Nghiên cứu định lượng atenolol và các đồng phân đối quang trong một số chế phẩm thuốc và trong dịch sinh học

DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT : 1- acid glycoprotein : Chất phân tích (Analyte) ATN : Atenolol AN : Cyclodextrin CD CM--CD : Carboxymethyl-β-cyclodextrin : Nồng độ cực đại : Dược động học Cmax DĐH : Diethylamin : Điện di đồ DEA ĐDĐ : Đồng phân đối quang : Ethanol ĐPĐQ EtOH : Acid acetic : Huyết tương HAc HT : Methanol : Acetonitril MeOH MeCN : Người tình nguyện : Khối phổ (Mass spectrometry) NTN MS : Sinh khả dụng : Sắc ký đồ SKD SKĐ : Triethylamin : Acid trifloroacetic TEA TFA t1/2 : Thời gian bán thải Tmax : Thời gian đạt nồng độ cực đại : Tương đương sinh học TRIS : Tris(hydroxymethyl)aminomethan TĐSH : Tài liệu tham khảo : Tử ngoại (Ultraviolet) TLTK UV AUC : Diện tích đường cong (Area under the curve) : Albumin huyết bò (Bovine serum albumin) BSA : Điện di mao quản (Capillary electrophoresis) CE : Đầu dò mảng diod (Diode array detector) DAD : Cơ quan quản lý thuốc Châu âu (European Medicines Agency) EMA : Dòng điện thẩm (Electro-osmotic flow) EOF : Ion hóa phun sương điện tử (Electrospray ionization) ESI : Sắc ký khí (Gas chromatography) GC : Sắc ký lỏng hiệu cao (High performance liquid chromatography) HPLC : Mẫu kiểm tra nồng độ cao (High quality control) HQC : Albumin huyết người (Human serum albumin) HSA : Chất nội chuẩn (Internal standard) IS : Sắc ký lỏng khối phổ (Liquid chromatography – Mass spectrometry) LC-MS LC-MS/MS : Sắc ký lỏng – khối phổ/khối phổ (Liquid chromatography – tandem mass spectrometry) : Giới hạn định lượng (Lower limit of quantitation) LLOQ : Mẫu kiểm tra nồng độ thấp (Low quality control) LQC : Mẫu kiểm tra nồng độ trung bình (Medium quality control) MQC : Chiết pha rắn (Solid phase extraction) SPE : Cơ quan quản lý thực phẩm dược phẩm Mỹ US-FDA (United States – Food and Drug Administration) : Tổ chức Y tế giới (World Health Organization) WHO 2-PrOH : 2-Propanol AGP iii MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG VÀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 1.1.1 Tổng quan thuốc chứa dược chất đối quang .3 1.1.1.1 Khái niệm đồng phân đối quang 1.1.1.2 Một số dược chất có đồng phân đối quang tác dụng không giống 1.1.1.3 Tầm quan trọng việc phân tích đồng phân đối quang .5 1.1.1.4 Tình hình nghiên cứu phân tích đồng phân đối quang Việt Nam 1.1.2 Phương pháp phân tích đồng phân đối quang 1.1.2.1 Nguyên tắc chung 1.1.2.2 Phân loại tác nhân chọn lọc hoạt quang .11 1.1.2.3 Một số phương pháp phân tích đồng phân đối quang thường gặp 17 1.2 PHÂN TÍCH THUỐC TRONG DỊCH SINH HỌC 28 1.2.1 Các kỹ thuật xử lý, chiết tách dược chất mẫu sinh học .28 1.2.1.1 Kỹ thuật tủa protein .29 1.2.1.2 Kỹ thuật chiết lỏng – lỏng 30 1.2.1.3 Kỹ thuật chiết pha rắn 31 1.2.2 Phân tích thuốc dịch sinh học phương pháp sắc ký – khối phổ .32 1.2.2.1 Nguyên lý hoạt động thiết bị phân tích khối phổ 33 1.2.2.2 Cấu tạo phận thiết bị phân tích khối phổ 34 1.2.2.3 Định lượng thuốc dịch sinh học LC-MS/MS với nguồn ESI 35 1.2.3 Thẩm định phương pháp LC-MS/MS phân tích thuốc dịch sinh học 37 1.2.3.1 Mục đích thẩm định phương pháp phân tích 37 1.2.3.2 Các tiêu, tiêu chí thẩm định phương pháp phân tích 37 1.3 ATENOLOL, ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG VÀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 39 1.3.1 Công thức cấu tạo tính chất hóa lý atenolol 39 1.3.1.1 Công thức cấu tạo 39 1.3.1.2 Tính chất hóa lý .40 1.3.2 Các đặc tính dược lý, dược động học atenolol 40 1.3.2.1 Tác dụng chế .40 1.3.2.2 Chỉ định – chống định 40 1.3.2.3 Dạng thuốc hàm lượng 41 iv 1.3.2.4 Dược động học 41 1.3.2.5 Nghiên cứu dược lý, dược động học đồng phân đối quang atenolol 42 1.3.3 Các phương pháp phân tích atenolol đồng phân đối quang 42 1.3.3.1 Phân tích atenolol đồng phân đối quang nguyên liệu, chế phẩm thuốc 42 1.3.3.2 Phân tích atenolol đồng phân đối quang dịch sinh học 46 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 49 2.1 NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ 49 2.1.1 Dung môi, hóa chất chất chuẩn 49 2.1.1.1 Chất chuẩn, chất đối chiếu 49 2.1.1.2 Dung môi, hóa chất .49 2.1.1.3 Huyết tương 49 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ phân tích 50 2.1.2.1 Thiết bị phân tích 50 2.1.2.2 Dụng cụ phân tích 50 2.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 50 2.2.1 Mẫu thuốc nghiên cứu .50 2.2.1.1 Mẫu thuốc atenolol racemic 50 2.2.1.2 Mẫu thuốc S-Atenolol 51 2.2.2 Mẫu huyết tương người chứa atenolol 51 2.3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 52 2.3.1 Nghiên cứu định lượng atenolol đồng phân đối quang chế phẩm .52 2.3.1.1 Khảo sát xây dựng phương pháp 52 2.3.1.2 Thẩm định phương pháp định lượng atenolol đồng phân chế phẩm 55 2.3.1.3 Phân tích atenolol đồng phân đối quang số mẫu thuốc .56 2.3.2 Nghiên cứu định lượng ATN ĐPĐQ huyết tương LC-MS/MS .57 2.3.2.1 Khảo sát xây dựng phương pháp LC-MS/MS 57 2.3.2.2 Thẩm định phương pháp LC-MS/MS 58 2.3.2.2 Phân tích atenolol đồng phân huyết tương người LC-MS/MS 60 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 62 3.1 PHÂN TÍCH ATENOLOL VÀ CÁC ĐỒNG PHÂN TRONG CHẾ PHẨM 62 3.1.1 Nghiên cứu phương pháp CE phân tích đồng phân đối quang atenolol 62 3.1.1.1 Khảo sát, lựa chọn điều kiện điện di .62 3.1.1.2 Thẩm định phương pháp CE phân tích atenolol đồng phân chế phẩm .65 3.1.2 Nghiên cứu định lượng ĐPĐQ ATN chế phẩm HPLC 70 3.1.2.1 Nghiên cứu xây dựng phương pháp HPLC .70 v 3.1.2.2 Thẩm định phương pháp HPLC phân tích đồng phân đối quang atenolol 75 3.1.3 Phân tích atenolol đồng phân đối quang chế phẩm .84 3.1.3.1 Định lượng atenolol đồng phân số thuốc 84 3.1.3.2 Xác định tạp đồng phân đối quang số chế phẩm S-Atenolol 88 3.1.3.3 Định lượng atenolol đồng phân so sánh độ hòa tan in vitro 89 3.2 PHÂN TÍCH ATENOLOL VÀ CÁC ĐỒNG PHÂN TRONG HUYẾT TƯƠNG 90 3.2.1 Định lượng ĐPĐQ ATN huyết tương LC-MS/MS 90 3.2.1.1 Nghiên cứu xây dựng phương pháp 90 3.2.1.2 Thẩm định phương pháp LC-MS/MS định lượng ĐPĐQ ATN HT 100 3.2.2 Nghiên cứu định lượng atenolol toàn phần huyết tương LC-MS/MS 112 3.2.2.1 Xây dựng phương pháp LC-MS/MS định lượng atenolol toàn phần 112 3.2.2.2 Thẩm định phương pháp LC-MS/MS định lượng atenolol toàn phần 114 3.2.3 Phân tích atenolol đồng phân huyết tương NTN, bệnh nhân 119 3.2.3.1 Định lượng atenolol toàn phần huyết tương 119 3.2.3.2 Phân tích atenolol đồng phân huyết tương bệnh nhân 120 3.2.3.3 Phân tích atenolol đồng phân huyết tương người tình nguyện 121 CHƯƠNG BÀN LUẬN 130 4.1 PHÂN TÍCH ĐỒNG PHÂN ATENOLOL TRONG CHẾ PHẨM 130 4.1.1 Phân tích đồng phân đối quang atenolol phương pháp HPLC, CE 130 4.1.2 Kết phân tích atenolol đồng phân chế phẩm thuốc 134 4.2 PHÂN TÍCH ATENOLOL VÀ ĐỒNG PHÂN TRONG DỊCH SINH HỌC 135 4.2.1 Phương pháp LC-MS/MS phân tích atenolol đồng phân huyết tương 135 4.2.2 Kết phân tích ĐPĐQ ATN HT sinh khả dụng thuốc 140 4.3 CÁC ĐIỂM ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN 142 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 146 DANH SÁCH CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC vi DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Một số dược chất có ĐPĐQ tác dụng dược lý không giống Bảng 1.2 Tính chất hóa lý số cyclodextrin tự nhiên 14 Bảng 1.3 Một số phương pháp GC với pha tĩnh đặc hiệu phân tích ĐPĐQ 19 Bảng 1.4 Một số thuốc thử sử dụng phân tích ĐPĐQ phương 20 pháp HPLC Bảng 1.5 Một số nghiên cứu phân tích ĐPĐQ mẫu nguyên liệu chế 22 phẩm thuốc phương pháp HPLC Bảng 1.6 Một số nghiên cứu phân tích ĐPĐQ dịch sinh học phương 23 pháp HPLC LC-MS Bảng 1.7 Tóm tắt số ứng dụng phân tích ĐPĐQ CE sử dụng chất chọn 27 lọc hoạt quang dẫn chất CD Bảng 1.8 Một số đặc điểm khác phân tích dược chất chế phẩm 28 bào chế dịch sinh học Bảng 1.9 Tóm tắt đặc điểm, phạm vi áp dụng phương pháp GC-MS LC-MS 35 Bảng 1.10 Giá trị thông số dược động học atenolol số nghiên cứu 41 Bảng 1.11 Một số nghiên cứu định lượng ĐPĐQ atenolol nguyên liệu 43 chế phẩm thuốc phương pháp HPLC Bảng 1.12 Một số nghiên cứu định lượng ĐPĐQ ATN chế phẩm 45 phương pháp CE Bảng 1.13 Một số phương pháp HPLC định lượng atenolol dịch sinh học 47 Bảng 1.14 Một số nghiên cứu định lượng ĐPĐQ atenolol dịch sinh học 48 phương pháp HPLC Bảng 2.1 Cách chuẩn bị mẫu chuẩn ATN huyết tương 59 Bảng 3.1 Kết xác định độ phù hợp hệ thống điện di 65 Bảng 3.2 Mối tương quan nồng độ ATN diện tích pic điện di đồ 67 Bảng 3.3 Độ lặp lại tái lặp phương pháp CE 68 Bảng 3.4 Kết xác định độ phương pháp CE 69 Bảng 3.5 Hàm lượng R-ATN S-ATN chất chuẩn racemic 76 Bảng 3.6 Độ phù hợp hệ thống sắc ký 77 Bảng 3.7 Khoảng nồng độ tuyến tính phương pháp HPLC 80 Bảng 3.8 Độ lặp lại ngày phương pháp HPLC 81 Bảng 3.9 Độ tái lặp phương pháp HPLC 82 Bảng 3.10 Độ phương pháp HPLC 83 Bảng 3.11 Kết định lượng atenolol đồng phân đối quang mẫu thử 85 vii Bảng 3.12 So sánh độ xác hai phương pháp HPLC, CE định lượng 85 ATN ĐPĐQ chế phẩm Bảng 3.13 Phân tích ANOVA kết định lượng ATN toàn phần chế phẩm 86 phương pháp Bảng 3.14 Kết xác định hàm lượng atenolol số chế phẩm thuốc 87 Bảng 3.15 Hàm lượng tạp R-ATN số chế phẩm thuốc S-ATN 88 Bảng 3.16 Kết định lượng ATN ĐPĐQ môi trường thử độ hòa tan 89 Bảng 3.17 Điều kiện khối phổ định lượng atenolol nội chuẩn 99 Bảng 3.18 Độ phù hợp hệ thống LC-MS/MS 100 Bảng 3.19 Đường chuẩn khoảng tuyến tính R-Atenolol 102 Bảng 3.20 Đường chuẩn khoảng tuyến tính S-Atenolol 103 Bảng 3.21 Giá trị LLOQ phương pháp LC-MS/MS 103 Bảng 3.22 Kết đánh giá ảnh hưởng mẫu 104 Bảng 3.23 Độ xác ngày khác ngày R-Atenolol 105 Bảng 3.24 Độ xác ngày khác ngày S-Atenolol 106 Bảng 3.25 Độ thu hồi đồng phân đối quang atenolol phương pháp 107 Bảng 3.26 Độ thu hồi nội chuẩn esomeprazol phương pháp 108 Bảng 3.27 Độ ổn định ATN mẫu HT bảo quản nhiệt độ phòng 109 o Bảng 3.28 Độ ổn định ATN sau xử lý mẫu bảo quản C 110 Bảng 3.29 Độ ổn định ATN sau ba chu kỳ đông lạnh – rã đông 110 Bảng 3.30 Độ ổn định dài ngày huyết tương atenolol 111 Bảng 3.31 Điều kiện khối phổ định lượng atenolol nội chuẩn diltiazem 113 Bảng 3.32 Khoảng nồng độ tuyến tính phương pháp LC-MS/MS định lượng 115 ATN toàn phần huyết tương Bảng 3.33 Độ xác phương pháp LC-MS/MS định lượng ATN toàn phần 116 Bảng 3.34 LLOQ phương pháp LC-MS/MS định lượng ATN toàn phần 117 Bảng 3.35 Ảnh hưởng mẫu phương pháp LC-MS/MS định lượng ATN 118 toàn phần Bảng 3.36 Độ thu hồi nội chuẩn diltiazem phương pháp LC-MS/MS định 118 lượng ATN toàn phần Bảng 3.37 So sánh nồng độ R,S-ATN xác định phương pháp LC-MS/MS 119 Bảng 3.38 Nồng độ atenolol số mẫu huyết tương bệnh nhân 121 Bảng 3.39 Nồng độ R-ATN S-ATN huyết tương 06 NTN sau uống 122 thuốc Atenolol STADA 50 mg Bảng 3.40 Nồng độ R-ATN S-ATN huyết tương 06 NTN sau uống thuốc TENORMIN 50 mg viii 123 Bảng 3.41 Nồng độ S-ATN huyết tương 06 NTN sau uống thuốc 124 ® Atpure 25 viên nén S-Atenolol 25 mg Bảng 3.42 Nồng độ S-ATN huyết tương 06 NTN sau uống thuốc 125 ® Atpure 25 Tenormin 50 mg Bảng 3.43 Thông số DĐH trung bình số thuốc ATN NTN Việt Nam ix 128 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ Trang Hình 1.1 Mô hình Easson-Stedman Hình 1.2 Liên kết tạo phức amylose tris (3,5-dimethylphenylcarbamat) với 10 (a): (1S, 2R)-(+)-norephedrin; (b): (1R, 2S)-(-)-norephedrin) Hình 1.3 Cấu trúc “phức lồng” R-propranolol với heptakis (2,3-di-O-acetyl- 10 6-O-sulfo)-β-cyclodextrin (a): dung môi; (b): nước Hình 1.4 Cấu tạo, vị trí hình thành liên kết HSA ĐPĐQ 12 Hình 1.5 Cấu tạo pha tĩnh đối quang dẫn chất polysaccharid cuả số cột HPLC 12 Hình 1.6 Cấu tạo số pha tĩnh liên kết tác nhân hoạt quang kiểu Pirkle 13 Hình 1.7 Cấu tạo kích thước hốc kỵ nước cyclodextrin 14 Hình 1.8 Cấu trúc số tác nhân hoạt quang dẫn chất cyclodextrin 15 Hình 1.9 Một số chất chọn lọc đối quang có cấu trúc vòng ether thường dùng 16 phương pháp CE phân tích ĐPĐQ Hình 1.10 Cấu trúc phức hợp N-(2-hydroxypropyl)-L-4-hydroxyprolin đồng 17 phân đối quang acid amin Hình 1.11 Cấu tạo số pha tĩnh đối quang dẫn chất CD cột GC 18 Hình 1.12 Sự hình thành dòng điện thẩm phương pháp CE 24 Hình 1.13 Sơ đồ mô nguyên tắc phân tích ĐPĐQ phương pháp CE 26 với tác nhân hoạt quang dẫn chất CD Hình 1.14 Qui trình xử lý mẫu kỹ thuật SPE 31 Hình 1.15 Sơ đồ cấu tạo nguyên lý hoạt động thiết bị khối phổ 33 Hình 1.16 Cấu tạo chế hoạt động khối phổ tứ cực chập ba 36 Hình 1.17 Công thức cấu tạo đồng phân đối quang atenolol 40 Hình 2.1 Các mẫu thuốc nghiên cứu 51 Hình 2.2 Quy trình khảo sát thành phần, tỷ lệ pha động cột Ultron ES-OVM 52 Hình 2.3 Quy trình khảo sát thành phần, tỷ lệ pha động cột Chirex 3022 52 Hình 2.4 Quy trình khảo sát thành phần, tỷ lệ pha động cột Chiracel AGP 53 Hình 2.5 Quy trình khảo sát thành phần, tỷ lệ pha động cột Astec Cyclobond 53 Hình 2.6 Quy trình khảo sát thành phần, tỷ lệ pha động cột Chiralpak CBH 54 Hình 2.7 Cơ chế hoạt động thiết bị LC-MS trình tối ưu hóa 57 Hình 3.1 Ảnh hưởng dung dịch đệm borat (a), Tetrabutylamoni sulfat 50 62 mM (b) TRIS 50 mM (c) tới tm atenolol Hình 3.2 Điện di đồ atenolol với tác nhân chọn lọc đối quang: a) β-CD 20 63 mM; b) HP-β-CD 25mM, c) CM-β-CD 8mM Hình 3.3 Ảnh hưởng pH dung dịch đệm đến độ phân giải atenolol x 64 Hình 3.4 Điện di đồ mẫu R,S-Atenolol nồng độ 100 ppb 65 Hình 3.5 Điện di đồ mẫu placebo (a), chuẩn R,S-Atenolol (b), chuẩn S- 66 Atenolol (c) mẫu thử Atenolol STADA (d) Hình 3.6 Phổ UV (a) phổ tinh khiết (b) pic ATN ĐDĐ mẫu thử 66 Hình 3.7 SKĐ mẫu chuẩn R,S-ATN phân tích cột Ultron ES–OVM bước 70 sóng =230 nm pha động: đệm phosphat 20mM, pH 3; 0,75 ml/phút (a) đệm phosphat 20 mM, pH 7–MeOH (99:1); 0,75 ml/phút (b) Hình 3.8 SKĐ phân tích R,S-ATN cột Chiral AGP với tốc độ dòng 0,75 71 ml/phút; đầu dò DAD ( = 230 nm) pha động (a): đệm NaH2PO4 10mM, pH 4,5 – 2-PrOH (99:1); (b): đệm NaH2PO4 10 mM, pH 7,0 – MeOH (99,9:0,1) Hình 3.9 SKĐ mẫu chuẩn R,S-ATN phân tích cột Astec Cyclobond 71 pha động (a): đệm amoni acetat, pH – MeCN (25:75), (b): MeCN – MeOH – acid acetic – triethylamine (99:1:0,1:0,1) với tốc độ 1,0 ml/phút đầu dò DAD ( = 230 nm) Hình 3.10 SKĐ mẫu chuẩn R,S-ATN phân tích cột Chirex 3022, DAD ( = 72 230 nm), pha động n-hexan – CH2Cl2 – MeOH – TFA với tỷ lệ 50:35:7,5:0,25 (a); 50:35:10:0,25 (b); 57,5:35:7,5:0,25 (c) 50:35:5:0,25 (d) Hình 3.11 SKĐ mẫu chuẩn R,S-ATN phân tích cột Chiralpak CBH, pha động 73 2- PrOH/đệm amoni acetat 10 mM, pH 7,0 với tỷ lệ 1/99(a) 15/85(b) Hình 3.12 SKĐ mẫu chuẩn R,S-ATN phân tích cột Chiralpak CBH với 73 pha động có pH dung dịch đệm 5,0 (a) 7,0 (b) Hình 3.13 SKĐ phổ UV mẫu chuẩn R,S-ATN phân tích cột Chirex 3022 với 74 pha động n-hexan – 1,2 CH2Cl2 – MeOH – TFA (57,5 : 35 : 7,5 : 0,2), ml/phút Hình 3.14 SKĐ phổ 3D phân tích mẫu chuẩn R,S-ATN với cột Chiralpak CBH; 75 pha động 2-PrOH/đệm amoni acetat 10 mM, pH 5,9 (10/90); 0,7 ml/phút Hình 3.15 Sắc ký đồ đánh giá tính chọn lọc – đặc hiệu phương pháp HPLC 78 phân tích đồng phân đối quang atenolol Hình 3.16 So sánh phổ UV pic mẫu thử chuẩn R,S-Atenolol 79 Hình 3.17 Đồ thị tương quan tuyến tính diện tích pic nồng độ R-ATN (trái) 80 S-ATN (phải) Hình 3.18 SKĐ mẫu chuẩn R,S-ATN nồng độ: (a) 0,078 µg/ml (b) 0,156 µg/ml xi 84 Hình 3.19 Sắc ký đồ xác định hàm lượng tạp R-ATN số thuốc: mẫu tạp 88 ® chuẩn (a); mẫu Atpure 25 (b) mẫu viên nén S-atenolol 25 mg (c) Hình 3.20 Biểu đồ so sánh độ hòa tan thuốc môi trường pH 1,2 90 Hình 3.21 Phổ khối dung dịch chuẩn atenolol 91 Hình 3.22 Giản đồ tối ưu điện “thấu kính hội tụ” ion có số khối 267 Da 91 Hình 3.23 Phổ khối MS/MS phân mảnh ion [ATN+H]+ 92 + Hình 3.24 Giản đồ lượng phân mảnh [ATN+H] tạo ion có tỷ số m/z = 190 92 Hình 3.25 SKĐ phân tích mẫu chuẩn atenolol IS cột Chiralpak CBH 95 Hình 3.26 Sơ đồ nghiên cứu chiết ATN HT phương pháp chiết lỏng-lỏng 96 Hình 3.27 Sắc ký đồ dòng ion ATN IS phân tích mẫu huyết tương trắng 97 xử lý tủa protein MeCN Hình 3.28 Sắc ký đồ dòng ion ATN IS phân tích mẫu huyết tương trắng 98 xử lý chiết lỏng - lỏng với chloroform Hình 3.29 SKĐ mẫu HT chứa R,S-ATN IS phân tích LC-MS/MS, (a): SKĐ 99 tổng ion; (b): SKĐ chọn lọc ion atenolol; (c): SKĐ chọn lọc ion esomeprazol Hình 3.30 SKĐ tính chọn lọc–đặc hiệu phương pháp LC-MS/MS định lượng 101 đồng phân đối quang atenolol huyết tương Hình 3.31 Sắc ký đồ mẫu huyết tương chứa R,S-ATN IS phân tích LC- 113 MS/MS (a): SKĐ tổng ion, (b): SKĐ chọn lọc ion atenolol, (c): SKĐ chọn lọc ion diltiazem Hình 3.32 Độ đặc hiệu–chọn lọc phương pháp LC-MS/MS định lượng ATN 114 toàn phần Hình 3.33 SKĐ mẫu HT bệnh nhân T.V.H sau uống ATN 120 Hình 3.34 SKĐ mẫu HT bệnh nhân T.V.H sau uống ATN 24 120 Hình 3.35 SKĐ mẫu HT trước uống thuốc (điểm h) NTN 01 126 Hình 3.36 SKĐ mẫu HT điểm h NTN 18 thêm nội chuẩn 126 Hình 3.37 SKĐ mẫu HT NTN 02 sau uống thuốc atenolol racemic 2,5 h 126 Hình 3.38 SKĐ mẫu HT NTN 02 sau uống thuốc atenolol racemic 24 h 126 Hình 3.39 SKĐ mẫu HT NTN 08 sau uống viên nén S-atenolol 127 Hình 3.40 SKĐ mẫu HT NTN 08 sau uống viên nén S-atenolol 24 127 Hình 3.41 Đường cong trung bình nồng độ S-Atenolol – thời gian chế 128 phẩm thuốc người tình nguyện Việt Nam Hình 3.42 Đường cong trung bình nồng độ R,S-Atenolol – thời gian 129 xii ile J dlLrP>Le c : \cFEr432 \ \DArA\A,TENOLOL\ Name: 11 05 I 00 057 : D Atenofol Acq Operator : THUY Acq Instrument : fnstrument Location : Viaf B Injection Date : 1/I1/201-4 4:09:01 PM Acq Method : c:\CHEM32\1\METHODS\CE\ATEB11M.M Last changed : 7/I'7/20L4 3:5'7:48 PM by THUY Analysis Method : C:\CHEM32\1\DATA\ArENoLol\130518000570.D\DA.M (ATEB11M.M) Last changed : 8/612014 2:,3I:.10 PM by THUY (modified after loading) Method Info : ATENOLOL Sample Info : 50mM Tris, pH 3.996, CMCD 8mM 25kV, 50mbar,/3s,Ateno1ol, 20 c IJAIJ lJ, Slg=1 9o,o Rel=360, 00 (ATENOUOL\1 3051 8000570 D) ,K Es ^!e mAU 200 *."t" *-o:'- 150 100 F/l b 10m Page of o ri"j o rD- d, N o tl tl tl tl d to ; d ; CL 3 o t o G tr t Iq E E E t o N tt r! o = tl ? o o : q e 9F c",Eg EF:!B co 59e :;#!a u iree;EsE#! E Io G) -d*F I E ci €) 59 gE AA o €) tl tl tl ? ? EzEF ^=N> EcirE rE r9g4A o o @ -@o @ o N )i! G o o * o c E< B> z 9; {s'EfraBq : +JSge = ! jq I (,) N o 91< E{ 6lz z o- 6l ; F 6F N> o pO :,15 d I :ql< it> G Yq =;-i i ':r s R g- rr aE2 Ex co lE> : 9Y 6X = ecaa€E G 66 c : ^_) + Fi 6P a? t*r &t E fle '=t P € 9l >/a^a ?l:gs" Z26,>:F! c.:+R>tQ:Y d"r5;dci ^"i OIE 9I N- e! tr I E: H 9fr*31 : EJFg9 I I I J zla zq Ia t, >a Et< 8ld - g€F eii > sT ;'E&fSs{iS E?N;E::EE H Ii5eq35iE! 3l I I I q< '{ o i{ o 91= < Jl= > 9l el "l E 1? O YqJ R,t _ E: Ro -BE E: >d 7iie >>6-@ I I ! € E ct9 p it !EE FI X 91 33i'e$ E, ??;]E > /,1 R ;: ;T I ga too EX !2 o o I Ft< H z "l> & I f! df! {-a -JJ-o q I EI EX qt€ 91 6q o >>t3g' -: :>ir! Er*Rtta:!a = d-5;oc' I Fl 3;tr ^r" E I I I x, X > Lj ?., ztE6 -e Eli I Etcz E€F.gi€ ol ,e".r€cd'b€ 5E6-Ezecqz -T E?N;E3iEE aii:Et3EE s i.E,E sq! 5i ! P 6-t oS E C)I I : I I ; I s; os! H zz Ex td E 33?, El -s 91 6@ 3'l;t$ E, E ??;IE FI ;^ 6ds-r> EI*rtr1:9 rp"Re g: Ei s"iq e{aFB vrJ6u!-dF J J z > E-€F g-Ee s'Esi9siES rI T2aaEo.9EE S 1=.=.!5EE5E H I5i=EiEgsE ; = - - X 9=.:9 e H E I I I 21 66 e Eli P zcdt at& a2 -ql -l I s 80F 3lE ; !i;es = < 8IE E E >>;^a A e PI El naG x, d R l6 rSc*: t I aa$ >>;^a ! s Et :q-l+PrrQ:!1 : tt:r$ c- c e I I [...]... vậy, luận án Nghiên cứu định lượng atenolol và các đồng phân đối quang trong một số chế phẩm thuốc và trong dịch sinh học được thực hiện với mục tiêu nghiên cứu các phương pháp phân tích ATN và ĐPĐQ trong chế phẩm thuốc và trong huyết tương nhằm kiểm tra chất lượng và so sánh sinh khả dụng (SKD), đánh giá tương đương sinh học (TĐSH) các thuốc ATN bao gồm dạng thuốc racemic và dạng thuốc đơn ĐPĐQ... hiện các nội dung chính sau: 1 Nghiên cứu xây dựng, thẩm định phương pháp phân tích các ĐPĐQ của ATN trong chế phẩm thuốc và ứng dụng trong kiểm tra chất lượng các thuốc ATN 2 Nghiên cứu xây dựng, thẩm định phương pháp phân tích ATN và các ĐPĐQ trong huyết tương và ứng dụng trong nghiên cứu SKD, đánh giá TĐSH một số chế phẩm thuốc ATN đang lưu hành trên thị trường -2- CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 ĐỒNG PHÂN ĐỐI... pháp hóa lý phân tích, định lượng đồng phân đối quang gặp nhiều khó khăn [23], [54], [77], [78] Tại Việt Nam cũng như nhiều nước đang phát triển trên thế giới, cho tới nay số lượng các nghiên cứu phân tích, định lượng các ĐPĐQ của ATN nói riêng và các đồng phân có tác dụng dược lý không giống nhau khác nói chung trong các chế phẩm thuốc và đặc biệt trong dịch sinh học còn tương đối ít và chưa có hệ... quang học của dẫn chất cis-N-alkyl-phthalazinon bằng phương pháp HPLC dùng pha tĩnh bất đối là dẫn xuất tris (3,5-dimethylphenyl carbamat) cellulose của tác giả Chương Ngọc Nãi và cộng sự năm 2011 [18] Ngoài các nghiên cứu định lượng ĐPĐQ trong các mẫu nguyên liệu và chế phẩm thuốc như đã nêu trên, cho đến nay tại nước ta mới chỉ một nghiên cứu phân tích, định lượng thuốc đối quang trong mẫu dịch sinh. .. tĩnh đối quang dẫn xuất của amylose Kết quả nghiên cứu cho thấy phương pháp có khoảng tuyến tính từ 2 – 20 ng/ml; độ lặp lại liên ngày với giá trị RSD khoảng 20% [13] Như vậy, mới chỉ có một số ít các nghiên cứu phân tách thuốc có ĐPĐQ được triển khai Vấn đề nghiên cứu phân tách các ĐPĐQ trong kiểm tra chất lượng thuốc và đặc biệt là trong nghiên cứu sinh khả dụng (SKD), tương đương sinh học (TĐSH) các. .. khiết đối quang [186] Như vậy, phương pháp phân tích ĐPĐQ không những có vai trò quan trọng trong quá trình nghiên cứu phát triển thuốc chứa dược chất đối quang mà còn giữ vai trò quan trọng trong việc kiểm tra, kiểm nghiệm, giám sát chất lượng thuốc đối quang đã được cấp phép [47], [88], [160], [198] 1.1.1.4 Tình hình nghiên cứu phân tích đồng phân đối quang ở Việt Nam Việc nghiên cứu phân tích và quản... mất ngủ, buồn nôn trong giai đoạn đầu của thai kỳ đã sinh ra những đứa trẻ bị dị tật bẩm sinh ở các chi (hội chứng phocomelia) Các nghiên cứu chuyên sâu thực hiện sau thảm họa cho thấy, đồng phân S-thalidomid trong thuốc racemic ức chế miễn dịch, gây độc đối với tế bào và là nguyên nhân gây ra hội chứng phocomelia [132] Mặc dù vậy, số lượng các thuốc chứa dược chất đối quang (thuốc đối quang) vẫn không... trọng trong đời sống của thực vật, động vật mà còn trong nền công nghiệp dược phẩm, nông nghiệp và hóa chất [50], [54] Trong khi các hợp chất tự nhiên như protein, enzym, acid amin, hydratcarbon, nucleosid, một số alkaloid và hormon… đều là các hợp chất đối quang và thường chỉ tồn tại ở một dạng đồng phân thì hầu hết các thuốc tổng hợp hóa học được phát triển trong quá khứ đều có cấu trúc phân tử bất đối. .. năng phân tách kém, độ phân giải giữa các pic không cao, hệ số đối xứng của pic thấp (pic doãng), số đĩa lý thuyết thấp… [32], [63], [87], [125] - Phương pháp phân tách đồng phân đối quang trực tiếp bằng cột pha tĩnh đối quang: Sử dụng một chất ĐPĐQ tạo liên kết hóa học với pha tĩnh để tạo ra một pha tĩnh đối quang (CSP) Pha tĩnh đối quang sẽ phản ứng với chất phân tích để tạo thành phức hợp đồng phân. .. thể” của các enzym) Kết quả là các đồng phân đối quang (ĐPĐQ) của một thuốc có thể có các đặc tính dược lý, lâm sàng khác nhau [50], [54] Trong khi các protein, enzym, acid amin, hydratcarbon tự nhiên chỉ tồn tại ở một dạng ĐPĐQ duy nhất, ví dụ như các acid amin là đồng phân l (tả tuyền); các loại đường tự nhiên là đồng phân d (hữu tuyền) thì phần lớn các chất tổng hợp hóa học và bán tổng hợp hóa học đều ... phân đối quang atenolol 75 3.1.3 Phân tích atenolol đồng phân đối quang chế phẩm .84 3.1.3.1 Định lượng atenolol đồng phân số thuốc 84 3.1.3.2 Xác định tạp đồng phân đối quang số chế phẩm. .. Nghiên cứu định lượng atenolol đồng phân đối quang số chế phẩm thuốc dịch sinh học thực với mục tiêu nghiên cứu phương pháp phân tích ATN ĐPĐQ chế phẩm thuốc huyết tương nhằm kiểm tra chất lượng. .. thông số dược động học atenolol số nghiên cứu 41 Bảng 1.11 Một số nghiên cứu định lượng ĐPĐQ atenolol nguyên liệu 43 chế phẩm thuốc phương pháp HPLC Bảng 1.12 Một số nghiên cứu định lượng