Phân lập, xác định một số đặc tính sinh vật học của vi khuẩn escherichia coli trong hội chứng tiêu chảy ở lợn con tại khu vực thành phố cẩm phả, tỉnh quảng ninh và biện pháp phòng trị

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM PHẠM HÀ GIANG PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH VẬT HỌC CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở LỢN CON TẠI KHU VỰC THÀNH PHỐ CẨM PHẢ, TỈNH QUẢNG NINH VÀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y THÁI NGUYÊN - 2015 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM PHẠM HÀ GIANG PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH VẬT HỌC CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở LỢN CON TẠI KHU VỰC THÀNH PHỐ CẨM PHẢ, TỈNH QUẢNG NINH VÀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ Chuyên ngành: THÚ Y Mã số: 60 64 01 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: GS TS NGUYỄN QUANG TUYÊN THÁI NGUYÊN - 2015 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Tác giả Phạm Hà Giang ii LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực tập thực đề tài này, nhận quan tâm, bảo, hướng dẫn, giúp đỡ tận tình thầy cô giáo, đồng nghiệp, bạn bè động viên khích lệ gia đình Nhân dịp xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: Giảng viên hướng dẫn khoa học: GS TS Nguyễn Quang Tuyên trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình suốt trình nghiên cứu hoàn thành Luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Quản lý Đào tạo – Sau Đại học, Ban chủ nhiệm khoa thầy cô giáo Khoa Chăn nuôi Thú y- Trường Đại học Nông lâm - Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện giúp đỡ suốt trình học tập Tôi xin trân trọng cảm ơn hộ gia đình nuôi lợn, thú y viên số xã phường thuộc thành phố Cầm Phả, tỉnh Quảng Ninh đồng nghiệp ngành giúp trình thực đề tài Cuối xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc ủng hộ, động viên, giúp đỡ gia đình, bạn bè đồng nghiệp suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành tốt luận văn Cẩm Phả, tháng năm 2015 Tác giả Phạm Hà Giang iii MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa đề tài Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Hiểu biết hội chứng tiêu chảy 1.1.1 Khái niệm hội chứng tiêu chảy 1.1.2 Một số nguyên nhân gây tiêu chảy lợn 1.1.3 Một số đặc điểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy 1.1.4 Cơ chế sinh bệnh 1.1.5 Bệnh lý, lâm sàng hội chứng tiêu chảy 1.1.6 Hậu hội chứng tiêu chảy 10 1.1.7 Biện pháp phòng trị tiêu chảy cho lợn 11 1.2 Đặc điểm sinh lý tiêu hóa lợn 15 1.2.1 Đặc điểm tiêu hóa lợn 15 1.2.2 Khả đáp ứng miễn dịch lợn 16 1.3 Vi khuẩn escherichia coli 17 1.3.1 Đặc điểm hình thái 17 1.3.2 Đặc điểm cấu trúc 17 1.3.3 Đặc tính sinh vật học vi khuẩn E coli 19 1.3.4 Đặc tính gây bệnh vi khuẩn E coli 20 1.3.5 Khả mẫn cảm với kháng sinh vi khuẩn E coli 23 1.4 Tình hình nghiên cứu nước 24 1.4.1 Tình hình nghiên cứu nước 24 1.4.2 Tình hình nghiên cứu giới 27 Chương ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 30 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 30 2.1.2 Nguyên vật liệu dùng nghiên cứu 30 iv 2.2 Địa điểm, thời gian nghiên cứu 31 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu 31 2.2.2 Thời gian nghiên cứu 31 2.3 Nội dung nghiên cứu 31 2.3.1 Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy lợn số xã, phường thuộc khu vực TP Cẩm Phả, tỉnh Quảng Ninh 31 2.3.2 Phân lập, xác định số đặc tính sinh học chủng E coli phân lập 31 2.3.3 Thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy cho lợn đề xuất biện pháp phòng chống bệnh 32 2.4 Phương pháp nghiên cứu 32 2.4.1 Phương pháp điều tra dịch tễ học 32 2.4.1.1 Chọn mẫu điều tra 32 2.4.1.2 Phương pháp 32 2.4.2 Thu thập mẫu phân lập vi khuẩn 32 2.4.3 Phương pháp xác định đặc tính sinh hoá vi khuẩn E coli 35 2.4.4 Phương pháp xác định serotype kháng nguyên O chủng vi khuẩn E coli phân lập 37 2.4.5 Phương pháp xác định yếu tố gây bệnh chủng vi khuẩn E coli phân lập 38 2.4.6 Phương pháp xác định độc lực chủng vi khuẩn E coli 40 2.4.7 Phương pháp xác định khả mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn E coli phân lập 40 2.4.8 Thử nghiệm vaccine phòng bệnh tiêu chảy lợn tháng tuổi 41 2.4.9 Xây dựng phác đồ điều trị tiêu chảy lợn tháng tuổi 41 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 41 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 42 3.1 Kết nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy lợn tháng tuổi số xã, phường thuộc khu vực thành phố Cẩm Phả, tỉnh Quảng Ninh 42 3.1.1 Tỷ lệ lợn tiêu chảy chết tiêu chảy số xã, phường thuộc khu vực TP Cẩm Phả 42 3.1.2 Tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy chết tiêu chảy theo lứa tuổi 44 3.1.4 Tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy chết tiêu chảy theo phương thức chăn nuôi 49 v 3.1.5 Triệu chứng lâm sàng lợn mắc tiêu chảy 52 3.1.6 Bệnh tích đại thể lợn bị mắc tiêu chảy 53 3.2 Kết phân lập xác định số đặc tính sinh học chủng E coli phân lập 55 3.2.1 Kết phân lập vi khuẩn E coli lợn mắc tiêu chảy 55 3.2.2 Kết phân lập E coli từ bệnh phẩm lợn chết mắc tiêu chảy 56 3.2.3 Kết xác định số đặc tính sinh học chủng vi khuẩn E coli phân lập 58 3.2.4 Kết xác định serotype chủng E coli phân lập 59 3.2.5 Kết xác định yếu tố gây bệnh (độc tố yếu tố bám dính) vi khuẩn E coli phân lập 60 3.2.6 Kết xác định độc lực chủng E coli phân lập động vật thí nghiệm 63 3.2.7 Kết xác định tính mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn E coli phân lập 64 3.3.1 Kết thử nghiệm phác đồ điều trị hội chứng tiêu chảy cho lợn 65 3.3.2 Kết thử nghiệm vaccine phòng bệnh tiếu chảy cho lợn 67 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 70 Kết luận 70 Đề nghị 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO 72 MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HỌA CHO ĐỀ TÀI 82 vi DANH MỤC TỪ VÀ CỤM TỪ VIẾT TẮT EPEC : Enteropathogenic Escherichia coli ETEC : Enterotoxigenic Escherichia coli BHI : Brain-heart infusion PBS : Phosphate buffer saline DHL : Deoxycholate Hydrogen sulfide Lactose agar MR : Methyl Red cs : Cộng Nxb : Nhà xuất PCR : Polymerase Chain Reaction SLT : Shiga-like toxin SLT1 : Shiga-like toxin SLT2 : Shiga-like toxin ST (a,b) : Heat- Slable toxin (a,b) LT : Heat-Labile toxin tr : trang pg : page TT : Thể trọng VP : Voges Pros Kaver VT2e : Verotoxin 2e VTEC : Verotoxigenic Escherichia coli i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Tác giả Phạm Hà Giang viii DANH MỤC HÌNH, ĐỒ THỊ Hình 3.1: Biểu đồ tỷ lệ lợn tiêu chảy chết tiêu chảy số xã, phường thuộc khu vực TP Cẩm Phả 43 Hình 3.2: Biểu đồ tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy chết tiêu chảy theo lứa tuổi 46 Hình 3.3: Biểu đồ tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy chết tiêu chảy theo mùa vụ 48 Hình 3.4: Biểu đồ tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy chết tiêu chảy theo phương thức chăn nuôi 50 Hình 3.5: Biểu đồ tỷ lệ quan có bệnh tích lợn bị mắc tiêu chảy 54 Hình 3.6: Biều đồ tỷ lệ mẫu bệnh phẩm dương tính với E coli 57 Hình 3.7: Kết xác định gen yếu tố bám dính 62 Hình 3.8: Kết xác định gen độc tố 62 70 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu hội chứng tiêu chảy lợn nuôi khu vực thành phố Cẩm Phả, tỉnh Quảng Ninh bước đầu có số kết luận sau: - Lợn nuôi khu vực thành phố Cẩm Phả mắc chết tiêu chảy với tỷ lệ cao (tương ứng 14,51 15,44%) tổng số lợn điều tra - Tỷ lê lợn mắc chết tiêu chảy giảm dần theo lứa tuổi, cao giai đoạn từ sơ sinh đến 20 ngày tuổi (18,84%) thấp 41-60 ngày tuổi (6,90%); mắc cao mùa Đông (18,52%), thấp mùa Thu (10,53%), mắc chủ yếu phương thức chăn nuôi gia trại bán công nghiệp (tương ứng 12,7 20,37%) - Lợn mắc tiêu chảy có bệnh tích điển ruột viêm, xuất huyết, dày chứa thức ăn không tiêu, niêm mạc phủ dịch nhờn, xung huyết hạch lâm ba màng ruột sưng, tụ huyết - Các chủng E coli phân lập từ lợn mắc tiêu chảy mang đầy đủ đặc tính sinh vật học điển hình giống tài liệu mô tả - Đã xác định chủng E coli phân lập thuộc nhóm kháng nguyên O149 chiếm tỷ lệ cao (51,58%), tiếp đến nhóm O139 (17,6%) nhóm O15 (12,45%) - Các chủng E coli phân lập mang yếu tố gây bệnh F4 chiếm tỷ lệ cao (50,0%), tiếp đến F5 (33,33%) thấp F41 (16,67%); độc tố LT, STa STb xuất với tỷ lệ cao STb (50,00% ) thấp LT (16,67%) - Các chủng E coli phân lập có độc lực mạnh, gây chết 100% chuột thí nghiệm từ 12 - 36 sau tiêm canh khuẩn - Các chủng E coli phân lập mẫn cảm cao với nofloxacin ceftiofur (100%), kháng lại với oxacillin (100%) colistin (80%) - Sử dụng ceftiofur nofloxacin kết hợp với điện giải vitamin điều trị tiêu chảy cho lợn cho hiệu tốt địa bàn khu vực thành phố Cẩm Phả, tỷ lệ khỏi tương ứng 93,33 81,61% 71 - Tiêm vaccine HANVET TOBACOLI phòng tiêu chảy cho lợn nái vào thời gian tuần trước đẻ làm giảm đáng kể tỷ lệ mắc bệnh tiêu chảy lợn (18%) Đề nghị - Tiếp tục nghiên cứu nhằm lựa chọn chủng vi khuẩn E coli phù hợp để chế vacccine phòng bệnh tiêu chảy vi khuẩn E coli gây - Áp dụng tiêm vaccine HANVET TOBACOLI phòng tiêu chảy phác đồ sử dụng ceftiofur điều trị cho lợn địa bàn thành phố Cẩm Phả để hạn chế hội chứng tiêu chảy lợn dưỡng, giúp cho trình tiêu hoá thuận lợi vi khuẩn có hại, có điều kiện gây bệnh Theo Lê Văn Tạo (1996) [47] họ vi khuẩn đường ruột gồm vi khuẩn cộng sinh thường trực đường ruột Những vi khuẩn này, muốn từ vi khuẩn cộng sinh trở thành gây bệnh phải có điều kiện: - Trên thể vật chủ có cấu trúc giúp cho vi khuẩn thực chức bám dính - Vi khuẩn phải có khả sản sinh yếu tố gây bệnh, đặc biệt sản sinh độc tố, quan trọng độc tố đường ruột Enterotoxin - Có khả xâm nhập vào lớp tế bào biểu mô niêm mạc ruột, từ phát triển nhân lên Theo Hồ Văn Nam cs (1997) [34] vi khuẩn đường ruột có vai trò thiếu hội chứng tiêu chảy Nguyễn Như Pho (2003) [39] cho khả gây bệnh loại vi khuẩn lứa tuổi lợn khác Đối với lợn theo mẹ, lợn sau cai sữa giai đoạn đầu nuôi thịt tỷ lệ mắc tiêu chảy Salmonella cao hơn; giai đoạn từ lúc sơ sinh đến sau cai sữa thường E coli; lứa tuổi - 12 tuần thường xoắn khuẩn Treponema hyodysenterriae; vi khuẩn yếm khí C perfringens thường gây bệnh nặng cho lợn theo mẹ khoảng tuần tuổi đến cai sữa Theo Phạm Sỹ Lăng (2009) [32] bệnh tiêu chảy lợn vi khuẩn chủ yếu có bệnh sau: - Bệnh vi khuẩn E coli - Bệnh hồng lỵ Treponema hyodysenteriae - Bệnh Salmonella - Bệnh Clostridium perfringens * Tiêu chảy virus: Virus tác nhân gây bệnh tiêu chảy lợn Sự xuất virus làm tổn thương niêm mạc ruột, làm suy giảm sức đề kháng thể thường gây ỉa chảy dạng cấp tính với tỷ lệ chết cao (Phạm Ngọc Thạch, 1996) [49] 73 10 Nguyễn Chí Dũng (2013), Nghiên cứu vai trò gây bệnh vi khuẩn E coli hội chứng tiêu chảy lợn nuôi tỉnh Vĩnh Phúc biện pháp phòng trị, Luận Văn thạc sĩ Thú y, Trường ĐH Nông Lâm – ĐH Thái Nguyên 11 Lê Văn Dương (2010), Phân lập, xác định vai trò gây bệnh Escherichia coli hội chứng tiêu chảy lợn số huyện tỉnh Bắc Giang biện pháp phòng trị, Luận Văn thạc sĩ khoa học Nông nghiệp, Trường ĐH Nông Lâm – ĐH Thái Nguyên 12 Thân Thị Đang (2010), “Vai trò ký sinh trùng đường tiêu hoá hội chứng tiêu chảy lợn sau cai cách phòng trị”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, tập 17, số 1, tr 43 - 51 13 Đào Trọng Đạt, Phan Thanh Phượng, Lê Ngọc Mỹ, Huỳnh Văn Kháng (1996), Bệnh lợn nái lợn con, Nxb Nông nghiệp Hà Nội, tr 44 - 81 14 Bùi Xuân Đồng (2002), “Bệnh phù đầu Escherichia coli gây lợn Hải Phòng biện pháp phòng chống”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tập IX, tr 98 - 99 15 Nguyễn Thị Thanh Hà, Bùi Thị Tho (2009), “Nghiên cứu bào chế thử nghiệm cao mật bò ứng dụng phòng bệnh phân trắng lợn con”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tập 16 (2), tr 57 - 60 16 Trần Đức Hạnh (2013), Nghiên cứu vai trò E coli, Salmonella Clostridium perfringens gây tiêu chảy lợn tỉnh miền núi phía Bắc biện pháp phòng trị, Luận án Tiến sĩ Thú y, Đại học Thái Nguyên 17 Trần Thị Hạnh, Đặng Xuân Bình, Lưu Quỳnh Hương (2004) “Xác định vai trò E coli C perfringens bệnh tiêu chảy lợn giai đoạn theo mẹ, chế tạo sinh phẩm phòng bệnh”, Viện Thú y 35 năm xây dựng phát triển (1996 - 2004), Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr 393 - 405 18 Phạm Khắc Hiếu, Trần Thị Lộc (1998), Stress đời sống người vật nuôi, Nxb nông nghiệp Hà Nội 19 Phạm Khắc Hiếu Bùi Thị Tho (1999), “Một số kết nghiên cứu tính kháng thuốc vi khuẩn gây bệnh thú y” Kết nghiên cứu KHKT khoa CNTY (1996 - 1998), Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr 134 - 138 74 20 Hoàng Phú Hiệp (2014), Nghiên cứu phát triển kỹ thuật phát chủng vi khuẩn Escherichia coli O157:H7 tạo kháng thể tái tổ hợp đặc hiệu, Luận án Tiến sĩ sinh học, Đại học Thái Nguyên 21 Nguyễn Xuân Hòa, Đặng Công Tin, Nguyễn Thị Hiền, Lê Văn Phước (2011), “Xác định độc lực tính mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn E coli phân lập từ bệnh phẩm lợn sau cai sữa bị bệnh tiêu chảy”, Tạp chi Nông nghiệp Phát triển nông thôn, kỳ 1, số tháng 9, tr 52 - 56 22 Lê Thị Hoài (2008), Xác định vai trò gây bệnh vi khuẩn E coli, C Perfringén hội chứng tiêu chảy lợn từ sơ sinh đến 60 ngày tuổi tỉnh Hưng Yên thử nghiệm phác đồ điều trị, Luận Văn thạc sĩ Nông nghiệp, Trường ĐH Nông Lâm - ĐH Thái Nguyên 23 Vũ Khắc Hùng, Lê Văn Tạo, Pilipcinec (2005), “Xác định loại kháng nguyên bám dính thường gặp vi khuẩn E coli phân lập từ lợn bị tiêu chảy phản ứng PCR”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y,(3) tr 22 - 28 24 Bùi Quý Huy (2003), Sổ tay phòng chống bệnh từ động vật lây sang người Bệnh E coli, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr 30 - 34 25 Lâm Thị Thu Hương Đường Chi Mai (2011), “Tỷ lệ nhiễm Rotavirus Escherichia coli K88 heo tiêu chảy”, Tạp chí khoa học kỹ thuật Thú y, tập 18, số 6, tr 31 - 35 26 Lý Thị Liên Khai (2001), “Phân lập, xác định độc tố ruột chủng E coli gây bệnh tiêu chảy cho heo con”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tập VIII, tr 13 - 18 27 Đặng Bá Khánh (2010), Nghiên cứu tính mẫn cảm, tính kháng thuốc E coli Salmonella spp phân lập từ bệnh lợn phân trắng, ứng dụng điều trị, Luận văn thạc sĩ Nông nghiệp, trường ĐH Nông nghiệp Hà Nội 28 Nguyễn Thị Kim Lan (2004), “Thử nghiệm phòng trị bệnh coli dung huyết cho lợn Thái Nguyên Bắc Giang”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tập XII (3), tr 35 - 39 75 29 Nguyễn Thị Kim Lan, Lê Minh, Nguyễn Thị Ngân (2006), “Vai trò ký sinh trùng đường tiêu hoá hội chứng tiêu chảy lợn sau cai sữa Thái Nguyên”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, tập 13, số 3, tr 36 - 40 30 Nguyễn Thị Kim Lan, Nguyễn Thị Ngân, Lê Minh (2006), “Một số đặc điểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy lợn Thái Nguyên”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tập 13, số 4, tr 92 - 96 31 Phạm Sỹ Lăng, Phan Địch Lân, Trương Văn Dung (1997), Bệnh phổ biến lợn biện pháp phòng trị, Nxb nông nghiệp Hà Nội, tr 193 - 195 32 Phạm Sỹ Lăng (2009), “Bệnh tiêu chảy vi khuẩn lợn biện pháp phòng tri”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tập 16 (6), tr 80- 85 33 Trần Trung Mỹ (2010), Phân lập xác định vai trò vi khuẩn E coli hội chứng tiêu chảy lợn tháng tuổi số huyện tỉnh Thái Nguyên biện pháp phòng trị, Luận Văn thạc sĩ Nông nghiệp, Trường ĐH Nông Lâm - ĐH Thái Nguyên 34 Hồ Văn Nam, Nguyễn Thị Đào Nguyên, Trương Quang, Phùng Quốc Chướng, Chu Đức Thắng, Phạm Ngọc Thanh (1997), “Bệnh viêm ruột ỉa chảy lợn”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, số 2, tr 39 - 45 35 Nguyễn Thị Nội (1985), Tìm hiểu vai trò E coli bệnh phân trắng lợn vaccine xin dự phòng, Luận án PTS khoa học, Hà Nội 36 Nguyễn Thị Nội, Nguyễn Ngọc Nhiên, Cù Hữu Phú, Nguyễn Thị Sở, Trần Thị Thu Hà (1989), “Nghiên cứu vaccine đa giá Salco phòng bệnh ỉa chảy cho lợn con”, Kết nghiên cứu KHKT Thú y 1985- 1989, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr 54 - 58 37 Nguyễn Thị Ngữ (2005), Nghiên cứu tình hình hội chứng tiêu chảy lợn huyện Chương Mỹ - Hà Tây, xác định số yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli Salmonella, biện pháp phòng trị, Luận văn thạc sỹ Nông nghiệp, Hà Nội 38 Vũ Văn Ngữ (1975), Loạn khuẩn đường ruột tác dụng điều trị Colisubtil Nxb Y học, Hà Nội 39 Nguyễn Như Pho (2003), Bệnh tiêu chảy heo, Nxb Nông nghiệp, Thành phố Hồ Chí Minh 76 40 Cù Hữu Phú, Nguyễn Ngọc Nhiên, Vũ Bình Minh Đỗ Ngọc Thuý (1999) “Kết phân lập vi khuẩn E coli Salmonella lợn mắc tiêu chảy, xác định số đặc tính sinh vật hoá học chủng vi khuẩn phân lập biện pháp phòng trị”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tr 47 - 51 41 Phan Thanh Phượng, Đặng Thị Thủy (2008), “Phòng bệnh kháng thể E coli chiết tách từ lòng đỏ trứng gà dạng bột”, Tạp chí Khoa học kĩ thuật Thú y, tập 15, số 5, tr 95 - 96 42 Phan Thanh Phượng, Đặng Thị Thủy (2008), “Nghiên cứu biến động hiệu giá kháng thể thụ động thể lợn sử dụng kháng thể dạng bột dạng đông khô phòng trị bệnh E coli tụ huyết trùng lợn”, Tạp chí Khoa học kĩ thuật Thú y, tập 15, số 6, tr 56 - 59 43 Trương Quang (2005), “Kết nghiên cứu vai trò gây bệnh E coli hội chứng tiêu chảy lợn - 60 ngày tuổi”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tập XII (1), tr 27 - 32 44 Phạm Thế Sơn, Phạm Khắc Hiếu (2008), “Tác dụng kháng khuẩn chế phẩm EM - TK21 với vi khuẩn E coli, Salmonella, Cl perfringens (in vitro) khả phòng trị tiêu chảy chế phẩm EM - TK21 lợn - 60 ngày tuổi”, tạp chí khoa học kỹ thuật Thú y, tập 15 (1), tr.69 - 72 45 Lê Thị Tài (1997), Ô nhiễm thực phẩm với sức khoẻ người gia súc, thành tựu nghiên cứu phòng chống bệnh vật nuôi, Viện thú y quốc gia, tr 65 - 66 46 Lê Văn Tạo, Khương Bích Ngọc, Nguyễn Thị Vui, Đoàn Băng Tâm (1993), “Nghiên cứu chế tạo vaccine E coli cho uống phòng bệnh ỉa phân trắng lợn con”, Tạp chí khoa học, công nghệ quản lý kinh tế, tr 324 - 326 47 Lê Văn Tạo (1996), “Cấu trúc fimbriae, kháng nguyên bám dính K88 vi khuẩn E coli vai trò trình gây bệnh phân trắng lợn con” Tạp chí nông nghiệp, công nghê thực phẩm - số 2, Hà Nội, tr 62 - 63 Rotavirus Coronavirus virus gây tiêu chảy quan trọng gia súc non sinh nghé, dê cừu con, lợn con, ngựa đặc biệt bê virus có khả phá huỷ màng ruột gây tiêu chảy nặng (Archie H, 2000 [1]) Các nghiên cứu nước Lê Minh Chí (1995) [5] Nguyễn Như Pho (2003) [39] cho rằng: Rotavirus Coronavirus gây bệnh tiêu chảy chủ yếu cho lợn giai đoạn theo mẹ, với triệu chứng tiêu chảy cấp tính, nôn mửa, nước với tỷ lệ mắc bệnh tỷ lệ chết cao * Tiêu chảy nấm mốc: Thức ăn chế biến bảo quản không kỹ thuật dễ bị nấm mốc Một số loài như: Aspergillus, Penicillium, Fusarium…có khả sản sinh nhiều loại độc tố, quan trọng nhóm độc tố Aflatoxin (Aflatoxin B1, B2, G1, G2, M1) Độc tố Aflatoxin gây độc cho người gia súc, gây bệnh nguy hiểm cho người ung thư gan, huỷ hoại gan, độc cho thận, sinh dục thần kinh Aflatoxin gây độc cho nhiều loài gia súc, gia cầm, mẫn cảm vịt, gà, lợn gia súc khác Lợn nhiễm độc thường bỏ ăn, thiếu máu, vàng da, ỉa chảy, ỉa chảy máu Nếu phần có 500 - 700g Aflatoxin/kg thức ăn làm cho lợn chậm lớn, còi cọc, giảm sức đề kháng với bệnh truyền nhiễm khác (Lê Thị Tài, 1997) [45] * Tiêu chảy ký sinh trùng Có nhiều loại ký sinh trùng gây bệnh tiêu chảy lợn như: cầu trùng Eimeria, Isospora suis, Crytosporidium, Ascaris suum, Trichuris suis… số loài giun tròn lớp Nematoda (A suum, T suis, Strongloides, Haemonchus, Mecistocirrus…) Bệnh Isospora suis, Crytosporidium thường tập trung vào giai đoạn lợn từ - 25 ngày tuổi, lợn tháng tuổi thể tạo miễn dịch bệnh cầu trùng, nên lợn mang mầm bệnh mà xuất triệu chứng tiêu chảy (Nguyễn Như Pho, 2003) [39] Cầu trùng số loại giun tròn (giun đũa, giun tóc, giun lươn) nguyên nhân gây tiêu chảy lợn sau cai sữa nuôi hộ gia đình Thái Nguyên (Nguyễn Thị Kim Lan cs., 2006 [29], Thân Thị Đang, 2010 [12]) 78 58 Tạ Thị Vịnh, Đặng Thị Hoè (2002), “Một số kết sử dụng chế phẩm sinh học để phòng trị bệnh tiêu chảy lợn con”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, tập 9, số 4, tr 54 - 56 59 Nguyễn Hữu Vũ, Hoàng Bùi Tiến, Trần Thị Thu Hiền (2010) “Kháng thể HANVET KTEHI phòng trị bệnh tiêu chảy E coli gây lợn”, Tạp chí khoa học kĩ thuật thú y, tập 17 (3), tr 94-95 II TÀI LIỆU TIẾNG NƯỚC NGOÀI 60 Adenipekun E O., Jackson C R., Oluwadun A., Iwalokun B A., Frye J G., Barrett J B., Hiott L M., Woodley T A (2015), “Prevalence and Antimicrobial Resistance in Escherichia coli from Food Animals in Lagos, Nigeria”, Microb Drug Resist 61 Adeyanju G T., Ishola O (2014), “Salmonella and Escherichia coli contamination of poultry meat from a processing plant and retail markets in Ibadan, Oyo State, Nigeria”, Springerplus, 12, pg – 139 62 Boonyasiri A., Tangkoskul T., Seenama C., Saiyarin J., Tiengrim S., Thamlikitkul V (2014), “Prevalence of antibiotic resistant bacteria in healthy adults, foods, food animals, and the environment in selected areas in Thailand”, Pathog Glob Health, 108(5), pg 235 - 245 63 Byun J W., Jung B Y., Kim H Y., Fairbrother J M., Lee M H., Lee W K (2013), “Real-time PCR for differentiation of F18 variants among enterotoxigenic and Shiga toxin-producing Escherichia coli from piglets with diarrhoea and oedema disease”, Vet J., pg 538 - 540 64 Dho-Moulin M , Fairbrother J M (1999), “Avian pathogenic Escherichia coli (APEC)”, Vet Res, 30(2-3), pg 299 - 316 65 Elsinghorst E A., Weitz J A (1994), “Epithelial cell invasion and adherence directed by the enterotoxigenic Escherichia coli tib locus is associated with a 104-kilodalton outer membrane protein”, Infect Immun, 62, pg 3463 - 3471 66 Fairbrother J M (1992), Enteric colibacillosis Diseases of swine, IOWA State University Press/AMES, IOWA U.S.A 7th Edition, pg 489 - 496 79 67 Falkow S (1975), Plasmid which contribute to pathogenity In infection multile drug resistance Pion Ltd London 68 Giannella R A., Rout W R., Formal S B., and Collins H (1976), “Role of plasma filtration in the intestinal fluid secretion mediated by infection with Salmonella typhimurium”, Infect Immun, 13, pg 470 - 474 69 Hering J., Hille K., Frömke C., von Münchhausen C., Hartmann M., Schneider B., Friese A., Roesler U., Merle R., Kreienbrock L (2014), “Prevalence and potential risk factors for the occurrence of cefotaxime resistant Escherichia coli in German fattening pig farms-a cross-sectional study”, Prev Vet Med, 116(1-2), pg 129 - 137 70 Ho W S., Tan L K., Ooi P T., Yeo C C., Thong K L (2013), “Prevalence and characterization of verotoxigenic - Escherichia coli isolates from pigs in Malaysia”, BMC Vet Res 71 Jones G W., Rutter J M (1974), “Contribution of the K88 antigen of Escherichia coli to enteropathogenicity; protection against disease by neutralizing the adhesive properties of K88 antigen”, Am J Clin Nutr, 27(12), pg 1441 - 1449 72 Kempf I., Fleury M A., Drider D., Bruneau M., Sanders P., Chauvin C., Madec J Y., Jouy E (2013), “What we know about resistance to colistin in Enterobacteriaceae in avian and pig production in Europe?”, Int J Antimicrob Agents, pg 379 - 383 73 Koláčková I., Házová K., Skočková A., Karpíšková R (2014), “Occurrence of Shiga toxigenic Escherichia coli strains in pigs and cattle at slaughterhouses in the Czech Republic in 2013”, Klin Mikrobiol Infekc Lek, 20(2), pg 36 - 39 74 Lu D., Li Q., Wu Z., Shang S., Liu S., Wen X., Li Z., Wu F., Li N (2014), “High-level recombinant human lysozyme expressed in milk of transgenic pigs can inhibit the growth of Escherichia coli in the duodenum and influence intestinal morphology of sucking pigs”, PloS One 80 75 Mainil J G., Gerardin J., Jacquemin E (2000), “Identification of the F17 fimbrial subunit- and adhesin-encoding (f17A andf17G) gene variants in necrotoxigenic Escherichia coli from cattle, pigs and humans”, Veterinary Microbiology, 73 (4), pg 327 - 335 76 Nimri L., Abu Al-Dahab F., Batchoun R (2014), “Foodborne bacterial pathogens recovered from contaminated shawarma meat in northern Jordan”, J Infect Dev Ctries., (11), pg 1407 - 1414 77 Odwar J A., Kikuvi G., Kariuki J N., Kariuki S (2014), “A cross-sectional study on the microbiological quality and safety of raw chicken meats sold in Nairobi, Kenya”, BMC Res Notes, 10, pg 507:627 78 Orskov F (1978), Vilurence Factor of the baterial cell surface, J Infect., pg 630 79 Rajkhowa S., Sarma D K (2014), “Prevalence and antimicrobial resistance of porcine O157 and non-O157 Shiga toxin-producing Escherichia coli from India”, Trop Anim Health Prod, 46(6), pg 931 - 937 80 Randall L P., Lemma F., Rogers J P., Cheney T E., Powell L F., Teale C J (2014), “Prevalence of extended-spectrum-β-lactamase-producing Escherichia coli from pigs at slaughter in the UK in 2013”, J Antimicrob Chemother, 69(11), pg 2947 - 2950 81 Zarfel G., Galler H., Luxner J., Petternel C., Reinthaler F F., Haas D., Kittinger C., Grisold A J., Pless P., Feierl G (2014), “Multiresistant bacteria isolated from chicken meat in Austria”, Int J Environ Res Public Health, 11(12), pg 12582 - 12593 82 Zhang S H., Lv X., Han B., Gu X., Wang P F., Wang C., He Z (2015), “Prevalence of antibiotic resistance genes in antibiotic-resistant Escherichia coli isolates in surface water of Taihu Lake Basin, China”, Environ Sci Pollut Res Int 83 Wang X., Ren W., Nie Y., Cheng L., Tan W., Wang C., Wei L., Zhang R., Yan G (2013), “A novel watery diarrhoea caused by the co-infection of neonatal piglets with Clostridium perfringens type A and Escherichia coli (K88, 987P)”, Vet J 81 84 Wyrsch E., Roy Chowdhury P., Abraham S., Santos J., Darling A E., Charles I G., Chapman T A., Djordjevic S P (2015), “Comparative genomic analysis of a multiple antimicrobial resistant enterotoxigenic E coli O157 lineage from Australian pigs”, BMC Genomics, 6, pg 165 Đặc điểm chủ yếu tiêu chảy ký sinh trùng vật mắc bệnh bị tiêu chảy không liên tục, có xen kẽ tiêu chảy bình thường, thể thiếu máu, da nhợt nhạt, gia súc ăn, thể trạng sa sút 1.1.3 Một số đặc điểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy Hội chứng tiêu chảy gia súc nhiều nguyên nhân gây Chính vậy, xuất bệnh phụ thuộc vào xuất nguyên nhân tương tác nguyên nhân với thể gia súc Các yếu tố tuổi gia súc, mùa vụ, thức ăn, chuồng trại, điều kiện chăm sóc nuôi dưỡng… có ảnh hưởng đến bệnh tiêu chảy gia súc lợn, hội chứng tiêu chảy xảy lứa tuổi Fairbrother J M (1992) [66] Archie H (2000) [1] cho tiêu chảy xảy ra, thường gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi Bệnh thường xuất giai đoạn phát triển lợn: - Giai đoạn sơ sinh (1 - ngày tuổi) - Giai đoạn lợn theo mẹ (5 - 21 ngày tuổi) - Giai đoạn lợn sau cai sữa (> 21 ngày tuổi) Tỷ lệ mắc bệnh tiêu chảy số sở chăn nuôi lợn phụ thuộc vào điều kiện chăm sóc, vệ sinh thú y đó, tỷ lệ chết, mức độ trầm trọng bệnh đàn phụ thuộc vào giai đoạn mắc bệnh (Hoàng Văn Tuấn cs., 1998 [54], Đoàn Kim Dung, 2003 [9]) Khi nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy lợn từ sau cai sữa hộ chăn nuôi gia đình Thái Nguyên, Nguyễn Thị Kim Lan cs (2006) [30] cho rằng, bệnh chịu ảnh hưởng rõ rệt lứa tuổi mắc bệnh, mùa vụ năm, loại thức ăn, chuồng tình trạng vệ sinh thú y Cụ thể: Về độ tuổi mắc bệnh, tỷ lệ lợn tiêu chảy giảm theo tuổi, cao giai đoạn sau cai sữa đến tháng (13,9%), sau giảm dần 5,55% lợn tháng tuổi Về mùa vụ, bệnh tiêu chảy lợn theo mẹ xảy quanh năm Trong năm, lợn nuôi mùa xuân mùa hè mắc tiêu chảy cao (13,67 - 14,75%) so với hai mùa lại (9,18 - 9,68%) Về thức ăn, lợn nuôi thức ăn tổng hợp dạng viên, không qua chế biến, mắc tiêu chảy với tỷ lệ 8,96% Tỷ lệ tăng lên cho thức ăn truyền thống mang tính tận dụng ăn rau sống (16,1%) Điều kiện chuồng trại vệ sinh có ảnh hưởng 83 Ảnh 3: Mổ khám, lấy bệnh phẩm lợn mâc tiêu chảy Ảnh 4: Hình thái vi khuẩn E coli tiêu nhuộm 84 Ảnh 5: Phản ứng xác định khả di động chủng vi khuẩn E coli Ảnh 6: Kháng sinh đồ chủng E coli phân lập [...]... bệnh tiêu chảy ở lợn con xảy ra gây thiệt hại kinh tế lớn cho người chăn nuôi lợn nái sinh sản Xuất phát từ thực tế trên, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài: Phân lập, xác định một số đặc tính sinh vật học của vi khu n Escherichia coli trong hội chứng tiêu chảy ở lợn con tại khu vực thành phố Cẩm Phả, tỉnh Quảng Ninh và biện pháp phòng trị 2 Mục tiêu nghiên cứu - Xác định một số đặc điểm dịch tễ hội. .. hội chứng tiêu chảy ở lợn con theo mẹ tại một số xã, phường của thành phố Cẩm Phả, tỉnh Quảng Ninh - Phân lập, xác định một số đặc điểm sinh vật, hóa học và một số yếu tố gây bệnh của vi khu n E coli gây hội chứng tiêu chảy ở lợn con phân lập được Từ đó, có cơ sở xây dựng và đề xuất phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy cho lợn con có hiệu quả cao 3 3 Ý nghĩa của đề tài * Ý nghĩa khoa học: - Đề tài là một. .. được 42 mẫu phân có vi khu n E coli trong tổng số 50 mẫu phân lợn con bị tiêu chảy, chiếm tỷ lệ 84% Trịnh Quang Tuyên và cs (2004) [54] khi tiến hành phân lập vi khu n E coli từ các mẫu phân của lợn bị tiêu chảy, đã xác định được 259/325 mẫu có vi khu n E coli chiếm tỷ lệ 79,69% Trong khi đó, Nguyễn Thị Kim Lan (2004) [28] phân lập E coli từ các mẫu phân lợn bị bệnh phù đầu ở 2 tỉnh Bắc Giang và Thái Nguyên,... sàng của hội chứng tiêu chảy 9 1.1.6 Hậu quả trong hội chứng tiêu chảy 10 1.1.7 Biện pháp phòng trị tiêu chảy cho lợn 11 1.2 Đặc điểm sinh lý tiêu hóa của lợn con 15 1.2.1 Đặc điểm tiêu hóa của lợn con 15 1.2.2 Khả năng đáp ứng miễn dịch của lợn con 16 1.3 Vi khu n escherichia coli 17 1.3.1 Đặc điểm hình thái 17 1.3.2 Đặc. .. tại một số xã, phường thuộc khu vực thành phố Cẩm Phả, tỉnh Quảng Ninh 42 3.1.1 Tỷ lệ lợn con tiêu chảy và chết do tiêu chảy tại một số xã, phường thuộc khu vực TP Cẩm Phả 42 3.1.2 Tỷ lệ lợn con mắc tiêu chảy và chết do tiêu chảy theo lứa tuổi 44 3.1.4 Tỷ lệ lợn con mắc tiêu chảy và chết do tiêu chảy theo phương thức chăn nuôi 49 23 về cấu trúc không gian, trình tự axit amin và phương... Trong chăn nuôi gia súc hội chứng tiêu chảy xảy ra ở mọi lứa tuổi, các mùa trong năm, thường tỷ lệ mắc tiêu chảy cao Nguyễn Thị Kim Lan và cs., (2006) [30], Nguyễn Nguyệt Cầm (2008) [4] đã phân lập được vi khu n E coli trong 89,1% số mẫu phân của lợn con bị tiêu chảy tại trung tâm nghiên cứu lợn Thụy Phương 100% mẫu phủ tạng của lợn tiêu chảy đều phân lập được vi khu n E coli Các chủng vi khu n E coli. .. tính sinh hoá của vi khu n E coli 35 2.4.4 Phương pháp xác định serotype kháng nguyên O của các chủng vi khu n E coli phân lập được 37 2.4.5 Phương pháp xác định các yếu tố gây bệnh của các chủng vi khu n E coli phân lập được 38 2.4.6 Phương pháp xác định độc lực của các chủng vi khu n E coli 40 2.4.7 Phương pháp xác định khả năng mẫn cảm với kháng sinh của các... gây tiêu chảy * Tiêu chảy do vi khu n: Một số vi khu n thuộc họ vi khu n đường ruột là E coli, Salmonella spp., Shigella, Klebsiella, C perfringens… Đó là những vi khu n quan trọng, gây rối loạn tiêu hoá, vi m ruột tiêu chảy ở người và nhiều loài động vật Đào Trọng Đạt và cs (1996) [13] cho biết chiếm tỷ lệ cao nhất trong số các vi khu n đường ruột gây tiêu chảy là E coli (45,6%) Cũng theo tác giả, trong. .. với thực tiễn sản xuất, chứng minh vai trò gây bệnh của E coli trong hội chứng tiêu chảy ở lợn con nuôi tại một số xã, phường thuộc thành phố Cẩm Phả, tỉnh Quảng Ninh - Kết quả nghiên cứu của đề tài là cơ sở khoa học phục vụ cho các nghiên cứu tiếp theo về hội chứng tiêu chảy ở lợn con, đồng thời đóng góp thêm tư liệu tham khảo cho nghiên cứu và giảng dạy, cho cán bộ thú y cơ sở và người chăn nuôi * Ý... nuôi Một trong những bệnh gây thiệt hại lớn đến kinh tế cho các hộ và trại chăn nuôi lợn sinh sản là hội chứng tiêu chảy ở lợn con, đặc biệt là giai đoạn lợn con theo mẹ Cù Hữu Phú và cs (1999) [40] khi tiến hành phân lập vi khu n E coli từ các mẫu phân của lợn từ 35 ngày đến 4 tháng tuổi bị tiêu chảy đã xác định được 60/70 mẫu có vi khu n E coli, chiếm tỷ lệ 85,71% Lý Thị Liên Khai (2001) [26] cũng phân