Luận án tiến sĩ Dược học: Xây dựng quy trình xác định một số tân dược trộn trái phép trong chế phẩm đông dược

Mục đích của luận án nhằm Xây dựng quy trình định tính và định lượng nhóm giảm đau, chống viêm, giảm glucose máu, ức chế PDE-5 trộn trái phép trong chế phẩm đông dược bằng phương pháp sắc ký hai lần khối phổ (LC-MS/MS). Xây dựng quy trình phát hiện nhanh một số tân dược trên trộn trái phép trong chế phẩm đông dược bằng sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao (HPTLC) và tán xạ Raman tăng cường bề mặt (SERS).

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO THỊ CẨM MINH XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH MỘT SỐ TÂN DƯỢC TRỘN TRÁI PHÉP TRONG CHẾ PHẨM ĐÔNG DƯỢC LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO THỊ CẨM MINH XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH MỘT SỐ TÂN DƯỢC TRỘN TRÁI PHÉP TRONG CHẾ PHẨM ĐÔNG DƯỢC LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH : KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ : 62720410 Người hướng dẫn khoa học : PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh PGS.TS Phạm Thị Thanh Hà HÀ NỘI, NĂM 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác Đào Thị Cẩm Minh LỜI CẢM ƠN Đề hồn thành Luận án này, tơi nhận giúp đỡ tận tình hiệu nhiều cá nhân tập thể, thầy cô giáo, đồng nghiệp, bạn bè gia đình Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh, Phó Viện trưởng Viện Cơng nghệ Dược phẩm Quốc gia, Trường Đại học Dược Hà Nội PGS.TS Phạm Thị Thanh Hà, Phó Trưởng Bộ mơn Hóa phân tích – Độc chất, hai giáo tận tình hướng dẫn, định hướng, giúp đỡ, cho tơi kiến thức quý báu động viên tâm hoàn thành luận án GS.TS Thái Nguyễn Hùng Thu, nguyên Hiệu phó, trưởng chuyên ngành Kiểm nghiệm thuốc Độc chất, Trường Đại học Dược Hà Nội người thầy động viên, dẫn đóng góp ý kiến q báu cho tơi hồn thành luận án PGS.TS Nguyễn Xuân Trường, Giám đốc Trung tâm giám định ma túy, Viện khoa học hình sự, Bộ Cơng an PGS.TS Lê Văn Vũ, Giám đốc Trung tâm Khoa học vật liệu, Khoa Vật lý, Trường Đại học Khoa học tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội, hai người thầy dẫn đóng góp kinh nghiệm q báu cho tơi hồn thành luận án Ban giám hiệu Trường Đại học Dược Hà Nội Ban giám hiệu Trường Đại học Y Dược Huế tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận án thời gian quy định Các thầy, Bộ mơn Hóa phân tích – Độc chất Phòng Sau đại học, Trường Đại học Dược Hà Nội giúp đỡ q trình học tập trường Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Gia đình người thân chia sẻ, động viên tơi có đủ nghị lực, tâm hồn thành luận án Tác giả luận án Đào Thị Cẩm Minh MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan tân dược trộn trái phép chế phẩm đông dược 1.1.1 Khái niệm, phân loại chế phẩm đơng dược 1.1.2 Tình hình tân dược trộn trái phép đơng dược giới 1.1.3 Tình hình tân dược trộn trái phép đơng dược Việt Nam 1.2 Tổng quan đối tượng nghiên cứu 12 1.2.1 Nhóm giảm đau, chống viêm steroid phi steroid 12 1.2.2 Nhóm giảm glucose máu 16 1.2.3 Nhóm ức chế PDE-5 18 1.3 Tổng quan phương pháp nghiên cứu 1.3.1 Phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) 19 19 1.3.2 Phương pháp sắc ký lớp mỏng kết hợp với quang phổ Raman tăng cường bề mặt (TLC-SERS) 24 1.3.3 Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS/MS) 32 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 39 2.1 Nguyên liệu, trang thiết bị 39 2.1.1 Nguyên liệu 39 2.1.2 Trang thiết bị 40 2.2 Đối tượng nghiên cứu 41 2.2.1 Mẫu thử 41 2.2.2 Mẫu placebo 41 2.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 43 2.3.1 Xây dựng quy trình định tính, định lượng số tân dược trộn trái phép chế phẩm đông dược LC-MS/MS 43 2.3.2 Xây dựng quy trình định tính số tân dược trộn trái phép chế phẩm đông dược HPTLC 46 2.3.3 Phát triển quy trình định tính sildenafil trộn trái phép chế phẩm đông dược phương pháp sắc ký lớp mỏng kết hợp với tán xạ Raman tăng cường bề mặt (TLC – SERS) 48 2.3.4 Ứng dụng phương pháp phân tích 50 2.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 51 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 52 3.1 Xây dựng quy trình định tính, định lượng phương pháp LCMS/MS 52 3.1.1 Xây dựng quy trình định tính, định lượng số thuốc nhóm giảm đau, chống viêm trộn trái phép chế phẩm đơng dược 52 3.1.2 Xây dựng quy trình định tính, định lượng số thuốc nhóm giảm glucose máu trộn trái phép chế phẩm đông dược 68 3.1.3 Xây dựng quy trình định tính, định lượng số thuốc nhóm ức chế PDE-5 trộn trái phép chế phẩm đơng dược 78 3.2 Xây dựng quy trình định tính phương pháp HPTLC 87 3.2.1 Xây dựng quy trình định tính nhóm glucorticoid phương pháp HPTLC 87 3.2.2 Xây dựng quy trình định tính nhóm NSAID phương pháp HPTLC 92 3.2.3 Xây dựng quy trình định tính nhóm giảm glucose máu phương pháp HPTLC 97 3.2.4 Xây dựng quy trình định tính nhóm ức chế PDE-5 phương pháp HPTLC 102 3.3 Phát triển quy trình định tính phương pháp TLC-SERS 106 3.3.1 Xây dựng quy trình định tính phương pháp TLC-SERS 106 3.3.2 Thẩm định phương pháp định tính sildenafil TLC-SERS 109 3.4 Đánh giá khả ứng dụng phương pháp HPTLC, LC-MS/MS TLC-SERS 110 3.4.1 Ứng dụng phương pháp HPTLC mẫu thực 111 3.4.2 Ứng dụng phương pháp LC-MS/MS xác định dược chất trộn lẫn chế phẩm đông dược 117 3.4.3 Ứng dụng phương pháp TLC-SERS mẫu thực CHƯƠNG BÀN LUẬN 120 122 4.1 Xây dựng mẫu chế phẩm đông dược 122 4.2 Phương pháp LC-MS/MS 124 4.2.1 Xây dựng quy trình chiết xuất thuốc tân dược chế phẩm đông dược 124 4.2.2 Xây dựng phương pháp phân tích LC-MS/MS 126 4.2.3 Thẩm định phương pháp LC-MS/MS 128 4.3 Phương pháp HPTLC 130 4.3.1 Xây dựng phương pháp phân tích HPTLC 130 4.3.2 Thẩm định phương pháp HPTLC 133 Phương pháp TLC-SERS 135 4.4 4.4.1 Lựa chọn phương pháp 135 4.4.2 Xây dựng quy trình định tính sildenafil TLC – SERS 136 4.4.3 Thẩm định phương pháp TLC-SERS 139 Đánh giá khả ứng dụng phương pháp 139 4.5.1 Ứng dụng phương pháp HPTLC để phân tích mẫu thực 139 4.5.2 Ứng dụng phương pháp LC-MS/MS phân tích mẫu thực 141 4.5.3 Ứng dụng phương pháp TLC – SERS để phân tích mẫu thực 143 4.5 4.5.4 Bước đầu đánh giá tình hình dược chất trộn lẫn mẫu thực 144 4.6 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn luận án KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 145 147 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ACN Acetonitril AOAC Hiệp hội nhà hóa phân tích thống (Association of Official Analytical Chemists) AR Thuốc thử phân tích BETA Betamethason CRE Hiệu ứng giọt cà phê (Coffe ring effect) CE Điện di mao quản (Capillary electrophoresis) COX Cyclooxygenase DEXA Dexamethason acetat ESI Ion hóa phun điện tử (Electrospray Ionization) GLIB GLIC Glibenclamid Gliclazid GLM Glimepirid GLIP Glipizid Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) HPTLC Sắc ký lớp mỏng hiệu cao (High Performance Thin Layer Chromatography) HPLC- DAD Sắc ký lỏng hiệu cao – Detector diod (High Performance Liquid Chromatography-Diode-Array Detection) HYDRO Hydrocortison acetat HPLC KETO ICH LOD Ketoprofen Hội đồng hòa hợp quốc tế (International Conference on Harmonisation) Indomethacin Hồng ngoại (Irradation) Sắc ký lỏng kết hợp khối phổ (Liquid chromatography - mass spectrometry) Sắc ký lỏng khối phổ hai lần (Liquid chromatography tandem mass spectrometry) Giới hạn phát (Limit of Detection) LOQ m/z MeOH Giới hạn định lượng (Limit of Quantitation) Khối lượng/điện tích Methanol INDO IR LC-MS LC-MS/MS MRM MS Chế độ khảo sát đa phản ứng (Multiple Reaction Monitoring) Khối phổ (Mass Spectrometry) NMR NSAID TAD Cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance) Thuốc chống viêm không steroid (Non-Steroidal AntiInflammatory Drug) Tinh khiết phân tích (Pure Analysis) Paracetamol Phosphodiesterae – Piroxicam Prednisolon Prednison Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) Tán xạ Raman tăng cường bề mặt (Surface- enhanced Raman spectroscopy) Tín hiệu/nhiễu (Signal/noise) Độ lệch chuẩn (Standard Deviation) Sildenafil citrat Chế độ khảo sát ion lựa chọn (Selected Ion Monitoring) Chế độ khảo sát phản ứng lựa chọn (Selected Reaction Monitoring) Nhóm cơng tác khoa học cho phân tích thuốc bị thu giữ (Scientific Working Group for the Analysis of Seized Drugs) Tadalafil TEM Kính hiển vi điện tử truyền qua (Transmission Electron microscopy) TFA Trifluoroacetic Acid TLC Sắc ký lớp mỏng (Thin layer chromatography) TLC-SERS TOF Sắc ký lớp mỏng kết hợp tán xạ Raman tăng cường bề mặt (Thin Layer Chromatography – Surface Enhanced Raman Spectroscopy) Thời gian bay (Time Of Flight) TPBVSK Thực phẩm bảo vệ sức khỏe TPCN Thực phẩm chức UV-Vis Tử ngoại – Khả kiến (Ultra Violet - Visible) VAR Vardenafil hydrochlorid VNKNTTW Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương PA PARA PDE – PIRO PREL PREN RSD SERS S/N SD SIL SIM SRM SWGDRUG DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Bảng 1.1 Cấu trúc hố học, tính chất vật lý liều dùng thuốc giảm đau, chống viêm phi steroid nghiên cứu 14 Bảng 1.2.Cấu trúc, tính chất vật lý liều dùng thuốc glucocorticoid 15 Bảng 1.3 Cấu trúc, tính chất vật lý liều dùng thuốc nghiên cứu 17 Bảng 1.4 Cấu trúc, tính chất vật lý liều dùng thuốc ức chế PDE-5 19 Bảng 1.5 So sánh vài thông số HPTLC TLC 20 Bảng 1.6 Các nghiên cứu phát tân dược trộn lẫn chế phẩm đông dược phương pháp TLC 23 Bảng 1.7.Phân loại kỹ thuật phân tích SWGDRUG 28 Bảng 1.8 Các nghiên cứu phát tân dược trộn lẫn chế phẩm đông dược phương pháp TLC-SERS 31 Bảng 1.9 Các nghiên cứu phát tân dược trộn lẫn chế phẩm đông dược phương pháp LC-MS 35 Bảng 2.1 Các chất chuẩn dùng nghiên cứu 39 Bảng 3.1 Các thông số máy khối phổ 52 Bảng 3.2 Điều kiện khối phổ nhóm giảm đau, chống viêm 53 Bảng 3.3 Điều kiện khảo sát pha động theo chế độ gradient nhóm giảm đau, chống viêm 55 Bảng 3.4 Kết khảo sát dung môi chiết 58 Bảng 3.5 Kết khảo sát thời gian siêu âm nhóm giảm đau, chống viêm 59 Bảng 3.6 Kết đánh giá độ phù hợp nhóm giảm đau chống viêm hệ thống LC-MS/MS 60 Bảng 3.7 Sự phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích pic chất nghiên cứu 64 Bảng 3.8 Kết LOD LOQ mẫu nhóm giảm đau, chống viêm 65 Bảng 3.9 Kết đánh giá độ độ xác nhóm giảm đau, chống viêm NX1 66 ... 43 2.3.1 Xây dựng quy trình định tính, định lượng số tân dược trộn trái phép chế phẩm đông dược LC-MS/MS 43 2.3.2 Xây dựng quy trình định tính số tân dược trộn trái phép chế phẩm đơng dược HPTLC... thuốc tân dược trộn trái phép chế phẩm đông dược TLC-SERS Từ thực tế lý trên, đề tài Xây dựng quy trình xác định số tân dược trộn trái phép chế phẩm đông dược tiến hành với mục tiêu sau: Xây dựng. .. trộn trái phép chế phẩm đông dược 52 3.1.2 Xây dựng quy trình định tính, định lượng số thuốc nhóm giảm glucose máu trộn trái phép chế phẩm đông dược 68 3.1.3 Xây dựng quy trình định tính, định