phân lập và xác định vai trò của vi khuẩn e. coli trong hội chứng tiêu chảy ở lợn con dưới 2 tháng tuổi tại một số huyện của tỉnh thái nguyên và biện pháp phòng trị

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o TRẦN TRUNG MỸ Tên đề tài: “PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH VAI TRÒ CỦA E.COLI TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở LỢN CON DƢỚI 2 THÁNG TUỔI TẠI MỘT SỐ HUYỆN CỦA TỈNH THÁI NGUYÊN VÀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ” Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60 62 50 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Hướng dẫn khoa học: 1. TS. Đỗ Ngọc Thúy (Bộ môn vi trùng - Viện Thú y quốc gia) 2. GS-TS. Nguyễn Quang Tuyên (Viện Khoa học sự sống – ĐHTN) THÁI NGUYÊN - 2010 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng cá nhân tôi. Các số liệu, kết quả trong luận văn là hoàn toàn trung thực và chưa từng được công bố trong bất kỳ một công trình nghiên cứu nào khác. Tôi xin đảm bảo rằng các thông tin, trích dẫn trong luận văn đã được chỉ rõ nguồn gốc. Thái Nguyên, tháng 10 năm 2010 Tác giả luận văn Trần Trung Mỹ Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 3 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ quý báu của các thầy cô giáo khoa Sau Đại học, khoa Chăn nuôi Thú y - Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Bộ môn Vi trùng - Viện Thú y Quốc gia đã dành nhiều thời gian và công sức giúp đỡ tôi trong quá trình học tập và tiến hành đề tài nghiên cứu của mình. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn TS. Đỗ Ngọc Thúy phó trưởng Bộ môn Vi trùng - Viện Thú y Quốc gia, GS.TS. Nguyễn Quang Tuyên - Viện Khoa học sự sống - Đại học Thái Nguyên đã tạo điều kiện, giúp đỡ và tận tình hướng dẫn để tôi hoàn thành luận văn này. Xin chân thành cảm ơn các cán bộ, công nhân viên chức Bộ môn Vi trùng - Viện Thú y Quốc gia, cán bộ công nhân viên Chi cục Thú y tỉnh Thái Nguyên, cán bộ công nhân viên Trạm Thú y huyện Định Hóa, Phú Lương và Đồng Hỷ đã giúp đỡ tôi trong quá trình nghiên cứu khoa học. Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới người thân trong gia đình, bạn bè, đồng nghiệp luôn động viên giúp đỡ tôi trong quá trình học tập cũng như trong quá trình thực hiện luận văn này. Thái Nguyên, tháng 10 năm 2010 Tác giả luận văn Trần Trung Mỹ Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn i MỤC LỤC Trang PHẦN MỞ ĐẦU 1 Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4 1.1. Một số biểu hiện bệnh lý và nguyên nhân chủ yếu của hội chứng tiêu chảy ở lợn con dưới 2 tháng tuổi 4 1.1.1. Bệnh lý tiêu chảy ở lợn con dưới 2 tháng tuổi 4 1.1.2. Một số nguyên nhân gây tiêu chảy ở lợn con dưới 2 tháng tuổi 7 1.2. Vai trò của vi khuẩn E. coli trong hội chứng tiêu chảy ở lợn con 15 1.2.1. Vi khuẩn Escherichia coli (E .coli) 15 1.3. Biện pháp phòng trị tiêu chảy ở lợn con dưới 2 tháng tuổi do vi khuẩn 26 1.3.1 Phòng bệnh 26 1.3.2. Điều trị bệnh 29 Chƣơng 2: NỘI DUNG - NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 2.1. Nội dung nghiên cứu 34 2.2. Nguyên liệu 35 2.2.1. Đối tượng nghiên cứu 35 2.2.2. Địa điểm nghiên cứu 35 2.2.3. Mẫu bệnh phẩm 35 2.2.4. Môi trường, hóa chất, dụng cụ, động vật thí nghiệm 35 2.2.5. Thời gian nghiên cứu. 36 2.3. Phương pháp nghiên cứu 36 2.3.1. Phương pháp điều tra dịch tễ học 36 2.3.2. Thu thập mẫu và phân lập vi khuẩn 37 Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 46 3.1. Kết quả nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy ở lợn từ sơ sinh đến dưới 2 tháng tuổi tại Thái Nguyên 46 3.1.1. Tỷ lệ lợn tiêu chảy và chết do tiêu chảy tại một số huyện thuộc tỉnh Thái Nguyên 46 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ii 3.1.2. Tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy và chết do tiêu chảy theo mùa vụ 49 3.1.3. Tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy và chết do tiêu chảy theo ph-ơng thức chăn nuôi 53 3.2. Biến động số lượng vi khuẩn hiếu khí và vi khuẩn E. coli trong phân lợn con dưới 2 tháng tuổi 55 3.2.1. Biến động số lượng vi khuẩn hiếu khí 56 3.2.2. Biến động số lượng của vi khuẩn E. coli 57 3.3. Kết quả phân lập vi khuẩn E. coli từ các mẫu bệnh phẩm 59 3.3.1. Kết quả phân lập vi khuẩn E. coli từ các mẫu phân 59 3.3.2. Kết quả phân lập vi khuẩn E. coli từ các mẫu là phủ tạng 62 3.4. Kết quả giám định một số đặc tính sinh hóa của các chủng vi khuẩn E. coli phân lập 63 3.5. Kết quả xác định một số yếu tố gây bệnh của các chủng vi khuẩn E. coli phân lập 65 3.6. Kết quả xác định các serotyp kháng nguyên O của các chủng vi khuẩn E. coli phân lập 66 3.7. Kết quả xác định độc lực của các chủng vi khuẩn E. coli phân lập trên chuột bạch 69 3.8. Kết quả xác định khả năng mẫn cảm với kháng sinh của các chủng vi khuẩn E. coli phân lập được 71 3.9. Kết quả thử nghiệm một số phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy ở lợn con dưới 2 tháng tuổi 74 3.10. Một số biện pháp phòng bệnh 77 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 78 1. Kết luận 78 2. Đề nghị 79 TÀI LIỆU THAM KHẢO 80 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, từ viết tắt Ý nghĩa APEC : Asia-Pacific Economic Cooperation BHI : Brain Heart Infusion CS : Cộng sự ColV : Colicin V Cl. perfringens : Clostridium perfringens CFU : Colony Forming Unit DHL : Deoxycholate Hydrogensulfide Lactose DNA : Deoxyribonucleic Acid E. coli : Escherichia coli EDTA : Ethylene Diamine Tetraacetic Acid ETEC : Enterotoxigenic Escherichia coli FAO : Food and Argriculture Oganization KL : Khuẩn lạc LD50 : Lethal Dose 50 LT : Heat Labile Toxin MR : Methyl Red NCCLS : National Committee of Clinical Laboratory : Standards NXB : Nhà xuất bản OMPs : Outer Memberance Proteins PBW : Buffered Pepton Water PCR : Polymera Chain Reaction ST : Heat Stable Toxin Tr : Trang UV : Ultraviolet VP : Voges Proskauer VTEC : Verotoxin Producing E. coli WTO : World Trade Organization Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iv DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1: Tiêu chuẩn đánh giá mức độ mẫn cảm và kháng kháng sinh theo NCCLS (1999) 45 Bảng 3.1. Tỷ lệ lợn tiêu chảy và chết do tiêu chảy tại một số huyện 47 Bảng 3.2: Tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy và chết theo mùa vụ 50 Bảng 3.3. Tỷ lệ lợn tiêu chảy và chết do tiêu chảy theo phương thức chăn nuôi 53 Bảng 3.4: Số lượng vi khuẩn hiếu khí ở lợn con dưới 2 tháng tuổi 56 Bảng 3.5: Biến động số lượng vi khuẩn E. coli trong phân lợn con dưới 2 tháng tuổi 57 Bảng 3.6: Kết quả phân lập vi khuẩn E. coli trong phân lợn con dưới 2 tháng tuổi ở 2 trạng thái 59 Bảng 3.7: Kết quả phân lập vi khuẩn E. coli từ phủ tạng lợn con dưới 2 tháng tuổi chết do tiêu chảy 62 Bảng 3.8: Đặc tính sinh hóa của một số chủng E. coli phân lập được 63 Bảng 3.9: Tỷ lệ các chủng vi khuẩn E. coli mang các yếu tố gây bệnh 65 Bảng 3.10: Kết quả xác định serotyp kháng nguyên O của các chủng vi khuẩn E. coli phân lập được từ lợn bệnh 67 Bảng 3.11: Kết quả xác định độc lực trên chuột bạch của một số chủng E. coli phân lập 69 Bảng 3.12: Kết quả xác định khả năng mẫn cảm với kháng sinh của các chủng vi khuẩn E. coli 72 Bảng 3.13: Kết quả thử nghiệm một số phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy lợn từ sơ sinh đến 60 ngày tuổi 76 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn v DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 2.1: Quy trình phân lập vi khuẩn đường ruột (Bộ môn Vi trùng - Viện Thú y Quốc gia) 39 Hình 3.1: Biểu đồ tỷ lệ lợn tiêu chảy và chết do tiêu chảy tại một số huyện . 49 Hình 3.2: Biểu đổ tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy và chết theo mùa vụ 52 Hình 3.3: Biểu đồ tỷ lệ lợn tiêu chảy và chết do tiêu chảy theo phương thức chăn nuôi 54 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1 PHẦN MỞ ĐẦU 1. Tính cấp thiết của đề tài Đã từ lâu chăn nuôi là ngành cung cấp thực phẩm chủ yếu phục vụ đời sống con người. Cùng với nhu cầu thực phẩm của con người ngày càng cao, chăn nuôi cũng đạt nhiều thành tựu nhằm đáp ứng nhu cầu đó. Đặc biệt trong thời kỳ hội nhập APEC, WTO… như hiện nay, ngành chăn nuôi nước ta cũng phải chuyển mình cho phù hợp với yêu cầu của thời đại, trong ngành chăn nuôi, nghề chăn nuôi lợn chiếm vị trí rất quan trọng. Theo thống kê của FAO (2006) tổng sản lượng thịt trên toàn thế giới là 232,1 triệu tấn, trong đó thịt lợn là 103 triệu tấn (chiếm gần 44%); thịt bò là 52,9 triệu tấn (chiếm 22,79%) , thịt gà là 48,6 triệu tấn (chiếm 20,93%). Ở nước ta, nghề chăn nuôi lợn đã có từ lâu đời và ngày càng phát triển, đạt được nhiều thành tựu quan trọng trên hầu hết các lĩnh vực như chọn tạo giống, dinh dưỡng, kỹ thuật chăn nuôi quy trình vệ sinh và thú y… Do vậy, năng suất và chất lượng sản phẩm chăn nuôi lợn không ngừng được nâng cao, số lượng đầu lợn tăng ngày càng nhanh. Theo số liệu của Cục thống kê năm 2007, tổng đàn lợn ở Việt Nam năm 2005 đạt 27,434 triệu con, năm 2006 đạt 26,85 triệu con, đã sớm đạt và vượt mục tiêu phấn đấu đến năm 2010 đạt 25 triệu con. Thực hiện mục tiêu nâng cao chất lượng và nạc hoá đàn lợn cũng như chuyển sang hướng chăn nuôi tập trung, Đảng và Nhà nước ta đã thực hiện nhiều dự án, chương trình nhằm cải tạo đàn lợn, tăng dần tỉ lệ đàn nái ngoại và nái lai trong cơ cấu đàn nhằm đáp ứng nhu cầu sản phẩm có chất lượng cao ở trong nước, cũng như hướng tới xuất khẩu. Cùng với xu thế của cả nước, tỉnh Thái Nguyên đã thực hiện các dự án nạc hoá đàn lợn, đưa nái ngoại vào chăn nuôi ở các nông hộ từ những năm 90 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2 của thế kỷ XX. Đến nay, đã có rất nhiều cơ sở chăn nuôi lợn nái ngoại quy mô từ 50 - 100 - 150 nái/trại. Đây thực sự là một bước tiến mới trong chăn nuôi lợn của tỉnh Thái Nguyên, góp phần cung cấp thực phẩm với tỷ lệ nạc cao cho người tiêu dùng. Tuy nhiên, cùng với sự phát triển chăn nuôi thì tình hình dịch bệnh cũng đang diễn biến hết sức phức tạp (dịch tai xanh, dịch lở mồm long móng…) hàng năm làm chết nhiều đầu lợn. Một trong những bệnh gây thiệt hại lớn về kinh tế, hay gặp và phổ biến ở lợn con dưới 2 tháng tuổi là bệnh tiêu chảy. Bệnh được gọi là hội chứng tiêu chảy do nhiều nguyên nhân gây nên và nhiều yếu tố bất lợi khác tác động như sự thay đổi đột ngột của thời tiết, khí hậu, kết hợp với những sai sót trong chăm sóc, nuôi dưỡng, quản lý cùng với điều kiện môi trường chăn nuôi bị ô nhiễm, vệ sinh kém, tạo điều kiện cho các vi sinh vật gây bệnh phát triển. Hội chứng tiêu chảy ở lợn con dưới 2 tháng tuổi được nhiều tác giả trong và ngoài nước nghiên cứu và đề cập tới ở nhiều khía cạnh khác nhau. Vi khuẩn E. coli là một trong những vi khuẩn thường gây tiêu chảy cho lợn con dưới 2 tháng tuổi. Việc nghiên cứu về vi khuẩn này giúp có được những hiểu biết sâu hơn, từ đó đưa ra các biện pháp phòng và điều trị bệnh bằng các phác đồ thích hợp và hiệu quả, làm giảm thiểu thiệt hại do bệnh. Xuất phát từ những lý do trên, chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu đề tài: “Phân lập và xác định vai trò của vi khuẩn E. coli trong hội chứng tiêu chảy ở lợn con dưới 2 tháng tuổi tại một số huyện của tỉnh Thái Nguyên và biện pháp phòng trị”. 2. Mục tiêu nghiên cứu Phân lập và xác định một số đặc tính gây bệnh của các chủng vi khuẩn E. coli phân lập được từ các lợn tiêu chảy của lợn con dưới 2 tháng tuổi tại một số huyện của tỉnh Thái Nguyên, làm cơ sở cho việc tuyển chọn các chủng [...]... mạnh phân lập từ lợn con tiêu chảy cao hơn rất nhiều so với lợn không tiêu chảy Cl perfringens cũng là loài vi khuẩn gây ra bệnh tiêu chảy ở lợn con Đây là một vi khuẩn yếm khí và cũng thường có trong đường tiêu hóa của lợn con như E coli và Salmonella Theo Nguyễn Văn Sửu và cs (20 08) [ 42] khi xác định tỷ lệ tiêu chảy do vi m ruột hoại tử tại một số địa phương thuộc tỉnh Thái Nguyên cho biết số Số hóa... về một số đặc điểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy ở Thái Nguyên đã kết luận cầu trùng và một số giun tròn (giun đũa, giun tóc, giun lươn) là một trong những nguyên nhân gây tiêu chảy ở lợn con sau cai sữa Khi nghiên cứu về tình hình bệnh tiêu chảy ở lợn sau cai sữa và tỷ lệ nhiễm giun sán ở lợn tiêu chảy tại Thái Nguyên, Nguyễn Thị Kim Lan và cs (20 09) [14] đã nhận xét giun sán đường tiêu hóa có vai trò. .. bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 13 lượng vi khuẩn Cl perfringens ở phân lợn con tiêu chảy trung bình là 21 ,58 triệu trong 1g phân và ở lợn bình thường là 7,98 triệu Như vậy, ba loại vi khuẩn E coli, Salmonella và Cl perfringens là 3 loại vi khuẩn thường gặp trong hội chứng tiêu chảy ở gia súc nói chung và ở lợn con nói riêng - Tiêu chảy do virus Bên cạnh các vi. .. đề kháng của lợn * Một số vi sinh vật gây tiêu chảy ở lợn con dưới 2 tháng tuổi - Tiêu chảy do vi khuẩn Trong đường ruột của gia súc nói chung và của lợn con nói riêng có rất nhiều loài vi sinh vật sinh sống Chúng tồn tại dưới dạng cân bằng và có lợi cho cơ thể của vật chủ Dưới một tác động bất lợi nào đó, trạng thái cân bằng của hệ vi sinh vật đường ruột này bị phá vỡ, tất cả hoặc chỉ một và loài nào... vi khuẩn thì virus cũng là một nguyên nhân quan trọng gây ra hội chứng tiêu chảy ở lợn con Vai trò của virus trong hội chứng tiêu chảy của gia súc đã được nhiều nhà nghiên cứu lưu tâm và đã có nhiều công trình nghiên cứu đã chỉ ra vai trò của một số virus như Rotavirus, Enterovirus, Transmissible Gastro Enteritis (TGE) là những nguyên nhân chủ yếu gây vi m dạ dày - ruột và gây triệu chứng tiêu chảy. .. trong hội chứng tiêu chảy của lợn ở lứa tuổi từ 1 - 120 ngày Ở lợn con theo mẹ, tỷ lệ mắc bệnh có thể đến 100% và tỷ lệ chết là 60% Lượng vi khuẩn Cl perfringens chứa trong 1g phân lợn tiêu chảy ở lứa tuổi 1 - 60 ngày tuổi dao động từ 106 1010 CFU (Colony Forming Unit); số mẫu có chứa lượng vi khuẩn cao (10 8, 109 , 1010) chiếm tỷ lệ 37 - 45% Ở lợn con từ 60 - 120 ngày tuổi bị tiêu chảy, số lượng vi khuẩn. .. khuẩn trong thức ăn và tỷ lệ lợn bị tiêu chảy là chặt chẽ (R>0,9) 1 .2 Vai trò của vi khuẩn E coli trong hội chứng tiêu chảy ở lợn con 1 .2. 1 Vi khuẩn Escherichia coli (E coli) Trực khuẩn ruột già Escherichia coli trước đây còn có tên là Bacterium coli commune, Bacillus coli communis do Escherich phân lập năm 1885 từ phân trẻ em Những chủng E coli phổ thông về mặt huyết thanh học được chia thành một số. .. - 12 tháng tuổi 12, 02% Khi bị tiêu chảy, lợn bị bội nhiễm Salmonella khá rõ, vi khuẩn xuất hiện cả trong máu, tim, thận Khi nghiên cứu vai trò của Salmonella trong hội chứng tiêu chảy ở lợn, Trương Quang và cs (20 07) [37] cho biết Salmonella đóng vai trò quan trọng trong hội chứng tiêu chảy ở lợn con Tỷ lệ các chủng Salmonella có các yếu tố gây bệnh (yếu tố bám dính, thành phần độc tố thẩm xuất) và. .. là STa, STb, LT và 2 loại yếu tố bám dính là F4 và F18 đã được phát hiện trong số 46 chủng vi khuẩn E coli phân lập được từ các lợn trước và sau cai sữa bị tiêu chảy Đặng Xuân Bình và cs (20 08) [2] khi nghiên cứu đặc tính sinh học của vi khuẩn E coli trong bệnh phân trắng lợn con tại một số tỉnh phía Bắc cho Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 21 thấy đã phát... là O111B4; O86B7; O55B5; O 127 B8 (Mỹ); O 128 B 12 (Anh); 408 và 145 1 .2. 1.3 Đặc tính gây bệnh của vi khuẩn E coli Khi nghiên cứu về một số yếu tố gây bệnh của vi khuẩn E coli Đỗ Ngọc Thúy và cs (20 07) [ 52] cho biết sự có mặt của các gen quy định độc lực cũng như tổ hợp của các gen khác nhau trên cùng một chủng vi khuẩn E coli phân lập được từ lợn con sau cai sữa bị tiêu chảy tại tỉnh Phú Thọ đã được khảo . tiêu chảy ở lợn con dưới 2 tháng tuổi 7 1 .2. Vai trò của vi khuẩn E. coli trong hội chứng tiêu chảy ở lợn con 15 1 .2. 1. Vi khuẩn Escherichia coli (E .coli) 15 1.3. Biện pháp phòng trị tiêu chảy. Một số biểu hiện bệnh lý và nguyên nhân chủ yếu của hội chứng tiêu chảy ở lợn con dưới 2 tháng tuổi 4 1.1.1. Bệnh lý tiêu chảy ở lợn con dưới 2 tháng tuổi 4 1.1 .2. Một số nguyên nhân gây tiêu. lợn con dưới 2 tháng tuổi 57 Bảng 3.6: Kết quả phân lập vi khuẩn E. coli trong phân lợn con dưới 2 tháng tuổi ở 2 trạng thái 59 Bảng 3.7: Kết quả phân lập vi khuẩn E. coli từ phủ tạng lợn con