nguy cấp nơi cư trú chúng bị thu hẹp rừng thường xuyên bị chặt phá; loài bị khai thác nhiều để làm thuốc dẫn đến cạn kiệt [2] Một nguyên nhân khác dẫn đến cạn kiệt nguồn gen quý Sâm Núi Dành khó nhân giống Hạt nảy mầm khó nảy mầm điều kiện tự nhiên, vùng phân bố Sâm không đa dạng Việc bảo tồn loài sâm quý mức báo động, cần chung tay góp sức cấp, ngành người dân địa phương Một mục tiêu quan trọng đề tài nhân giống vơ tính lồi Sâm Núi Dành nhằm lưu giữ, bảo tồn nguồn gen quý loài Sâm nguy bị tuyệt chủng khai thác ạt Việc đáp ứng nhanh bền vững nguồn giống Sâm Núi Dành có chất lượng tốt yêu cầu cấp bách Nguồn cung cấp giống chủ yếu phương pháp nhân giống truyền thống: giâm cành, gieo hạt hệ số nhân giống đạt thấp, hạt gần khơng nảy mầm ngồi tự nhiên Để cải thiện hệ số nhân giống Sâm này, chúng tơi nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống cho loài Sâm Núi Dành Nghiên cứu thực nhằm thiết lập quy trình nhân giống vơ tính lồi Sâm Núi Dành có nguồn gốc từ tỉnh Bắc Giang Ni cấy Thí nghiệm giâm hom Sâm Núi Dành a b c d e f Thí nghiệm môi trường rễ khác a) MT: 1/2MS + IBA b) MT: 1/2MS + IBA c) MT: MS + 1,5IBA d) MT: MS + NAA e) MT: 1/2MS + 1,5 NAA f) MT: MS + 0,5NAA PHỤ LỤC Bảng 3.19 Kết Blast trình tự nucleotid vùng gen ITS mẫu S1 NCBI (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) Accession KC441034 KF294872 KF294868 AF467031 AF467027 Description Callerya speciosa voucher YC_11211269_MT01 internal transcribed spacer 2, partial sequence Callerya reticulata voucher Tang Shaoqing 201152906 (GNU) internal transcribed spacer 1, partial sequence; 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 26S ribosomal RNA gene, partial sequence Callerya eurybotrya voucher Tang Shaoqing 201161501(GNU) internal transcribed spacer 1, partial sequence; 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 26S ribosomal RNA gene, partial sequence Callerya reticulata specimen-voucher Liston 877 (OSC) small subunit ribosomal RNA gene, partial sequence; internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and large subunit ribosomal RNA gene, partial sequence Callery a eurybotrya specimenvoucher Tao 578 (KUN) small subunit ribosomal RNA gene, partial sequence; internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and large subunit ribosomal RNA gene, partial sequence Ma x scor e Total score Quer y cover E value Iden t 623 623 54% 0.0 99% 819 819 96% 0.0 91% 808 808 96% 0.0 90% 721 721 96% 0.0 89% 688 688 96% 0.0 88% Bảng 3.20 Kết Blast trình tự nucleotid vùng gen ITS mẫu S2 NCBI (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) Accession Description Callerya KC441034.1 speciosa Max score Total score Query cover E value Ident 608 608 53% 0.0 99% voucher YC_11211269_MT01 internal transcribed spacer 2, partial sequence Callerya reticulata voucher Tang Shaoqing 201152906 (GNU) internal transcribed KF294872.1 spacer 1, partial sequence; 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 26S ribosomal RNA gene, partial 817 817 97% 0.0 90% 806 806 97% 0.0 90% 719 719 97% 0.0 88% sequence Callerya eurybotrya voucher Tang Shaoqing 201161501(GNU) internal KF294868.1 transcribed spacer 1, partial sequence; 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 26S ribosomal RNA gene, partial sequence AF467031.1 Callerya reticulata specimenvoucher Liston 877 (OSC) small subunit ribosomal RNA gene, partial sequence; internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and large subunit ribosomal RNA gene, partial sequence Callerya eurybotrya specimenvoucher Tao 578 (KUN) small subunit ribosomal RNA gene, AF467027.1 partial sequence; internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, 686 686 97% 0.0 87% complete sequence; and large subunit ribosomal RNA gene, partial sequence Bảng 3.21 Kết Blast trình tự nucleotid vùng gen ITS mẫu S3 NCBI (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) Tot Accessio n AF46703 3.1 KF29487 2.1 KF29486 8.1 Description Quer y cover E value Iden t 477 84% 0.0 88% 627 91% 8e176 92% 621 91% 4e174 91% Max score al scor e 477 Callerya speciosa specimen-voucher Yu-Xi Team 1029 (KUN) small subunit ribosomal RNA gene, partial sequence; internal transcribed spacer 1, Callerya reticulata voucher Tang Shaoqing 201152906 (GNU) internal transcribed spacer 1, partial sequence; 5.8S ribosomal RNA gene and 627 internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 26S ribosomal RNA gene, partial sequence Callerya eurybotrya voucher Tang Shaoqing 201161501(GNU) internal transcribed spacer 1, partial sequence; 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 26S ribosomal RNA 621 gene, partial sequence Callerya reticulata specimen-voucher Liston 877 (OSC) small subunit ribosomal RNA gene, partial sequence; AF46703 1.1 internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and large subunit ribosomal 582 582 84% 566 566 84% 2e162 93% RNA gene, partial sequence AF46702 7.1 Callerya eurybotrya specimenvoucher Tao 578 (KUN) small subunit ribosomal RNA gene, partial sequence; internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and large subunit ribosomal RNA gene, partial sequence 2e157 92% Bảng 3.22 Kết Blast trình tự nucleotid vùng gen ITS mẫu S4 NCBI (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) Accession Description Callerya speciosa specimenvoucher Yu-Xi Team 1029 (KUN) small subunit ribosomal RNA gene, partial sequence; internal transcribed AF467033.1 spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and large subunit ribosomal RNA gene, partial sequence Callerya reticulata voucher KF294872.1 Tang Shaoqing 201152906 (GNU) internal transcribed Max Total Query E Ident score score cover value 488 676 488 676 77% 95% 0.0 0.0 88% 90% spacer 1, partial sequence; 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 26S ribosomal RNA gene, partial sequence Callerya eurybotrya voucher Tang Shaoqing 201161501(GNU) internal transcribed spacer 1, partial KF294868.1 sequence; 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 26S ribosomal RNA gene, partial sequence 660 660 95% 0.0 89% 597 597 98% 7e167 87% 566 566 77% 3e157 91% Callerya reticulata specimenvoucher Liston 877 (OSC) small subunit ribosomal RNA gene, partial sequence; internal transcribed spacer 1, 5.8S AF467031.1 ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and large subunit ribosomal RNA gene, partial sequence Callerya eurybotrya specimenvoucher Tao 578 (KUN) small subunit ribosomal RNA gene, AF467027.1 partial sequence; internal transcribed spacer 1, 5.8S riboso S1 S2 S3 S4 T T T T T T T T T T T T C C C C A A A A C C C C C C C C A A A A A A A A C C C C C C C C G G G G G G G G A A A A G G G G G G G G C C C C C C C C C C C C G G G G G G G G C C C C T T T T C T C C A C A A C C C C G G G G G G G G S1 S2 S3 S4 A A A A C C C C G G G G G G G G T T T T C C C C T T T T G G G G T T T T G G G G A A A A C C C C G G G G C C C C C C C C C C C C A A A A G G G G G G G G C C C C A A A A A G G A A A A A C C C C G G G G T T T T G G G G C C C C S1 S2 S3 S4 C C C C C C C C T T T T C C C C A A A A A A A A C C C C T T T T A A A A A A A A T T A T G G G G G G G G C C C C T T T T T T T T C C C C G G G G G G G G G G G G C C C C G G G G C C C C A A A A A A A A C C C C T T T T T T T T S1 S2 S3 S4 G G G G C C C C G G G G T T T T T T T T C C C C A A A A A A A A A A A A G G G G A A A A C C C C T T T T C C C C G G G G A A A A T T T T G G G G G G G G T T T T T T T T C C C C C A A A C C C C G G G G G G G G G G G G A A A A S1 S2 S3 S4 C C C C T T T T A A A A G G G A A A A A T T T T A A A A T T T T C C C C T C C C G G G G T T T T T T T T G G G G C C C C C C C C G G G G A A A A G G G A A A A A G G G G T T T T C C C C A A A A T T T T T T T T C C C C T C T C S1 S2 S3 S4 G G G G T T T T A A A A T T T T A C C C G G G G C C C C G G G G T T T T G G G G T T T T C C C C A A A A A A A A G G G G G G G G C C C C G G G G C C C C C C C C G G G G C C C C C C C C C C C C G G G G C C C C C C C C G G G G S1 S2 S3 S4 G G G G A A A A C C C C C C C C A A A A C C C C C C C C G G G G T T T T C C C C T T T T C C C C C C C C G G G G G G G G G G G G C C C C C C C C G G G A A A A A C C C C G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G C C C C G G G G S1 S2 S3 S4 G G G G G G G G C C C C G G G G G G G G G G G G G G G A A A A A A A A A C C C C A A A A C C C C A A A A C C C C T T T T G G G G C C C C G G G G T T T T G G G G G G G G C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C T T T T S1 S2 S3 S4 C C C C C C C C G G G A A A A A G G G G C C C C C C C C C C C C G G G G A A A A G G G G G G G G G G G G A A A A G G G G A A A A G G G G G G G G A A A A T T T T G G G G C C C C G G G G G G G G C C C C G G G G C C C C T T T T S1 S2 S3 S4 G G G G T T T T C C C C A A A A G A A A A A A A C C C C A A A A G G G G A A A A T T T T T C C C G G G G C C C C C C C C G G G G G G G G T T T T G G G G A A A A C C C C T T T T G G G G C C C C T T T T G G G G C A A C A A A A Hình Đoạn so sánh trình tự nucleotide vùng ITS mẫu Sâm PHỤ LỤC KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU BẰNG PHẦN MỀM IRRISTAT 5.0 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDTBC FILE BB315 30/8/19 23:22 :PAGE ANH HUONG CUA KI DEN KHA NANG TAI SINH CHOI VARIATE V003 CDTBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= KI$ 1.99333 498333 83.06 0.000 * RESIDUAL 10 600000E-01 600000E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 2.05333 146667 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BB315 30/8/19 23:22 :PAGE ANH HUONG CUA KI DEN KHA NANG TAI SINH CHOI MEANS FOR EFFECT KI$ KI$ KI0.2 KI0.4 KI0.6 KI0.8 KI1 NOS 3 3 CDTBC 10.2667 10.5333 10.7000 10.2000 9.63333 SE(N= 3) 0.447214E-01 5%LSD 10DF 0.140919 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BB315 30/8/19 23:22 :PAGE ANH HUONG CUA KI DEN KHA NANG TAI SINH CHOI F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CDTBC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 10.267 STANDARD DEVIATION C OF V |KI$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.38297 0.77460E-01 0.8 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BB318A 7/9/19 23:40 :PAGE ANH HUONG CUA BA VA IBA DEN NHAN NHAN CHOI VARIATE V004 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= BA$ 16.1008 4.02519 875.02 0.000 * RESIDUAL 10 460009E-01 460009E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 16.1468 1.15334 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTB FILE BB318A 7/9/19 23:40 :PAGE ANH HUONG CUA BA VA IBA DEN NHAN NHAN CHOI VARIATE V005 CCTB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= BA$ 450666 112667 4.97 0.018 * RESIDUAL 10 226666 226666E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 677332 483809E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BB318A 7/9/19 23:40 :PAGE ANH HUONG CUA BA VA IBA DEN NHAN NHAN CHOI MEANS FOR EFFECT BA$ BA$ BA2 BA2.5 BA3 BA3.5 BA4 NOS 3 3 HSNC 3.25000 5.14000 6.15000 6.02000 5.16000 CCTB 9.46667 9.80000 10.0000 9.80000 9.70000 SE(N= 3) 0.391582E-01 0.869226E-01 5%LSD 10DF 0.123389 0.273896 MEANS FOR EFFECT IBA$ IBA$ IBA.0.2 NOS 15 HSNC 5.14400 CCTB 9.75333 SE(N= 15) 0.000000 0.000000 5%LSD 0DF 0.000000 0.000000 MEANS FOR EFFECT BA$*IBA$ BA$ BA2 BA2.5 BA3 BA3.5 BA4 IBA$ IBA.0.2 IBA.0.2 IBA.0.2 IBA.0.2 IBA.0.2 NOS 3 3 HSNC 3.25000 5.14000 6.15000 6.02000 5.16000 CCTB 9.46667 9.80000 10.0000 9.80000 9.70000 SE(N= 3) 0.000000 0.000000 5%LSD 0DF 0.000000 0.000000 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BB318A 7/9/19 23:40 :PAGE ANH HUONG CUA BA VA IBA DEN NHAN NHAN CHOI F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC CCTB GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 5.1440 15 9.7533 STANDARD DEVIATION C OF V |BA$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.0739 0.67824E-01 1.3 0.0000 0.21996 0.15055 1.5 0.0184 |IBA$ | | | 0.0000 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BB318B 7/10/19 23:45 :PAGE ANH HUONG CUA BA VA IBA DEN NHAN NHANH CHOI |BA$*IBA$| | | | | | | 0.0000 0.0000 VARIATE V004 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= BA$ 15.6556 3.91391 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 345326E-01 345326E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 15.6902 1.12073 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTB FILE BB318B 7/9/19 23:45 :PAGE ANH HUONG CUA BA VA IBA DEN NHAN NHANH CHOI VARIATE V005 CCTB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= BA$ 1.45733 364333 10.51 0.001 * RESIDUAL 10 346667 346667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.80400 128857 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BB318B 7/9/19 23:45 :PAGE ANH HUONG CUA BA VA IBA DEN NHAN NHANH CHOI MEANS FOR EFFECT BA$ BA$ BA2 BA2.5 BA3 BA3.5 BA4 NOS 3 3 HSNC 3.39000 5.32000 6.54000 4.62333 5.10333 CCTB 9.53333 9.60000 10.3667 9.96667 9.63333 SE(N= 3) 0.339277E-01 0.107497 5%LSD 10DF 0.106907 0.338726 MEANS FOR EFFECT IBA$ IBA$ IBA.0.4 NOS 15 HSNC 4.99533 CCTB 9.82000 SE(N= 15) 0.000000 0.000000 5%LSD 0DF 0.000000 0.000000 MEANS FOR EFFECT BA$*IBA$ BA$ BA2 BA2.5 BA3 BA3.5 BA4 IBA$ IBA.0.4 IBA.0.4 IBA.0.4 IBA.0.4 IBA.0.4 NOS 3 3 HSNC 3.39000 5.32000 6.54000 4.62333 5.10333 CCTB 9.53333 9.60000 10.3667 9.96667 9.63333 SE(N= 3) 0.000000 0.000000 5%LSD 0DF 0.000000 0.000000 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BB318B 7/9/19 23:45 :PAGE ANH HUONG CUA BA VA IBA DEN NHAN NHANH CHOI F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 15) NO STANDARD DEVIATION C OF V |BA$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | |IBA$ | | |BA$*IBA$| | | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSNC 15 4.9953 1.0586 0.58764E-01 1.2 0.0000 0.0000 CCTB 15 9.8200 0.35897 0.18619 1.9 0.0015 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BB318C 7/9/19 23:52 :PAGE ANH HUONG CUA BA VA IBA DEN NHAN NHANH CHOI | 0.0000 0.0000 VARIATE V004 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= BA$ 14.8282 3.70704 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 124668E-01 124668E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 14.8406 1.06005 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTB FILE BB318C 7/9/19 23:52 :PAGE ANH HUONG CUA BA VA IBA DEN NHAN NHANH CHOI VARIATE V005 CCTB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= BA$ 642667 160667 7.09 0.006 * RESIDUAL 10 226667 226667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 869333 620952E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BB318C 7/9/19 23:52 :PAGE ANH HUONG CUA BA VA IBA DEN NHAN NHANH CHOI MEANS FOR EFFECT BA$ BA$ BA2 BA2.5 BA3 BA3.5 BA4 NOS 3 3 HSNC 3.28333 4.80000 6.36667 5.30333 5.05667 CCTB 9.63333 9.73333 10.2000 9.73333 9.66667 SE(N= 3) 0.203853E-01 0.869227E-01 5%LSD 10DF 0.642348E-01 0.273896 MEANS FOR EFFECT IBA$ IBA$ NOS HSNC CCTB IBA.0.6 15 4.96200 9.79333 SE(N= 15) 0.000000 0.000000 5%LSD 0DF 0.000000 0.000000 MEANS FOR EFFECT BA$*IBA$ BA$ IBA$ NOS HSNC CCTB BA2 IBA.0.6 3.28333 9.63333 BA2.5 IBA.0.6 4.80000 9.73333 BA3 IBA.0.6 6.36667 10.2000 BA3.5 IBA.0.6 5.30333 9.73333 BA4 IBA.0.6 5.05667 9.66667 SE(N= 3) 0.000000 0.000000 5%LSD 0DF 0.000000 0.000000 - | ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BB318C 7/9/19 23:52 :PAGE ANH HUONG CUA BA VA IBA DEN NHAN NHANH CHOI F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC CCTB GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 4.9620 15 9.7933 STANDARD DEVIATION C OF V |BA$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.0296 0.35308E-01 0.7 0.0000 0.24919 0.15055 1.5 0.0059 |IBA$ | | | 0.0000 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTB FILE BB318A 11/9/19 16:12 :PAGE ANH HUONG CUA MT VA IBA DEN RA RE |BA$*IBA$| | | | | | | 0.0000 0.0000 VARIATE V003 SRTB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 266227 665567E-01 525.45 0.000 * RESIDUAL 10 126667E-02 126667E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 267493 191067E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDTB FILE BB318A 11/9/19 16:12 :PAGE ANH HUONG CUA MT VA IBA DEN RA RE VARIATE V004 CDTB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 924760 231190 62.82 0.000 * RESIDUAL 10 368000E-01 368000E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 961560 686829E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BB318A 11/9/19 16:12 :PAGE ANH HUONG CUA MT VA IBA DEN RA RE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ MS0.5IBA MS1IBA MS1.5IBA MS2IBA MS2.5IBA NOS 3 3 SRTB 0.473333 0.680000 0.883333 0.723333 0.626667 CDTB 1.72333 2.22000 2.45000 2.14333 1.93333 SE(N= 3) 0.649787E-02 0.350238E-01 5%LSD 10DF 0.204750E-01 0.110361 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BB318A 11/9/19 16:12 :PAGE ANH HUONG CUA MT VA IBA DEN RA RE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 15) STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | | | SRTB CDTB NO OBS 15 0.67733 15 2.0940 BASED ON TOTAL SS 0.13823 0.26207 BASED ON % | RESID SS | 0.11255E-01 1.7 0.0000 0.60663E-01 2.9 0.0000 | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTB FILE BB318B 11/9/19 16:32 :PAGE ANH HUONG CUA MT VA IBA DEN RA RE VARIATE V003 SRTB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.54487 886217 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 446679E-02 446679E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.54933 253524 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDTB FILE BB318B 11/9/19 16:32 :PAGE ANH HUONG CUA MT VA IBA DEN RA RE VARIATE V004 CDTB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.39684 599210 889.91 0.000 * RESIDUAL 10 673335E-02 673335E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 2.40357 171684 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BB318B 11/9/19 16:32 :PAGE ANH HUONG CUA MT VA IBA DEN RA RE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ 1/2MS0.5IBA 1/2MS1IBA 1/2MS1.5IBA 1/2MS2IBA 1/2MS2.5IBA NOS 3 3 SRTB 1.53667 2.63667 2.14667 1.64000 1.27333 CDTB 4.12667 4.54333 3.96333 3.54333 3.44667 SE(N= 3) 0.122022E-01 0.149815E-01 5%LSD 10DF 0.384495E-01 0.472072E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BB318B 11/9/19 16:32 :PAGE ANH HUONG CUA MT VA IBA DEN RA RE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SRTB CDTB GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 1.8467 15 3.9247 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.50351 0.21135E-01 1.1 0.0000 0.41435 0.25949E-01 0.7 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTB FILE BB317 11/9/19 1:37 :PAGE ANH HUONG CUA NAA DEN KHA NANG RA RE VARIATE V003 SRTB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 313373 783433E-01 135.07 0.000 * RESIDUAL 10 580003E-02 580003E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 319173 227981E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDTB FILE BB317 11/9/19 1:37 :PAGE ANH HUONG CUA NAA DEN KHA NANG RA RE VARIATE V004 CDTB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 602973 150743 196.62 0.000 * RESIDUAL 10 766671E-02 766671E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 610640 436171E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BB317 11/9/19 1:37 :PAGE ANH HUONG CUA NAA DEN KHA NANG RA RE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ MS0.5NAA MS1NAA MS1.5NAA MS2NAA MS2.5NAA NOS 3 3 SRTB 0.320000 0.470000 0.606667 0.753333 0.576667 CDTB 1.54333 1.72333 1.94667 2.13667 1.84000 SE(N= 3) 0.139045E-01 0.159861E-01 5%LSD 10DF 0.438135E-01 0.503729E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BB317 11/9/19 1:37 :PAGE ANH HUONG CUA NAA DEN KHA NANG RA RE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SRTB CDTB GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 0.54533 15 1.8380 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.15099 0.24083E-01 1.4 0.0000 0.20885 0.27689E-01 1.5 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTB FILE BB318 11/9/19 15:39 :PAGE ANH HUONG CUA MT VA NAA DEN RA RE VARIATE V003 SRTB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.90677 726693 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 800004E-03 800004E-04 * TOTAL (CORRECTED) 14 2.90757 207684 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDTB FILE BB318 11/9/19 15:39 :PAGE ANH HUONG CUA MT VA NAA DEN RA RE VARIATE V004 CDTB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.04077 1.51019 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 240042E-02 240042E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 6.04317 431655 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BB318 11/9/19 15:39 :PAGE ANH HUONG CUA MT VA NAA DEN RA RE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ 1/2MS0.5NAA 1/2MS1NAA 1/2MS1.5NAA 1/2MS2NAA 1/2MS2.5NAA NOS 3 3 SRTB 0.643333 1.21000 1.91667 1.22667 0.810000 CDTB 2.32667 2.54667 3.81333 2.43000 1.94000 SE(N= 3) 0.516399E-02 0.894506E-02 5%LSD 10DF 0.162719E-01 0.281862E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BB318 11/9/19 15:39 :PAGE ANH HUONG CUA MT VA NAA DEN RA RE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SRTB CDTB GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 1.1613 15 2.6113 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.45572 0.89443E-02 0.8 0.0000 0.65700 0.15493E-01 0.6 0.0000 | | | | ... đề tài: Nghiên cứu, đánh giá xây dựng quy trình nhân giống cho loài Sâm Núi Dành (Callerya speciosa (Champ ex Benth) Schot) phân bố địa bàn tỉnh Bắc Giang MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI - Nghiên cứu, điều... TRÌNH NHÂN GIỐNG CHO LỒI SÂM NÚI DÀNH (CALLERYA SPECIOSA (CHAMP. EX BENTH) SCHOT) PHÂN BỐ TRÊN ĐỊA BÀN TỈNH BẮC GIANG Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI... in-vitro - Công việc 1: Nghiên cứu phương pháp nhân giống loài Sâm Núi Dành vùng địa phương pháp giâm hom - Công việc 2: Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống cho lồi Sâm Núi Dành phương pháp nuôi