TRƯƠNG MINH HUẤN xây DỰNG PHƯƠNG PHÁP xác ĐỊNH các THUỐC lợi TIỂU TRỘN TRÁI PHÉP TRONG CHẾ PHẨM ĐÔNG dược BẰNG LC MSMS và TLC LUẬN văn tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRƯƠNG MINH HUẤN XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CÁC THUỐC LỢI TIỂU TRỘN TRÁI PHÉP TRONG CHẾ PHẨM ĐÔNG DƯỢC BẰNG LC-MS/MS VÀ TLC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2019 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRƯƠNG MINH HUẤN Mã sinh viên: 1401259 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CÁC THUỐC LỢI TIỂU TRỘN TRÁI PHÉP TRONG CHẾ PHẨM ĐÔNG DƯỢC BẰNG LCMS/MS VÀ TLC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn : PGS TS Nguyễn Thị Kiều Anh DS Trịnh Thị Hoài Ân Nơi thực : Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia – Đại học Dược Hà Nội Viện Khoa học hình - Bộ Công An HÀ NỘI – 2019 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành đề tài khóa luận cách hồn chỉnh, hướng dẫn nhiệt tình q Thầy Cơ, động viên ủng hộ gia đình, bạn bè đồng nghiệp suốt thời gian học tập nghiên cứu nguồn động lực lớn lao quý giá Lời xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh, DS Trần Thị Hoài Ân người hướng dẫn bảo tơi tận tình suốt q trình nghiên cứu, hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn Công ty cổ phần Traphaco giúp đỡ tơi q trình tạo mẫu nghiên cứu Tôi xin gởi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo anh chị cán Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia – Trường Đại học Dược Hà Nội Trung tâm giám định ma túy – Viện Khoa học hình – Bộ Công an không ngừng hỗ trợ thiết bị tạo điều kiện tốt cho suốt thời gian nghiên cứu thực đề tài khóa luận Tơi xin gửi lời chân thành cám ơn đến Ban Giám hiệu, Bộ mơn Hóa Phân tích – Độc chất - Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện cho tơi q trình học tập làm đề tài khóa luận Cuối tơi xin dành lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, đồng nghiệp ln khích lệ, tạo động lực cho tơi q trình học tập nghiên cứu vừa qua Hà Nội, 11 tháng năm 2019 Trương Minh Huấn MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tình hình trộn trái phép thuốc lợi tiểu chế phẩm đông dược 1.2 Tổng quan đối tượng nghiên cứu 1.2.1 Tính chất vật lý, hóa học 1.2.2 Tính chất dược lý 1.3 Các nghiên cứu xác định dược chất lợi tiểu trộn trái phép chế phẩm động dược 1.4 Tổng quan phương pháp nghiên cứu 1.4.1 Sắc ký lớp mỏng (TLC) 1.4.2 Sắc ký lỏng khối phổ (LCMS) CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị đối tượng nghiên cứu 14 2.1.1 Nguyên vật liệu 14 2.1.2 Thiết bị nghiên cứu 14 2.1.3 Đối tượng nghiên cứu 15 2.2 Phương pháp nghiên cứu 15 2.2.1 Thu thập mẫu 15 2.2.2 Quy trình xử lý mẫu 15 2.2.3 Xây dựng phương pháp phân tích 16 2.2.4 Thẩm định phương pháp phân tích xây dựng 16 2.2.5 Ứng dụng phân tích mẫu chế phẩm đông dược thu thập thị trường 17 2.2.6 Phương pháp xử lý số liệu 17 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM - KẾT QUẢ 18 3.1 Xây dựng thẩm định phương pháp LC-MS/MS 18 3.1.1 Xây dựng phương pháp LC-MS/MS 18 3.1.2 Thẩm định phương pháp LC-MS/MS 23 3.2 Xây dựng thẩm định phương pháp TLC 31 3.2.1 Xây dựng phương pháp TLC 31 3.2.2 Thẩm định phương pháp TLC 34 3.3 Ứng dụng phân tích mẫu thực thu nhận thị trường 37 3.3.1 Kết phân tích phương pháp TLC 37 3.3.2 Kết phân tích phương pháp LC-MS/MS 38 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 41 4.1 Tạo mẫu 41 4.2 Xây dựng phương pháp phân tích 41 4.2.1 Lựa chọn phương pháp phân tích 41 4.2.2 Xây dựng phương pháp phân tích 42 4.2.3 Lựa chọn quy trình xử lý mẫu 43 4.3 Thẩm định phương pháp phân tích 43 4.4 Ứng dụng 44 KẾT QUẢ VÀ KIẾN NGHỊ 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tiếng anh tên khoa học ACN Acetonitril AML Amlodipin besilat AOAC APCI APPI Association of Official Analytical Hiệp hội nhà hóa phân Chemists tích thống Atmospheric Pressure Chemical Ion hóa hóa học áp suất Ionization Atmospheric Atenolol ESI Electrospray Ionization Fu Furosemid HCT Hydroclorothiazid HPTLC LC-MS/MS khí Pressure Photonization ATE HPLC Tiếng việt High Performance Ion hóa photon áp suất khí Ion hóa phun điện tử Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao High Performance Thin layer Sắc ký lớp mỏng hiệu chromatography cao Liquid chromatography – Mass Sắc ký lỏng hai lần khối Spectrometry/Mass Spectrometry phổ LOD Limit of Detection Giới hạn phát LOQ Limit of Quantitation Giới hạn định lượng Khối lượng/điện tích m/z MeOH Methanol MRM Multiple Reaction Monitoring MRM Multiple Reaction Monitoring MS Mass Spectrometry NIF Nifedipin NSAID Khối phổ Non steroidal anti-inflammatory Thuốc chống viêm khơng drug steroid RAAS Renin-Angiotensin-Aldosterone SCAN renin-angiotensin- aldosterone Qt tồn phổ SIM Selected Ion Monitoring SRM Selected Reaction Monitoring TLC Thin layer chromatography UHPLC Hệ Ultra High Performance Liquid Chromatography VAL Valsartan WHO Word health organization Sắc ký lớp mỏng Sắc ký lỏng siêu hiệu Tổ chức y tế giới DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các phương pháp phân tích số thuốc lợi tiểu trộn trái phép đông dược Bảng 2.1 Các chất chuẩn dùng nghiên cứu 14 Bảng 3.1 Tối ưu điều kiện khối phổ chất nghiên cứu 18 Bảng 3.2 Điều kiện khối phổ chất phân tích 19 Bảng 3.3 Khảo sát chế độ gradient 20 Bảng 3.4 Kết đánh giá độ phù hợp hệ thống LC-MS/MS (n=6) 23 Bảng 3.5 Các nồng độ xây dựng khoảng tuyến tính 26 Bảng 3.6 Sự phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích pic chất nghiên cứu 27 Bảng 3.7 Kết đánh giá độ độ lặp lại ngày phương pháp (n=7) 28 Bảng 3.8 Kết đánh giá độ độ lặp lại khác ngày phương pháp (n=7) 28 Bảng 3.9 Kết LOD LOQ mẫu 30 Bảng 3.10 Khảo sát hệ Ethylacetat – cloroform – acid acetic: 32 Bảng 3.11 Khảo sát hệ dung môi Ethylacetat : methanol : Amoniac 33 Bảng 3.12 Kết ứng dụng phân tích mẫu thực 39 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo Furosemid Hình 1.2 Công thức cấu tạo Hyrochlorothiazid Hình 1.3 Sơ đồ hệ thống HPLC Hình 1.4 Sơ đồ cấu tạo phận khối phổ kế 10 Hình 1.5 Sơ đồ tạo ion ESI 11 Hình 1.6 Sơ đồ phân tích tứ cực 12 Hình 1.7 Sơ đồ phân tứ cực chập ba 12 Hình 3.1 Phổ khối Hydroclorothiazid 19 Hình 3.2 Phổ khối Furosemid 19 Hình 3.3 Sắc ký đồ khảo sát cột sắc ký 21 Hình 3.4 Sắc ký đồ khảo sát chất phân tích điều kiện phân tích 22 Hình 3.5 Sắc ký đồ đánh giá độ đặc hiệu phương pháp viên nang cứng 25 Hình 3.6 Sắc ký đồ chất phân tích nồng độ LOD LOQ mẫu viên hoàn 30 Hình 3.7 Kết khảo sát hệ Ethylacetat – cloroform – acid acetic: 32 Hình 3.8 Kết khảo sát hệ dung môi Ethylacetat : methanol :amoniac 33 Hình 3.9 Sắc ký đồ khảo sát số chất chuẩn 35 Hình 3.10 Độ đặc hiệu chạy TLC 36 Hình 3.11 Kết LOD chạy TLC 37 Hình 3.12 Kết chạy mẫu thực M1 – M7 38 11 NLT08 Viên nang cứng Tán thảo khang Trang web Công ty TNHH viên/ lần dược phẩm Ngày lần thương mại Thành Công 12 NLT16 Viên nang cứng Thanh Áo Đình Nhà thuốc NLT17 Dáng xuân phục linh viên/ lần TBYT Phú Hải /ngày Công ty TNHH viên/ngày Dươc phẩm Hải Viên nang cứng 13 Công ty CP Trang web Gold Linh SĐK: 7204/2017/ATTT P-XNCB 14 15 16 17 18 19 NLT19 NLT21 NLT 22 NLT 24 HLT01 HLT05 Viên nang cứng Slim Phục Linh Viên nang cứng Hồng Hạc Phục Linh Phân phối Trang web viên/ngày công ty TNHH ADPHA Hà Nội Mẫu gửi để kiểm nghiệm American viên/ Biological and lần/ngày TechnologyHồng Koong Viên nang cứng Mẫu gửi để Phân phối viên/lần Giảm mỡ Scitec kiểm Gymstore Việt Ngày lần Nutrition Renex -16 nghiệm Nam Viên nang cứng Giảm cân Super star Viên hoàn cứng Tiêu sỏi an thận Viên hoàn cứng Thuốc trị sỏi thận Phân phối Trang web viên/ngày công ty TNHH Beauty care Trang web Cơng ty cổ phần gói/lần Dược Thiên Y Ngày lần Phúc Phòng Phòng khám đơng viên/ lần khám đông y gia truyền Trần Ngày lần y gia Ngọc Sinh truyền Trần Ngọc Sinh (Bắc Giang) Trang web Đông y gia truyền 15 viên/ lần phòng Ca Cơng Ngày lần gói/lần khám đơng 20 HLT06 Viên hoàn cứng y gia An thận hoàn truyền An Ca Cơng (Thanh Hóa) 21 22 HLT07 HLT08 Viên hoàn cứng Nhà thuốc Cơ sở y dược SoThadi Yến Trang Diệu Phương Trang web Đông y gia truyền đơng y gia Mộc Tân Đường Viên hồn Hoạt thạch tán viên/ lần truyền Mộc Tâm Đường 23 HLT10 Viên hoàn chữa đái rắt, đái buốt Viên hoàn 24 HLT09 Thuốc chữa sỏi thận Triệu Hòa Phòng Nhà thuốc gia gói/ khám đơng truyền Bách Thảo lần/ngày y Đường Trang web Lương y Triệu thìa ‘‘ Thuốc Thị Hòa café/lần nam Ngày lần Lương Y Triệu Thị Hòa ’’ 25 NELT03 Viên nén Bài thạch Phúc Thọ Trang web Công ty TNHH viên/ lần quốc tế Phúc Thọ Ngày 2-3 lần Pharma XNCB: 14686/2017/ATT P-XNCB 26 CLT01 Phòng Phòng khám đơng gói/lần Cốm khám đông y Y Phúc Đường Ngày lần Tiêu sỏi an thận y Y Phúc Công ty cổ phần gói/lần Kingphar Việt Ngày 2-3 lần Đường 27 TLT02 Trà giảm cân Kingphar Slim Trang web Nam SĐK: 4896/2014/ATTP -XNCB 28 TLT3 Trà giảm cân Figura Trang web Nhập từ gói/ ngày châu Âu PL 6: Sắc ký đồ, kết mẫu chạy TLC số mẫu đại diện chạy LCMS/MS 6.1 Kết chạy TLC mẫu thu nhận thị trường Ký hiệu mỏng Mẫu thực M1 – M7 Mẫu thực M8 – M14 Sắc ký đồ TLC Mẫu thực M15 – M21 Mẫu thực M22 – M28 6.2 Sắc ký đồ số mẫu thực đại diện chạy LC-MS/MS 6.2.1 Mẫu NLT 17 Viên nang Dáng xuân Phục linh Gold NSX: Công ty TNHH Dươc phẩm Hải Linh Nơi mua: trang web Phổ đồ Furosemid Phổ đồ HCT Sắc ký đồ phân tích mẫu viên nang NLT- 17 6.2.2 Mẫu HLT 05 Viên hoàn cứng Thuốc trị sỏi NSX: Phòng khám đơng y gia trun Trần Ngọc Sinh Mua phòng khám Phổ khối furosemid Phổ khối HCT Sắc ký đồ mẫu HLT 05 6.2.3 Mẫu HHA06 Hoàn mềm Tongren NiuHuan Qing xin wan Beijing Tong Ren Tang Limited Company-Trung Quốc Mua qua internet Phổ khối HCT Phổ khối Furosemid Sắc ký đồ mẫu HHA 06 ... HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRƯƠNG MINH HUẤN Mã sinh viên: 1401259 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CÁC THUỐC LỢI TIỂU TRỘN TRÁI PHÉP TRONG CHẾ PHẨM ĐÔNG DƯỢC BẰNG LCMS/MS VÀ TLC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ... cấm trộn lẫn chế phẩm đông dược, tiến hành đề tài nghiên cứu: Xây dựng phương pháp xác định thuốc lợi tiểu trộn trái phép chế phẩm đông dược LC- MS/MS TLC Với mục tiêu: Xây dựng phương pháp xác. .. lần/ngày 1.3 Các nghiên cứu xác định dược chất lợi tiểu trộn trái phép chế phẩm động dược Có nhiều nghiên cứu xây dựng phương pháp để phát xác định thuốc lợi tiểu phẩm đông dược nhiều phương pháp khác