Nghiên cứu tác dụng của cây móc trên thực nghiệm theo hướng làm thuốc cầm máu

ĐẶT VẤN ĐỀ Chảy máu là hiện tượng máu ra khỏi thành mạch vì vỡ mạch hay không vỡ mạch. Là một hội chứng rất hay gặp, có thể xảy ra ở mọi cơ quan trong cơ thể như rong kinh hay băng huyết, chảy máu cam, chảy máu chânrăng, ho ra máu,…Chảy máu gây hậu quả nặng hoặc nhẹ tuỳ thuộc lượng máu bị mất, tốc độ chảy máu và số lần chảy máu. Trong trường hợp chảy máu cấp nặng, có thể gây sốc hoặc thậm chí gây tử vong. Chảy máu mạn tínhvới tình trạng rỉ máu liên tiếp kéo dài, tuy không nguy hiểm trực tiếp nhưng có nhiều hậu quả về sau. Chảy máumạnthường khó khăn trong chẩn đoán, có thể gặptrong các thể bệnh như: ung thư tử cung, loét dạ dày tá tràng, nhiễm ký sinh trùng đường ruột, điều trị thuốc chống đông máu,... Ngo ài ra, chảy máu dẫn đến gây chèn ép, nguy hiểm trong các trường hợp như: tụmáu trong não, chảy máu màng não, chảy máu bao tim (do vỡ tim)có thể gây tử vong đột ngột 23. Có rất nhiều trường hợp chảy máu kết hợp với các triệu chứng viêm, nhưng cũng có khi chảy máu đơn thuần. Các bệnh liên quan đến chảy máu rất đa dạng, phổ biến và nguy hiểm nếu không điều trị kịp thời. Trong khi đó thuốc điều trị các bệnh chảy máu còn ítvà còn nhiều tác dụng không muốn, đồng thời là những nội dung nghiên cứu còn ít được quan tâm gần đây. Vì vậy,việc tìm kiếm các thuốc điều trị bệnh chảy máucó nguồn gốc dược liệu đang là vấn đề cấp thiết hiện nay. Việt Nam có nền y học cổ truyền lâu đời và phong phú. Trong kho tàng đó, nhiều bài thuốc, vị thuốc dùng để điều trị bệnh chảy máunhư: tông lư, trắc bách diệp, hoè hoa, cỏ nhọ nồi,…Tông lư là bẹ củacây móc, được sử dụng rất phổ biến trong dân gian. Ở nước ta, cây móc mọc hoang và được trồng ở nhiều nơi. Từ lâu, người ta đã dùng bẹ vàrễ móc để chữa các bệnh

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM THỊ MAI HƯƠNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA CÂY MÓC TRÊN THỰC NGHIỆM THEO HƯỚNG LÀM THUỐC CẦM MÁU KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM THỊ MAI HƯƠNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA CÂY MÓC TRÊN THỰC NGHIỆM THEO HƯỚNG LÀM THUỐC CẦM MÁU KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS. TS. Đào Thị Vui Ths. Nguyễn Hương Giang Nơi thực hiện: Bộ môn Dược lực- Đại Học Dược Hà Nội HÀ NỘI - 2013 LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc em xin gửi lời cảm ơn chân thành nhất tới PGS.TS. Đào Thị Vui – Bộ môn Dược lực Ths. Nguyễn Thị Hương Giang – Bộ môn Y học cơ sở TS. Nguyễn Thu Hằng - Bộ môn Dược liệu Những cô giáo luôn tận tình dạy dỗ, chỉ bảo và giúp đỡ em trong suốt quá trình làm khoá luận. Em cũng xin chân thành cảm ơn các thầy, cô giáo và anh chị kĩ thuât viên Bộ môn Dược lực, Bộ môn Y học cơ sở và Bộ môn Dược liệu đã nhiệt tình giúp đỡ em hoàn thành khoá luận. Em xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu, các phòng ban, cùng toàn thể các thầy cô giáo, các cán bộ trường Đại học Dược Hà Nội đã tạo điều kiện để em có thể lĩnh hội những kiến thức quí giá về ngành Dược trong suốt 5 năm học. Cuối cùng, em gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân, bạn bè đã luôn ủng hộ, giúp đỡ em trong quá trình thực hiện khoá luận này. Hà Nội, ngày 20 tháng 5 năm 2013 Sinh viên Phạm Thị Mai Hương DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT Kí hiệu 1 ADP Adrenosin diphosphat 2 APTT Thời gian thromboplastin hoạt hoá từng phần (Activated Partial Thromboplastin Time) 3 FDP Sản phẩm phân huỷ fibrin 4 IgG Immunoglobulin G 5 PIVKA Các tiền chất đông máu (Protein induced by vitamine K absence) 6 PT Thời gian prothrombin (Prothrombin Time) 7 TT Thời gian thrombin (Thrombin Time) DANH MỤC CÁC BẢNG STT Ký hiệu Tên bảng Trang 1 Bảng 3.1 Khảo sát tác dụng cầm máu trên thời gian chảy máu của bẹ móc 30 2 Bảng 3.2 So sánh tác dụng của bẹ và rễ móc trên thời gian chảy máu 32 3 Bảng 3.3 Ảnh hưởng của số lần dùng bẹ móc tới thời gian chảy máu đuôi chuột 34 4 Bảng 3.4 Ảnh hưởng của bẹ móc đến số lượng tiểu cầu và một số chỉ số đông máu cơ bản 35 5 Bảng 3.5 Tác dụng tại chỗ của bẹ móc trên thời gian chảy máu 36 6 Bảng 3.6 Tác dụng chống viêm cấp đường uống của bẹ móc 38 7 Bảng 3.7 Tác dụng chống viêm cấp tại chỗ của bẹ móc 39 8 Bảng 3.8 Số chuột chết trong vòng 72 giờ đầu của thử độc tính cấp 41 9 Bảng 3.9 Tình hình chung của chuột trong 7 ngày thử độc tính cấp 41 DANH MỤC CÁC HÌNH STT Ký hiệu Tên bảng Trang 1 Hình 1.1 Sơ đồ quá trình đông máu 6 2 Hình 2.1 Ảnh cây móc (Caryota urens L., Arecaceae) chụp tại Phù Ninh, Phú Thọ 21 3 Hình 2.2 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 23 9 Hình 2.3 Sơ đồ qui trình nghiên cứu tác dụng chống viêm tại chỗ của bẹ móc 27 4 Hình 3.1 Khảo sát liều dùng của bẹ móc 30 3 Hình 3.2 So sánh tác dụng của bẹ và rễ móc trên thời gian chảy máu 32 4 Hình 3.3 Tác dụng tại chỗ của bẹ móc trên thời gian chảy máu 36 5 Hình 3.4 Tác dụng chống viêm cấp đường uống của bẹ móc 38 6 Hình 3.5 Tác dụng chống viêm cấp tại chỗ của bẹ móc 40 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Chảy máu là hiện tượng máu ra khỏi thành mạch vì vỡ mạch hay không vỡ mạch. Là một hội chứng rất hay gặp, có thể xảy ra ở mọi cơ quan trong cơ thể như rong kinh hay băng huyết, chảy máu cam, chảy máu chân răng, ho ra máu,…Chảy máu gây hậu quả nặng hoặc nhẹ tuỳ thuộc lượng máu bị mất, tốc độ chảy máu và số lần chảy máu. Trong trường hợp chảy máu cấp nặng, có thể gây sốc hoặc thậm chí gây tử vong. Chảy máu mạn tính với tình trạng rỉ máu liên tiếp kéo dài, tuy không nguy hiểm trực tiếp nhưng có nhiều hậu quả về sau. Chảy máu mạn thường khó khăn trong chẩn đoán, có thể gặp trong các thể bệnh như: ung thư tử cung, loét dạ dày tá tràng, nhiễm ký sinh trùng đường ruột, điều trị thuốc chống đông máu, Ngoài ra, chảy máu dẫn đến gây chèn ép, nguy hiểm trong các trường hợp như: tụ máu trong não, chảy máu màng não, chảy máu bao tim (do vỡ tim) có thể gây tử vong đột ngột [23]. Có rất nhiều trường hợp chảy máu kết hợp với các triệu chứng viêm, nhưng cũng có khi chảy máu đơn thuần. Các bệnh liên quan đến chảy máu rất đa dạng, phổ biến và nguy hiểm nếu không điều trị kịp thời. Trong khi đó thuốc điều trị các bệnh chảy máu còn ít và còn nhiều tác dụng không muốn, đồng thời là những nội dung nghiên cứu còn ít được quan tâm gần đây. Vì vậy, việc tìm kiếm các thuốc điều trị bệnh chảy máu có nguồn gốc dược liệu đang là vấn đề cấp thiết hiện nay. Việt Nam có nền y học cổ truyền lâu đời và phong phú. Trong kho tàng đó, nhiều bài thuốc, vị thuốc dùng để điều trị bệnh chảy máu như: tông lư, trắc bách diệp, hoè hoa, cỏ nhọ nồi,…Tông lư là bẹ của cây móc, được sử dụng rất phổ biến trong dân gian. Ở nước ta, cây móc mọc hoang và được trồng ở nhiều nơi. Từ lâu, người ta đã dùng bẹ và rễ móc để chữa các bệnh 2 chảy máu như: đái ra máu, lỵ ra máu, bạch đới, rong kinh, rong huyết, ho ra máu, sưng và chảy máu chân răng,…đã cho kết quả tốt. Tuy nhiên cho tới nay chưa có đề tài nào đánh giá tác dụng cầm máu của rễ và bẹ móc trên thực nghiệm cũng như trên lâm sàng nên việc áp dụng điều trị còn hạn chế. Để góp phần chứng minh tác dụng của rễ và bẹ móc, hướng tới tạo ra sản phẩm thuốc có tác dụng cầm máu, chống viêm từ cây móc chúng tôi thực hiện đề tài: “Nghiên cứu tác dụng của cây móc trên thực nghiệm theo hướng làm thuốc cầm máu” gồm 3 mục tiêu chính: 1. Đánh giá tác dụng cầm máu của cây móc trên thực nghiệm 2. Đánh giá tác dụng chống viêm của bẹ móc trên thực nghiệm 3. Độc tính cấp của bẹ móc 3 Chương 1 TỔNG QUAN 1.1. Quá trình đông máu, cầm máu Cầm máu là một quá trình diễn ra nhằm hạn chế hoặc ngăn cản máu chảy ra khỏi mạch khi thành mạch bị tổn thương. Quá trình cầm máu được thực hiện qua năm giai đoạn: co mạch, hình thành nút tiểu cầu, đông máu, co cục máu đông và tan cục máu đông. Sau khi quá trình cầm máu hoàn thành tại nơi tổn thương mô xơ phát triển thành sẹo làm liền vết thương [2]. 1.1.1. Co mạch tại chỗ Ngay sau khi thành mạch bị tổn thương, mạch máu sẽ co lại để hạn chế lượng máu thoát ra ngoài. Co mạch còn có tác dụng làm tốc độ lưu chuyển máu chậm lại, tạo điều kiện cho việc hình thành nút tiểu cầu và cục máu đông. Cơ chế của co mạch là do những xung động đau nơi mạch bị tổn thương sẽ hoạt hóa thần kinh giao cảm gây phản xạ co mạch. Ngoài ra, tại vị trí tổn thương sẽ xuất hiện hiệu điện thế hoạt động, điện thế hoạt động này sẽ lan truyền dọc theo thành mạch gây co mạch. Serotonin và thromboxanA 2 được bài tiết từ tiểu cầu cũng gây tác dụng co mạch. Tổn thương càng lớn thì mức độ co mạch càng mạnh. Co mạch có thể kéo dài hàng phút thậm chí hàng giờ để tạo điều kiện cho tiểu cầu kết dính và kết tụ vào nơi tổn thương [2]. 1.1.2. Tạo nút tiểu cầu Bình thường tế bào nội mô thành mạch máu bài tiết prostacyclin có tác dụng ức chế kết dính tiểu cầu. Khi thành mạch bị tổn thương sẽ làm rách lớp nội mô, để lộ lớp collagen tích điện (+) ở bên dưới. Do tích điện âm và có receptor với collagen nên tiểu cầu có thể dễ dàng kết dính với thành mạch tổn thương. Bản thân tế bào nội mô bị tổn thương còn giải phóng ra yếu tố hoạt 4 hoá tiểu cầu, yếu tố von Willebrand cần cho sự kết dính tiểu cầu. Sau khi đã kết dính vào nơi có tổn thương, tiểu cầu được hoạt hoá, bề mặt trở nên xù xì đồng thời bài tiết yếu tố hoạt hoá tiểu cầu, ADP và thromboxan A 2 (thromboxan A 2 được tổng hợp từ phospholipid của màng tiểu cầu). Các chất này sẽ làm các tiểu cầu khác lưu động trong máu kết tụ với các tiểu cầu vừa bị kết dính. Các tiểu cầu mới kết tụ sẽ tiếp tục được hoạt hoá bài tiết các chất hoá học làm cho càng có thêm nhiều tiểu cầu mới đến kết tụ hình thành nút tiểu cầu. Sự hình thành nút tiểu cầu có thể sơ bộ bịt kín vết thương làm cho máu ngừng chảy nếu tổn thương ở mạch nhỏ, đặc biệt là hàng ngàn vết thương nhỏ vẫn xảy ra hàng ngày. Thời gian hình thành nút tiểu cầu hay còn được gọi là thời gian máu chảy bình thường khoảng 2 – 4 phút. Khi số lượng hoặc chất lượng tiểu cầu giảm sẽ làm thời gian chảy máu kéo dài, xuất hiện nhiều nốt xuất huyết dưới da và niêm mạc, bệnh nhân dễ bị chảy máu khi bị sang chấn nhẹ và thời gian chảy máu kéo dài trên 6 phút. Chảy máu nặng xảy ra khi số lượng tiểu cầu giảm dưới 50G/l, nếu số lượng tiểu cầu chỉ còn 10G/l thì bệnh nhân sẽ chết vì không cầm được máu [2]. 1.1.3. Tạo cục máu đông Đông máu là trạng thái tự bảo vệ của cơ thể khi có chảy máu. Sau khi ra ngoài lòng mạch 2 – 4 phút, máu đông lại. Đông máu nghĩa là máu chuyển từ thể lỏng sang thể đặc nhờ chuyển fibrinogen hoà tan trong huyết tương thành fibrin không hoà tan dưới xúc tác của thrombin [14]. Đông máu là một chuỗi phản ứng hóa học của yếu tố đông máu có trong huyết tương, các mô tổn thương và tiểu cầu. Đông máu gồm 3 giai đoạn: giai đoạn tạo prothrombinase, giai đoạn chuyển prothrombin thành thrombin và giai đoạn chuyển fibrinogen thành fibrin [2]. [...]... dùng của bẹ móc trên thời gian chảy máu So sánh tác dụng của rễ và bẹ móc trên thời gian chảy máu Ảnh hưởng của số lần dùng bẹ móc tới thời gian chảy máu Ảnh hưởng của bẹ móc trên tiểu cầu và các chỉ số đông máu Hình 2.2: Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp nghiên cứu tác dụng cầm máu của cây móc 2.3.1.1 Phương pháp nghiên cứu tác dụng cầm máu đường uống  Khảo sát liều dùng của bẹ móc trên. .. Chương 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Kết quả nghiên cứu 3.1.1 Nghiên cứu tác dụng cầm máu Để đánh giá tác dụng cầm máu của rễ và bẹ cây móc, khoá luận tiến hành xác định thời gian máu chảy, thời gian máu đông, số lượng tiểu cầu và một số thông số đông máu cơ bản trên chuột thực nghiệm theo đường uống và xác định thời gian chảy máu theo đường dùng tại chỗ 3.1.1.1 Tác dụng cầm máu đường uống của. .. xuất Các hoá chất khác đạt tiêu chuẩn thí nghiệm do phòng giáo tài trường đại học Dược cung cấp 2.2 Nội dung nghiên cứu - Đánh giá tác dụng cầm máu của rễ và bẹ móc - Đánh giá tác dụng chống viêm cấp của bẹ móc - Độc tính cấp của bẹ móc 2.3 Phương pháp nghiên cứu Sơ đồ phương pháp nghiên cứu được trình bày trong sơ đồ 2.2 23 Phương pháp nghiên cứu Tác dụng cầm máu Tại chỗ Chống viêm Đường uống Tại chỗ... bẹ móc Để nghiên cứu tác dụng cầm máu, nhiều tác giả đã tiến hành xác định thời gian chảy máu đuôi chuột Đây là phương pháp được sử dụng rất phổ biến do kĩ thuật đơn giản và có thể liên quan đến cả yếu tố thành mạch cũng như yếu tố đông máu Vì vậy, chúng tôi lựa chọn mô hình dựa trên xác định thời gian chảy máu đuôi chuột để nghiên cứu tác dụng cầm máu của rễ và bẹ móc  Khảo sát liều dùng của bẹ móc. .. cơ bản cho cầm máu: Các xét nghiệm cơ bản cho cầm máu giúp bác sĩ trong việc chẩn đoán và điều trị các bệnh liên quan tới chảy máu bao gồm: xét nghiệm giai đoạn cầm máu ban đầu, xét nghiệm đông máu, xét nghiệm giai đoạn phân huỷ fibrin 1.3.1 Xét nghiệm của giai đoạn cầm máu ban đầu Giai đoạn cầm máu ban đầu bao gồm giai đoạn thành mạch và hình thành nút tiểu cầu Để đánh giá giai đoạn cầm máu ban đầu,... tiểu cầu có tác dụng làm đông và cầm máu  Carbazochrom Carbazochrom làm tăng sức đề kháng của mao mạch, giảm tính thấm thành mạch nên giảm thời gian chảy máu Carbazochrom không tác dụng lên quá trình đông máu [14]  Ethamsylat và dobesylat calci Cơ chế: làm tăng sức đề kháng của mao mạch, giảm tính thấm thành mạch nên giảm thời gian chảy máu 1.4.1.2 Các thuốc cầm máu tại chỗ Các thuốc cầm máu tại chỗ... Euglobulin Xét nghiệm thời gian phân giải Euglobulin nhằm đánh giá sự có mặt của yếu tố hoạt hoá plasminogen Thời gian phân giải Euglobulin bình thường trên 90 phút Thời gian này ngắn lại khi có sự phân huỷ fibrin hệ thống [19] 1.4 Các thuốc cầm máu 1.4.1 Các thuốc tân dược Thuốc cầm máu có thể chia thành 2 loại: thuốc cầm máu toàn thân và thuốc cầm máu tại chỗ [14] 1.4.1.1 Thuốc cầm máu toàn thân ... huyết, lỵ, chảy máu mủ [9] Ngoài ra, bẹ móc non còn có tác dụng làm sít ruột, tan hòn cục Quả móc vị cay, tính mát, có tác dụng giải khát và chống mệt mỏi Rượu móc có tác dụng nhuận tràng [13], [25] 1.6.6 Công dụng Bẹ móc được dùng làm thuốc chữa đái ra máu, đái rắt, tiểu tiện không thông, lỵ ra máu, bạch đới, rong kinh, rong huyết, ho ra máu Liều dùng: 20g đốt tồn tính tán bột uống hoặc sắc thuốc Nhân quả... Phương pháp này được tiến hành lần đầu tiên do Dottl và Ripke năm 1936 và được sử dụng phổ biến để nghiên cứu tác dụng cầm máu trong các thí 15 nghiệm dược lý Phương pháp này dùng để đánh giá những khiếm khuyết của hệ thống đông máu và ảnh hưởng của thuốc lên quá trình cầm máu [30] Tiến hành: thí nghiệm có thể tiến hành trên chuột cống trắng và chuột nhắt trắng Gây mê chuột, dùng dao lam sắc cắt 1 đoạn... (1) 2.3.2 Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp 2.3.2.1.Phương pháp nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp đường uống Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp trên mô hình gây phù bằng carrageenan [22] Chuột cống trắng được chia thành các 4 lô, mỗi lô 10 con Lô chứng: uống nước muối sinh lý 26 Lô indomethacin: uống indomethacin liều10mg/kg chuột Lô bẹ 3: uống cao bẹ móc mức liều 3g/kg chuột Cho chuột uống thuốc liên . tới tạo ra sản phẩm thuốc có tác dụng cầm máu, chống viêm từ cây móc chúng tôi thực hiện đề tài: Nghiên cứu tác dụng của cây móc trên thực nghiệm theo hướng làm thuốc cầm máu gồm 3 mục tiêu. 3 mục tiêu chính: 1. Đánh giá tác dụng cầm máu của cây móc trên thực nghiệm 2. Đánh giá tác dụng chống viêm của bẹ móc trên thực nghiệm 3. Độc tính cấp của bẹ móc 3. NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA CÂY MÓC TRÊN THỰC NGHIỆM THEO HƯỚNG LÀM THUỐC CẦM MÁU KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS. TS. Đào Thị Vui Ths. Nguyễn Hương Giang Nơi thực