Đang tải... (xem toàn văn)
Nội dung của luận trình bày kết quả đánh giá mức độ biểu hiện mRNA của gen CIZ1b, VEGF, đột biến EGFR và tỷ lệ nhiễm virus Merkel cell. Phân tích mối liên quan giữa mức độ biểu hiện mRNA của gen CIZ1b, VEGF, đột biến EGFR với nhiễm virus Merkel cell và một số triệu chứng lâm sàng, cận lâm sàng ở bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHỊNG HỌC VIỆN QN Y N VĂN HỒN HỒ VĂN SƠN NGHIÊN CỨU SỰ BIỂU HIỆN mRNA CỦA GEN CIZ1b, VEGF VÀ ĐỘT BIẾN EGFR VỚI NHIỄM VIRUS MERKEL CELL Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ PHỔI KHƠNG TẾ BÀO NHỎ LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI – 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHỊNG HỌC VIỆN QN Y NGUYỄN VĂN HỒN HỒ VĂN SƠN N VĂN HỒN NGHIÊN CỨU SỰ BIỂU HIỆN mRNA CỦA GEN CIZ1b, VEGF VÀ ĐỘT BIẾN EGFR VỚI NHIỄM VIRUS MERKEL CELL Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ PHỔI KHƠNG TẾ BÀO NHỎ Chun ngành: Khoa học y sinh Mã số: 9 72 01 01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: 1. GS.TS. Nguyễn Lĩnh Tồn 2. TS. Ngơ Tất Trung HÀ NỘI – 2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan luận án này là cơng trình nghiên cứu của riêng bản thân tơi, tất cả các số liệu trong luận án hồn tồn trung thực và chưa cơng bố trong bất kỳ cơng trình nào TÁC GIẢ Hồ Văn Sơn LỜI CẢM ƠN Đầu tiên tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Đảng ủy, Ban Giám đốc Học viện Qn y, Bộ mơn Sinh lý Bệnh, Phịng Sau Đại học, Học viện Qn y đã tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ tơi trong q trình học tập và nghiên cứu Tơi xin trân trọng cảm ơn Đảng ủy, Ban giám đốc Bệnh viện Qn y 175, Trung tâm tư vấn di truyền và sàng lọc ung thư (CGC), Trung tâm nghiên cứu y học Việt Đức (VGCARE), Khoa Sinh học phân tử (C17) bệnh viện Trung ương Quân đội 108 và các cơ quan chức năng đã tạo mọi điều kiện cho tơi học tập và thực hiện luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc với GS.TS. Nguyễn Lĩnh Tồn và TS. Ngơ Tất Trung, hai thầy hướng dẫn khoa học, đã tận tụy dành thời gian, trí tuệ, cơng sức giúp đỡ tơi trong q trình thực hiện và hồn chỉnh luận án Tơi chân thành cảm ơn Trung tâm chẩn đốn và điều trị ung bướu, Khoa Sinh hố Bệnh viện Qn y 175 đã giúp đỡ tơi trong q trình thực hiện đề tài Nhân dịp này chúng tơi chân thành cảm ơn các bạn bè, đồng nghiệp đã ủng hộ, động viên tơi trong q trình thực hiện đề tài Tơi dành tình cảm biết ơn sâu sắc tới gia đình, bố mẹ và vợ con đã ln động viên, giúp đỡ trong q trình học tập, nghiên cứu để hồn thành luận án TP Hồ Chí Minh 03/2020 Hồ Văn Sơn MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ix DANH MỤC BẢNG xi DANH MỤC HÌNH xii ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG 1 3 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1.1. Tình hình ung thư phổi trên thế giới 3 1.1.2. Tuổi và giới 4 1.1.3. Tỷ lệ tử vong 5 1.1.4. Tình hình ung thư phổi ở Việt Nam 6 1.1.5. Nguyên nhân gây ung thư phổi 6 1.2.1. Gen gây ung thư (oncogene) trong ung thư phổi 10 1.2.2. Gen ức chế khối u 11 1.3. Các dấu ấn phân tử trong chẩn đốn, tiên lượng ung thư phổi khơng tế bào nhỏ 13 1.3.1. Các dấu ấn protein 14 1.3.2. Tự kháng thể (Autoantibody) 15 1.3.3. Methyl hóa DNA 16 1.3.4. DNA khối ung thư trong máu (ctDNA) 16 1.3.5. RNA lưu hành trong máu ngoại vi 17 1.4. Yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu (Vascular Endothelial Growth Factor VEGF) 19 1.4.1. Đặc điểm cấu trúc và hoạt động chức năng của VEGF 19 1.4.2. Hoạt động của gen mã hóa cho VEGF 21 1.4.3. Mối liên quan giữa VEGF và ung thư 22 1.5. CIZ1 và biến thể CIZ1b trong ung thư phổi 24 1.5.1. Đặc điểm cấu trúc và hoạt động chức năng của CIZ1 24 1.5.2. Hoạt động của gen CIZ1 26 1.5.3. CIZ1b và mối liên quan với ung thư phổi 27 1.6 Yếu tố tăng trưởng biểu bì (Epidermal growth factor receptor EGFR) trong ung thư phổi không tế bào nhỏ 29 1.6.1. Chức năng của EGFR 29 1.6.2. Mối liên quan giữa EGFR và ung thư phổi không tế bào nhỏ . 30 1.7. Virus Merkel cell và ung thư phổi 31 1.7.1. Đặc điểm chung của Virus Merkel Cell 31 1.7.2. Cơ chế gây ung thư của virus Merkel cell 33 1.7.3. Mối liên quan giữa virus Merkel cell và ung thư phổi 34 1.8. Mối liên quan giữa VEGF, CIZ1b, đột biến EGFR với nhiễm virus Merkel cell. 35 CHƯƠNG 2 37 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.1.1. Tiêu chuẩn chọn mẫu nghiên cứu 37 2.1.2. Tiêu chuẩn loại trừ 37 2.2.1. Thiết kế nghiên cứu 38 2.2.2. Địa điểm và thời gian nghiên cứu 38 2.2.3. Phương pháp chọn mẫu 38 2.2.4. Phương pháp thu thập số liệu 38 2.3. Định lượng mRNA bằng kỹ thuật realtime PCR 40 2.4.1. Lấy mẫu xét nghiệm 42 2.4.2. Vật liệu, hóa chất 43 2.4.3. Thiết bị, máy móc 44 2.4.4. Phương pháp tách chiết, tinh sạch RNA 45 2.4.5. Phương pháp tổng hợp cDNA 46 2.4.6. Phương pháp đo quang phổ kế xác định nồng độ, độ tinh sạch cDNA 47 2.4.7. Phương pháp xác định mức độ biểu hiện mRNA của gen CIZ1b và VEGF huyết tương 47 2.5.1. Tách DNA từ mẫu sinh thiết đúc paraffin (FFPE) bằng bộ sinh phẩm Gene JET FFPE DNA Purification Kit 49 2.5.2. Thực hiện phản ứng realtime PCR bằng bộ sinh phẩm EGFR Mutation Detection Kit 50 2.5.3. Phân tích kết quả 51 2.6. Phương pháp phát hiện MCV 52 2.6.1. Phát hiện MCV huyết tương và trong mô bằng phương pháp realtime PCR 52 2.7.1. Chẩn đốn ung thư phổi khơng tế bào nhỏ 56 2.7.2. Đánh giá mức độ biểu hiện của mRNA VEGF, mRNA CIZ1b, đột biến EGFR với tình trạng nhiễm virus Merkel nhóm bệnh ung thư phổi khơng tế bào nhỏ 65 2.9. Đạo đức trong nghiên cứu 66 2.10. Sơ đồ nghiên cứu 67 CHƯƠNG 3 68 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 68 3.1.1. Tuổi và giới của nhóm bệnh nhân ung thư phổi khơng tế bào nhỏ và nhóm chứng 68 3.1.2. Triệu chứng lâm sàng của bệnh nhân khi nhập viện 69 3.1.3. Tiền sử cá nhân của các bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ 70 3.1.4. Một số đặc điểm cận lâm sàng nhóm bệnh nhân ung thư phổi khơng tế bào nhỏ 71 3.1.5. Một số đặc điểm cận lâm sàng nhóm người bình thường 77 3.4.1. Kết quả Ct của phản ứng realtime PCR cho gen CIZ1b 81 3.4.2. Kết quả Ct của phản ứng realtime PCR cho gen VEGF 81 3.4.3. Kết quả Ct của phản ứng realtime PCR cho gen ABL 82 3.5.1. Biểu hiện của mRNA của CIZ1b huyết tương ở bệnh nhân ung thư phổi khơng tế bào nhỏ và người bình thường 82 3.5.2. Biểu hiện của mRNA của VEGF huyết tương ở bệnh nhân ung thư phổi khơng tế bào nhỏ và người bình thường 83 3.6. Đột biến gen EGFR ở bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ 84 3.7. Kết quả xác định MCV người khỏe mạnh và bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ kỹ thuật realtime PCR. 86 3.7.1. Kết quả xác định MCV huyết tương nhóm người khỏe mạnh bằng kỹ thuật realtime PCR 86 3.7.2. Kết quả xác định MCV mô ung thư và huyết tương bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ bằng phản ứng realtime PCR 86 3.7.3. Kết quả xác định dương tính với MCV bằng phản ứng PCR. . 87 3.7.4. Kết quả giải trình tự và so sánh đoạn giải trình tự với trình tự MCV trên dữ liệu NCBI. 88 3.7.5. Tỷ lệ nhiễm MCV nhóm bệnh nhân ung thư phổi khơng tế bào nhỏ và nhóm chứng người bình thường 88 3.8.1. Mối liên quan giữa biểu hiện mRNA của CIZ1b và VEGF với các rối loạn tế bào máu ngoại vi 89 3.8.2. Mối liên quan giữa biểu hiện mRNA của CIZ1b và VEGF với rối loạn hoạt độ men gan 90 3.8.3. Mối liên quan giữa biểu hiện mRNA của CIZ1b và VEGF với rối loạn nồng độ Glucose máu 90 3.8.4. Mối liên quan giữa biểu hiện mRNA của CIZ1b và VEGF với mô bệnh học của khối u 91 ... nói riêng chưa được? ?nghiên? ?cứu. Chính vì v? ?y, chúng tơi thực? ?hiện? ?đề tài: ? ?Nghiên? ?cứu? ?sự ? ?biểu? ?hiện ? ?mRNA? ?của ? ?gen? ?CIZ1b,? ? VEGF? ?và? ?đột? ?biến EGFR? ?với? ?nhiễm? ?virus? ?Merkel? ?cell? ? ở? ?bệnh? ?nhân? ?ung? ?thư? ?phổi? ?không? ?tế bào? ?nhỏ? ??? ?với? ?mục tiêu: 1. Đánh giá ... 3.5.2.? ?Biểu? ?hiện? ?của? ?mRNA? ?của? ?VEGF? ?huyết tương? ?ở? ?bệnh? ?nhân? ?ung ? ?thư? ?phổi? ?khơng? ?tế? ?bào? ?nhỏ? ?và? ?người bình? ?thư? ??ng 83 3.6.? ?Đột? ?biến? ?gen? ?EGFR? ?ở? ?bệnh? ?nhân? ?ung? ?thư? ?phổi? ?không? ?tế? ?bào? ?... Single Nucleotide Polymorphism (Đa hình Nucleotide đơn) UTBMT Ung? ?thư? ?biểu? ?mơ tuyến UTBMTBG Ung? ?thư? ?biểu? ?mơ? ?tế? ?bào? ?gai UTP Ung? ?thư? ?phổi UTPKTBN Ung? ?thư? ?phổi? ?không? ?tế? ?bào? ?nhỏ UTPTBL Ung? ?thư? ?phổi? ?tế? ?bào? ?lớn UTPNP Ung? ?thư? ?phổi? ?nguyên phát