Nghiên cứu tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu và giảm xơ vữa động mạch của chế phẩm SAD trên động vật thực nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THÚY NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ĐIỀU CHỈNH RỐI LOẠN LIPID MÁU VÀ GIẢM XƠ VỮA ĐỘNG MẠCH CỦA CHẾ PHẨM SAD TRÊN ĐỘNG VẬT TH

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN THỊ THÚY

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ĐIỀU CHỈNH

RỐI LOẠN LIPID MÁU VÀ GIẢM XƠ VỮA ĐỘNG MẠCH CỦA CHẾ PHẨM

SAD TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM

LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC

HÀ NỘI 2015

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN THỊ THÚY

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ĐIỀU CHỈNH

RỐI LOẠN LIPID MÁU VÀ GIẢM XƠ VỮA ĐỘNG MẠCH CỦA CHẾ PHẨM

SAD TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM

LỜI CẢM ƠN

Trong quá trình thực hiện đề tài, tôi đã nhận được rất nhiều sự quan tâm giúp đỡ của thầy cô, gia đình, đồng nghiệp và bạn bè Qua đây tôi muốn bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới:

TS Phạm Thị Vân Anh đã trực tiếp hướng dẫn, gợi ý, tạo điều kiện cho tôi hoàn thành luận văn này

ThS Mai Phương Thanh, ThS Nguyễn Thị Thanh Hà, đã có nhiều ý kiến đóng góp quý báu cho tôi trong quá trình thực hiện đề tài

Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô, anh chị em kỹ thuật viên bộ môn Dược

lý và Trung tâm Dược lý lâm sàng - Đại học Y Hà Nội, đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong quá trình thực nghiệm và nghiên cứu khoa học

Cuối cùng tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè đã luôn bên cạnh động viên, giúp tôi có thời gian hoàn thành luận văn

Do thời gian và điều kiện nghiên cứu có hạn, luận văn không tránh khỏi những thiếu sót Tôi rất mong nhận được ý kiến đóng góp của thầy cô, bạn bè, đồng nghiêp

để hoàn thiện hơn những nghiên cứu của mình

Tôi xin trân trọng cảm ơn!

Hà Nội, tháng 8 năm 2015 Học viên

Nguyễn Thị Thúy

MỤC LỤC

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

Chương 1 TỔNG QUAN 3

1.1 Hội chứng rối loạn lipid máu (RLLPM) 3

1.1.1 Đại cương về lipid máu 3

1.1.2 Lipoprotein 3

1.1.2.1 Cấu trúc của lipoprotein 3

1.1.2.2 Phân loại lipoprotein 5

1.1.2.3 Chuyển hóa của lipoprotein 6

1.1.3 Hội chứng rối loạn chuyển hóa lipid máu 9

1.1.3.1 Định nghĩa rối loạn chuyển hóa lipid [46] 9

1.1.3.2 Nguyên nhân gây RLLPM [46] 10

1.1.4 Hội chứng rối loạn lipid máu với bệnh xơ vữa động mạch 12

1.1.4.1 Xơ vữa động mạch 12

1.1.4.2 Cơ chế hình thành vữa xơ động mạch 12

1.1.4.3 Mối liên quan giữa rối loạn lipid máu và bệnh vữa xơ động mạch 13

1.1.5 Điều trị hội chứng rối loạn lipid máu 13

1.1.5.1 Chế độ ăn uống và tăng cường hoạt động thể lực 13

1.1.5.2 Thuốc điều trị RLLPM 14

1.1.5.3 Thảo dược điều chỉnh RLLPM 16

1.1.6 Một số mô hình dược lý thực nghiệm gây tăng cholesterol máu để nghiên cứu thuốc điều trị RLLPM và xơ vữa động mạch 18

1.2 Tổng quan về chế phẩm SAD 21

1.2.1 Giảo cổ lam 21

1.2.2 Cây chóc máu 24

1.2.3 Các nghiên cứu về SAD 26

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28

2.1 Nguyên liệu nghiên cứu 28

2.1.1 Chất liệu nghiên cứu 28

2.1.2 Hoá chất và dụng cụ xét nghiệm 28

2.1.2.1 Hoá chất phục vụ nghiên cứu 28

2.1.2.2 Máy móc phục vụ nghiên cứu 29

2.2 Đối tượng nghiên cứu 29

2.3 Địa điểm và thời gian nghiên cứu 29

2.4.1 Nghiên cứu tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu của chế phẩm 30

2.4.1.1 Mô hình gây rối loạn lipid máu ngoại sinh 31

2.4.1.2 Mô hình gây rối loạn lipid máu nội sinh 33

2.4.2 Mô hình gây rối loạn lipid máu và vữa xơ động mạch 34

1.1 Xử lý số liệu 36

Chương 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU……….………37

3.1 Tác dụng điều chỉnh lipid máu của SAD trên mô hình gây RLLPM nội sinh 37 3.2 Tác dụng điều chỉnh lipid máu của SAD trên mô hình gây RLLPM ngoại sinh 38 3.2.1 Tác dụng của SAD lên nồng độ lipid máu ở mô hình gây RLLPM ngoại sinh sau 2 tuần nghiên cứu 39

3.3 Tác dụng làm giảm xơ vữa động mạch của SAD trên thỏ thực nghiệm 41

Chương 4 KẾT LUẬN VÀ BÀN LUẬN 56

4.1 Tác dụng điều chỉnh lipid máu của SAD trên mô hình thực nghiệm 56

4.1.1 Tác dụng điều chỉnh lipid máu của SAD trên mô hình gây rối loạn lipid máu nội sinh 56

4.1.2 Tác dụng điều chỉnh lipid máu của SAD trên mô hình ngoại sinh 62

4.2 Tác dụng chống xơ vữa động mạch của SAD trên thỏ thực nghiệm 64

KẾT LUẬN 70

KIẾN NGHỊ 70

Tài liệu tham khảo Error! Bookmark not defined

Phụ lục 1

Phụ lục 2

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT, KÝ HIỆU

: Adult Treatment Panel III : Chylomicron

: High density lipoprotein – cholesterol (lipoprotein tỷ trọng cao)

: 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase : Intermediate density lipoprotein

(lipoprotein tỷ trọng trung gian) : Lecithin Cholesterol Acyltransferase : Low density lipoprotein (lipoprotein tỷ trọng thấp) : Low density lipoprotein – cholesterol

: Lipoprotein lipase : Malonyldialdehyd : National Cholesteron Education Program (Chương trình giáo dục Quốc gia về Cholesterol) : Poloxamer 407

: Propylthiuracil : Rối loạn lipid máu : Sagydi

: Total cholesterol (cholesterol toàn phần) : Triglycerid

: Very low density lipoprotein (lipoprotein tỷ trọng rất thấp) : Vữa xơ động mạch

DANH MỤC CÁC HÌNH

Hình 1.1 Cấu trúc lipoprotein 4

Hình 1.2 Tỷ trọng và kích thước các loại lipoprotein 6

Hình 1.3 Chuyển hóa lipid ngoại sinh và nội sinh 7

Hình 1.4 Chuyển hóa HDL……… … 9

Hình 1.5 Hình ảnh mặt cắt một phần động mạch xơ vữa 15

Hình 1.6 Cây giảo cổ lam……… 25

Hình 1.7 Cây chóc máu……… 28

Hình 3.1 Hình thái vi thể gan thỏlô chứng (thỏ số 67) (HE x 400) 46

Hình 3.2 Hình thái vi thể ĐMC thỏlô chứng (thỏ số 67) (HE x 400) 49

Hình 3.3 Hình thái vi thể gan thỏ lô chứng sinh học (thỏ số 68) (HE x 400) 49

Hình 3.4 Hình thái vi thể ĐMC thỏ lô chứng sinh học (thỏ số 68) (HE x 400) 49

Hình 3.5 Hình thái vi thể gan thỏ lô mô hình (thỏ số 3) (HE x 400) 50

Hình 3.6 Hình thái vi thể ĐMC thỏ lô mô hình (thỏ số 3) (HE x 400) 50

Hình 3.7 Hình thái vi thể gan thỏ lô mô hình (thỏ số 1) (HE x 400) 50

Hình 3.8 Hình thái vi thể ĐMC thỏ lô mô hình (thỏ số 1) (HE x 400) 50

Hình 3.9 Hình thái vi thể gan thỏ lô uống atorvastatin 5 mg/kg (thỏ số 16) (HE x 400) 51

Hình 3.10 Hình thái vi thể ĐMC thỏ lô uống atorvastatin 5 mg/kg (thỏ số 16) (HE x 400) 51

Hình 3.11 Hình thái vi thể gan thỏ lô uống Atorvastatin 5 mg/kg(thỏ số 17) (HE x 400) 51

Hình 3.12 Hình thái vi thể ĐMC thỏ lô uống Atorvastatin 5 mg/kg(thỏ số 17) (HE x 400) 51

Hình 3.13 Hình thái vi thể gan thỏ lô uống SAD 0,18g cao khô/kg/ngày (thỏ số 22) (HE x 400) 52

Hình 3.14 Hình thái vi thể ĐMC thỏ lô uống SAD 0,18g cao khô/kg/ngày (thỏ số 22) (HE x 400) 52

Hình 3.15 Hình thái vi thể gan thỏ lô uống SAD 0,18g cao khô/kg/ngày (thỏ số 29) (HE x 400) 52

Hình 3.16 Hình thái vi thể ĐMC thỏ lô uống SAD 0,18g cao khô/kg/ngày

(thỏ số 29) (HE x 400) 52Hình 3.17 Hình thái vi thể gan thỏ lô uống SAD 0,54g cao khô/kg/ngày

(thỏ số 35) (HE x 400) 53Hình 3.18 Hình thái vi thể ĐMC thỏ lô uống SAD 0,54 g cao khô /kg/ngày

(thỏ số 35) (HE x 400) 53Hình 3.19 Hình thái vi thể gan thỏ lô uống SAD 0,54g cao khô/kg/ngày

(thỏ số 36) (HE x 400) 53Hình 3.20 Hình thái vi thể ĐMC thỏ lô uống SAD 0,54g cao khô/kg/ngày

(thỏ số 36) (HE x 400) 53

DANH MỤC CÁC BẢNG VÀ BIỂU ĐỒ

Bảng 1.1 Các loại lipoprotein chính trong huyết tương người ……… ………… 6

Bảng 1.2 Phân loại rối loạn lipid máu theo Fredrickson/WHO……… 13

Bảng 1.3 Đánh giá mức độ RLLPM theo NCEP ATP III……… 13

Bảng 2.1 Đối tượng nghiên cứu ……… 32

Bảng 2.2 Thành phần hỗn hợp dầu cholesterol ……… 35

Bảng 3.1 Mô hình rối loạn lipid máu bằng Poloxamer 407……… …… 40

Biểu đồ 3.1 Sự thay đổi cân nặng chuột cống trắng sau 4 tuần ……… 41

Bảng 3.2 Sự thay đổi nồng độ lipid máu chuột nhắt trắng ở mô hình nội sinh 40

Bảng 3.3 Mô hình RLLPM bằng hỗn hợp dầu cholesterol……… 38

Bảng 3.4 Sự thay đổi nồng độ lipid máu chuột cống sau 2 tuần uống thuốc…… .39

Bảng 3.5 Sự thay đổi nồng độ lipid máu chuột cống sau 4 tuần uống thuốc…… .40

Biểu đồ 3.2 Sự thay đổi trọng lượng thỏ sau 8 tuần nghiên cứu 44

Bảng 3.6.Tác dụng lên nồng độ lipid máu thỏ ở mô hình gây XVĐM sau 4 tuần 45

Biểu đồ 3.3.Sự thay đổi nồng độ lipid máu thỏ ở mô hình gây XVĐM sau 8 tuần 46

Bảng 3.7 Sự thay đổi hoạt độ AST ở thỏ sau 8 tuần uống thuốc 47

Bảng 3.8 Sự thay đổi hoạt độ ALT ở thỏ sau 8 tuần uống thuốc……….48

Bảng 3.9 Hình ảnh đại thể và vi thể của động mạch chủ và gan thỏ 54

ý, bởi các biến chứng và hậu quả của bệnh rất nặng như: Nhồi máu cơ tim (45%), mạch vành (32%), tai biến mạch máu não (13%), tăng huyết áp [24]

Bệnh VXĐM ở Việt Nam trong những năm gần đây có chiều hướng gia tăng Theo nhịp độ phát triển của xã hội, đời sống vật chất ngày càng được cải thiện, số người mắc bệnh tim mạch có liên quan đến VXĐM ngày càng tăng, ảnh hưởng rõ rệt đến sức lao động, chất lượng cuộc sống và tuổi thọ của con người [24],[37]

Hiện nay, các thuốc của y học hiện đại như nhóm fibrat, nhóm statin, acid nicotinic… điều trị có hiệu quả tốt, tác dụng nhanh nhưng lại gây ra các tác dụng không mong muốn như đau cơ, tiêu cơ, tăng enzym gan, rối loạn tiêu hoá và chống chỉ định cho bệnh nhân suy gan, suy thận hoặc loét dạ dày – tá tràng [41],[42] Vì thế một trong những xu hướng hiện nay trong điều trị hội chứng rối loạn lipid máu

là hướng về các thuốc có nguồn gốc thảo dược, vừa mang lại hiệu quả điều trị vừa hạn chế được các tác dụng không mong muốn và giảm đáng kể chi phí điều trị cho bệnh nhân [97]

Ở Việt Nam, nhiều thảo dược có tác dụng hạ lipid máu đã được nghiên cứu và

sử dụng như ngưu tất, tỏi, dầu cám, nghệ, … [20], [21], [28], [34] trong đó phải kể đến hai loại thảo dược là giảo cổ lam và chóc máu nam bộ Giảo cổ lam được Phạm Thanh Kỳ và cs nghiên cứu từ năm 1997 và được Viện dược liệu Trung ương, Đại học Y Hà Nội kết hợp với Thụy Điển nghiên cứu chuyên sâu về tác dụng hạ đường huyết, làm hạ cholesterol toàn phần trong máu Tác dụng đơn độc của giảo cổ lam trên lipid máu đã được nghiên cứu chứng minh, cho thấy giảo cổ lam làm hạ cholesterol toàn phần và triglycerid rõ rệt [6], [67], [82], [84] Đối với chóc máu

nam bộ, dịch chiết toàn phần và phân đoạn n-hexan có tác dụng hạ cholesterol toàn phần trên chuột cống trắng gây đái tháo đường typ 2 bằng HFD và STZ [36], giảm triglycerid huyết tương, giảm triglycerid gan và acid béo no không ester hóa, giảm

tỷ lệ hạt lipid trong mô của gan trên chuột ĐTĐ béo phì Zuker [80] Tuy nhiên, với mục đích tạo ra sản phẩm có hiệu quả cao hơn nữa trong điều trị rối loạn lipid máu, một số nhà nghiên cứu đã phối hợp các dược liệu có thành phần khác nhau, có thể

có cơ chế khác nhau Chế phẩm SAD (Sagydi) là sự phối hợp giữa cao khô giảo cổ lam và cao khô rễ cây chóc máu Qua nghiên cứu của Đỗ Thị Thu Hướng (2014) đánh giá tác dụng hạ đường huyết trên mô hình gây ĐTĐ typ 2 bằng chế độ ăn HFD kết hợp với STZ liều 100mg/kg tiêm màng bụng (theo phương pháp của Fabiola và Srinivasan) cho thấy ngoài tác dụng hạ glucose máu SAD còn có tác dụng điều chỉnh lipid máu Ngoài ra, SAD chưa có biểu hiện độc tính cấp và bán trường diễn [17] Để góp phần khẳng định tác dụng điều trị rối loạn lipid của SAD, hy vọng cung cấp thêm sự lựa chọn sản phẩm có nguồn gốc từ dược liệu trong việc điều trị

rối loạn lipid máu, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài “Nghiên cứu tác dụng điều

chỉnh rối loạn lipid máu và giảm xơ vữa động mạch của chế phẩm SAD trên động vật thực nghiệm” nhằm giải quyết hai mục tiêu sau:

2 Đánh giá tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu trên mô hình nội sinh và

ngoại sinh của SAD ở động vật thực nghiệm

3 Đánh giá tác dụng giảm xơ vữa động mạch của SAD trên động vật thực nghiệm

Chương 1 TỔNG QUAN

1.1 Hội chứng rối loạn lipid máu (RLLPM)

1.1.1 Đại cương về lipid máu

Về cấu tạo hóa học, hầu hết các loại lipid đều có acid béo và alcol Trong thành phần cấu tạo của lipid không có hoặc có rất ít các nhóm ưa nước như –OH, -

NH2 và –COOH, nhưng lại có rất nhiều các nhóm kỵ nước Chính vì vậy, lipid không hoặc ít tan trong nước mà hòa tan nhiều trong dung môi có độ phân cực thấp như các dung môi hữu cơ (bao gồm ether, benzen, chloroform…) [3], [14]

Lipid không tan trong nước và không tan trong máu, vì vậy lipid phải kết hợp với protein nhờ liên kết Vander - Walls để tạo thành lipoprotein (LP) Nhờ tạo thành lipoprotein nên các lipid tan được trong nước và vận chuyển đến các mô Lipid máu bao gồm: cholesterol toàn phần (cholesterol tự do và cholesterol este

hóa), triglycerid, phospholipid và các acid béo tự do

- Cholesterol là một alcol vòng không no, là thành phần tham gia cấu tạo màng tế bào

- Triglycerid cấu tạo gồm một phân tử glycerol và 3 acid béo, có 3 chức năng chính là: tạo nên mỡ trung tính dưới dạng dự trữ và cung cấp năng lượng, cách nhiệt, là lớp đệm để bảo vệ các cơ quan trong cơ thể

- Phospholipid là một phức hợp có nhiều dạng, có nhiều chức năng đặc hiệu như: truyền tin trong tế bào, chất làm căng bề mặt, tham gia cấu tạo màng tế bào

- Acid béo là những chuỗi cacbon có mạch thẳng được chia thành 2 nhóm chính: acid béo bão hòa và acid béo không bão hòa

- Protein gắn vào các lipid có nguồn gốc tại niêm mạc ruột hoặc tại gan gọi là apolipoprotein [3], [5], [10]

1.1.2 Lipoprotein

1.1.2.1 Cấu trúc của lipoprotein

Lipid không tan trong nước, chúng được vận chuyển trong huyết tương dưới dạng kết hợp với protein đặc hiệu ( gọi là apolipoprotein, viết tắt là Apo) tạo nên

phức hợp phân tử lớn gọi là lipoprotein (LP)

Lipoprotein là các phân tử hình cầu, đường kính khoảng 100-500A, các phân

tử lipid và protein liên kết với nhau chủ yếu bởi các liên kết Van-der-Walls, cấu trúc

gồm 2 phần:

- Phần ưa nước (vỏ ngoài) có các apoprotein, cholesterol tự do và các phospholipid

- Phần kỵ nước (trong lõi), có cholesterol este và triglycerid

Mỗi một loại lipoprotein chứa một hoặc nhiều apolipoprotein Các Apo này tạo

sự ổn định cấu trúc cho lipoprotein, tạo cầu nối với thụ thể của tế bào, các thụ thể này quyết định chuyển hóa của một phân tử lipoprotein và hoạt động như các đồng yếu tố của các enzym trong quá trình chuyển hóa lipid [5], [10]

Hình 1.1 Cấu trúc lipoprotein

Các apoprotein có vai trò quan trọng trong cấu trúc và chuyển hóa của lipoprotein Trong quá trình chuyển hóa lipid, các apoprotein có thể giữ chức năng:

- Tham gia và ổn định cấu trúc lipoprotein

- Hoạt hóa hoặc ức chế một số enzym, là chất cộng tác của các enzym

- Giúp các lipoprotein được vận chuyển trong máu và bạch huyết

Mỗi loại lipoprotein có chức năng đặc biệt, phụ thuộc vào thành phần lipid

và hàm lượng apoprotein Có nhiều loại apoprotein khác nhau được tìm thấy trong các lipoprotein của huyết tương người dựa vào:

- Cấu trúc của các acid amin

- Phân tử lượng và các chức năng của chúng

Đó là ApoA-I, ApoA-II, ApoA-IV, ApoA-V, ApoB-48, ApoB-100, I,

ApoC-II, ApoC-IApoC-II, ApoE, apo(a) [3], [14], [55], [61]

1.1.2.2 Phân loại lipoprotein

Các lipoprotein có tỷ lệ lipid và protein khác nhau nên chúng có tỷ trọng và

độ di chuyển điện di khác nhau Dựa vào tỷ trọng của lipoprotein, người ta xếp các

lipoprotein thành 5 loại khác nhau [10], [13], [55], [61]

- Hạt vi thể dưỡng chấp (chylomicron): thành phần chủ yếu trong hạt vi thể dưỡng chấp là triglycerid (85 – 95%), cholesterol chỉ chiếm 2- 5% Hạt vi thể dưỡng chấp là chất vận chuyển triglycerid ngoại sinh tới gan

- Lipoprotein có tỷ trọng rất thấp (VLDL) được tạo ra ở gan có thành phần chủ yếu là triglycerid và cholesterol Lipoprotein có tỷ trọng rất thấp là chất vận chuyển triglycerid nội sinh

- Lipoprotein có tỷ trọng thấp (LDL): do gan tổng hợp, là chất vận chuyển cholesterol đến các tổ chức, tỷ trọng 1,019 – 1,063, kích thước 200 – 220A0, hằng số nổi SF 0 – 20, mang chủ yếu apoprotein B

- Lipoprotein có tỷ trọng trung gian (IDL): được tạo ra trong quá trình chuyển hóa của VLDL

- Lipoprotein có tỷ trọng cao (HDL): là chất vận chuyển cholesterol từ các tổ chức về gan, tỷ trọng 1,063 – 1,210, kích thước 75 – 95A0, mang apoprotein AI, AII,

XX HDL được tạo thành ở gan, ruột non, HDL giàu protein, có lượng nhỏ cholesterol

và không có cholesterol este, chứa ApoC-I và ApoC-II Phần Apo có enzym lecithin cholesterol acyl transferase (LCAT) xúc tác sự hình thành cholesterol este từ lecithin và cholesterol LCAT được hoạt hóa bởi ApoA-I, cholesterol este được hình thành và tách khỏi bề mặt của lipoprotein để đi vào phần trung tâm không phân cực Cholesterol tự

do và lecithin đƣợc vận chuyển từ VLDL hoặc LDL tới HDL LCAT và HDL vận chuyển cholesterol ở tổ chức tới gan để tạo thành acid mật Cholesterol của HDL là cholesterol “tốt” vì nó bảo vệ thành mạch, không gây VXĐM Lƣợng cholesterol trong HDL càng thấp (<0,3g/l) có khả năng bị vữa xơ động mạch càng cao và ngƣợc lại (>0,76g/l) [3], [14], [73]

Bảng 1.1 Các loại lipoprotein chính trong huyết tương người [57], [88]

Lipoprotein có 2 nguồn gốc: Nội sinh và ngoại sinh

- Gan tổng hợp các lipoprotein nội sinh từ các sản phẩm của lipid, glucid và các acid amin (acid amin tạo ceton) Quá trình tổng hợp xảy ra trên bề mặt của hệ thống lưới trong chất nguyên sinh của tế bào gan

- Lipoprotein ngoại sinh được tạo ra từ ruột và có thể được chuyển hóa ở gan

Hình 1.3 Chuyển hóa lipid ngoại sinh và nội sinh [88]

LPL, lipoprotein lipase; FFA (free fatty acid), acid béo tự do; HL, hepatic lipase

Chuyển hóa lipoprotein ngoại sinh

Sau khi ăn chất béo, triglycerid và cholesterol được hấp thu vào tế bào ruột dưới dạng acid béo và cholesterol tự do

Trong tế bào ruột, acid béo được tái este hóa cùng với cholesterol, chúng sát nhập vào chân của phân tử chylomicron mới sinh Lớp bề mặt của phân tử này gồm:

phospholipid và các apo AI, AII, AIV, apo B48 là một protein được sinh ra cùng một gen mã hóa apo B100 ở gan

Chylomicron bị mất một phân tử triglycerid, tạo thành chylomicron dư (remnant), chứa nhiều apoE Remnant có thời gian bán hủy rất ngắn (vài phút) Ở gan, cholesterol được chuyển hóa thành acid mật, rồi muối mật theo đường mật xuống ruột non, một phần cholesterol cùng với triglycerid tham gia tạo VLDL VLDL rời gan vào hệ tuần hoàn để đi vào chuyển hóa lipid nội sinh [3],[15],[48], [50]

Chuyển hóa lipoprotein nội sinh

Các lipoprotein mang apo B100 sinh ra trong quá trình tổng hợp VLDL tại gan Apo B100 gắn vào triglycerid, cholesterol vừa được tổng hợp theo con đường nội sinh kết hợp với phospholipid rồi được bài tiết như một VLDL mới sinh

Khi VLDL tuần hoàn trong máu, triglycerid bị thủy phân bởi enzym lipoprotein lipase (LPL), enzym này gắn trên tế bào biểu mô các mao mạch, tế bào

mỡ, cơ Các acid béo được giải phóng sẽ vào các tế bào mỡ nơi chúng được tái etse hóa và được dự trữ dưới dạng triglycerid hoặc đi vào các cơ, nơi chúng bị oxy hóa

để tạo thành năng lượng Các triglycerid của VLDL ra khỏi mao mạch nhờ phản ứng thủy phân do enzym LPL xúc tác và tạo thành IDL Chuyển hóa của IDL xảy

ra rất nhanh, một phần gắn vào gan, phần còn lại biến đổi thành LDL-C

Điều hòa bằng con đường thụ thể LDL- Ccủa gan là cơ chế nổi bật trong việc kiểm soát lượng LDL- C huyết tương của người Cơ sở của các biện pháp mới nhất làm hạ LDL- C dựa trên khả năng làm thay đổi số lượng thụ thể LDL-C của gan bằng chế độ ăn uống và thuốc [5],[9]

Chuyển hóa của HDL-C

Khi nhân của các phân tử lipoprotein giàu triglycerid bị thủy phân bởi

LDL-C , phần vỏ còn lại là cholesterol tự do, phopholid và các apolipoprotein khác được

chuyển tới HDL-C, HDL-C mới sinh được tạo ra ở gan và ruột, nó gồm các đĩa phospholipid chứa apo AI, AII

Chức năng của HDL-C là thu hút các cholesterol dư thừa ở các mô về gan Các cholesterol este của HDL-C được chuyển sang LDL-C để đi tới tế bào gan, đó là sự vận chuyển cholesterol ngược chiều HDL-C đóng vai trò có lợi đặc biệt đối với thành động mạch, bằng cách loại trừ cholesterol thừa Vì vậy cholesterol của HDL-C được coi là cơ chế chống VXĐM quan trọng nhất [14]

Hình 1.4 Chuyển hóa HDL-C [88]

1.1.3 Hội chứng rối loạn chuyển hóa lipid máu

1.1.3.1 Định nghĩa rối loạn chuyển hóa lipid [46]

Ở cơ thể bình thường, nồng độ các lipid máu tồn tại ở dạng cân bằng động bằng sự điều hoà của nhiều cơ chế Khi có rối loạn cân bằng động này sẽ dẫn tới các RLLPM

Rối loạn chuyển hoá lipid máu có thể do :

- Di truyền

HDL

Đại thực bào Cholesterol

LCAT, lecithin-cholesterol acyltransferase; CETP, cholesteryl ester transfer protein; LDLR, low-density

lipoprotein receptor; SR-BI (scavenger receptor class BI), receptor dọn rác nhóm BI

- Chế độ ăn không hợp lý

- Rối loạn thứ phát từ các quá trình bệnh lý khác…[13], [14]

Rối loạn chuyển hóa lipid khi có một hoặc nhiều rối loạn sau [46]

- Tăng cholesterol

+ Bình thường cholesterol trong máu < 5,2mmol/l (<200 mg/dl)

+ Tăng giới hạn khi cholesterol trong máu từ 5,2 -> 6,2mmol/l (200-239 mg/dl)

+ Tăng cholesterol máu khi > 6,2mmol/l (>240 mg/dl)

- Tăng LDL-C

+ Bình thường LDL-C trong máu < 3,4mmol/l

+ Tăng giới hạn từ 3,4 – 4,1mmol/l

+ Tăng nhiều khi > 4,1mmol/l

- Tăng triglycerid (TG)

+ Bình thường triglycerid trong máu < 2,26mmol/l (<200mg/dl)

+ Tăng giới hạn từ 2,26 – 4,5mmol/l (200-400 mg/dl)

+ Tăng TG từ 4,5- 11.3mmol/l (400-1000 mg/dl)

+ Rất tăng khi TG trong máu > 11,3mmol/l (>1000 mg/dl)

- Tăng hỗn hợp lipid máu : Khi cholesterol > 6,2mmol/l và 2,26 < TG < 4,5 (giữa khoảng 2,26 – 4,5mmol/l)

- Giảm HDL-C : Bình thường HDL-C trong máu > 0,9 mmol/l; khi HDL-C trong máu < 0.9mmol/l là giảm

- Nguyên nhân gây tăng cholesterol máu

+ Ăn quá nhiều mỡ động vật

+ Ăn quá nhiều thức ăn có chứa cholesterol (phủ tạng động vật, mỡ động vật, trứng, bơ, sữa toàn phần)

+ Dư thừa năng lượng (béo phì)

+ Tăng cholesterol gia đình (thiếu hụt receptor LDL-C)

+ Tăng mỡ máu hỗn hợp gia đình

+ Tăng cholesterol do rối loạn hỗn hợp gen

+ Hội chứng thận hư

+ Suy giáp trạng

+ Đái tháo đường

+ Bệnh gan tắc nghẽn

+ Một số bệnh gây rối loạn protein máu (myloma, mocroglolenlinemia)

- Nguyên nhân gây tăng triglycerid máu

+ Thiếu hụt enzym lipase tiêu hủy lipoprotein hoặc apoliprotein CII

+ Tăng TG có tính chất gia đình

+ Béo phì

+ Uống quá nhiều rượu

+ Đái tháo đường

+ Dùng thuốc chẹn beta giao cảm quá dài

- Nguyên nhân gây giảm HDL-C:

+ Dùng thuốc chẹn beta giao cảm quá dài

+ Rối loạn gen chuyển hóa HDL - C

1.1.4 Hội chứng rối loạn lipid máu với bệnh xơ vữa động mạch

Theo định nghĩa của Tổ chức y tế thế giới: “Vữa xơ động mạch là sự phối hợp những biến đổi của lớp nội mạc động mạch bao gồm sự tích tụ tại chỗ các lipid, phức hợp các glucid, máu và các sản phẩm của máu, tổ chức xơ và calci, kèm theo những biến đổi của lớp trung mạc”

Vữa xơ động mạch là một bệnh của động mạch lớn và vừa được thể hiện bằng hai loại tổn thương cơ bản, đặc trưng là những mảng vữa rất giàu cholesterol

và tổ chức xơ, xảy ra ở lớp nội mạc và một phần lớp trung mạc, nó làm hẹp dần lòng động mạch và cản trở dòng máu đến nuôi dưỡng các tổ chức [10], [11], [19], [23], [24]

Khởi phát là có tổn thương các tế bào nội mạc làm lớp tế bào nội mạc mất đi chức năng bảo vệ thành mạch, tổn thương đó có thể do ảnh hưởng của dòng máu có

áp lực cao tác động liên tục như trong bệnh tăng huyết áp, do ảnh hưởng của hội chứng RLLPM, hút thuốc lá, một số hóa chất, thức ăn, nhiễm khuẩn…

Khi bị tổn thương, các tế bào nội mạc tại chỗ mất khả năng bảo vệ thành mạch Tiểu cầu lập tức tách ra khỏi dòng máu tập trung vào chỗ nội mạc bị bộc lộ tập kết lại, giải phóng ra các chất trong đó có yếu tố PDGF (platelet derived growth factor), yếu tố này kích thích sự di chuyển các tế bào cơ trơn ở lớp trung mạc ra lớp nội mạc và phát triển mạnh ở đó Các tế bào đơn nhân từ dòng máu cũng đến ngay chỗ tổn thương và được chuyển dạng thành đại thực bào Các đại thực bào này “ăn” các LDL - C và trở thành các tế bào bọt, tích đầy cholesterol este, đến khi quá tải thì

tế bào tự vỡ, đổ cholesterol ra tổ chức xung quanh Tổ chức liên kết phát triển to ra nhiễm thêm calci, có thể bị loét và tạo thành huyết khối 12, 23, 24

1.1.4.3 Mối liên quan giữa rối loạn lipid máu và bệnh vữa xơ động mạch

Trong bệnh VXĐM hay gặp tăng cholesterol, tăng triglycerid, tăng LDL-C, nhất là khi có giảm đồng thời HDL- C

Nghiên cứu dịch tễ về cholesterol máu trong bệnh vữa xơ động mạch tại Framingham cho thấy giữa nộng độ cholesterol máu và tỷ lệ tử vong do VXĐM có mối tương quan tỷ lệ thuận 15, 23

1.1.5 Điều trị hội chứng rối loạn lipid máu

1.1.5.1 Chế độ ăn uống và tăng cường hoạt động thể lực

Thay đổi chế độ ăn uống là một phần trọng trong quản lý bệnh nhân rối loạn lipid máu NCEP đưa ra một số khuyến cáo trong thay đổi chế độ ăn là: hạn chế tổng lượng chất béo ở mức 25-35%, và lượng chất béo bão hòa chiếm dưới 7% tổng lượng calo cần cung cấp hàng ngày và lượng cholesterol trong khẩu phần ăn nên

Hình 1.5 Hình ảnh mặt cắt động mạch xơ vữa [88]

dưới 200 mg/ngày Điều chỉnh chế độ ăn còn phụ thuộc vào loại rối loạn lipid máu

ở bệnh nhân: Bệnh nhân tăng LDL-C, chất béo bão hòa và cholesterol trong khẩu phần ăn cần được hạn chế Bệnh nhân tăng triglycerid máu, lượng carbohydrat cần được cắt giảm Nếu bệnh nhân tăng triglycerid nặng (>1000 mg/dL), hạn chế tổng lượng chất béo là rất quan trọng

Tăng cường hoạt động thể lực đóng vai trò quan trọng trong việc kiểm soát lipid máu do giảm lượng mỡ dư thừa, tăng khả năng đề kháng của cơ thể, điều chỉnh các nguy cơ khác đi kèm như ổn định huyết áp, giảm nguy cơ đái tháo đường

+ Không uống quá nhiều rượu

+ Giảm cân nặng, duy trì chỉ số khối cơ thể trong khoảng 19-23, vòng bụng không quá 90cm ở nam giới và 85 cm ở nữ giới

- Nhóm làm giảm hấp thu và tăng thải trừ lipid:

Các thuốc thuộc nhóm này gồm có cholestyramin, colestipol, neomycin

Cơ chế tác dụng:

+ Thuốc có tính hấp phụ mạnh, tạo phức với acid mật, làm giảm quá trình nhũ hóa các lipid ở ruột, dẫn đến giảm hấp thu và tăng thải trừ lipid qua phân

+ Thuốc nhóm này gián tiếp làm tăng chuyển hóa cholesterol tạo thành acid mật thông qua sự thoát ức chế hydroxylase ở microsom gan (hydroxylase là enzym điều hòa tổng hợp acid mật từ cholesterol bị ức chế bởi acid mật), và làm tăng số lượng và hoạt tính LDL-receptor ở màng tế bào

- Nhóm làm giảm tổng hợp lipid:

Nhóm thuốc này bao gồm những dẫn xuất của acid fibric (bezafibrat, ciprofibrat, fenofibrat và gemfibrozil); dẫn xuất statin (atorvastatin, pravastatin, simvastatin, lovastatin, rosuvastatin, fluvastatin, pitavastatin); acid nicotinic; probucol

+ Các dẫn xuất acid fibric tăng hoạt tính LPL, các dẫn xuất statin có cấu trúc gần giống với HMG-CoA nên ức chế cạnh tranh HMG-CoA reductase (hydroxymethylglutaryl-CoA reductase) làm giảm tổng hợp cholesterol, đồng thời cũng làm tăng sinh LDL-receptor ở màng tế bào + Acid nicotinic là một vitamin dùng để điều trị bệnh Pellagra, nhưng cũng làm hạ LP máu Tác dụng này được thông qua bởi sự tăng sinh LDL-receptor và ức chế sự tích tụ AMP trong mỡ, tăng hoạt tính triglyceridlipase làm giảm LDL-cholesterol

+ Probucol có cấu trúc hóa học hoàn toàn khác với nhóm thuốc trên, cơ chế tác dụng của thuốc vẫn còn chưa được giải thích đầy đủ Nhiều nghiên cứu đã chứng minh thuốc làm tăng chuyển hóa LDL-cholesterol không thông qua LDL-receptor vì ở người có tăng LP máu có thiếu hụt LDL-receptor do di truyền, thuốc vẫn còn tác dụng Có tác giả cho rằng

probucol ngăn cản oxy hóa của acid béo và làm giảm khả năng tiếp nhận LDL của tế bào nội mô

Trong quá trình điều trị, ngoài việc thường xuyên theo dõi lượng LP máu

để đánh giá hiệu quả điều trị, bệnh nhân còn được theo dõi tác dụng không mong muốn do thuốc gây ra như viêm cơ, tiêu cơ vân, tăng transaminase, rối loạn điện tim

Acid béo omega-3: có nhiều trong dầu cá, bao gồm eicosapentaennoic (EPA) và acid decohexanoic (DHA) là hai thành phần sử dụng phổ biến trong điều trị lipid máu Omega-3 được sử dụng phối hợp với fibrat, niacin hoặc statin trong điều trị tăng TG máu

- Điều trị phối hợp thuốc

Điều trị phối hợp thuốc khi bệnh nhân không đạt được mục tiêu đơn trị liệu: + Bệnh nhân không đạt mục tiêu LDL-C và non-HDL-C với statin đơn trị liệu: Bổ sung vào phác đồ chất ức chế hấp thu cholesterol hoặc chất tạo phức với acid mật

+ Bệnh nhân tăng LDL-C phối hợp với bất thường TG, HDL:

 Bệnh nhân không đạt mục tiêu LDL-C và HDL-C thấp phối hợp niacin và statin

 Bệnh nhân không đạt mục tiêu LDL-C và TG cao có thể phối hợp thêm fibrat và dầu cá

+ Bệnh nhân tăng TG máu nặng không đạt được mục tiêu non-HDL-C với fibrat hoặc dầu cá: có thể cân nhắc bổ sung thêm statin Việc phối hợp statin và fibrat làm tăng tỷ lệ mắc bệnh cơ nặng và tiêu cơ vân, vì vậy bệnh nhân được giám sát chặt chẽ [42]

Ở Việt Nam, đã có rất nhiều công trình nghiên cứu khác nhau về việc sử dụng thảo dược trong điều trị RLLPM:

- Nghệ (Curcuma longa) được nghiên cứu trên thực nghiệm và thử

nghiệm lâm sàng cho thấy cao lỏng và viên nén với liều tương đương 10g nghệ tươi/ngày, dùng trong 1 tháng làm giảm 11,7% TC, gần bằng tác dụng của clofibrat với liều 1g/ngày [20]

- Ngưu tất (Achyranthes bidentata blume): Nghiên cứu của Đoàn Thị

Nhu và cộng sự cho thấy viên Bidentin chiết xuất từ ngưu tất làm giảm TC máu ở 43% bệnh nhân [34]

- Tỏi: Vũ Hiền Hạnh, Lương Thúy Quỳnh nghiên cứu viên tỏi (Allisa) thấy có tác dụng làm giảm TC trên 75% số BN, mức độ hạ từ 30 – 50 % [16]

- Dầu cám: Lê Minh, Phạm Ngọc Phú, Trần Thị Hiền điều trị cho 60 BN với liều 20g/ ngày thấy hạ TC và lipid toàn phần và thử nghiệm Burstein có ý nghĩa thống kê p < 0,05 [28]

- Nguyễn Trung Chính và cộng sự đã dùng viên Diosgin từ cây mía nghệ trên BN thấy giảm 16% TG, 22% LDL và tăng 28,7% HDL - C [5]

- NC về dầu đậu tương, dầu mầm hạt ngô là dầu chứa nhiều acid béo không bão hòa làm giảm TC máu đối với 75% số bệnh nhân [27]

- Bài thuốc “Bán hạ bạch truật thiên ma thang”: Hoàng Khánh Toàn và cộng sự điều trị cho 60 bệnh nhân, sau 2 tháng thấy có tác dụng giảm 16%

TC, 31,5% TG, 20,2% LDL- C, tăng 19,8% HDL-C [44]

- Viên nén “Hạ mỡ”: Nguyễn Thùy Hương nghiên cứu tác dụng của viên nén “Hạ mỡ” trong điều trị hội chứng RLLPM do khoa YHCT Bệnh viện Bạch Mai bào chế, kết quả sau 2 tháng có giảm chỉ số TC và LDL-C, không

có tác dụng trên chỉ số TG và HDL-C [18]

- Nguyễn Thị Như Ái và cộng sự đã tiến hành nghiên cứu tác dụng của chế phẩm Gylopsin (tạo thành từ polyphenol của cây chè dây và cao chiết từ cây giảo cổ lam) trên thỏ gây tăng lipid máu Kết quả nghiên cứu cho thấy Gylopsin làm giảm các chỉ số TG, TC, LDL-C, làm tăng HDL-C huyết tương,

đồng thời giảm MDA huyết tương Ngoài ra, Gylopsin còn làm giảm mức độ XVĐM [1]

- Nguyễn Phương Thanh và cs đã tiến hành nghiên cứu tác dụng điều chỉnh RLLPM của Monacholes trên động vật thực nghiệm và thấy rằng Monacholes liều 2g/kg/ngày và 4g/kg/ngày trên chuột cống trắng có tác dụng

rõ rệt làm hạn chế sự rối loạn lipid gây ra bởi hỗn hợp dầu cholesterol: Làm hạn chế sự tăng TG (giảm 17% và 7,1%), TC (giảm 27,6% và 21,5%), LDL-c (giảm 34,8% và 26,9%) và làm tăng HDL-c (tăng 16,1% và 15,9%) Monacholes liều 2g/kg/ngày và 4g/kg/ngày có tác dụng tương đương với lovastatin 10mg/kg trên chuột cống trắng Monacholes liều 30g/kg trên chuột nhắt trắng có tác dụng hạn chế sự RLLPM gây ra do tiêm màng bụng P407, biểu hiện bằng sự giảm có ý nghĩa thống kê nồng độ TC (24,5%) và LDL-c (31,1%) so với lô mô hình [40]

- Mai Phương Thanh và cs đã tiến hành nghiên cứu tác dụng điều chỉnh RLLPM của bài thuốc Chỉ thực đạo trệ hoàn trên động vật thực nghiệm Kết quả nghiên cứu cho thấy trên cả mô hình nội sinh, ngoại sinh bài thuốc đều có tác dụng rõ rệt hạn chế RLLPM, đồng thời cũng có tác dụng giảm mức độ VXĐM trên thỏ gây tăng lipid máu [39]

1.1.6 Một số mô hình dược lý thực nghiệm gây tăng cholesterol máu để nghiên

cứu thuốc điều trị RLLPM và xơ vữa động mạch

Để nghiên cứu thuốc điều trị rối loạn lipid máu, trước hết phải gây được mô hình rối loạn lipid máu Nhiều loài động vật đã được sử dụng và nhiều mô hình dược lý cũng đã được nghiên cứu và áp dụng thành công trên động vật thực nghiệm Các mô hình có thể thuộc loại: gây tăng cholesterol hoặc lipid máu ngoại sinh (đưa cholesterol và mỡ theo đường thức ăn), gây tăng cholesterol máu nội sinh (gây tăng tổng hợp cholesterol) hoặc phối hợp cả hai loại này Tuy tỉ lệ các loại lipid thay đổi trong mô hình nghiên cứu trên động vật có sự khác biệt với hội chứng rối loạn lipid

máu ở người nhưng phần lớn các mô hình nghiên cứu này cho kết quả có sự tương quan cao với thử nghiệm lâm sàng [33]

Mô hình dược lý thực nghiệm gây rối loạn lipid máu ngoại sinh

Động vật được sử dụng trong các mô hình tăng cholesterol máu thường là: thỏ, chuột cống, chuột nhắt, chuột đồng, khỉ, lợn, chim

- Trên thỏ, mô hình Anichkov được coi là mô hình kinh điển được tiến hành bằng cách cho thỏ ăn cholesterol 0,3 – 0,5 g/kg/ngày trong một năm [1]

- Tại Việt Nam, Đoàn Thị Nhu và cộng sự đã gây mô hình tăng cholesterol máu bằng cách cho thỏ đực uống cholesterol hoà tan trong dầu lạc với liều 0,5 g/kg/ngày kéo dài liên tục trong 2 tuần [33]

- Nhiều nhà nghiên cứu trên thế giới sử dụng chuột cống trắng trưởng thành với mô hình gây tăng cholesterol bằng bổ sung vào chế độ ăn 1% cholesterol, 1% acid mật (acid cholic) và 0,5 % kháng giáp trạng propylthiouracil trong vòng 4 tuần Bổ sung acid cholic làm tăng hấp thu cholesterol và nồng độ cholesterol huyết thanh tăng mạnh hơn nếu sử dụng thêm các hormon kháng giáp trạng

- Nassiri và cộng sự đã cải tiến mô hình này bằng cách cho chuột uống 10ml/kg cân nặng hỗn hợp dầu cholesterol gồm: 10mg cholesterol, 3g propylthiouracil và 10g acid cholic, dầu lạc vừa đủ 100ml Kết quả cho thấy ở nhóm sử dụng 10ml hỗn hợp dầu cholesterol/kg/ngày, cholesterol tăng lên 9,65 ± 0,1 mmol/L trong khi ở nhóm chứng là 3,7 ± 0,1 mmol/L [89] Khi áp dụng mô hình này tại Việt Nam, Nguyễn Phương Thanh đã sử dụng hàm lượng cholesterol tương đương với Nassiri và các nhà nghiên cứu khác nhưng hàm lượng acid cholic thấp hơn 10 lần, PTU thấp hơn 6 lần với mục đích vẫn gây được mô hình để đánh giá tác dụng cùa thuốc và hạn chế được số lượng acid cholic phải sử dụng vì giá thành còn tương đối cao Kết quả nghiên cứu cho thấy mức tăng rõ rệt nồng độ TC ở nhóm uống hỗn hợp dầu cholesterol

với liều 1mL/100g chuột/ngày (tăng gấp 2,04 lần) so với nhóm chứng sinh học [40]

Mô hình dược lý thực nghiệm gây rối loạn lipid máu nội sinh

Chất hay được sử dụng để gây mô hình tăng cholesterol máu nội sinh là Tween 80, Triton WR-1339 (Tyloxapol) và Poloxamer 407 (P-407), được chứng minh có cơ chế là làm tăng tổng hợp cholesterol tại gan

- Phí Thị Ngọc sử dụng Tween 80 trên thỏ theo mô hình của Kell, Correll và Ladd bằng cách tiêm tĩnh mạch vành tai 2,5 ml/kg cân nặng dung dịch tween 80 20 % trong NaCl 0,9 %, kết quả cho thấy nồng độ TC tăng 167

% và TG là 913 % [32]

- Triton WR-1339 là chất diện hoạt, dùng đường toàn thân trên chuột nhắt hoặc chuột cống nhịn đói hoặc không nhịn đói sẽ gây tăng TC và TG huyết thanh Quá trình tăng này có hai giai đoạn: giai đoạn 1 là tăng đột ngột cholesterol và đạt đỉnh 24h sau khi tiêm Triton, sau đó là giai đoạn 2 giảm dần nồng độ cholesterol về bình thường trong 24h tiếp theo [33] Theo một nghiên cứu của Nandakumar và cộng sự, sử dụng mô hình của Moreover Paoletti gây tăng cholesterol bằng triton WR-1339 đường tiêm tĩnh mạch liều 200mg/kg trên chuột nhắt, nồng độ TC tăng 290 % và TG tăng 415% [79]

- Huỳnh Ngọc Trinh và cs đã sử dụng Tyloxapol 3 % đường tiêm màng bụng với liều 300mg/kg trên chuột nhắt trắng để gây mô hình tăng lipid máu, kết quả cho thấy TC tăng 130 % và TG tăng 170 % [115] Millar và cộng sự tiến hành so sánh mô hình gây tăng lipid máu trên chuột nhắt bằng Tyloxapol liều 500mg/kg và Poloxamer 407 liều 1g/kg cho thấy Poloxamer 407 làm tăng

rõ rệt nồng độ TC và TG máu sau 24 giờ, Poloxamer 407 có ưu điểm so với Tyloxapol là có ít tác dụng phụ hơn [75]

- Tại Việt Nam, Nguyễn Phương Thanh đã sử dụng P-407 đường tiêm màng bụng với liều 500 mg/kg trên chuột nhắt trắng để gây mô hình RLLPM

nội sinh, kết quả cho thấy tất cả các thông số lipid máu (TG, TC, HDL-C, LDL-C) đều tăng lên rất cao, trong đó tăng cao nhất là nồng độ TC, gấp khoảng 10 lần so với nhóm chứng [40]

Mô hình dược lý thực nghiệm gây xơ vữa động mạch

Mô hình gây xơ vữa động mạch trên động vật thực nghiệm đầu tiên được tiến hành thành công trên thỏ bởi Saltykow (1908) và Ignatowski (1909) [66]

Thỏ đực, giống New Zealand, 8-10 tuần tuổi, ít có sự khác biệt về trọng lượng,

chia thành các lô (10 con): chứng sinh học, mô hình, chứng dương và lô nghiên cứu Trước khi nghiên cứu, thỏ được lấy máu tĩnh mạch tai để định lượng các chỉ số lipid máu (TC, TG, HDL-C, LDL-C) Các lô thỏ được ăn bổ sung 0,3-2% cholesterol, trong 10-12 tuần trừ nhóm chứng sinh học có chế độ ăn bình thường Trong quá trình nghiên cứu và kết thúc nghiên cứu, định lượng lại các chỉ số lipid trong máu thỏ Kết thúc nghiên cứu, tiến hành giải phẫu động mạch chủ của thỏ để đánh giá tổn thương xơ vữa mạch đại thể và vi thể [66]

Một số nghiên cứu mô hình dược lý thực nghiệm gây xơ vữa động mạch: Shore and Shore (1976) tiến hành nghiên cứu trên hai giống thỏ New Zealand

và Dutch Belt cũng bằng chế độ ăn giàu cholesterol [102]

Tennent và Cs (1960), gây xơ vữa động mạch trên gà trống trong thời gian ngắn bởi liều cao estrogen [104]

Ngoài ra, mô hình gây xơ vữa động mạch còn được nghiên cứu trên các động vật thực nghiệm khác như: chuột, hamster, chim bồ câu, lợn, khỉ…

1.2 Tổng quan về chế phẩm SAD

1.2.1 Giảo cổ lam

Tên khoa học:

Gynostemma pentaphyllum (thunb.) Makino Cucurbitaceae họ Bí

Tên khác: Cỏ Thần kỳ, Ngũ diệp sâm, cây Trường thọ

Cây mọc tự nhiên ở vùng cao

Hình thái thực vật là loài thân thảo,

dây nhỏ dài có tua cuốn (vòi như bầu bí), lá

có dạng chân gà, thường có 5 - 7 lá nhỏ,

quả khô hình cầu, đường kính 5 - 9 mm, khi

chín có mầu đen Cụm hoa hình chuỳ mang

nhiều hoa nhỏ màu trắng, các cánh hoa rời

nhau xòe hình sao, bao phấn dính thành đĩa,

bầu có 3 vòi nhuỵ Thời kì ra hoa từ tháng

6 - 8, thời kì ra quả tháng 9 - 10, thu hoạch

vào tháng 11 - 12 hàng năm [4], [26]

Thành phần hóa học chính của giảo cổ lam là flavonoid, saponin, sterol và các loại đường Saponin trong giảo cổ lam là gypenosid có cấu trúc tri-terpen, tồn tại chủ yếu ở dạng glycosid nhiều gấp 3 - 4 lần so với nhân sâm [4] Thành phần flavonoid của giảo cổ lam ít được nghiên cứu hơn Có ba flavonoid được tìm thấy là ombuin, ombuoisde và rutin [2],[30] Sterol trong giảo cổ lam chứa khoảng 0,0001% bao gồm ergostanol, sitosterol, stigmasterol Ngoài ra, giảo cổ lam còn chứa các vitamin và các chất khoáng khác nhau [99]

Giảo cổ lam là cây thuốc đã được dùng từ rất lâu trong y học cổ truyền Trung Quốc Giảo cổ lam có tính hàn, vị ngọt đắng, vào các kinh Tỳ, Phế, Tâm, và Thận

Có tác dụng ích khí kiện tỳ (tăng cường tiêu hóa), thanh nhiệt giải độc, dưỡng tâm

an thần, chủ trị khí hư âm thương (phần khí, phần âm bị tổn thương)…

Trong nghiên cứu, thực hành lâm sàng, giảo cổ lam được chứng minh có tác dụng điều trị bệnh đái tháo đường, sử dụng giúp hạ áp, hạ lipid máu [35], [58],[89]

Tại Việt Nam, giảo cổ lam được Phạm Thanh Kỳ nghiên cứu từ năm 1997 (đề tài cấp Quốc gia mã số KC.07.03.03) và được Viện dược liệu Trung ương, Đại học

Y Hà Nội kết hợp với Thụy Điển nghiên cứu chuyên sâu về tác dụng hạ đường huyết Giảo cổ lam làm hạ cholesterol toàn phần trong máu, làm tăng miễn dịch và

Hình 1.6: Cây giảo cổ lam

Gynostemma pentaphyllum (thunb.) Makino Cucurbitaceae

nâng cao sức đề kháng của cơ thể, có tác dụng kìm hãm sự phát triển của khối u một cách rõ rệt [25]

Một số nghiên cứu về tác dụng trên chuyển hóa lipid của giảo cổ lam

Tác dụng của giảo cổ lam trên chuyển hóa lipid trên động vật thực nghiệm

- Tác dụng hạ lipid đã được nghiên cứu khi dùng nước sắc của giảo cổ lam cùng với hai loại dược liệu khác, hỗn hợp này giảm đáng kể nồng độ TG

và cholesterol trong huyết tương thỏ và chim cút [84]

- Nghiên cứu của Bùi Thị Quỳnh Nhung (2011) về tính an toàn và tác dụng hạ glucose máu của Vinabetes (gồm 3 loại dược liệu: tri mẫu, bằng lăng nước, giảo cổ lam) trên chuột cống gây mô hình ĐTĐ typ 2 béo phì cũng cho thấy tác dụng hạ glucose máu và lipid máu rất tốt [35]

- Nghiên cứu của Nguyễn Tiến Dẫn (1999), đã định lượng flavonoid , saponin toàn phần và tác dụng dược lý của cây giảo cổ lam, kết quả nghiên cứu đã khẳng định khả năng hạ cholesterol máu của dịch chiết dược liệu có tác dụng ức chế sự tăng cholesterol máu ở chuột ăn cholesterol hàng ngày 71% so với nhóm đối chứng [6]

- Nghiên cứu của Samer M và cộng sự (2006) về ảnh hưởng của giảo cổ lam trên nồng độ glucose máu và lipid máu ở chuột Zucker béo phì, kết quả cho thấy giảo cổ lam ở liều 250mg/kg cân nặng có tác dụng hạ glucose máu,

hạ lipid máu rõ rệt [101]

- Nghiên cứu của Haiyun W và cộng sự (2009) đã chứng minh gypenosid được chiết xuất từ giảo cổ lam với liều 250mg/kg có tác dụng làm giảm đáng kể TC, TG trong máu chuột được gây mô hình tăng lipid cấp và mạn tính [67]

- Trong liệu pháp gây béo phì bằng chế độ ăn giàu lipid, chuột cống được điều trị bằng dịch chiết thô từ giảo cổ lam trong 4 tuần Kết quả cho thấy nồng độ TG trong máu giảm rõ rệt [71]

- Chuột cống Wistar được nuôi bằng thức ăn có hàm lượng chất béo và lượng đường cao, sau 7 tuần điều trị bằng gypenosid toàn phần từ giảo cổ lam

100 mg/kg chuột, làm giảm lượng TG và cholesterol toàn phần là 32% và 34% Trong khi nhóm được điều trị bằng gypenosid toàn phần từ giảo cổ lam

500 mg/kg chuột làm nồng độ TG và cholesterol toàn phần giảm tương đương chuột bình thường, cùng với đó lượng lipid peroxid trong huyết tương và gan cũng giảm rõ rệt [82],[83]

- Ở mô hình gây tăng lipid trên chuột nhắt, gypenosid (300mg/kg) làm giảm cholesterol và TG lần lượt là 12% và 39,1% [98], với liều gypenosid 700mg/kg, lượng cholesterol, TAG, β-lipoprotein huyết tương giảm lầm lượt

là 60,7%, 41,3% và 37,8%, đồng thời HDL tăng 50,6% [110]

- Dịch chiết giảo cổ lam (1:1) có khả năng hạ cholesterol trên thỏ theo phương pháp gây tăng cholesterol nội sinh Kết quả nghiên cứu cho thấy rằng với liều 5 g/kg thể trọng thỏ/ ngày dùng trong 4 ngày liền, tác dụng hạ cholesterol máu có ý nghĩa thống kê p <0,02 so với lô không điều trị [2]

Một số nghiên cứu trên lâm sàng về giảo cổ lam trên chuyển hóa lipid

- Nghiên cứu giảo cổ lam đã được thực hiện nhiều ở các viện, các trường đại học ở Trung Quốc Một thử nghiệm trên 300 bệnh nhân từ bệnh viện hữu nghị Sino-Japan, sử dụng dạng viên nang mềm chứa dịch chiết giảo cổ lam toàn phần, đã cho thấy sự giảm rõ rệt lượng cholesterol, TG, và tăng HDL-C [65]

- Wang và cộng sự đã thử nghiệm trên một nhóm 94 bệnh nhân bị tăng lipid máu Sau 8 tuần điều trị, gypenosid làm giảm cholesterol toàn phần (6,7%), TG (12,8%), LDL (8,3%) và tỷ lệ non-HDL/LDL (10,4%), cũng gây tăng HDL (8,4%) với p < 0,001 [107]

1.2.2 Cây chóc máu

Tên khoa học Salacia cochichinensis L

Tên khác: Cây chóp máu, chóp mào, chóp

mao họ Dây gối Celastraceae

Đặc điểm thực vật: một loài dây leo cao

1–2 m, cành nhỏ có cạnh, mặt dưới lá màu lục

nâu; quả mọng, hình quả lê, chóp quả màu đỏ

Tại Việt Nam, ngoài Vườn quốc gia Bạch

Mã, nơi đang bảo tồn nguồn gen chóc máu thì ở

núi Kim Phụng, thôn Hải Cát, xã Hương Thọ,

huyện Hương Trà, tỉnh Thừa Thiên-Huế người

dân cũng đã phát hiện loài dược liệu này [4], [7]

Bộ phận sử dụng: Rễ cây rửa sạch, thái lát, phơi khô

Thành phần hóa học:

Theo nghiên cứu của tác giả Trần Thị Minh, Nguyễn Thị Hoàng Oanh, Trần Văn Sung (Viện Hóa Học, Viện Khoa học và công nghệ Hà Nội) thành phần trong phân đoạn n-hexan, bằng phương pháp sắc kí kết hợp với phương pháp phổ hiện đại

đã phân lập và nhận dạng được 3 chất triterpen có các khung hopan, lupan, friedel,

taraxeran từ Salacia [29]

Nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của rễ cây chóc máu, Đỗ Thị Nguyệt Quế (2013) đã ban đầu đánh giá tác dụng của một số chất tinh khiết trong phân đoạn n-hexan: Friedelan-3β-ol; 21α, 30-dihydroxyfriedelan và β-sitosterol lên glucose huyết Trên chuột cống trắng gây tăng glucose máu bằng STZ, dịch chiết toàn phần, phân đoạn n-hexan, phân đoạn ethylacetat đều có tác dụng làm hạ đường huyết Trên chuột cống gây ĐTĐ dạng typ 2 bằng HFD và STZ, dịch chiết toàn phần và phân đoạn n-hexan có tác dụng hạ đường huyết và hạ cholesterol toàn phần [36] Ngoài ra, dịch chiết từ lá cây còn chứa mangiferin có hoạt tính kháng virus

cao [29], các hợp chất quercitrin, phenolic, glycoside cũng được tìm thấy trong lá cây [105]

Hình 1.7 Cây chóc máu

Salacia cochichinensis Lour.,

Celastraceae

Tác dụng: Quả và rễ là những phần hữu ích Rễ cây đã được sử dụng như một

loại thuốc trị đái tháo đường S chinensis đã được sử dụng ở Ấn Độ và ở một số

nước khác như một loại thuốc bổ, lọc máu và điều trị vô kinh, đau bụng kinh Vỏ rễ của nó đã được sử dụng trong bệnh lậu, bệnh thấp khớp và bệnh ngoài da Nước dịch chiết của cây được chứng minh có tác dụng hạ đường huyết [50]

Ngoài ra cây chóc máu còn có tác dụng hạn chế sự phát triển tế bào u bướu, trong kinh nghiệm dân gian dùng để trị viêm khớp, phong thấp, đau lưng, mỏi gối,

cơ thể suy nhược

1.2.3 Các nghiên cứu về SAD

Nghiên cứu của Nguyễn Trọng Thông và Cs (2014) về tác dụng hạ glucose máu của chế phẩm SAD trên động vật thực nghiệm và Đỗ Thị Thu Hướng (2014) [17], [43], nghiên cứu tác dụng hạ glucose máu của chế phẩm SAD trên mô hình gây đái tháo đường typ2 ở động vật thực nghiệm Kết quả cho thấy:

- Trên chuột nhắt trắng gây ĐTĐ dạng typ 1, SAD liều 750 mg/kg cân nặng/ngày và liều 3750 mg/kg cân nặng/ngày uống liên tục 1 tuần không làm thay đổi nồng độ glucose máu trên chuột nhắt trắng gây ĐTĐ dạng typ 1 bằng alloxan liều 250 mg/kg

- Trên chuột nhắt trắng được gây ĐTĐ dạng typ 2

SAD cả 2 liều 750 mg/kg cân nặng/ngày và 3750 mg/kg/ngày uống liên tục trong 2 tuần làm giảm rõ nồng độ glucose máu trên chuột nhắt trắng ĐTĐ dạng typ 2 so với thời điểm trước uống thuốc và giảm rõ rệt so với lô mô hình (p < 0,05)

Tác dụng hạ glucose máu của SAD ở cả 2 liều 750 mg/kg/ ngày và 3750 mg/kg/ngày không có sự khác biệt khi so sánh với nhau (p > 0,05) và khi so sánh với gliclazid liều 80mg/kg /ngày (p > 0,05)

- Ngoài ra, kết quả nghiên cứu còn cho thấy bên cạnh tác dụng hạ glucose máu SAD còn có tác dụng hạ lipid máu rõ rệt SAD ở cả 2 liều 750

mg/kg/ngày và liều 3750 mg/kg/ngày uống liên tục trong 2 tuần đều có tác dụng làm giảm rõ nồng độ cholesterol toàn phần, triglycerid và LDL-C của chuột nhắt trắng ĐTĐ dạng typ 2 có ý nghĩa thống kê so với lô mô hình (p < 0,05)

Qua kết quả trên cho thấy SAD vừa có tác dụng hạ glucose máu vừa có tác dụng hạ lipid máu, một rối loạn chuyển hóa kép thường gặp trên lâm sàng Tuy nhiên, để trả lời câu hỏi liệu SAD thật sự có tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid hay không, cần phải tiến hành nghiên cứu trên các mô hình chuyên về đánh giá tác dụng trên lipid Do vậy, đề tài “Nghiên cứu tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu và giảm xơ vữa động mạch của chế phẩm SAD trên động vật thực nghiệm” là cần thiết

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Nguyên liệu nghiên cứu

3.1.1 Chất liệu nghiên cứu

SAD do công ty TNHH Tuệ Linh cung cấp, SAD là sự kết hợp giữa:

Cao khô giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum (thunb.) Makino cucurbitaceae)

và cao khô rễ chóc máu (Salacia cochichinensis Lour., Celastraceae) theo tỷ lệ 1:1

Giảo cổ lam và rễ chóc máu được chiết nóng, dung môi nước, sau đó phun sấy tần sôi Trong nghiên cứu này, SAD được cho động vật thử nghiệm uống nên trước khi uống, thuốc thử được pha trong dung môi là nước tao thành hỗn dịch với tỷ lệ thích hợp tùy nghiên cứu

Cao khô giảo cổ lam và cao khô rễ chóc máu: Theo tiêu chuẩn cơ sở (phụ lục 1 và

phụ lục 2)

3.1.2 Hoá chất và dụng cụ xét nghiệm

3.1.2.1 Hoá chất phục vụ nghiên cứu

- Cholesterol tinh khiết (Merck – Đức)

- Dầu lạc (công ty Trường An – Việt Nam)

- Propylthiouracil viên nén 50 mg (biệt dược Lothisil ® - Young IL Pharma Hàn Quốc SĐK: VN-11252-10

- Acid cholic (Sigma – Singapore)

- Poloxamer 407 (Sigma – Singapore)

- Atorvastatin viên nén 20 mg (Dược phẩm Hậu Giang) SĐK: 18910-13

VD Kit định lượng các enzym và chất chuyển hoá trong máu: TC, TG, LDL-C, HDL-C, ALT (alanin aminotransferase), AST (aspartat

aminotransferase) của hãng Hospitex Diagnostics (Italy) và hãng DIALAB GmbH (Áo)

- Các hoá chất xét nghiệm và làm tiêu bản mô bệnh học

3.1.2.2 Máy móc phục vụ nghiên cứu

Máy Screen master của hãng Hospitex Diagnostics (Italy)

3.2 Đối tượng nghiên cứu

Động vật thực nghiệm được nuôi 3 ngày trước khi nghiên cứu và trong suốt thời gian nghiên cứu bằng thức ăn chuẩn riêng cho từng loại tại phòng thí nghiệm của bộ môn Dược lý – Trường Đại học Y Hà Nội

Nơi cung cấp thức ăn: Công ty liên doanh Guyomarc’h-VCN và Viện Vệ sinh dịch tễ trung ương

mô hình gây RLLPM nội sinh

Chuột nhắt trắng

chủng Swiss

Giống đực, khoẻ mạnh, trọng lượng 25±2g

Tác dụng giảm VXĐM Thỏ chủng

Newzealand White

Khoẻ mạnh, trọng lượng

1,8-2,5kg

3.3 Địa điểm và thời gian nghiên cứu

- Địa điểm nghiên cứu

+ Các nghiên cứu tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu, giảm xơ vữa mạch máu đều được tiến hành tại Bộ môn Dược lý – Trường Đại học Y Hà Nội

+ Các xét nghiệm sinh hoá, định lượng các chất trong các nghiên cứu trên đều được thực hiện tại phòng xét nghiệm, Bộ môn Dược lý – Đại học Y Hà Nội

+ Các xét nghiệm đánh giá tổn thương giải phẫu bệnh động mạch chủ và gan được thực hiện tại Trung tâm nghiên cứu và phát hiện sớm ung thư – Liên hiệp các hội khoa học và kỹ thuật Việt Nam (do PGS.TS

Lê Đình Roanh đọc kết quả)

- Thời gian nghiên cứu: Từ tháng 10/ 2014 đến tháng 7/ 2015

3.4 Phương pháp nghiên cứu

Hình 2.1 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu

3.4.1 Nghiên cứu tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu của chế phẩm

Theo thông tin của nhà sản xuất, liều dùng SAD ở người là 6 viên/ngày tương đương 3g cao/ngày

- Ngoại suy liều trên chuột nhắt (hệ số 12)

Dựa trên phương pháp tính liều ngoại suy để tính liều cho động vật thực nghiệm trong nghiên cứu là chuột nhắt trắng liều tương đương với liều dùng trên người là 0,72 g cao khô/kg/ngày

Chế phẩm SAD

Nghiên cứu tác dụng điều chỉnh RLLPM

Nghiên cứu tác dụng hạn chế VXĐM

Mô hình gây rối

loạn lipid máu

ngoại sinh

Mô hình gây rối loạn lipid máu nội

sinh

Vì vậy, nghiên cứu trên chuột nhắt trắng sử dụng 2 mức liều là 0,72 g cao khô

/kg/ngày và liều gấp 3 lần trên lâm sàng là 2,16 g cao khô /kg/ngày

- Ngoại suy liều ở chuột cống (hệ số 6)

Chuột cống liều tương đương trên lâm sàng là 0,36 g cao khô/ kg /ngày Liều cao gấp 3 trên lâm sàng là 1,08 g cao khô/ kg/ ngày

- Ngoại suy liều ở thỏ (hệ số 3)

Trên thỏ liều tương đương trên lâm sàng là 0,18 g cao khô/ kg/ngày Liều cao gấp 3 trên lâm sàng là 0,54 g cao khô/ kg /ngày

3.4.1.1 Mô hình gây rối loạn lipid máu ngoại sinh

Mô hình gây rối loạn lipid máu ngoại sinh được thực hiện bằng cách cho chuột cống trắng uống hỗn hợp dầu chứa cholesterol (trong 1ml hỗn hợp dầu cholesterol chứa: 0,1g cholesterol, 0,01g acid cholic và 0,005g propylthiouracil) với liều 10 ml/kg (1 ml/100g) cân nặng mỗi ngày vào buổi sáng, trong suốt 4 tuần liên tục (28 ngày) để gây tăng RLLPM

Chuẩn bị hỗn hợp dầu cholesterol

- Cân 50g cholesterol

- Đun nóng cách thuỷ 200 ml dầu lạc, cho cholesterol vào, khuấy đều cho tan hết, để nguội, cho thêm 5g acid cholic và 2,5g propylthiouracil, cuối cùng cho thêm dầu lạc vừa đủ 500ml

- Trong 1ml hỗn hợp dầu cholesterol chứa: 0,1g cholesterol, 0,01g acid cholic

và 0,005g propylthiouracil

Bổ sung acid cholic và PTU là một biện pháp để làm tăng hấp thu cholesterol

và làm giảm chuyển hoá cholesterol thành acid mật, vì vậy gây được mô hình có độ

ổn định, độ đồng nhất cao hơn và rút ngắn thời gian nghiên cứu (Bảng 2.2)

Theo nghiên cứu của Nguyễn Phương Thanh để gây mô hình RLLPM ngoại sinh trên chuột cống trắng với mục đích vẫn gây được mô hình để đánh giá tác dụng cùa thuốc, nhưng hạn chế được số lượng acid cholic phải sử dụng vì giá thành còn tương đối cao [40]