Luận văn phân lập xác định một số đặc tính, độc lực và khả năng gây bệnh của vi khuẩn salmonella gây bệnh cho lợn con sau cai sữa t

Luận văn phân lập xác định một số đặc tính, độc lực và khả năng gây bệnh của vi khuẩn salmonella gây bệnh cho lợn con sau cai sữa t

Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ====***==== ðỒNG THIỆN TÂM PHÂN LẬP, XÁC ðỊNH MỘT SỐ ðẶC TÍNH, ðỘC LỰC VÀ KHẢ NĂNG GÂY BỆNH CỦA VI KHUẨN SALMONELLA GÂY BỆNH CHO LỢN SAU CAI SỮA TẠI HÀ TÂY THỬ NGHIỆM VACXIN PHÒNG BỆNH Chuyên nghành : Thú y Mã số: 60.62.50 LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS. Cù Hữu Phú HÀ NỘI - 2007 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 2 LỜI CẢM ƠN Trong quá trình học tập và nghiên cứu tại lớp cao học khoá 14 chuyên ngành Thú y –Viện khoa học Nông Nghiệp Việt Nam, tôi ñã nhận ñược sự giúp ñỡ, giảng dạy nhiệt tình của các thầy giáo, cô giáo. Nhân dịp này, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới tập thể các thầy, cô giáo, ñặc biệt là các thầy, cô trong Bộ môn Vi trùng – Viện Thú y Quốc gia Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc tới PGS. T.S Cù Hữu Phú, người ñã tận tình hướng dẫn, tạo ñiều kiện giúp ñỡ tôi hoàn thành ñề tài nghiên cứu này. Xin chân thành cảm ơn các ñồng nghiệp và những người thân ñã ñộng viên, giúp ñỡ tôi trong quá trình nghiên cứu thực hiện ñề tài. Xin chân trọng cảm ơn! Hà Nội, tháng 10 năm 2007 Tác giả luận văn ðỒNG THIỆN TÂM Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 3 LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan rằng kết quả nghiên cứu trong luận văn này là kết quả trung thực chưa ñược sử dụng ñể bảo vệ một học vị nào. Các thông tin trích dẫn trong luận văn ñã ñược ghi rõ nguồn gốc. Hà nội, tháng 10 năm 2007 Tác giả luận văn ðỒNG THIỆN TÂM Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 4 MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa .i Lời cảm ơn . ii Lời cam ñoan iii Mục lục .iv Danh mục các ký hiệu, các chữ viết tắt .vii Danh mục các bảng viii MỞ ðẦU 1. Tính cấp thiết của ñề tài 1 2. Mục tiêu nghiên cứu .3 3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ñề tài .3 4. ðối tượng nghiên cứu .3 5. ðịa ñiểm thực hiện . 3 Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4 1.1. Tình hình nghiên cứu vi khuẩn Salmonella . 4 1.1.1. Tình hình nghiên cứu trên thế giới 4 1.1.2. Những nghiên cứu trong nước 7 1.2. Vi khuẩn Salmonella 11 1.2.1. ðặc ñiểm hình thái 11 1.2.2. Tính chất nuôi cấy 11 1.2.3. ðặc tính sinh hoá 12 1.2.4. ðặc ñiểm dịch tễ học 13 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 5 1.2.5. Cấu trúc kháng nguyên .15 1.2.6. ðộc tố của vi khuẩn Salmonella 17 1.3 Bệnh do vi khuẩn Salmonella gây ra ở lợn 18 1.3.1 Cơ chế gây bệnh 18 1.3.2. Thể nhiễm trùng huyết do Salmonella choleraesuis var kunzendorf gây ra 25 1.3.3. Thể viêm ruột do S.typhimurium .27 1.4. Biện pháp phòng trị bệnh do Salmonella gây nên ở lợn .31 1.4.1. Phòng bệnh . 31 1.4.2. Các biện pháp cần tiến hành khi có dịch bệnh xảy ra……… 34 1.4.3. ðiều trị bệnh 35 Chương 2: NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 2.1. Nội dung nghiên cứu . 36 2.2. Nguyên liệu dùng cho nghiên cứu 36 2.3. Phương pháp nghiên cứu .37 2.4. Phương pháp thử nghiệm Vacxin và ñánh giá hiệu lực của Vacxin phòng bệnh cho lợn do Salmonella gây ra 47 2.5. Phương pháp xử lý số liệu .49 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 50 3.1. Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella từ các mẫu bệnh phẩm . 50 3.2. Kết quả xác ñịnh một số ñặc tính nuôi cấy và ñặc tính sinh hoá của chủng Salmonella phân lập ñược . 52 3.3. Kết quả xác ñịnh ñộc lực của một số chủng Salmonella phân lập ñược: . 55 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 6 3.4. Kết quả thử ñộ mẫn cảm với kháng sinh, hoá dược của các chủng Salmonella phân lập ñược . 57 3.5. Kết quả ñịnh type vi khuẩn Salmonella phân lập ñược .60 3.6. Kết quả gây bệnh thực nghiệm trên lợn bằng các chủng Salmonella phân lập ñược .62 3.7. Kết quả thử nghiệm và ñánh giá hiệu lực của Vacxin do viện thú y chế ñể phòng bệnh bại huyết và tiêu chảy cho lợn nuôi tại Hà Tây 65 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 4.1. Kết luận . 73 4.2. ðề nghị 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO 75 PHỤ LỤC .83 1. Sơ ñồ các giai ñoạn sản xuất Vacxin 2. Mô tả các bước sản xuất Vacxin 3. Một số hình ảnh minh hoạ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 7 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU – CÁC CHỮ VIẾT TẮT. BPW : Bytfered Pepte Water. BSA : Bismuth Sulfite Agar CHO : Chinese Hansten Ovary. DPF : Delayed Permeability Factor KN : Kháng Nguyên KT : Kháng Thể LPS : Lipo Poly Saccharid LT : Lable Toxiu MacC : MacConkey R : Rough RPF : RapitPermeabilityFactor RV : RappaportsVassiliadis S : Smooth ST : Stable Toxin Tr : Trang TSA : Triple Soya Agar TSI : Tryple Sugar Iron XLD : Xylose Lysine Desoxycholate Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 8 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1: Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella từ bệnh phẩm .61 Bảng 3.2: Kết quả xác ñịnh một số ñặc tính nuôi cấy và hình thái khuẩn lạc của các chủng Salmonella phân lập ñược 64 Bảng 3.3: Kết quả xác ñịnh một số ñặc tính sinh hoá của vi khuẩn Salmonella phân lập ñược .65 Bảng 3.4: Kết quả giám ñịnh khả năng lên men ñường của các chủng Salmonella phân lập ñược .65 Bảng 3.5: Kết quả xác ñịnh ñộc lực Salmonella phân lập ñược bằng phương pháp tiêm truyền qua chuột nhắt trắng .67 Bảng 3.6: Kết quả thử ñộ mẫn cảm với kháng sinh của các chủng Salmonella phân lập ñược .69 Bảng 3.7: Kết quả ñịnh type vi khuẩn Salmonella phân lập ñược bằng phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính 71 Bảng 3.8: Ký hiệu chủng vi khuẩn Salmonella chọn ñể gây bệnh .73 Bảng 3.9: Kết quả sau khi gây bệnh trên lợn .74 Bảng 3.10: Bệnh tích ñại thể bệnh Phó thương hàn lợn thể cấp tính .75 Bảng 3.11: Bệnh tích ñại thể bệnh Phó thương hàn lợn thể mãn tính 76 Bảng 3.12: Kết quả xác ñịnh hiệu giá kháng thể ở lợn sau khi ñược tiêm AutoVacxin chế từ các chủng Salmonella phân lập ñược. 78 Bảng 3.13: Kết quả thử nghiệm liều và số lần tiêm AutoVacxin cho lợn. .81 Bảng 3.14: Kết quả kiểm tra an toàn Vacxin trên lợn .82 Bảng 3.15: Kết quả thử nghiệm an toàn và hiệu lực của Vacxin trên diện hẹp ở các hộ chăn nuôi tại Hà Tây 83 viii Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 9 MỞ ðẦU 1.Tính cấp thiết của ñề tài. Hiện nay ngành chăn nuôi ñang chiếm một vị trí quan trọng trong nền kinh tế nông nghiệp. Mục tiêu chủ yếu của kế hoạch phát triển chăn nuôi của Việt Nam ñến năm 2010 cần ñạt: ñàn lợn 32,8 triệu con, sản lượng thịt lợn 3,2 triệu tấn; ñàn bò thịt 7,1 triệu con, sản lượng thịt bò 210 ngàn tấn; ñàn bò sữa 200 ngàn con, sản lượng sữa 350 ngàn tấn; ñàn gia cầm 283 triệu con, sản lượng thịt 1.427 ngàn tấn và 7,95 tỷ quả trứng gà, vịt (Cục chăn nuôi, 2006)[1]. Trong ngành chăn nuôi thì nuôi lợn là ngành chiếm một vị trí vô cùng quan trọng, cung cấp phần lớn lượng thịt trên thị trường, bên cạnh ñó còn cung cấp lượng phân bón cho trồng trọt. Con lợn gắn liền với ñời sống người nông dân, nhờ các ñặc ñiểm ưu việt của lợn nuôi: - Khả năng sinh sản cao, là loài ăn tạp. - Khả năng cho thịt cao, chi phí thức ăn/kg tăng trọng thấp. - Thịt lợn có giá trị dinh dưỡng cao, ñáp ứng ñược nhu cầu xã hội. Sau 20 năm nhờ chính sách ñổi mới, mở cửa của ðảng và Nhà nước, nghề chăn nuôi lợn ñã có những bước ñột phá. Từ một nghề sản xuất truyền thống quảng canh chăn nuôi lợn nhanh chóng chuyển thành sản xuất công nghiệp hàng hoá. Thịt lợn không những ñã ñáp ứng ñược nhu cầu trong nước mà còn từng bước chiếm lĩnh thị phần khu vực và quốc tế. Lợn sữa của nước ta ñã xuất khẩu sang các nước Trung Quốc, ðài Loan, Hồng Kông…, thịt lợn xẻ của Việt Nam ñã xuất khẩu sang Liên Bang Nga và một số nước khác. Tuy nhiên tình trạng bệnh dịch trong chăn nuôi lợn nói chung và chăn nuôi lợn con trước và sau cai sữa vẫn còn nhiều ñiều cần quan tâm như: Tỷ lệ nuôi sống lợn con thấp, lợn chậm lớn, còi cọc do các bệnh truyền nhiễm, bệnh ký sinh trùng…, gây thiệt hại lớn về kinh tế cho người chăn nuôi. Một trong những bệnh gây thiệt hại cho lợn sau cai sữa phải kể ñến bệnh do vi khuẩn Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 10 Salmonella còn gọi là bệnh Phó thương hàn. Bệnh tuy không nổ ra thành dịch lớn nhưng thường xuyên xảy ra mang tính chất ñịa phương. Ở Việt Nam, tuy ñã có một số công trình nghiên cứu về Salmonella và bệnh do chúng gây ra ở lợn (Phùng Quốc Chướng, 1995) [2], (Nguyễn Lương, 1986) [23], (Nguyễn Thị Nội và cộng sự, 1989) [28], (Lê Văn Tạo và cộng sự, 1989) [37]. Nhìn chung vi khuẩn Salmonella không những ñã gây ñược sự chú ý của những nghiên cứu cơ bản trong ngành vi sinh vật học của thế giới mà còn ở Việt Nam. Ngày nay, nhiều nước trên thế giới như ðức, Pháp và các nước thuộc khối EU ñã thanh toán ñược thể cấp tính nhiễm trùng huyết do S.choleraesuis gây ra ở lợn. Trong khi ñó thì một số loài Salmonella khác như: S. typhimurium, S. enteritidis, S. dublin, S. poona… bấy lâu vẫn ẩn mình nay lại gia tăng ñột biến (Selbitz H-J. và cộng sự,1995) [60]. Theo Selbitz H-J. và cộng sự (1995)[60] thì các ñàn gia súc bị nhiễm Salmonella trầm trọng không những gây thiệt hại kinh tế cho người chăn nuôi mà chúng còn là nguồn tàng trữ mầm bệnh chủ yếu ñối với con người. Bởi vậy mà mỗi biện pháp ngăn chặn có hiệu quả ở gia súc ñều cần thiết và là ñiều kiện tiên quyết góp phần giảm thiểu dịch bệnh, tăng thu nhập cho người chăn nuôi, chống ô nhiễm môi trường và bảo vệ sức khoẻ cộng ñồng. Mục tiêu theo ñuổi ñến cùng của các nhà khoa học cũng như các nhà sản xuất là xây dựng các ñàn gia súc sạch Salmonella. Nhằm ñáp ứng một phần nào mục tiêu trên, ñặc biệt ñối với những nơi mà phương thức chăn nuôi lợn còn thô sơ, kiến thức của người chăn nuôi còn thiếu, ñể hạn chế và ñi ñến khống chế bệnh, giảm thiệt hại, tăng thu nhập, góp phần xoá ñói, giảm nghèo cho bà con nông dân, trong phạm vi và ñiều kiện cho phép, chúng tôi tiến hành nghiên cứu ñề tài: “Phân lập, xác ñịnh một số ñặc tính, ñộc lực và khả năng gây bệnh của vi khuẩn Salmonella gây bệnh cho lợn sau cai sữa tại Hà tây. Thử nghiệm Vacxin phòng bệnh” 2. Mục tiêu nghiên cứu. Trên kết quả phân lập, xác ñịnh ñược ñặc tính, ñộc lực của vi khuẩn Salmonella gây bệnh cho lợn sau cai sữa ở một số khu vực chăn nuôi lợn tại tỉnh Hà Tây, tiến hành thử nghiệm Vacxin phòng bệnh bại huyết và tiêu chảy . VI T NAM ====***==== ðỒNG THIỆN T M PHÂN LẬP, XÁC ðỊNH M T SỐ ðẶC T NH, ðỘC LỰC VÀ KHẢ NĂNG GÂY BỆNH CỦA VI KHUẨN SALMONELLA GÂY BỆNH CHO LỢN SAU CAI SỮA. cứu ñề t i: Phân lập, xác ñịnh m t số ñặc t nh, ñộc lực và khả năng gây bệnh của vi khuẩn Salmonella gây bệnh cho lợn sau cai sữa t i Hà t y. Thử nghiệm