Báo cáo thực hành hóa dược II Trường đại học Võ trường Toản

TRƯỜNG ĐẠI HỌC VÕ TRƯỜNG TOẢN KHOA DƯỢC BÁO CÁO THỰC HÀNH HÓA DƯỢC II Giảng viên hướng dẫn : HỨA HỮU BẰNG Sinh viên thực : Đỗ Khánh Lộc Trần Quốc Duy Lê Thị Yến Ông Tuấn Vũ Nguyễn Hiền Hậu Hậu Giang Tháng 04/2016 BÀI METRONIDAZOL, QUININ SULFAT MEBENDAZOL KIỂM NGHIỆM METRONIDAZOL: Công thức phân tử: C6H9O3N3 Phân tử lượng: 171,20 Tính chất: Bột kết tinh màu trắng vàng, vị đắng, dễ biến màu ánh ánh sáng Khó tan nước dung môi hữu cơ, tan acid vơ lỗng Hóa tính, định tính: a) Phản ứng xác định nhóm nitro thơm: - Tính chất: Bột kết tinh màu trắng vàng, vị đắng; dễ biến màu ánh sang Khó tan nước dung mơi hữu cơ; tan acid vơ lỗng + Xác định nhiệt độ nóng chảy: F= 159 −163oC + Phản ứng xác định nhóm nitro thơm: Nguyên tắc : Khử nhóm –NO2 H sinh thành nhóm −NH2; sản phẩm tạo thành cho phản ứng đặc trưng amin thơm I Thực hành hóa dược II Tiến hành: - Ống nghiệm 1: Đun nồi cách thủy 5-10 phút hỗn hợp gồm : 10 mg metronidazol; ml nước; 0,5 ml HCl 10% viên kẻm hạt; để nguội , lọc thu dịch lọc Thêm 1-2 giọt NaNO2 0,1M vào dịch lọc, trộn - Ống nghiệm 2: Hòa tan khoảng 0,1 g 2-naphtol vào ml NaOH 10% đun nhẹ: Xuất màu tím đỏ, chuyển sang màu vàng thêm HCl 10% tới pH acid Hình ảnh ống nghiệm xuất màu tím đỏ - Phản ứng màu: Hòa 10 mg chất khử vào ml NaOH 10%, đun nước: Xuất màu tím đỏ, chuyển sang màu vàng thêm HCl 10% tới pH acid Hình ảnh thí nghiệm Thực hành hóa dược II - Định lượng: + Phương pháp quang phổ UV: Tiến hành: - Dung dịch 1: Hòa tan 40 mg metronidazol HCl 0,1 M thành 100 ml - Dung dịch 2: Pha loãng ml d.d HCl 0,1M thành 100 ml Đo nhanh độ hấp thụ d.d bước song 277 nm Tính hàm lượng metronidazole C6H9O3N3 chế phẩm thử, lấy trị số hấp thụ riêng E ( 1%,1 cm) 277 nm 372 Chất chế phẩm thử phải đạt 99,0 – 101,0% (chất khơ) Ta có : A = E L C Với L = cm ; A đo =0,843 ; m = 0,0415 ( mg) Thực hành hóa dược II MEBENDAZOL Cơng thức: C6H13N3O3 Phân tử lượng 295,3 Tính chất: Bột kết tinh màu trắng vàng nâu, nhẹ xốp, không mùi Khó tan nước, ethanol, ether; tan nhẹ acid acetic đặc; tan aceton, cloroform; tan acid fomic hỗn hợp acid formic isopropanol Định tính: Phản ứng màu: Trộn 10 mg mebendazol với ml ethanol 96%, thêm ml dung dịch dinitrobenzene 1% ethanol 96% ml dung dịch NaOH 2M, trộn đều: Xuất màu vàng đậm Hình ảnh mebendazol phản ứng xuất màu vàng đậm Thực hành hóa dược II Bài PROMETHAZIN HYDROCLORID, CÁC SULFAMID I KIỂM NGHIỆM PROMRTHAZIN HYDROCLORID Công thức: C17H20N2S.HCl Phân tử lượng: 320,89 Tính chất: Bột kết tinh màu trắng, khơng mùi, vị đắng, tê lưởi nóng nếm (có thể phồng rộp lưỡi) Bị sẫm màu phơi khơng khí ánh sáng Độ tan: Dễ tan nước, ethanol, cloroform ; không tan ether Dung dịch 1g/10ml nước có pH 4,00 đến 5,00 Chú ý: Rửa dụng cụ tay nước acid hóa Hóa tính, định tính 3.1 Dế bị oxy hoá (nhân phenothiazin), tiến hành phép thử sau: Pha dung dịch chất thử 0,1%; lấy vào ống nghiệm 1,5 ml thêm thuốc thử : -Ống nghiệm 1: Thêm vài giọt acid sulfuric đậm đặc: Xuất màu hồng Thực hành hóa dược II Hình ảnh thí nghiệm ống nghiệm - Ống nghiệm 2: Thêm vài giọt FeCl3 5% : Xuất màu hồng Hình ảnh thí nghiệm ống nghiệm 3.2 Tính Base: Kết tủa với thuốc thử chung alcaloid: Tiến hành: Cho vào ống nghiệm ml dung dịch thử 1%, thêm thuốc thử: - Ống nghiệm 1: Thêm 2-3 ml acid picric 1% : Xuất tủa màu hồng Hình ảnh thí nghiệm ống nghiệm Thực hành hóa dược II - Ống nghiệm : Thêm vài giọt dung dịch iod 0,05M : Xuất tủa màu nâu Hình ảnh thí nghiệm ống nghiệm 3.2 Acid HCl: Dung dịch 1%, thêm vài giọt HNO3 10% giọt AgNO3 5% : Xuất tủa AgCl màu xám trắng, vón; tan amoniac Hình ảnh thí nghiệm NHẬN THỨC , ĐỊNH TÍNH CÁC SULFAMID A Các Sulfamid: dạng acid muối natri: Sulfadiazin, Sulfadimerazin (hoặc muối mononatri ), sulfaguanidin, Sulfamethoxazol, sulfacetamid natri Dạng acid Thực hành hóa dược II Dạng muối Natri Tính chất chung: Bột kết tinh màu trắng, vị đắng nhẹ dư vị Bị biến màu chậm để trần khơng khí ánh sáng Dạng acid khó tan nước, tan dung dịch kiềm acid vơ (lưỡng tính ), trừ sulfaguanidin không tan dung dịch kiềm; tan số dung môi hữu Dạng muối natri dễ tan nước, dung dịch kiềm HCl lỗng Hóa tính: Tiến hành thử đồng thời sulfamid Thử độ tan nước, acid kiềm: a) Trong nước: Lấy khoảng 0,1 g chất thử vào ống nghiệm chứa ml nước, lắc nhẹ, nhận xét độ tan: - Dạng acid khó tan nước; dạng muối mononatri dễ tan Giữ lại ống thử cho phép thử b) Trong HCl 10%: Tiến hành (a), thay nước ml HCl 10% Nhận xét: Tất sulfamid tan Giữ lại ống dung dịch sulfamid cho phép thử sau c) Trong NaOH 0,1M: Lấy khoảng 0,05 g sulfamid acid cho vào ml NaOH 0,1M lắc nhẹ Nhận xét: Chỉ sulfaguanidin không tan Giữ lại ống dung dịch sulfamid cho phép thử sau Thực hành hóa dược II Phản ứng đặc trưng amin thơm I (tạo phẩm màu nitơ ): - Tiến hành: Dùng ống thử phép thử độ tan HCl 10% trên, thêm giọt NaNO2 0,1 M, trộn đều, để vào chổ lạnh (ống thử ) Trong ống khác, hòa tan 0,1 g –naphtol vào ml NaOH 10% Cho giọt dung dịch vào ống thử: Xuất màu đỏ tủa đỏ Phản ứng tạo muối Cu: Mỗi sulfumid cho muối kết tủa với Cu2+ có màu riêng Dùng phản ứng để phân biệt sơ sulfamid Tiến hành: - Với sulfamid mononatri: Dùng ống phép thử độ tan nước, thêm từ từ giọt CuSO4 5% Mỗi sulfumid có màu đặc trưng: Sulfacylum cho tủa màu xanh ngọc bền Sulfadiazin natri cho màu xanh lục, chuyển chậm sang nâu-tím - Với sulfamid acid: Dùng ống thử thử độ tan NaOH 0,1M: thêm bột sulfamid tương ứng vào ống thử đến bảo hòa, lắc phút, lọc lấy dịch lọc Thêm giọt CuSO4 5% vào dịch lọc xuất màu Sulfamethoxazol cho màu xanh lục bền Sulfadimerazin cho tủa màu xanh lục, chuyển dần sang đỏ nâu Thực hành hóa dược II 10 BENZYL PENICILLIN NATRI ( KALI ) Tên khác: Penicillin G Natri (Kali) Công thức : C16H17N2NaO4S Phân tử lượng : 356,40 Tính chất: Bột kết tinh màu trắng gần trắng, mùi đặc trưng Độ tan: Dễ tan nước; khó tan ethanol Hóa tính, định tính: Phản ứng màu phân biệt beta-lactam: Tiến hành: Cho mg chất thử vào ống nghiệm ( 1,5 cm x 1,5 cm ), làm ẩm bột thử giọt nước Thêm ml thuốc thử formaldehyde- acid sulfuric 98%, trộn Quan sát thay đổi màu thêm thuốc thử sau để vào nồi cách thủy sôi phút Hình ảnh thí nghiệm Thực hành hóa dược II 16 Sự thay đổi màu sắc penicillin cephalosporin bảng sau: Bảng : Phản ứng màu phân biệt kháng sinh β-lactam Tên mẫu thử Với TT For-sul Lúc trộn Với TT For-sul Sau phút/100oC Amoxycillin trihydrat Không màu Vàng sẫm Ampicillin trihydrat Không màu Vàng sẫm Benzathin penincillin G Không màu Nâu đỏ Benzylpenicillin natri Không màu Nâu đỏ Penicillin V Nâu đỏ Nâu đỏ sẫm Cephalexin Vàng nhạt Vàng sẫm Cephaloridin Đỏ Đỏ nâu Cephalothin natri Đỏ Đỏ nâu Ghi chú: Viết tắt TT for-sul = Thuốc thử formaldehyde –acid sulfuric 96% Cách pha: Hòa 0,1 ml formaldehyde vào ml acid sulfuric 96% (đậm đặc ) Kết tủa penincillin G dạng acid: Tiến hành: Hòa tan 50 mg penicillin G natri vào ml nước Thêm giọt HCl 18% ( 1/2 ) tới xuất tủa màu trắng Tiếp tục thêm acid HCl : tủa tan dần Hình ảnh thí nghiệm Thực hành hóa dược II 17 CEPHALEXIN MONOHYDRAT Cơng thức: C16H17H3O4S.H2O Phân tử lượng: 365,40 Tính chất: Bột kết tinh màu trắng đục , mùi thơm đặc trưng Độ tan: Tan nhẹ nước (1 kg/ khoảng 100 ml nước ) ; khó tan số dung mơi hữu cơ: ethanol, ether v.v… Hóa tính, định tính: Phản ứng phân biệt kháng sinh beeta-lactam: Tiến hành với penicillin G natri; kết theo bảng Phản ứng màu: Trộn 20 mg chất thử với 2-3 giọt acid acetic 1%, thêm giọt CuSO4 1% 0,2 ml NaOH 2M : Xuất màu xanh (ơ-lưu ) Thực hành hóa dược II 18 ài ISONIAZID, STREPTOMYCIN SULFAT ,RIFAMYCIN I/ KIỂM NGHIỆM ISONIAZID : Công thức: C6H7N3O Phân tử lượng: 137,10 Tên Khoa H c : I onicotinohydra id Tính chất : Bột kết tinh màu trắng ,không mùi Dễ tan nước ;tan nhẹ ethanol,khó tan ether số dung mơi khác Hóa tính, định tính : Phản ứng với im lo i : A/ Với AgNO3: Tạo phức kết tủa màu trắng nhiệt độ phịng Thực hành hóa dược II 19 Tiến hành : lấy ml dd isoniazid 2% vào ống nghiệm ,thêm 2-3giọt ddAgNO3 5%: Xuất tủa màu trắng Đun sôi hỗn hợp xuất dần tủa màu đen Ag kim loại Hình ảnh thí nghiệm B/ Với CuSO4: Phức với Cu có màu xanh ngọc Tiến hành : lấy 2ml dd isoniazid 2% vào ống nghiệm ,thêm 2-3giọt dd CuSO4 5%: xuất tủa màu xanh ngọc Hình ảnh thí nghiệm Đun sôi hỗn hợp 30 phút : màu xanh ngọc chuyển dần màu nâu đỏ (thấy CuSO4 ml Fehling A B ,đun sôi,tủa Cu2O tạo nhanh hơn.) Thực hành hóa dược II 20 Hình ảnh thí nghiệm 2/ Phản ứng tạo hydrazon : Nguyên tắc : Phần hydrazin phân tử isoniazid gặp 1andehydsẽ loại phân tử H2O, tạo hydrazon,ví dụ với vanilin tạo phân tử Phtivazid sau : Tiến hành: Hoà tan 0,1 g chế phẩm ml nước,thêm ml dung dịch nóng 0,10 g vanilin (TT).Đun nóng ,khuấy nhẹ thỉng thoảng cọ đầu đ a đ a thủy tinh lên thành ống nghiệm phía , có tủa vàng, tủa sau kết tinh hình kim lại ml ethanol 70% Thực hành hóa dược II 21 Độ màu sắc dung dịch : Dung dịch thử: Hòa tan 2,5 g chế phẩm nước khơng có carbon dioxyd (TT) pha loãng thành 50 ml với dung môi Dung dịch phải ,so với nước cất Lấy 15 ml dd thử vào ống nghiệm, so sánh với 15ml dd màu mẫu VN7 khơng có màu đậm màu mẫu VN7 pH dung dịch S từ 6,0 đến 8,0 ( đo máy đo pH) Định lượng: Bằng phương pháp đo brom Nguyên tắc: Tiến hành: Dung dịch S: Hòa tan 0,25 g chất thử vào nước vừa đủ 100 ml - Mẫu thử: Lấy xác 20 ml dung dịch S vào bình nón dung tích 250 ml; thêm 100 ml nước, 20 ml HCl đặc 0,20 g KBr; thêm 2-3 giọt thị đỏ metyl chuẩn độ dung dịch kali bromate 0,1 N đến màu đỏ Ghi V1 ml Thực hành hóa dược II 22 Hình ảnh mẫu thử - Mẫu trắng : Tiến hành mẫu thử, thay 20 ml dung dịch thử 20 ml nước cất: Ghi V2 ml thể tích dung dịch kali bromate 0,1 N mẫu trắng Thể tích kali bromat 0,1 N tương ứng lượng isoniazid : V(ml) = V1-V2 ml kali bromat 0,1 N tương đương 3,429 mg C6H7N3O Hàm lượng chất chế phẩm thử phải đạt 99,0 – 101,0% Hình ảnh mẫu thử mẫu trắng Thực hành hóa dược II 23 II- NHẬN THỨC, ĐỊNH TÍNH STREPTOMYCIN SULFAT, RIFAMPICIN STREPTOMYCIN SULFAT Cơng thức (C21H39N7O12)2.3H2SO4 Phân tử lượng 1457,40 Tính chất: Bột màu trắng, khơng mùi, vị đắng, bền khơng khí Dễ tan nước; khơng tan ethanol.ether, clorform Hóa tính, định tính: 1.1 Nhóm guanine: Đun isoniazid NaOH đặc sẻ giải phóng NH3 Tiến hành: Hịa tan 100 mg chất thử vào ml NaOH 15%, đun sôi: bốc chuyển giấy quì đỏ thành xanh Hình ảnh chuyển màu giấy quỳ đỏ sang xanh Thực hành hóa dược II 24 1.2 Phản ứng tạo maltol (đặc trưng streptomycin): Khi đun nóng dung dịch streptomycin NaOH loãng, phần đường streptose biến đổi thành phân tử maltol; mơi trường trung tính maltol tạo phức màu tím đỏ với ion Fe3+ Tiến hành: Hịa tan 10 mg chất thử vào ml nước; thêm ml NaOH 1M đun cách thủy khoảng phút Sau để nguội, dùng HCl 2M chỉnh hỗn hợp pH trung tính acid nhẹ; thêm 2-3 giọt FeCl3 5%: Xuất màu tím đỏ 1.2 Ion SO42-: Lấy ml dung dịch streptomycin sulfat 0,5% , acid hóa HCl 10%; thêm 0,5 ml dung dịch BaCl2 5%: Xuất tủa màu trắng BaSO4 Hình ảnh thí nghiệm RIFAMPICIN Cơng thức: C43H58N4O12 Phân tử lượng 823,0 Tính chất: Bột kết tinh màu đỏ nâu, không mùi Tan methanol; khó tan nước,aceton,ethanol 96% ether Thực hành hóa dược II 25 Định tính định lượng: Thử nang rifampicin Phản ứng màu: Lắc 25 mg chất thử với 25 ml nước khoảng phút, lọc lấy dịch lọc Thêm vào ml dịch lọc ml amonipersulfat 10% pha đệm phosphate pH 7,4; trộn kỹ vài phút: Màu chuyển từ vàng cam sang đỏ -tím Phổ hấp thụ UV Cân 20 nang lấy trị số khối lượng trung bình/nang Bóc vỏ nang vf nghiền thành bột mịn phần thuốc nang - Dung dịch 1: Cân xác lượng bột mịn tương đương 100 mg rifampicin Hòa tan vào 40 ml methanol, chuyển vào bình định mức dung tích 100 ml Dùng methanol tráng cốc chuyển dịch tráng vào bình định mức, với tổng thể tích methanol 50 ml Thêm methanol vào bình đến vạch; trộn - Dung dịch 2: Lấy xác ml dung dịch vào bình định mức dung tích 50 ml; thêm dung dịch đệm phosphate pH =7,4 đến vạch, trộn Vẽ phổ hấp thụ UV rifampicin từ dung dịch khoảng 220- 500 nm + Với mục đích định tính: methanol; dung dịch đệm phosphate pH 7,4 ; Phổ hấp thụ dung dịch có cực đại hấp thụ 237; 254;334 475 nm Tỷ số E334 khoảng 1,75 +Với mục đích định lượng: Đo độ hấp thu dung dịch 475 nm, dùng đệm phosphat pH = 7,4 làm mẫu trắng Tính hàm lượng C43N58N4O12 lấy trị số E(1%, cm ) 475 nm 187 Hàm lượng C43N58N4O12 phải đạt 92,5 -107,5 % lượng ghi nhãn Thực hành hóa dược II 26 Bài PREDNISOLON ACETAT, GLIBENCLAMID, LEVOTHYROXIN NATRI I KIỂM NGHIỆM PREDNISOLON ACETAT Sơ lược ho t chất - Cơng thức:C23H30O6 - Tính chất: Bột kết tinh màu trắng, gần trắng Không tan nước, tan vừa ethanol, methylen clorid Định tính với phản ứng màu huỳnh quang - Mơ tả thí nghiệm: Cho vào ống nghiệm 2mg mẫu thử + 2ml H2SO4 đặc, sau phút xuất màu đỏ đậm Hình ảnh thí nghiệm Đặt đèn UV 365nm, phát huỳnh quang màu nâu đỏ nhạt Hình ảnh thí nghiệm Thực hành hóa dược II 27 Thêm 10ml nước vào hỗn hợp, trộn, màu nhạt đi, huỳnh quang có màu vàng xanh lục đặt đèn UV 365nm Hình ảnh thí nghiệm - Kết luận: mẫu Định lượng quang phổ UV - Mơ tả thí nghiệm: + Lấy 100mg mẫu thử cho vào bình định mức 100ml, thêm ethanol 96% vừa đủ  dung dịch + Lấy 2ml dung dịch cho vào bình định mức 100ml, thêm ethanol 96% vừa đủ  dung dịch Đem dung dịch thu đo quang bước sóng 243nm Kết quả: Mật độ quang bước sóng 243nm đo A = 0.74 Theo định luật Lambert Beer: A = E(1cm, 1%).L.C Với E(1cm,1%) 243nm = 370 L = 1cm Nồng độ prednisolon acetat dung dịch đem đo quang tính là: C = 0.74/370 = x10-3 % Dung dịch prednisolon acetat đem đo pha loãng 50 lần, nồng độ prednisolon acetat dung dịch 1(100ml) ban đầu 50xC % Ta tính khối lượng prednisolon acetat thực tế đo là: x10-3 % x 50 x 100 = 0.1 gam Hàm lượng mẫu: H = (0.1/0.1) x 100% = 100% Nhận xét: Mẫu đạt (giới hạn 99 – 101%) Thực hành hóa dược II 28 II NHẬN THỨC, ĐỊNH TÍNH GLIBENCLAMID, LEVOTHYROXIN NATRI Glibenclamid C23H28ClN3O5S 1.1 Định tính phản ứng huỳnh quang t o màu Mơ tả thí nghiệm: Lấy 20mg mẫu thử cho vào ống nghiệm + 2ml H2SO4 đặc, tạo thành dung dịch không màu Khi đem soi đèn UV 365 thấy phát huỳnh quang màu Tiếp tục cho thêm 0.1 gam cloral hydrat vào ống nghiệm, lắc đều, khoảng phút sau thấy có màu vàng đậm, sau 20 phút có màu nâu nhạt Hình ảnh thí nghiệm - Kết luận: mẫu 1.2 Định lượng phương pháp acid ba e: - Mô tả thí nghiệm: Lấy 0.4 gam mẫu thử cho vào erlen 250ml, thêm 100ml ethanol 96%, lắc cho tan, thêm vài giọt thị phenolphtalein Tiến hành chuẩn độ NaOH 0.1M đến xuất màu hồng nhạt bền Hình ảnh thí nghiệm - Kết quả: VNaOH 0.1M dùng = 8.1 ml Thực hành hóa dược II 29 Ta có: 1ml NaOH 0.1M tương đương 49.4mg Glibenclamid Với 8.1ml NaOH 0.1M dùng có 8.1 x 49.4 = 400.14 mg Glibenclamid Ta tính hàm lượng mẫu thử là: % = (400.14/400)x 100% = 100% - Kết luận: mẫu đạt (giới hạn 99-101%) Levothyroxin natri - Định tính phản ứng màu: + Mơ tả thí nghiệm: Lấy 20 viên Levothyroxin 0.1mg nghiền thành bột mịn Lấy cho vào ống nghiệm + cồn ethanol 50% HCl đặc Đun sơi khoảng 30 giây, làm nguội, lọc Lấy dịch lọc cho vào ống nghiệm, thêm NaNO2 đun sơi, thấy xuất màu vàng, thêm amoniac đặc chuyển sang màu vàng cam Hình ảnh thí nghiệm + Nhận xét: Phản ứng chưa màu rõ ràng lắm, hóa chất, hay thao tác chưa chuẩn (Theo quy trình yêu cầu sử dụng amoniac đậm đặc, thực tế phịng thí nghiệm trang bị amoniac lỗng) Hình ảnh thí nghiệm Thực hành hóa dược II 30 ... tủa màu xanh lục, chuyển dần sang đỏ nâu Thực hành hóa dược II 10 Hình ảnh thí nghiệm cho tủa màu xanh lục, chuyển dần sang đỏ nâu Thực hành hóa dược II 11 Bài CLORAMPHENICOL, ERYTHROMYCIN TETRACYCLIN... nghiệm Thực hành hóa dược II - Định lượng: + Phương pháp quang phổ UV: Tiến hành: - Dung dịch 1: Hòa tan 40 mg metronidazol HCl 0,1 M thành 100 ml - Dung dịch 2: Pha loãng ml d.d HCl 0,1M thành... nitro thơm: Nguyên tắc : Khử nhóm –NO2 H sinh thành nhóm −NH2; sản phẩm tạo thành cho phản ứng đặc trưng amin thơm I Thực hành hóa dược II Tiến hành: - Ống nghiệm 1: Đun nồi cách thủy 5-10 phút