Nghiên cứu tạo củ in vitro cây bách hợp Lilium brownii Brown. (Khóa luận tốt nghiệp)

Nghiên cứu tạo củ in vitro cây bách hợp Lilium brownii Brown. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu tạo củ in vitro cây bách hợp Lilium brownii Brown. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu tạo củ in vitro cây bách hợp Lilium brownii Brown. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu tạo củ in vitro cây bách hợp Lilium brownii Brown. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu tạo củ in vitro cây bách hợp Lilium brownii Brown. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu tạo củ in vitro cây bách hợp Lilium brownii Brown. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu tạo củ in vitro cây bách hợp Lilium brownii Brown. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu tạo củ in vitro cây bách hợp Lilium brownii Brown. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu tạo củ in vitro cây bách hợp Lilium brownii Brown. (Khóa luận tốt nghiệp)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM BÙI ĐỨC QUỲNH Tên đề tài: NGHIÊN CỨU TẠO CỦ IN VITRO CÂY BÁCH HỢP (Lilium brownii Brown) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH & CNTP Khoá học : 2012- 2016 Thái Nguyên, năm 2016 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM BÙI ĐỨC QUỲNH Tên đề tài: NGHIÊN CỨU TẠO CỦ IN VITRO CÂY BÁCH HỢP (Lilium brownii Brown) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Lớp : 44 - CNSH Khoa : CNSH & CNTP Khoá học : 2012- 2016 Giảng viên hƣớng dẫn : TS Nguyễn Văn Duy ThS Vũ Hoài Sâm Thái Nguyên, năm 2016 i LỜI CẢM ƠN Để hoàn chỉnh tốt chương trinh đào tạo nhà trường với phương châm học đôi với hành, sinh viên trường cần chuẩn bị cho lượng kiến thức cần thiết , chun mơn vững vàng Thời gian thực tập tốt nghiệp phần quan trọng khơng thể thiếu trương trình đào tạo sinh viên đại học nói chung sinh viên Đại Học Nơng Lâm nói riêng Đây khoảng thời gian cần thiết để sinh viên củng cố lại kiến thức lý thuyết học cách có hệ thống nâng cao khả vận dụng lý thuyết vào thực tiễn, xây dựng phong cách kỹ sư Với lòng biết ơn vơ hạn, xin chân thành cảm ơn thầy giáo cô giáo, khoa CNSH – CNTP Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên truyền đạt cho kiến thức quý báu suốt trình học tập rèn luyện trường Đặc biệt xin chân thành cảm ơn thầy giáo TS Nguyễn Văn Duy giáo ThS Vũ Hồi Sâm tận tình bảo hướng dẫn tơi suốt q trình thực tập hồn thiện khóa luận tốt nghiệp Tơi xin chân thành cảm ơn Ban Giám Đốc trung tâm Nghiên Cúu Trồng Chế Biến Cây Thuốc Hà Nội, Viện Dược Liệu toàn thể nhân viên Phòng / Bộ mơn trung tâm tạo điều kiện cho tơi q trình thực tập Tơi xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng Năm 1016 Sinh Viên Bùi Đức Quỳnh ii DANH MỤC HÌNH Trang Hình 2.1 Hình ảnh Bách hợp (Lilium brownii Br.) .5 Hình 2.2 Một số thực phẩm chế biến từ Bách hợp Hình 2.3 Một số sản phẩm thuốc từ Bách hợp Hình 4.1 Củ hình thành mơi trường MS + 60g/l đường + 0,5 mg/l α-NAA 34 Hình 4.2 Nhân nhanh củ nhỏ từ loại lát cắt khác 37 Hình 4.3 Nhân nhanh bách hợp môi trường .40 Hình 4.4 Cây bách hợp môi trường tạo rễ 42 Hình 4.5 Cây bách hợp giá thể khác vườn ươm .44 iii DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 4.1 Ảnh hưởng thời gian xử lý HgCl2 0,1% đến hiệu khử trùng mẫu cấy 25 Bảng 4.2 Ảnh hưởng BAP đến tái sinh in vitro .28 Bảng 4.3 Ảnh hưởng NAA đến tái sinh in vitro 30 Bảng 4.4 Ảnh hưởng Kinetin đến hình thành củ nhỏ 32 Bảng 4.5 Ảnh hưởng NAA đến khả hình thành củ nhỏ in vitro .33 Bảng 4.6 Ảnh hưởng đường đến khả hình thành củ in vitro bách hợp 35 Bảng 4.7 Ảnh hưởng loại lát cắt đến khả nhân nhanh củ in vitro 36 Bảng 4.8: Ảnh hưởng NAA đến khả nhân nhanh củ nhỏ 38 Bảng 4.9 Ảnh hưởng tổ hợp NAA BAP đến nhân nhanh củ in vitro 39 Bảng 4.10 Ảnh hưởng NAA BAP đến tạo rễ in vitro .41 Bảng 4.11 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống bách hợp vườn ươm 43 Bảng 4.12 Ảnh hưởng giá thể đến sinh trưởng vườn ươm .44 iv MỤC LỤC Trang PHẦN I: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu tổng quát 1.2.2 Mục tiêu cụ thể PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung chi Lilium Bách hợp 2.1.1 Giới thiệu chung chi Lilium 2.1.2 Giới thiệu c1hung Bách hợp 2.2 Các phương pháp nhân giống chi Lilium Bách hợp 2.2.1 Phương pháp nhân giống hạt 2.2.2 Phương pháp nhân giống vảy củ 2.2.3 Phương pháp nhân giống nuôi cấy mô 11 PHẦN III: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.1 Đối tượng 18 3.2 Địa điểm nghiên cứu 18 3.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 18 3.3.1 Nội dung nghiên cứu 18 3.3.2 Phương pháp nghiên cứu 19 PHẦN IV KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 25 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng đến hiệu khử trùng mẫu 25 4.2 Kết nghiên tái sinh in vitro từ đốt thân vẩy củ 27 4.2.1 Ảnh hưởng BAP đến tái sinh in vitro từ đốt thân vẩy củ 27 4.2.2 Ảnh hưởng NAA đến tái sinh in vitro từ đốt thân vẩy củ 29 4.3 Nghiên cứu hình thành củ nhỏ 32 v 4.3.1 Ảnh hưởng Kinetin đến hình thành củ nhỏ 32 4.3.2 Ảnh hưởng NAA đến hình thành củ nhỏ in vitro 33 4.3.3 Ảnh hưởng nồng độ đường đến hình thành củ nhỏ 34 4.4 Nghiên cứu nhân nhanh củ nhỏ in vitro 36 4.4.1 Ảnh hưởng loại lát cắt đến khả nhân nhanh củ in vitro 36 4.4.2 Ảnh hưởng NAA đến khả nhân nhanh củ nhỏ 37 4.5 Nghiên cứu tạo hoàn chỉnh 40 4.6 Nghiên cứu đưa vườn ươm 42 4.6.1 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống vườn ươm 43 4.6.2 Ảnh hưởng giá thể đến sinh trưởng vườn ươm 44 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46 5.1 Kết luận 46 5.2 Đề nghị 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Bách hợp gọi Tỏi rừng, Khẻo ma, Sn phạ (Tày), Kíp pá (Thái), Cà ngái dòi (Dao), có tên khoa học Lilium brownii Brown var Viridulum Baker, 1885, tên đồng danh Lilium brownii Brown var Colchesteri Wils.ex Stapf., 1921., thuộc họ hành tỏi (Liliaceae) thuốc phổ biến quan trọng Đông y (Nguyễn Tập, 2007) [7] Bách hợp có dạng cỏ, cao 0,5 – 1m, thân hành to màu trắng, dọc thân có nhiều vảy xếp chồng lên Cây thường mọc hoang trảng cỏ bờ nương rẫy vùng núi cao Vẩy thân hành thường dùng làm thuốc giảm đau, chống ho, chống viêm nguồn dinh dưỡng Theo tài liệu cổ, Bách hợp có tác dụng bổ phổi, trừ ho, định tâm, an thần, nhiệt, lợi tiểu, chữa ho lao thổ huyết, ho có đờm, viêm phế quản, hư phiền hồi hộp, tim đập mạnh, phù thũng (Đỗ Huy Bích, 2004) [2] Ở Trung Quốc, Bách hợp thường dùng làm thuốc nhuận phế, khái, an thần bình tâm Ở Việt Nam, Bách hợp có mặt thành phần nhiều loại thuốc trị ho có mặt thị trường Bách hợp khái lộ, An khái hoa, Cốm ho Ma hạnh Vinet….Ngoài tác dụng làm thuốc kế trên, Bách hợp cho hoa đẹp để làm cảnh Với đặc tính từ năm 1980 bị khai thác mức để lấy nguyên liệu làm thuốc xuất tiểu ngạch qua biên giới Thêm vào nguồn Bách hợp tự nhiên bị thu hẹp nạn phá rừng ngày gia tăng Mặc dù tái sinh tự nhiên hạt, có hạt phát tán, tiếp xúc với mặt đất ẩm hay hốc đá có mùn có hội nẩy mầm (Đỗ Huy Bích, 2004) [2] Do vậy, liên tục đưa vào danh lục đỏ Cây thuốc Việt Nam năm 1996, 2001 2006 Nghị định số 32/2006/NĐ-CP phủ (30/3/2006) nhằm quản lý bảo vệ Tuy nhiên, nghiên cứu nhân giống bách hợp chưa quan tâm nhiều Việt Nam Nhằm bảo tồn nguồn gen nhân rộng giống thuốc bị đe dọa tiến hành đề tài: “Nghiên cứu tạo củ in vitro bách hợp (Lilium brownii Brown)” 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu tổng quát Nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố kỹ thuật đến hình thành củ in vitro bách hợp nhằm xây dựng quy trình nhân giống loài với tỷ lệ sống cao vườn ươm 1.2.2 Mục tiêu cụ thể - Xác định điều kiện khử trùng thích hợp - Xác định mơi trường tái sinh thích hợp - Xác định ảnh hưởng mơi trường, chất điều hòa sinh trưởng, đường đến tạo củ in vitro - Xác định giá thể thích hợp để đưa in vitro vườn ươm PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung chi Lilium Bách hợp 2.1.1 Giới thiệu chung chi Lilium Chi Lilium (họ Liliaceae) gồm khoảng 100 loài (Mcrae, 1998) [30], biết đến trước hết loài hoa loa kèn, huệ tây trồng làm cảnh Trong số có hai nhóm quan trọng Lilium longilorum (Easter Loa kèn) Lilium hybrids (gồm Asiatic Loa kèn Oriental Loa kèn) đa dạng hình thái, màu sắc Hiện việc lai tạo nhóm Lilium để tạo giống có sắc riêng, phù hợp với điều kiện sinh thái, khí hậu vùng cải thiện đặc tính giống lai xu hướng công tác lai tạo giống loa kèn Chi Lilium phân bố chủ yếu vùng ôn đới ấm Bắc bán cầu Ở Châu Á có khoảng chục loài tập trung chủ yếu vùng cận Himalaya (Đỗ Huy Bích, 2004) [2] Theo thống kê Đặng Văn Đông Đinh Thế Lộc (2008) [1] Trung Quốc có khoảng 460 giống hoa thuộc chi Lilium, 280 biến chủng (chiếm 1/2 tổng số hoa loa kèn giới), Nhật Bản có 145 giống có 19 giống đặc trưng Nhật, Hà Lan có 302 giống 80% giống Hà Lan tạo ra, Hàn Quốc có khoảng 110 giống có 30 giống đặc trưng nước Theo Phạm Hoàng Hộ (1999) [12] Việt Nam, loài trồng phổ biến L longiflorum Thunb L lancifolium, có lồi hoa loa kèn hoang dại thuộc chi Lilium ghi nhận Lilium brownii F.E Brown (bách hợp), Lilium poilanei Gagne Lilium arboricola Trong loài mọc tự nhiên, đáng ý bách hợp, loài vừa có hoa đẹp làm cảnh vừa có tác dụng làm thuốc chữa bệnh Bách hợp gọi Tỏi rừng, Khẻo ma, Sn phạ (Tày), Kíp pá (Thái), Cà ngái dòi (Dao), có tên khoa học Lilium brownii Brown var viridulum Baker (năm 1885), tên đồng danh Lilium brownii Brown var colchesteri Wils.ex Stapf (năm 1921), thuốc phổ biến quan trọng Đông y ... đề tài: Nghiên cứu tạo củ in vitro bách hợp (Lilium brownii Brown)” 2 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu tổng quát Nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố kỹ thuật đến hình thành củ in vitro bách hợp nhằm... BÙI ĐỨC QUỲNH Tên đề tài: NGHIÊN CỨU TẠO CỦ IN VITRO CÂY BÁCH HỢP (Lilium brownii Brown) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Lớp : 44 - CNSH Khoa... Kết nghiên tái sinh in vitro từ đốt thân vẩy củ 27 4.2.1 Ảnh hưởng BAP đến tái sinh in vitro từ đốt thân vẩy củ 27 4.2.2 Ảnh hưởng NAA đến tái sinh in vitro từ đốt thân vẩy củ 29 4.3 Nghiên