Xây dựng quy trình xác định một số tân dược trộn trái phép trong chế phẩm đông dược

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO THỊ CẨM MINH XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH MỘT SỐ TÂN DƯỢC TRỘN TRÁI PHÉP TRONG CHẾ PHẨM ĐÔNG DƯỢC LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO THỊ CẨM MINH XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH MỘT SỐ TÂN DƯỢC TRỘN TRÁI PHÉP TRONG CHẾ PHẨM ĐÔNG DƯỢC LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH : KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ : 62720410 Người hướng dẫn khoa học : PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh PGS.TS Phạm Thị Thanh Hà HÀ NỘI, NĂM 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác Đào Thị Cẩm Minh LỜI CẢM ƠN Đề hồn thành Luận án này, tơi nhận giúp đỡ tận tình hiệu nhiều cá nhân tập thể, thầy cô giáo, đồng nghiệp, bạn bè gia đình Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh, Phó Viện trưởng Viện Cơng nghệ Dược phẩm Quốc gia, Trường Đại học Dược Hà Nội PGS.TS Phạm Thị Thanh Hà, Phó Trưởng Bộ mơn Hóa phân tích – Độc chất, hai giáo tận tình hướng dẫn, định hướng, giúp đỡ, cho tơi kiến thức quý báu động viên tâm hoàn thành luận án GS.TS Thái Nguyễn Hùng Thu, nguyên Hiệu phó, trưởng chuyên ngành Kiểm nghiệm thuốc Độc chất, Trường Đại học Dược Hà Nội người thầy động viên, dẫn đóng góp ý kiến q báu cho tơi hồn thành luận án PGS.TS Nguyễn Xuân Trường, Giám đốc Trung tâm giám định ma túy, Viện khoa học hình sự, Bộ Cơng an PGS.TS Lê Văn Vũ, Giám đốc Trung tâm Khoa học vật liệu, Khoa Vật lý, Trường Đại học Khoa học tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội, hai người thầy dẫn đóng góp kinh nghiệm q báu cho tơi hồn thành luận án Ban giám hiệu Trường Đại học Dược Hà Nội Ban giám hiệu Trường Đại học Y Dược Huế tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận án thời gian quy định Các thầy, Bộ mơn Hóa phân tích – Độc chất Phòng Sau đại học, Trường Đại học Dược Hà Nội giúp đỡ q trình học tập trường Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Gia đình người thân chia sẻ, động viên tơi có đủ nghị lực, tâm hồn thành luận án Tác giả luận án Đào Thị Cẩm Minh MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1.Tổng quan tân dược trộn trái phép chế phẩm đông dược 1.1.1 Khái niệm, phân loại chế phẩm đơng dược 1.1.2 Tình hình tân dược trộn trái phép đơng dược giới 1.1.3 Tình hình tân dược trộn trái phép đông dược Việt Nam 1.2.Tổng quan đối tượng nghiên cứu 1.2.1 Nhóm giảm đau, chống viêm steroid phi steroid 1.2.2 Nhóm giảm glucose máu 1.2.3 Nhóm ức chế PDE-5 1.3.Tổng quan phương pháp nghiên cứu 1.3.1 Phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) 1.3.2 Phương pháp sắc ký lớp mỏng kết hợp với quang phổ Raman tăng cường bề mặt (TLC-SERS) 1.3.3 Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS/MS) CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu, trang thiết bị 2.1.1 Nguyên liệu 2.1.2 Trang thiết bị 2.2 Đối tượng nghiên cứu 2.2.1 Mẫu thử 2.2.2 Mẫu placebo 2.3 Nội dung phương pháp nghiên 2.3.1 Xây dựng quy trình định tính, định lượng số tân dược trộn trái phép chế phẩm đơng dược LC-MS/MS 2.3.2 Xây dựng quy trình định tính số tân dược trộn trái phép chế phẩm đơng dược HPTLC 2.3.3 Phát triển quy trình định tính sildenafil trộn trái phép chế phẩm đơng dược phương pháp sắc ký lớp mỏng kết hợp với tán xạ Raman tăng cường bề mặt (TLC – SERS) 2.3.4 Ứng dụng phương pháp phân tích 2.3.5 Phương pháp xử lý số liệu CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 MS/MS 52 Xây dựng quy trình định tính, đ 3.1.1 Xây dựng quy trình định tính, định lượng số thuốc nhóm giảm đau, chống viêm trộn trái phép chế phẩm đông dược 3.1.2 Xây dựng quy trình định tính, định lượng số thuốc nhóm giảm glucose máu trộn trái phép chế phẩm đơng dược 3.1.3 Xây dựng quy trình định tính, định lượng số thuốc nhóm ức chế PDE-5 trộn trái phép chế phẩm đông dược 3.2 Xây dựng quy trình định tính 3.2.1 Xây dựng quy trình định tính nhóm glucorticoid phương pháp HPTLC 3.2.2 Xây dựng quy trình định tính nhóm NSAID phương pháp HPTLC 3.2.3 Xây dựng quy trình định tính nhóm giảm glucose máu phương pháp HPTLC 97 3.2.4 Xây dựng quy trình định tính nhóm ức chế PDE-5 phương pháp HPTLC 102 3.3 Phát triển quy trình định tính 3.3.1 Xây dựng quy trình định tính phương pháp TLC-SERS 3.3.2 Thẩm định phương pháp định tính sildenafil TLC-SERS 3.4 TLC-SERS Đánh giá khả ứng dụng cá 3.4.1 Ứng dụng phương pháp HPTLC mẫu thực 3.4.2 Ứng dụng phương pháp LC-MS/MS xác định dược chất trộn lẫn chế phẩm đông dược 3.4.3 Ứng dụng phương pháp TLC-SERS mẫu thực CHƯƠNG BÀN LUẬN 4.1 Xây dựng mẫu chế phẩm đông dược 4.2 Phương pháp LC-MS/MS 4.2.1 Xây dựng quy trình chiết xuất thuốc tân dược chế phẩm đông dược 124 4.2.2 Xây dựng phương pháp phân tích LC-MS/MS 4.2.3 Thẩm định phương pháp LC-MS/MS 4.3 Phương pháp HPTLC 4.3.1 Xây dựng phương pháp phân tích HPTLC 4.3.2 Thẩm định phương pháp HPTLC 4.4 Phương pháp TLC-SERS 4.4.1 Lựa chọn phương pháp 4.4.2 Xây dựng quy trình định tính sildenafil TLC – SERS 4.4.3 Thẩm định phương pháp TLC-SERS 4.5 Đánh giá khả ứng dụng cá 4.5.1 Ứng dụng phương pháp HPTLC để phân tích mẫu thực 4.5.2 Ứng dụng phương pháp LC-MS/MS phân tích mẫu thực 4.5.3 Ứng dụng phương pháp TLC – SERS để phân tích mẫu thực 4.5.4 Bước đầu đánh giá tình hình dược chất trộn lẫn mẫu thực 144 4.6 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực ti DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ACN AOAC AR BETA CRE CE COX DEXA ESI GLIB GLIC GLM GLIP HPLC HPTLC HPLC- DAD HYDRO KETO ICH INDO IR LC-MS LC-MS/MS LOD LOQ m/z MeOH MRM MS NMR NSAID PA PARA PDE–5 PIRO PREL PREN RSD SERS S/N SD SIL SIM SRM SWGDRUG TAD TEM TFA TLC TLC-SERS TOF TPBVSK TPCN UV-Vis VAR VNKNTTW DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Bảng 1.1 Cấu trúc hố học, tính chất vật lý liều dùng thuốc giảm đau, chống viêm phi steroid nghiên cứu 14 Bảng 1.2.Cấu trúc, tính chất vật lý liều dùng thuốc glucocorticoid 15 Bảng 1.3 Cấu trúc, tính chất vật lý liều dùng thuốc nghiên cứu 17 Bảng 1.4 Cấu trúc, tính chất vật lý liều dùng thuốc ức chế PDE-5 19 Bảng 1.5 So sánh vài thông số HPTLC TLC .20 Bảng 1.6 Các nghiên cứu phát tân dược trộn lẫn chế phẩm đông dược phương pháp TLC 23 Bảng 1.7.Phân loại kỹ thuật phân tích SWGDRUG 28 Bảng 1.8 Các nghiên cứu phát tân dược trộn lẫn chế phẩm đông dược phương pháp TLC-SERS 31 Bảng 1.9 Các nghiên cứu phát tân dược trộn lẫn chế phẩm đông dược phương pháp LC-MS 35 Bảng 2.1 Các chất chuẩn dùng nghiên cứu 39 Bảng 3.1 Các thông số máy khối phổ 52 Bảng 3.2 Điều kiện khối phổ nhóm giảm đau, chống viêm 53 Bảng 3.3 Điều kiện khảo sát pha động theo chế độ gradient nhóm giảm đau, chống viêm 55 Bảng 3.4 Kết khảo sát dung môi chiết 58 Bảng 3.5 Kết khảo sát thời gian siêu âm nhóm giảm đau, chống viêm 59 Bảng 3.6 Kết đánh giá độ phù hợp nhóm giảm đau chống viêm hệ thống LC-MS/MS 60 Bảng 3.7 Sự phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích pic chất nghiên cứu 64 Bảng 3.8 Kết LOD LOQ mẫu nhóm giảm đau, chống viêm 65 Bảng 3.9 Kết đánh giá độ độ xác nhóm giảm đau, chống viêm NX1 66 BÁO CÁO THẨM ĐỊNH TIÊU CHUẨN KỸ THUẬT tR VAR Spic tR TAD Spic *: tR (phút); Spic (Counts) Nhận xét: Kết cho thấy hệ số biến thiên (RSD) thời gian lưu thấp (