Các kỹ thuật chẩn đoán phân tử ĐH KHTN HCMUS

1. PCR và các kỹ thuật liên quan: RTPCR, realtime PCR, dPCR 2. Các kỹ thuật nhân bản không PCR : bDNA, NASBA, LAMP 3. Các kỹ thuật lai phân tử: RDB, PCR ELISA, DNA microarray 4. Các kỹ thuật giải trình tự: Sanger, NGS 5. Nanoparticle 6. Các kỹ thuật áp điện: Quartz crystal microbalance

CHẨN ĐOÁN PHÂN TỬ MOLECULAR DIAGNOSTICS CHẨN ĐOÁN PHÂN TỬ - Nguyên tắc: phát bất thường thể mức độ phân tử Hai hướng chính: chẩn đoán in vivo chẩn đoán in vitro xác vị trí -Chẩn đoán in vivo: sử dụng chất hóa học đánh dấu để theo dõi bất thường bên thể -Chẩn đoán in vitro: chẩn đoán dựa dịch thể, mẫu tế bào, mô, quan thể -Đa phần phương pháp chẩn đoán in vitro dựa kỹ thuật sinh học phân tử -Kết chẩn đoán phân tử cần kết hợp với chẩn đoán khác để có kết luận xác tình trạng bệnh Ví dụ, HPV phát nhờ kỹ thuật chẩn đoán phân tử, chưa ung thư xuất cổ tử cung Muốn biết xác cần sinh thiết, theo dõi trạng thái mô học không bào lớn thể khác người bình thường người bênh đánh dấu CHẨN ĐOÁN IN VIVO Theo dõi vị trí xuất khối u, khối u thường chuyển hóa mạnh, nên tập trung nhiều, chỗ xuất đường phóng xạ nhiều chỗ bị ung thư Các chất đánh dấu: •Đường phóng xạ: 2-deoxy-2[F-18]fluoroD-glucose (FDG) •Dạng nucleotide tương đồng: thymidine (FLT) tương tự đường •Hạt nano sắt FL- Theo dõi ung thư di hay không? Các kỹ thuật theo dõi: Kỹ thuật chụp cắt lớp phát xạ positron (positron emission tomography –PET) Kỹ thuật chụp cắt lớp điện toán (computerized Tomograph –CT) Kỹ thuật chụp ảnh cộng hưởng từ (Magnetic Resonance Imaging) ƯU VÀ NHƯỢC ĐIỂM CỦA CHẨN ĐOÁN PHÂN TỬ Ưu điểm: -Phát bệnh thể lặn -Phát sớm bất thường thai nhi -Phát gen biểu muộn trình sống -Phát tác nhân ngoại lai với độ nhạy, độ đặc hiệu cao, phát giai đoạn sớm, phát tác nhân không nuôi cấy Nhược điểm: -Thiết bị đại đắt tiền, chi phí xét nghiệm cao, đòi hỏi người thao tác đào tạo tốt -Đặt vấn đề đạo đức, xã hội CÁC KIỂU CHẨN ĐOÁN PHÂN TỬ BỆNH Ở NGƯỜI BỆNH NỘI TẠI (Bệnh di truyền, bệnh ung thư) BỆNH NHIỄM (Virus, vi khuẩn, nấm, ký sinh) Chẩn đoán phân tử DNA RNA Protein XÁC ĐỊNH SNP  Y HỌC CÁ THỂ XÁC ĐỊNH CÁC LOCUS  HUYẾT THỐNG CÁC PHƯƠNG PHÁP SỬ DỤNG TRONG CHẨN ĐOÁN PHÂN TỬ PCR kỹ thuật liên quan: RT-PCR, real-time PCR, dPCR Các kỹ thuật nhân không PCR : bDNA, NASBA, LAMP Các kỹ thuật lai phân tử: RDB, PCR ELISA, DNA microarray Các kỹ thuật giải trình tự: Sanger, NGS Nanoparticle Các kỹ thuật áp điện: Quartz crystal microbalance Digital PCR Xuất cách chưa tới 10 năm (năm 2017) Cho phép định lượng tuyệt đối, phát allele (tỷ lệ xuất