BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2

BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2BÁO CÁO THUC HÀNH HOA DUOC 2

TRƯỜNG ĐẠI HỌC VÕ TRƯỜNG TOẢN

KHOA DƯỢC

BÁO CÁO THỰC HÀNH HĨA DƯỢC II

Giảng viên hướng dẫn : Sinh viên thực hiện :

Thực hành hóa dược II

2

BÀI 1 METRONIDAZOL, QUININ SULFAT MEBENDAZOL

1 KIỂM NGHIỆM METRONIDAZOL:

- Tính chất: Bột kết tinh màu trắng hơi vàng, vị đắng; dễ biến màu do

ánh sang Khó tan trong nước và dung môi hữu cơ; tan trong acid vô cơ loãng

+ Xác định nhiệt độ nóng chảy: F= 159 −163oC

+ Phản ứng xác định nhóm nitro thơm:

Nguyên tắc : Khử nhóm –NO2 bằng H mới sinh thành nhóm −NH2; sản phẩm tạo thành cho phản ứng đặc trưng amin thơm I

Thực hành hóa dược II

3

Tiến hành:

- Ống nghiệm 1: Đun trên nồi cách thủy trong 5-10 phút hỗn hợp gồm : 10

mg metronidazol; 1 ml nước; 0,5 ml HCl 10% và 2 viên kẻm hạt; để

nguội , lọc thu dịch lọc Thêm 1-2 giọt NaNO2 0,1M vào dịch lọc, trộn đều

- Ống nghiệm 2: Hòa tan khoảng 0,1 g 2-naphtol vào 2 ml NaOH 10% đun nhẹ: Xuất hiện màu tím đỏ, chuyển sang màu vàng khi thêm HCl 10% tới pH acid

Hình ảnh ống nghiệm xuất hiện màu tím đỏ

- Phản ứng màu : Hòa 10 mg chất khử vào 2 ml NaOH 10%, đun nước:

Xuất hiện màu tím đỏ, chuyển sang màu vàng khi thêm HCl 10% tới pH acid

Hình ảnh thí nghiệm

- Dung dịch 1: Hòa tan 40 mg metronidazol và HCl 0,1 M thành 100 ml

- Dung dịch 2: Pha loãng 5 ml d.d 1 bằng HCl 0,1M thành 100 ml

Đo nhanh độ hấp thụ của các d.d 2 ở bước song 277 nm

Tính hàm lượng metronidazole C6H9O3N3 trong chế phẩm thử, lấy trị số hấp thụ riêng E ( 1%,1 cm) ở 277 nm bằng 372

Chất này trong chế phẩm thử phải đạt 99,0 – 101,0% (chất khô)

Ta có : A = E L C

Với L = 1 cm ; A đo =0,843 ; m = 0,0415 ( mg)

Thực hành hóa dược II

5

MEBENDAZOL Công thức:

C6H13N3O3

Phân tử lượng 295,3

Tính chất: Bột kết tinh màu trắng hoặc hơi vàng nâu, nhẹ xốp, không mùi Khó tan trong nước, ethanol, ether; tan nhẹ trong acid acetic đặc; rất ít tan trong aceton, cloroform; tan trong acid fomic và hỗn hợp acid formic và isopropanol

Định tính:

Phản ứng màu: Trộn 10 mg mebendazol với 5 ml ethanol 96%, thêm 1 ml dung dịch dinitrobenzene 1% trong ethanol 96% và 1 ml dung dịch NaOH 2M, trộn đều: Xuất hiện màu vàng đậm

Hình ảnh mebendazol phản ứng xuất hiện màu vàng đậm

Thực hành hóa dược II

6

Bài 2 PROMETHAZIN HYDROCLORID, CÁC SULFAMID

I KIỂM NGHIỆM PROMRTHAZIN HYDROCLORID

3.1 Dế bị oxy hoá (nhân phenothiazin), tiến hành các phép thử sau:

Pha dung dịch chất thử 0,1%; lấy vào ống nghiệm 1,5 ml rồi thêm thuốc thử : -Ống nghiệm 1: Thêm vài giọt acid sulfuric đậm đặc: Xuất hiện màu hồng

Tiến hành: Cho vào mỗi ống nghiệm 3 ml dung dịch thử 1%, thêm thuốc thử:

- Ống nghiệm 1: Thêm 2-3 ml acid picric 1% : Xuất hiện tủa màu hồng

Hình ảnh thí nghiệm ống nghiệm 1

A Các Sulfamid: 2 dạng acid và muối natri:

Sulfadiazin, Sulfadimerazin (hoặc muối mononatri ), sulfaguanidin,

Sulfamethoxazol, sulfacetamid natri

Dạng muối natri dễ tan trong nước, dung dịch kiềm và HCl loãng

Hóa tính: Tiến hành thử đồng thời các sulfamid

1 Thử độ tan trong nước, acid và kiềm:

a) Trong nước: Lấy khoảng 0,1 g chất thử vào ống nghiệm chứa 3 ml nước, lắc

nhẹ, nhận xét độ tan:

- Dạng acid khó tan trong nước; dạng muối mononatri dễ tan

Giữ lại các ống thử cho phép thử tiếp theo

b) Trong HCl 10%: Tiến hành như (a), thay nước bằng 3 ml HCl 10%

Nhận xét: Tất cả các sulfamid đều tan

Giữ lại các ống dung dịch sulfamid cho phép thử sau

c) Trong NaOH 0,1M:

Lấy khoảng 0,05 g sulfamid acid cho vào 3 ml NaOH 0,1M và lắc nhẹ

Nhận xét: Chỉ sulfaguanidin không tan

Giữ lại các ống dung dịch sulfamid cho các phép thử sau

Thực hành hóa dược II

10

2 Phản ứng đặc trưng của amin thơm I (tạo phẩm màu nitơ ):

- Tiến hành: Dùng ống thử trong phép thử độ tan trong HCl 10% trên, thêm

1 giọt NaNO2 0,1 M, trộn đều, để vào chổ lạnh (ống thử 1 )

Trong một ống khác, hòa tan 0,1 g 2 –naphtol vào 2 ml NaOH 10% Cho từng giọt dung dịch này vào ống thử: Xuất hiện màu đỏ và tủa đỏ

3 Phản ứng tạo muối Cu:

Mỗi sulfumid cho muối kết tủa với Cu2+

có màu riêng Dùng phản ứng này để phân biệt sơ bộ các sulfamid

Tiến hành:

- Với sulfamid mononatri: Dùng ống trong phép thử độ tan trong nước, thêm từ từ

từng giọt CuSO4 5% Mỗi sulfumid có màu đặc trưng:

Sulfacylum cho tủa màu xanh ngọc bền

Sulfadiazin natri cho màu xanh lục, chuyển chậm sang nâu-tím

- Với sulfamid acid: Dùng ống thử trong thử độ tan trong NaOH 0,1M: thêm bột

sulfamid tương ứng vào các ống thử đến bảo hòa, lắc trong 5 phút, lọc lấy dịch lọc trong Thêm từng giọt CuSO4 5% vào dịch lọc sẽ xuất hiện màu

Sulfamethoxazol cho màu xanh lục bền

Sulfadimerazin cho tủa màu xanh lục, chuyển dần sang đỏ nâu

Thực hành hóa dược II

11

Hình ảnh thí nghiệm cho tủa màu xanh lục, chuyển dần sang đỏ nâu

ml; Khay sứ nhiều lỗ; Nồi cách thủy

- Thuốc thử: H2SO4 98% và 15%; HCl đặc và 18% (1/2); HNO3 10%; Acid acetic 1%; NaOH 10% và 2 M; NaNO2 0,1 M; AgNO3 5%; CuSO4 5%; Kẽm hạt; 2-naphtol; Bản silica gel GF254 ; clorroform; methanol; aceton; formol

I- KIỂM NGHIỆM CLOTRAMPHENICOL

1 Công thức:

C11H12O5N2Cl2

Phân tử lượng: 323,13

2 Tính chất:

Bột kết tinh màu trắng hoặc trắng ánh vàng, vị rất đắng

Độ tan: Tan rất ít trong nước; tan trong aceton, ethanol, ethylacetat

Nhiệt độ nóng chảy 149 – 153oC [α]D20

+ 18,5o đến 20,5o

(ethanol)

3 Hóa tính:

A Các phản ứng của nitrophenyl và clo hữu cơ

Nguyên tắc: Trong dung dịch, dưới tác dụng của H mới sinh (dùng Zn/H+

), nhóm nitro chuyễn thành nhóm amin thơm I; các nguyên tử clo hữu cơ sẽ

Thực hành hóa dược II

13

chuyển sang dạng ion Cl

(vô cơ )

Tiến hành: Trong ống nghiệm, phân tán 0,10 g chloramphenicol vào 5 ml

acid sulfuric 15% Thả 2 viên kẽm hạt và để sôi bọt khí, thỉnh thoảng lắc, đến khi tan hết kẽm Lọc lấy dịch lọc để tiến hành các phản ứng sau:

1 Phản ứng của amin thơm I: Lấy 1 ml dịch lọc vào ống nghiệm, thêm 1 – 2 giọt NaNO2 0,1M Thêm 0,5 ml ding dịch 2-naphtol 0,5% : xuất hiện tủa

màu trắng xám, tan trong amoniac

Hình ảnh thí nghiệm xuất hiện tủa

2 Ion Cl - : Lấy 1 ml dịch lọc, thêm 5 giọt AgNO3 5%: Xuất hiện kết tủa

màu trắng xám, tan trong amoniac

Hình ảnh thí nghiệm xuất hiện kết tủa

- Pha tĩnh : Sylica gel GF254

- Pha động: Cloroform- Methanol- Nước (90 : 10 : 1)

- Dung dịch thử: 50 mg chloramphenicol chuẩn trong 10 ml aceton

- Dung dịch đối chiếu: 50 mg chloramphenicol chuẩn trong 10 ml aceton Chấm riêng biệt các dung dịch thử và đối chiếu lên bản sắc ký

+ Vết 1: 2 µl dung dịch thử

+ Vết 2: 2 µl dung dịch đối chiếu

Triển khai sắc ký trong pha động đến chiều cao 15 cm; lấy bản mỏng ra,

để khô ngoài không khí rồi kiểm tra dưới đèn UV 254 nm

- Nhận định kết quả: Vết chính trên sắc đồ 1 trùng hợp với chính trên sắc

đồ vết 2 về vị trí (Rf) và màu sắc

Thử tinh khiết:

Giới hạn clorid: DĐVN IV

Lấy 1,0 g chất thử trộn vào 20 ml nước và 10 ml HNO3 10%; lắc trong 5 phút; lọc qua giấy lọc (đã rửa bằng nước tới hết tủa trắng với AgNO3 5% )

Lấy 15 ml dịch lọc làm dung dịch thử

Định lượng: Phương pháp quang phổ UV

Nguyên tắc: Cloramphenicol có 1 cực đại hấp thụ ở 278 nm với cường độ

hấp thụ cao, cho phép định lượng bằng quang phổ UV

Tiến hành:

- Dung dịch 1: Trong cốc dung tích 250 ml hòa 90-100 mg chất thử vào

200 ml nước, khuấy kỹ (có thể nâng nhiệt độ 50oC ) đến tan hết

Chuyển dịch vào bình định mức dung tích 250 ml Tráng cốc pha dịch bằng nước nhiều lần, tập trung nước tráng vào bình định mức Thêm nước tới

Hình ảnh pha loảng dung dịch trong bình định mức

- Đo độ hấp thụ dung dịch 2 trên máy quang phổ UV ở 278 nm, cốc đo 1

cm

Tính hàm lượng C11H12N2O5Cl2 , lấy E (1%, 1 cm) ở 278 nm bằng 297 Hàm lượng chất này phải đạt 98,0- 102,0% trong chế phẩm thử

II- NHẬN THỨC, ĐỊNH TÍNH: ERYTHROMYCIN, TETRACYCLIN VÀ MỘT SỐ KHÁNG SINH β- LACTAM

1 ERYTHROMYCIN STEARAT

Tính chất: Bột kết tinh màu trắng, không mùi, vị đắng

Độ tan: Khó tan trong nước ; tan trong aceton, methanol

Các phản ứng màu:

Hòa tan 10 mg chất thử vào 5 ml HCl đặc; để yên: Xuất hiện màu vàng

Thực hành hóa dược II

16

2 BENZYL PENICILLIN NATRI ( KALI )

Tên khác: Penicillin G Natri (Kali)

Công thức :

C16H17N2NaO4S

Phân tử lượng : 356,40

Tính chất: Bột kết tinh màu trắng hoặc gần như trắng, mùi đặc trưng

Độ tan: Dễ tan trong nước; khó tan trong ethanol

Hình ảnh thí nghiệm

Thực hành hóa dược II

17

Sự thay đổi màu sắc của penicillin và cephalosporin như bảng sau:

Bảng 1 : Phản ứng màu phân biệt kháng sinh β-lactam

Tên mẫu thử Với TT For-sul

Lúc mới trộn

Với TT For-sul Sau 1 phút/100oC Amoxycillin trihydrat Không màu Vàng sẫm

Ampicillin trihydrat Không màu Vàng sẫm

Benzathin penincillin G Không màu Nâu đỏ

Benzylpenicillin natri Không màu Nâu đỏ

2 Kết tủa penincillin G dạng acid:

Tiến hành: Hòa tan 50 mg penicillin G natri vào 2 ml nước Thêm từng

giọt HCl 18% ( 1/2 ) tới xuất hiện tủa màu trắng Tiếp tục thêm acid HCl : tủa tan dần

Hình ảnh thí nghiệm

Tính chất: Bột kết tinh màu trắng đục , mùi thơm đặc trưng

Độ tan: Tan nhẹ trong nước (1 kg/ khoảng 100 ml nước ) ; khó tan trong

một số dung môi hữu cơ: ethanol, ether v.v…

Hóa tính, định tính:

1 Phản ứng phân biệt kháng sinh beeta-lactam:

Tiến hành như với penicillin G natri; kết quả theo bảng 1

2 Phản ứng màu: Trộn 20 mg chất thử với 2-3 giọt acid acetic 1%, thêm

2 giọt CuSO4 1% và 0,2 ml NaOH 2M : Xuất hiện màu xanh (ô-lưu )

Thực hành hóa dược II

19

ài 4 ISONIAZID, STREPTOMYCIN SULFAT ,RIFAMYCIN

I/ KIỂM NGHIỆM ISONIAZID :

Công thức: C6H7N3O

Phân tử lượng: 137,10

Tên Khoa H c : I onicotinohydra id

Tính chất : Bột kết tinh màu trắng ,không mùi

Dễ tan trong nước ;tan nhẹ trong ethanol,khó tan trong ether và một

Thực hành hóa dược II

20

Tiến hành : lấy 2 ml dd isoniazid 2% vào ống nghiệm ,thêm 2-3giọt ddAgNO35%: Xuất hiện tủa màu trắng Đun sôi hỗn hợp sẽ xuất hiện dần tủa màu đen của Ag kim loại

Hình ảnh thí nghiệm

B/ Với CuSO4: Phức với Cu có màu xanh ngọc

Tiến hành : lấy 2ml dd isoniazid 2% vào ống nghiệm ,thêm 2-3giọt dd CuSO4

5%: xuất hiện tủa màu xanh ngọc

Hình ảnh thí nghiệm

Đun sôi hỗn hợp trong 30 phút : màu xanh ngọc chuyển dần màu nâu đỏ (thấy CuSO4 bằng 1 ml Fehling A B ,đun sôi,tủa Cu2O tạo ra nhanh hơn.)

Thực hành hóa dược II

22

Độ trong và màu sắc của dung dịch :

Dung dịch thử: Hòa tan 2,5 g chế phẩm trong nước không có carbon dioxyd (TT) và pha loãng thành 50 ml với cùng dung môi

Dung dịch phải trong ,so với nước cất

Lấy 15 ml dd thử vào ống nghiệm, so sánh với 15ml dd màu mẫu VN7 và không được có màu đậm hơn màu mẫu VN7

pH của dung dịch S từ 6,0 đến 8,0 ( đo trên máy đo pH)

Định lượng: Bằng phương pháp đo brom

Nguyên tắc:

Tiến hành:

Dung dịch S: Hòa tan 0,25 g chất thử vào nước vừa đủ 100 ml

- Mẫu thử: Lấy chính xác 20 ml dung dịch S vào bình nón dung tích 250 ml; thêm

100 ml nước, 20 ml HCl đặc và 0,20 g KBr; thêm 2-3 giọt chỉ thị đỏ metyl rồi chuẩn độ bằng dung dịch kali bromate 0,1 N đến mất màu đỏ Ghi V1 ml

Thể tích kali bromat 0,1 N tương ứng lượng isoniazid : V(ml) = V1-V2

1 ml kali bromat 0,1 N tương đương 3,429 mg C6H7N3O

Hàm lượng chất này trong chế phẩm thử phải đạt 99,0 – 101,0%

Hình ảnh mẫu thử và mẫu trắng

Tính chất: Bột màu trắng, không mùi, vị đắng, bền trong không khí

Dễ tan trong nước; không tan trong ethanol.ether, clorform

Hóa tính, định tính:

1.1 Nhóm thế guanine: Đun isoniazid trong NaOH đặc sẻ giải phóng NH3

Tiến hành: Hòa tan 100 mg chất thử vào 3 ml NaOH 15%, đun sôi: hơi bốc ra chuyển giấy quì đỏ thành xanh

Hình ảnh chuyển màu của giấy quỳ đỏ sang xanh

Thực hành hóa dược II

25

1.2 Phản ứng tạo maltol (đặc trưng của streptomycin):

Khi đun nóng dung dịch streptomycin trong NaOH loãng, phần đường

streptose biến đổi thành phân tử maltol; ở môi trường trung tính maltol tạo phức

màu tím đỏ với ion Fe3+

Tiến hành: Hòa tan 10 mg chất thử vào 4 ml nước; thêm 1 ml NaOH 1M và đun

cách thủy khoảng 5 phút Sau khi để nguội, dùng HCl 2M chỉnh hỗn hợp về pH

trung tính hoặc acid nhẹ; thêm 2-3 giọt FeCl3 5%: Xuất hiện màu tím đỏ

1.2 Ion SO 4 2-: Lấy 2 ml dung dịch streptomycin sulfat 0,5% , acid hóa bằng

HCl 10%; thêm 0,5 ml dung dịch BaCl2 5%: Xuất hiện tủa màu trắng BaSO4

Tính chất: Bột kết tinh màu đỏ nâu, không mùi

Tan trong methanol; khó tan trong nước,aceton,ethanol 96% và ether

2 Phổ hấp thụ UV

Cân 20 nang lấy trị số khối lượng trung bình/nang Bóc vỏ nang vf nghiền thành bột mịn phần thuốc trong nang

- Dung dịch 1: Cân chính xác lượng bột mịn tương đương 100 mg rifampicin

Hòa tan vào 40 ml methanol, chuyển vào bình định mức dung tích 100 ml Dùng methanol tráng cốc và chuyển dịch tráng vào bình định mức, với tổng thể tích methanol là 50 ml Thêm methanol vào bình đến vạch; trộn đều

- Dung dịch 2: Lấy chính xác 1 ml dung dịch 1 vào bình định mức dung tích 50

ml; thêm dung dịch đệm phosphate pH =7,4 đến vạch, trộn đều

Vẽ phổ hấp thụ UV của rifampicin từ dung dịch 2 trong khoảng 220- 500 nm + Với mục đích định tính: methanol; dung dịch đệm phosphate pH 7,4 ;

Phổ hấp thụ của dung dịch 2 có 4 cực đại hấp thụ ở 237; 254;334 và 475

nm Tỷ số E334 bằng khoảng 1,75

+Với mục đích định lượng:

Đo độ hấp thu dung dịch 2 ở 475 nm, dùng đệm phosphat pH =7,4 làmmẫu trắng Tính hàm lượng C43N58N4O12 lấy trị số E(1%, 1 cm ) ở 475 nm bằng 187 Hàm lượng C43N58N4O12 phải đạt 92,5 -107,5 % lượng ghi trên nhãn

Thực hành hóa dược II

27

3

Bài 5 PREDNISOLON ACETAT, GLIBENCLAMID, LEVOTHYROXIN

NATRI

I KIỂM NGHIỆM PREDNISOLON ACETAT

1 Sơ lược ho t chất

- Công thức:C23H30O6

- Tính chất: Bột kết tinh màu trắng, hoặc gần như trắng Không tan trong

nước, tan vừa trong ethanol, methylen clorid

2 Định tính với phản ứng màu và huỳnh quang

- Mô tả thí nghiệm: Cho vào ống nghiệm 2mg mẫu thử + 2ml H2SO4 đặc,

sau 5 phút xuất hiện màu đỏ đậm

Hình ảnh thí nghiệm

Đặt dưới đèn UV 365nm, phát huỳnh quang màu nâu đỏ nhạt

Hình ảnh thí nghiệm

Đem dung dịch 2 thu được đo quang ở bước sóng 243nm

Kết quả: Mật độ quang tại bước sóng 243nm đo được là A = 0.74

Theo định luật Lambert Beer: A = E(1cm, 1%).L.C

Với E(1cm,1%) ở 243nm = 370 và L = 1cm

Nồng độ prednisolon acetat trong dung dịch đem đo quang được tính là:

C = 0.74/370 = 2 x10-3 % Dung dịch prednisolon acetat đem đo được pha loãng 50 lần, do đó nồng

độ prednisolon acetat trong dung dịch 1(100ml) ban đầu là 50xC %

Ta tính được khối lượng prednisolon acetat thực tế đo được là:

2 x10-3 % x 50 x 100 = 0.1 gam

Hàm lượng mẫu: H = (0.1/0.1) x 100% = 100%

Nhận xét: Mẫu đạt (giới hạn 99 – 101%)

1.1 Định tính bằng phản ứng huỳnh quang và t o màu

- Mô tả thí nghiệm: Lấy 20mg mẫu thử cho vào ống nghiệm + 2ml

H2SO4 đặc, tạo thành dung dịch không màu Khi đem soi dưới đèn UV

365 thì thấy phát huỳnh quang màu

Tiếp tục cho thêm 0.1 gam cloral hydrat vào ống nghiệm, lắc đều, khoảng

5 phút sau thấy có màu vàng đậm, sau 20 phút thì có màu nâu nhạt

Hình ảnh thí nghiệm

- Kết luận: mẫu đúng

1.2 Định lượng bằng phương pháp acid ba e:

- Mô tả thí nghiệm: Lấy 0.4 gam mẫu thử cho vào erlen 250ml, thêm 100ml ethanol 96%, lắc đều cho tan, thêm vài giọt chỉ thị phenolphtalein Tiến hành chuẩn độ bằng NaOH 0.1M đến xuất hiện màu hồng nhạt bền

Hình ảnh thí nghiệm

- Kết quả: VNaOH 0.1M đã dùng = 8.1 ml