Nghiên cứu thành phần loài sán lá Song chủ (Digenea) ký sinh ở cá chẽm (Lates calcarifer Bloch, 1790) nuôi tại tỉnh Khánh Hòa (Luận án tiến sĩ)

Nghiên cứu thành phần loài sán lá Song chủ (Digenea) ký sinh ở cá chẽm (Lates calcarifer Bloch, 1790) nuôi tại tỉnh Khánh Hòa (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu thành phần loài sán lá Song chủ (Digenea) ký sinh ở cá chẽm (Lates calcarifer Bloch, 1790) nuôi tại tỉnh Khánh Hòa (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu thành phần loài sán lá Song chủ (Digenea) ký sinh ở cá chẽm (Lates calcarifer Bloch, 1790) nuôi tại tỉnh Khánh Hòa (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu thành phần loài sán lá Song chủ (Digenea) ký sinh ở cá chẽm (Lates calcarifer Bloch, 1790) nuôi tại tỉnh Khánh Hòa (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu thành phần loài sán lá Song chủ (Digenea) ký sinh ở cá chẽm (Lates calcarifer Bloch, 1790) nuôi tại tỉnh Khánh Hòa (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu thành phần loài sán lá Song chủ (Digenea) ký sinh ở cá chẽm (Lates calcarifer Bloch, 1790) nuôi tại tỉnh Khánh Hòa (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu thành phần loài sán lá Song chủ (Digenea) ký sinh ở cá chẽm (Lates calcarifer Bloch, 1790) nuôi tại tỉnh Khánh Hòa (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu thành phần loài sán lá Song chủ (Digenea) ký sinh ở cá chẽm (Lates calcarifer Bloch, 1790) nuôi tại tỉnh Khánh Hòa (Luận án tiến sĩ)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG NGUYỄN NGUYỄN THÀNH NHƠN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN LOÀI SÁN LÁ SONG CHỦ (DIGENEA) KÝ SINH Ở CÁ CHẼM (LATES CALCARIFER BLOCH, 1790) NI TẠI KHÁNH HỊA LUẬN ÁN TIẾN SĨ KHÁNH HÒA - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG NGUYỄN NGUYỄN THÀNH NHƠN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN LOÀI SÁN LÁ SONG CHỦ (DIGENEA) KÝ SINH Ở CÁ CHẼM (LATES CALCARIFER BLOCH, 1790) NI TẠI KHÁNH HỊA Ngành đào tạo: Ni trồng thủy sản Mã số: 62620301 LUẬN ÁN TIẾN SĨ NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS ĐỖ THỊ HÒA PGS.TS GLENN ALLAN BRISTOW KHÁNH HÒA - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết đề tài “Nghiên cứu thành phần loài sán song chủ (Digenea) ký sinh cá chẽm (Lates calcarifer Bloch, 1790) nuôi Khánh Hịa” cơng trình nghiên cứu cá nhân chưa công bố cơng trình khoa học khác thời điểm Khánh Hòa, ngày 25 tháng 08 năm 2017 Tác giả luận án Nguyễn Nguyễn Thành Nhơn i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian thực đề tài, tơi nhận giúp đỡ q phịng ban trường Đại học Nha Trang tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành đề tài Đặc biệt hướng dẫn tận tình PSG TS Đỗ Thị Hòa PGS.TS Glenn Allan Bristow giúp tơi hồn thành tốt đề tài Qua đây, tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến giúp đỡ Xin chân thành cảm ơn Lãnh đạo Viện Nghiên cứu Ni trồng Thủy sản III, phịng chức tạo điều kiện thuận lợi cho trình thực luận án Xin chân thành cảm ơn Lãnh đạo Trường Đại học Nha Trang, Khoa Sau Đại học, Viện Nuôi trồng Thủy sản – Trường Đại học Nha Trang quan tâm, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận án Xin chân thành cảm ơn Dự án NUFU (NUFU Pro 67/2003) hỗ trợ kinh phí cho tơi suốt q trình thực đề tài, tạo điều kiện cho được tiếp cận trang thiết bị đại phục vụ nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn bạn đồng nghiệp thuộc dự án NUFU, Phòng Sinh học Thực nghiệm, Phịng Vắc xin Cơng nghệ Sinh học Thủy sản, Phòng Khoa học, Hợp tác quốc tế Đào tạo - Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản III, Viện Công nghệ Sinh học Môi trường – Trường Đại học Nha Trang giúp đỡ tơi q trình thu mẫu, phân tích mẫu Cuối tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến gia đình tất bạn bè giúp đỡ, động viên suốt trình học tập thực đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn! Khánh Hịa, ngày 25 tháng 08 năm 2017 Tác giả luận án Nguyễn Nguyễn Thành Nhơn ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH x MỞ ĐẦU CHƯƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Một số đặc điểm sinh học cá chẽm (Lates calcarifer) 1.2 Tình hình ni cá chẽm (Lates calcarifer) thương phẩm 1.2.1 Nuôi cá chẽm thương phẩm giới 1.2.2 Tình hình ni cá chẽm (Lates calcarifer) thương phẩm Việt Nam 1.3 Nghiên cứu ký sinh trùng cá chẽm (Lates calcarifer) nuôi 10 1.3.1 Thành phần loài ký sinh trùng ký sinh cá chẽm (Lates calcarifer) phát công bố giới 10 1.3.2 Nghiên cứu ký sinh trùng cá chẽm (Lates calcarifer) Việt Nam 12 1.3.3 Nghiên cứu sán song chủ ký sinh cá biển 13 1.4 Ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử phân loại sán song chủ 17 1.4.1 Hệ thống học phân tử hệ thống học truyền thống 17 1.4.2 Các thị phân tử thường sử dụng nghiên cứu di truyền 18 1.4.3 Ứng dụng sinh học phân tử phân loại sán song chủ 20 CHƯƠNG II PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1 Đối tượng, thời gian địa điểm nghiên cứu 29 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 29 2.1.2 Thời gian nghiên cứu 29 2.1.3 Địa điểm nghiên cứu 29 2.2 Vật liệu nghiên cứu 30 2.2.1 Mẫu cá chẽm thương phẩm 30 2.3 Các phương pháp nghiên cứu sử dụng 33 2.3.1 Phương pháp phát hiện, thu thập, bảo quản, cố định làm tiêu ký sinh trùng sán song chủ 33 iii 2.3.2 Phân loại sán song chủ phương pháp hình thái học 36 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm di truyền loài sán song chủ ký sinh cá chẽm (Lates calcarifer) 37 2.3.4 Khảo sát vòng đời phát triển loài sán song chủ ký sinh cá chẽm 43 2.3.5 Xử lý số liệu 46 CHƯƠNG III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 50 3.1 Tình hình ni cá chẽm Khánh Hòa 50 3.1 Thành phần giống loài sán song chủ (Digenea) ký sinh cá chẽm ni Khánh Hịa 501 3.1.1 Thành phần giống loài sán song chủ tìm thấy ký sinh cá chẽm 51 3.1.2 Mơ tả hình dạng, cấu tạo loài sán song chủ ký sinh cá chẽm 55 3.1.3 Xác định loài Pseudometadena celebesensis ký sinh trung đặc hữu cá chẽm (Lates calcarifer) 66 3.2 Phân loại xác định mối quan hệ di truyền loài SLSC ký sinh cá chẽm ni Khánh Hịa kỹ thuật sinh học phân tử 71 3.2.1 Khuếch đại, giải trình tự ADN sán song chủ cá chẽm 71 3.2.2 So sánh khác biệt trình tự gen loài sán song chủ ký sinh cá chẽm (Lates calcarifer) ni Khánh Hịa 72 3.2.3 Xây dựng phát sinh loài với sán song chủ ký sinh cá chẽm ni Khánh Hịa 78 3.3 Xác định mức độ nhiễm sán song chủ chẽm ni Khánh Hịa 81 3.3.1 Mức độ nhiễm sán song chủ cá chẽm nuôi theo năm nghiên cứu 81 3.3.2 Mức độ nhiễm sán song chủ (Digenea) cá chẽm nuôi ao đất lồng biển 84 3.3.3 Mức độ nhiễm sán song chủ cá chẽm nuôi thương phẩm kích cỡ khác cá 87 3.4 Khảo sát phát triển giai đoạn ấu trùng loài sán Pseudometadena celebesensis ký sinh cá chẽm 88 3.4.1 Kiểm tra phát ấu trùng sán song chủ ký sinh loài ốc cá tạp 89 iv 3.4.2 Kết thí nghiệm dùng cá đối làm thức ăn cho cá chẽm để nghiên cứu vịng đời lồi sán song chủ Pseudometadena celebesensis 94 CHƯƠNG IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 97 4.1 Kết luận 97 4.2 Đề xuất ý kiến 98 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 99 TÀI LIỆU THAM KHẢO 100 Tài liệu Tiếng Việt 100 Tài liệu Tiếng Anh 102 v DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ADN : Acid Deoxyribonucleic CĐCN : Cường độ cảm nhiễm CĐCNTB : Cường độ cảm nhiễm trung bình KCCC : Ký chủ cuối KCTG : Ký chủ trung gian KST : Ký sinh trùng ITS1, : Internal Transcribed Spacer 1, (Đoạn chèn 1, 2) PCR : Polymerase Chain Reaction rRNA : Ribosomal Deoxyribonucleic Acid SLSC : Sán song chủ TLCN : Tỷ lệ cảm nhiễm vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Sản lượng cá chẽm giới giai đoạn 2005 - 2014 .6 Bảng 1.2 Thành phần giống loài ký sinh trùng cá chẽm (Lates calcarifer) 10 Bảng 2.1 Số lượng kích cỡ trung bình mẫu cá chẽm 30 Bảng 2.2 Số lượng kích thước cá chẽm thu từ ao nuôi thời gian từ tháng 6/2007 đến tháng 3/ 2009 31 Bảng 2.3 Số lượng kích cỡ trung bình cá chẽm nuôi ao thu theo năm từ 2010 đến 2013 31 Bảng 2.4 Số lượng kích cỡ lồi cá tạp dùng để kiểm tra ấu trùng metacercaria sán song chủ 32 Bảng 2.5 Kích cỡ cá chẽm giống trước bố trí thí nghiệm 33 Bảng 2.6 Trình tự đoạn mồi sử dụng cho phản ứng PCR 39 Bảng 2.7 Trình tự gen 18S rRNA lồi sán song chủ ký sinh số loài cá biển 47 Bảng 2.8 Trình tự gen 28S rRNA số lồi sán song chủ ký sinh số loài cá biển .48 Bảng 3.1: Thành phần lồi, mức độ nhiễm vị trí ký sinh sán song chủ cá chẽm 51 Bảng 3.2 Thành phần loài sán song chủ ký sinh cá chẽm nuôi Khánh Hịa 52 Bảng 3.3 So sánh kích thước lồi Erilepturus hamati ký sinh cá chẽm ni Khánh Hòa với nghiên cứu khác .58 Bảng 3.4 So sánh kích thước lồi Transversotrema patialense ký sinh cá chẽm ni Khánh Hịa với nghiên cứu khác 60 Bảng 3.5 So sánh kích thước lồi Pseudometadena celebesensis ký sinh cá chẽm ni Khánh Hịa với nghiên cứu khác 62 Bảng 3.7 So sánh kích thước lồi Elytrophallus sp ký sinh cá chẽm nuôi Khánh Hòa với nghiên cứu khác 66 Bảng 3.8 Kết Parafit loài sán song chủ ký sinh cá chẽm .69 vii Bảng 3.9 Sự tương đồng (phía đường bên) khác biệt (phía đường bên) trình tự 18S rRNA 74 Bảng 3.10 Sự khác biệt trình tự vùng ITS1 rRNA loài sán song chủ ký sinh cá chẽm GenBank 75 Bảng 3.11 Sự tương đồng (phía đường bên) khác biệt (phía đường bên) trình tự 28S rRNA 76 Bảng 3.12 Tỷ lệ nhiễm (%) lồi sán song chủ cá chẽm ni Khánh Hòa theo năm nghiên cứu 82 Bảng 3.13 Cường độ nhiễm trung bình (trùng/cá) lồi sán song chủ cá chẽm ni Khánh Hòa theo năm nghiên cứu .82 Bảng 3.14 Tỷ lệ nhiễm (%) sán song chủ cá chẽm nuôi ao lồng qua năm nghiên cứu .84 Bảng 3.15 Cường độ cảm nhiễm trung bình (trùng/cá) SLSC cá chẽm nuôi ao nuôi lồng Khánh Hòa qua năm nghiên cứu 85 Bảng 3.16 Mức độ nhiễm sán song chủ kích cỡ cá chẽm khác Khánh Hòa .87 Bảng 3.17 Mức độ nhiễm giai đoạn hậu ấu trùng metacercaria sán song chủ cá đối 90 Bảng 3.18 Một số tiêu hình thái ấu trùng metacercaria M1 ký sinh cá đối thu Khánh Hòa 91 Bảng 3.19 Một số tiêu hình thái dạng metacercaria M2 ký sinh cá đối thu Khánh Hòa 92 Bảng 3.20 Một số tiêu hình thái dạng ấu trùng metacercaria M3 ký sinh cá đối thu Khánh Hòa 93 Bảng 3.21 Mức độ nhiễm sán song chủ loài Pseudometadena celebesensis ruột cá chẽm nuôi thức ăn cá đối, sau 30 ngày thí nghiệm 95 viii ... ký sinh sán song chủ cá chẽm 51 Bảng 3.2 Thành phần loài sán song chủ ký sinh cá chẽm ni Khánh Hịa 52 Bảng 3.3 So sánh kích thước lồi Erilepturus hamati ký sinh cá chẽm ni Khánh. .. loài sán song chủ (Digenea) ký sinh cá chẽm nuôi Khánh Hòa 501 3.1.1 Thành phần giống lồi sán song chủ tìm thấy ký sinh cá chẽm 51 3.1.2 Mô tả hình dạng, cấu tạo lồi sán song chủ ký. .. NGUYỄN THÀNH NHƠN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN LOÀI SÁN LÁ SONG CHỦ (DIGENEA) KÝ SINH Ở CÁ CHẼM (LATES CALCARIFER BLOCH, 1790) NI TẠI KHÁNH HỊA Ngành đào tạo: Nuôi trồng thủy sản Mã số: 62620301 LUẬN ÁN TIẾN