Nghiên cứu tác dụng của cây móc trên thực nghiệm theo hướng làm thuốc cầm máu

Trong kho tàng đó, nhiều bài thuốc, vị thuốc dùng để điều trị bệnh chảy máu như: tông lư, trắc bách diệp, hoè hoa, cỏ nhọ nồi,…Tông lư là bẹ của cây móc, được sử dụng rất phổ biến trong

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

PHẠM THỊ MAI HƯƠNG

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA CÂY MÓC TRÊN THỰC NGHIỆM THEO HƯỚNG LÀM THUỐC CẦM MÁU

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI - 2013

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

PHẠM THỊ MAI HƯƠNG

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA CÂY MÓC TRÊN THỰC NGHIỆM THEO HƯỚNG LÀM THUỐC CẦM MÁU

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

Người hướng dẫn:

PGS TS Đào Thị Vui Ths Nguyễn Hương Giang

LỜI CẢM ƠN

Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc em xin gửi lời cảm ơn chân thành nhất tới

PGS.TS Đào Thị Vui – Bộ môn Dược lực

Ths Nguyễn Thị Hương Giang – Bộ môn Y học cơ sở

TS Nguyễn Thu Hằng - Bộ môn Dược liệu

Những cô giáo luôn tận tình dạy dỗ, chỉ bảo và giúp đỡ em trong suốt quá trình làm khoá luận

Em cũng xin chân thành cảm ơn các thầy, cô giáo và anh chị kĩ thuât viên Bộ môn Dược lực, Bộ môn Y học cơ sở và Bộ môn Dược liệu đã nhiệt tình giúp đỡ em hoàn thành khoá luận

Em xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu, các phòng ban, cùng toàn thể các thầy cô giáo, các cán bộ trường Đại học Dược Hà Nội đã tạo điều kiện để

em có thể lĩnh hội những kiến thức quí giá về ngành Dược trong suốt 5 năm

học

Cuối cùng, em gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân, bạn bè

đã luôn ủng hộ, giúp đỡ em trong quá trình thực hiện khoá luận này

Hà Nội, ngày 20 tháng 5 năm 2013 Sinh viên

Phạm Thị Mai Hương

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

2 APTT Thời gian thromboplastin hoạt hoá từng phần

(Activated Partial Thromboplastin Time)

(Protein induced by vitamine K absence)

(Prothrombin Time)

(Thrombin Time)

DANH MỤC CÁC BẢNG

1 Bảng 3.1 Khảo sát tác dụng cầm máu trên thời gian chảy

3 Bảng 3.3 Ảnh hưởng của số lần dùng bẹ móc tới thời gian

chảy máu đuôi chuột

34

4 Bảng 3.4 Ảnh hưởng của bẹ móc đến số lượng tiểu cầu và

một số chỉ số đông máu cơ bản

7 Bảng 3.7 Tác dụng chống viêm cấp tại chỗ của bẹ móc 39

8 Bảng 3.8 Số chuột chết trong vòng 72 giờ đầu của thử độc

DANH MỤC CÁC HÌNH

2 Hình 2.1 Ảnh cây móc (Caryota urens L., Arecaceae)

chụp tại Phù Ninh, Phú Thọ

21

9 Hình 2.3 Sơ đồ qui trình nghiên cứu tác dụng chống viêm

tại chỗ của bẹ móc

27

3 Hình 3.2 So sánh tác dụng của bẹ và rễ móc trên thời gian

ĐẶT VẤN ĐỀ

Chảy máu là hiện tượng máu ra khỏi thành mạch vì vỡ mạch hay không

vỡ mạch Là một hội chứng rất hay gặp, có thể xảy ra ở mọi cơ quan trong cơ thể như rong kinh hay băng huyết, chảy máu cam, chảy máu chân răng, ho ra máu,…Chảy máu gây hậu quả nặng hoặc nhẹ tuỳ thuộc lượng máu bị mất, tốc

độ chảy máu và số lần chảy máu Trong trường hợp chảy máu cấp nặng, có thể gây sốc hoặc thậm chí gây tử vong Chảy máu mạn tính với tình trạng rỉ máu liên tiếp kéo dài, tuy không nguy hiểm trực tiếp nhưng có nhiều hậu quả

về sau Chảy máu mạn thường khó khăn trong chẩn đoán, có thể gặp trong các thể bệnh như: ung thư tử cung, loét dạ dày tá tràng, nhiễm ký sinh trùng đường ruột, điều trị thuốc chống đông máu, Ngoài ra, chảy máu dẫn đến gây chèn ép, nguy hiểm trong các trường hợp như: tụ máu trong não, chảy máu màng não, chảy máu bao tim (do vỡ tim) có thể gây tử vong đột ngột [23] Có rất nhiều trường hợp chảy máu kết hợp với các triệu chứng viêm, nhưng cũng

có khi chảy máu đơn thuần Các bệnh liên quan đến chảy máu rất đa dạng, phổ biến và nguy hiểm nếu không điều trị kịp thời Trong khi đó thuốc điều trị các bệnh chảy máu còn ít và còn nhiều tác dụng không muốn, đồng thời là những nội dung nghiên cứu còn ít được quan tâm gần đây Vì vậy, việc tìm kiếm các thuốc điều trị bệnh chảy máu có nguồn gốc dược liệu đang là vấn đề cấp thiết hiện nay

Việt Nam có nền y học cổ truyền lâu đời và phong phú Trong kho tàng

đó, nhiều bài thuốc, vị thuốc dùng để điều trị bệnh chảy máu như: tông lư, trắc bách diệp, hoè hoa, cỏ nhọ nồi,…Tông lư là bẹ của cây móc, được sử dụng rất phổ biến trong dân gian Ở nước ta, cây móc mọc hoang và được trồng ở nhiều nơi Từ lâu, người ta đã dùng bẹ và rễ móc để chữa các bệnh

chảy máu như: đái ra máu, lỵ ra máu, bạch đới, rong kinh, rong huyết, ho ra máu, sưng và chảy máu chân răng,…đã cho kết quả tốt Tuy nhiên cho tới nay chưa có đề tài nào đánh giá tác dụng cầm máu của rễ và bẹ móc trên thực nghiệm cũng như trên lâm sàng nên việc áp dụng điều trị còn hạn chế Để góp phần chứng minh tác dụng của rễ và bẹ móc, hướng tới tạo ra sản phẩm thuốc

có tác dụng cầm máu, chống viêm từ cây móc chúng tôi thực hiện đề tài:

“Nghiên cứu tác dụng của cây móc trên thực nghiệm theo hướng làm thuốc cầm máu” gồm 3 mục tiêu chính:

1 Đánh giá tác dụng cầm máu của cây móc trên thực nghiệm

2 Đánh giá tác dụng chống viêm của bẹ móc trên thực nghiệm

3 Độc tính cấp của bẹ móc

Chương 1

TỔNG QUAN

1.1 Quá trình đông máu, cầm máu

Cầm máu là một quá trình diễn ra nhằm hạn chế hoặc ngăn cản máu chảy ra khỏi mạch khi thành mạch bị tổn thương Quá trình cầm máu được thực hiện qua năm giai đoạn: co mạch, hình thành nút tiểu cầu, đông máu, co cục máu đông và tan cục máu đông Sau khi quá trình cầm máu hoàn thành tại nơi tổn thương mô xơ phát triển thành sẹo làm liền vết thương [2]

1.1.1 Co mạch tại chỗ

Ngay sau khi thành mạch bị tổn thương, mạch máu sẽ co lại để hạn chế lượng máu thoát ra ngoài Co mạch còn có tác dụng làm tốc độ lưu chuyển máu chậm lại, tạo điều kiện cho việc hình thành nút tiểu cầu và cục máu đông

Cơ chế của co mạch là do những xung động đau nơi mạch bị tổn thương sẽ hoạt hóa thần kinh giao cảm gây phản xạ co mạch Ngoài ra, tại vị trí tổn thương sẽ xuất hiện hiệu điện thế hoạt động, điện thế hoạt động này sẽ lan truyền dọc theo thành mạch gây co mạch Serotonin và thromboxanA2 được bài tiết từ tiểu cầu cũng gây tác dụng co mạch Tổn thương càng lớn thì mức

độ co mạch càng mạnh Co mạch có thể kéo dài hàng phút thậm chí hàng giờ

để tạo điều kiện cho tiểu cầu kết dính và kết tụ vào nơi tổn thương [2]

1.1.2 Tạo nút tiểu cầu

Bình thường tế bào nội mô thành mạch máu bài tiết prostacyclin có tác dụng ức chế kết dính tiểu cầu Khi thành mạch bị tổn thương sẽ làm rách lớp nội mô, để lộ lớp collagen tích điện (+) ở bên dưới Do tích điện âm và có receptor với collagen nên tiểu cầu có thể dễ dàng kết dính với thành mạch tổn thương Bản thân tế bào nội mô bị tổn thương còn giải phóng ra yếu tố hoạt

hoá tiểu cầu, yếu tố von Willebrand cần cho sự kết dính tiểu cầu Sau khi đã kết dính vào nơi có tổn thương, tiểu cầu được hoạt hoá, bề mặt trở nên xù xì đồng thời bài tiết yếu tố hoạt hoá tiểu cầu, ADP và thromboxan A2(thromboxan A2 được tổng hợp từ phospholipid của màng tiểu cầu) Các chất này sẽ làm các tiểu cầu khác lưu động trong máu kết tụ với các tiểu cầu vừa

bị kết dính Các tiểu cầu mới kết tụ sẽ tiếp tục được hoạt hoá bài tiết các chất hoá học làm cho càng có thêm nhiều tiểu cầu mới đến kết tụ hình thành nút tiểu cầu Sự hình thành nút tiểu cầu có thể sơ bộ bịt kín vết thương làm cho máu ngừng chảy nếu tổn thương ở mạch nhỏ, đặc biệt là hàng ngàn vết thương nhỏ vẫn xảy ra hàng ngày Thời gian hình thành nút tiểu cầu hay còn được gọi là thời gian máu chảy bình thường khoảng 2 – 4 phút

Khi số lượng hoặc chất lượng tiểu cầu giảm sẽ làm thời gian chảy máu kéo dài, xuất hiện nhiều nốt xuất huyết dưới da và niêm mạc, bệnh nhân dễ bị chảy máu khi bị sang chấn nhẹ và thời gian chảy máu kéo dài trên 6 phút Chảy máu nặng xảy ra khi số lượng tiểu cầu giảm dưới 50G/l, nếu số lượng tiểu cầu chỉ còn 10G/l thì bệnh nhân sẽ chết vì không cầm được máu [2]

1.1.3 Tạo cục máu đông

Đông máu là trạng thái tự bảo vệ của cơ thể khi có chảy máu Sau khi

ra ngoài lòng mạch 2 – 4 phút, máu đông lại Đông máu nghĩa là máu chuyển

từ thể lỏng sang thể đặc nhờ chuyển fibrinogen hoà tan trong huyết tương thành fibrin không hoà tan dưới xúc tác của thrombin [14]

Đông máu là một chuỗi phản ứng hóa học của yếu tố đông máu có trong huyết tương, các mô tổn thương và tiểu cầu Đông máu gồm 3 giai đoạn: giai đoạn tạo prothrombinase, giai đoạn chuyển prothrombin thành thrombin và giai đoạn chuyển fibrinogen thành fibrin [2]

1.1.3.1 Giai đoạn tạo prothrombinase

Đây là giai đoạn phức tạp nhất và kéo dài nhất của quá trình đông máu Giai đoạn này được xảy ra theo hai con đường: nội sinh và ngoại sinh

Ngoại sinh: khi mô bị tổn thương, giải phóng thromboplastin (yếu tố III) và phospholipid của mô Hai yếu tố trên kết hợp với Ca2+ hoạt hoá yếu tố VII Yếu tố VII kết hợp với Ca2+ hoạt hoá yếu tố IX Yếu tố IX hoạt hoá kết hợp với Ca2+ và phospholipid mô hoạt hoá yếu tố V Yếu tố V hoạt hoá yếu tạo prothrombinase ngoại sinh Như vậy, yếu tố III của mô khởi phát con đường đông máu ngoại sinh

Nội sinh (chất hoạt hoá ở máu): khi thành mạch tổn thương, các sợi collagen hoạt hoá XII trong máu Yếu tố XII hoạt hoá IX Yếu tố IX hoạt hoá VIII, phospholipid tiểu cầu hoạt hoá XI Yếu tố XI hoạt hoá IX Yếu tố IX hoạt hoá X Yếu tố X hoạt hoá V Yếu tố V hoạt hoá kết hợp Ca2+ tạo prothrombinase nội sinh [14] Như vậy, yếu tố XII và tiểu cầu khởi phát con đường đông máu nội sinh

Đông máu theo con đường ngoại sinh xảy ra nhanh và mạnh hơn rất nhiều so với conđường nội sinh Vài giây sau khi mạch máu tổn thương đã có

sự thành lập thrombin và sớm hình thành fibrin

Hình 1: Sơ đồ quá trình đông máu

1.1.3.2 Giai đoạn chuyển prothrombin thành thrombin

Prothrombin là một globulin có trong huyết tương và do gan sản xuất

Nó là tiền chất không hoạt động của một enzym tiêu protein rất mạnh là thrombin Phức hợp enzym prothrombinase được tạo thành cùng với ion Ca2+xúc tác cho quá trình chuyển prothrombin thành thrombin

Thrombin không chỉ có tác dụng đối với sự hình thành và ổn định mạng fibrin mà còn có tác dụng hoạt hoá yếu tố VIII trong con đường nội sinh, yếu

tố V trong con đường ngoại sinh Do vậy, với một lượng nhỏ thrombin có sẵn trong máu và sau đó được sinh ra nhanh chóng từ con đường ngoại sinh sẽ lập tức tạo ra một feedback dương tính để tạo ra nhiều thrombin hơn, hoạt hoá quá trình hình thành cục máu đông [2]

1.1.3.3 Giai đoạn chuyển fibrinogen thành fibrin

Dưới tác dụng của thrombin các phân tử fibrinogen bình thường hoà tan sẽ biến thành fibrin đơn phân Các fibrin đơn phân sẽ trùng hợp để tạo ra sợi fibrin trong vài giây Các sợi fibrin này nối lại với nhau bằng cầu nối hydro lỏng lẻo nên không bền Dưới tác dụng của yếu tố ổn định fibrin - yếu

tố `XIIIh (do thrombin hoạt hoá), các cầu nối hydro được thay thế bằng các cầu nối đồng hoá trị, tạo ra mạng lưới fibrin bền vững Cục máu đông hình thành sẽ có tác dụng bịt kín chỗ tổn thương một cách vững chắc [2]

1.1.4 Co cục máu đông và tan cục máu đông

1.1.4.1 Co cục máu đông

Sau khi máu đông khoảng 1 – 2 giờ, cục máu đông co lại và giải phóng

ra toàn bộ dịch của nó gọi là huyết thanh Hiện tượng co cục máu đông có tác dụng làm mép vết thương khép lại gần nhau hơn để tạo điều kiện cho sự tạo sẹo [2]

1.1.4.2 Tan cục máu đông

Là hiện tượng cục máu đông tan ra dưới tác dụng của plasmin được hoạt hóa từ plasminogen Plasmin là một enzyme có khả năng phân hủy fibrin mạnh, do đó làm tan cục máu đông Tan cục máu đông là một trong những cơ chế chống đông của chính cơ thể khi có xuất hiện cục máu đông để ngăn ngừa tắc mạch và tạo điều kiện cho quá trình liền sẹo [2]

Như vậy, cầm máu là một quá trình phức tạp liên quan đến ba yếu tố chính: sức bền và tính thấm thành mạch, tiểu cầu và các yếu tố đông máu

1.2 Các bệnh liên quan tới chảy máu

Chảy máu là hội chứng biểu hiện tình trạng máu thoát ra khỏi thành mạch do vỡ mạch hoặc không do vỡ mạch Chảy máu có thể do các nguyên nhân: do thành mạch tổn thương, do tiểu cầu, do bệnh huyết tương [5]

1.2.1 Do thành mạch bị tổn thương

Thành mạch bị tổn thương do thiếu vitamin C, vitamin PP; nhiễm khuẩn (bệnh sởi, nhiễm khuẩn huyết do não mô cầu); một số bệnh mạn tính (lao, đái tháo đường, xơ gan); bệnh Scholein - Henoch (dị ứng gây tổn thương thành mạch),…

1.2.2 Do tiểu cầu

Tiểu cầu đóng vai trò rất quan trọng quá trình cầm máu Một số bệnh của tiểu cầu làm ảnh hưởng tới quá trình cầm máu thường gặp như:

1.2.2.1.Bệnh tiểu cầu bẩm sinh

Bệnh suy nhược tiểu cầu Glanzmann: bệnh di truyền lặn trên nhiễm sắc thể thường (số lượng tiểu cầu bình thường, nhưng rối loạn tập trung tiểu cầu)

Bệnh Willebrand: bệnh có tính di truyền theo tính trội (thời gian chảy máu kéo dài, co cục máu bình thường)

1.2.2.2 Giảm tiểu cầu thứ phát

Giảm tiểu cầu thứ phát trong các trường hợp: suy tuỷ, dị ứng, nhiễm

khuẩn,…

Suy tuỷ: dẫn đến giảm số lượng tiểu cầu được sinh ra, thường do nhiễm độc thuốc hoặc hoá chất trong điều trị hoặc do tiếp xúc với chất độc nồng độ cao kéo dài

Tuỷ bị lấn át: do thâm nhiễm các tế bào ác tính trong tuỷ làm giảm số lượng tiểu cầu do đó giảm số lượng tiểu cầu ở máu ngoại vi, thường gặp ở các bệnh máu ác tính như: Leukemia cấp, Leukemia thể tuỷ mạn tính giai đoạn chuyển dạng cấp

Dị ứng: tác động của thuốc làm cơ thể sinh kháng thể kháng tiểu cầu Nhiễm khuẩn: sốt xuất huyết, nhiễm khuẩn huyết

1.2.2.3 Xuất huyết giảm tiểu cầu tự miễn

Là một bệnh tự miễn, trong đó một tự kháng thể IgG được tạo thành và gắn vào tiểu cầu, phần Fc của tự kháng thể này bị đại thực bào ở lách nhận

diện (do chúng có thụ thể Fc) Các đại thực bào ở lách sẽ gắn với tiểu cầu có phủ kháng thể làm tiểu cầu bị tiêu huỷ Mặc dù có sự gắn bổ thể vào tự kháng thể nhưng quá trình này không gây tiêu huỷ tiểu cầu trực tiếp [5]

1.2.3 Do bệnh huyết tương

Các thành phần trong huyết tương liên quan mật thiết tới quá trình đông máu Việc thiếu hụt các thành phần của huyết tương gây ra bệnh huyết tương như: thiếu hụt yếu tố tạo thành thromboplastin, thiếu hụt prothrombin và proconvertin,…

1.2.3.1 Do thiếu hụt yếu tố tạo thành thromboplastin

Bệnh Hemophylia là bệnh hay gặp nhất do thiếu hụt yếu tố VIII, IX tạo thành thromboplastin Đây là bệnh bẩm sinh do di truyền trên nhiễm sắc thể

X, thường gặp ở con trai Bệnh càng nặng thì triệu chứng xuất huyết càng sớm Xuất huyết thường xảy ra sau một chấn thương dù rất nhẹ, ít có khả năng tự cầm máu, hay tái phát ở một nơi nhất định [5]

1.2.3.2 Thiếu prothrombin và proconvertin

Thiếu prothrombin và proconvertin có thể gặp trong các trường hợp tổn thương gan, ứ mật , tổn thương nhiều vùng ở ống tiêu hoá, dung nhiều thuốc chống đông làm cho cơ thể không tổng hợp được prothrombin

1.2.3.3.Bệnh tiêu sợi huyết (tiêu fibrinogen và fibrin)

Bệnh xảy ra sau phẫu thuật phổi, phẫu thuật sản phụ khoa, nhiễm trùng huyết, nhiễm độc Bệnh do sự huỷ hoại quá mức các yếu tố đông máu và tiểu cầu cùng với sự giải phóng các sản phẩm giáng hoá fibrin Nguyên nhân liên quan đến sự huỷ hoại các cơ quan của cơ thể, giải phóng ra nhiều chất hoạt hoá như streptokinase, urokinase, làm tăng chuyển plasminogen thành plasmin và tăng giáng hoá fibrinogen, fibrin, ức chế hình thành thromboplastin và chức năng của tiểu cầu gây hội chứng xuất huyết nặng [5]

1.3 Các xét nghiệm cơ bản cho cầm máu:

Các xét nghiệm cơ bản cho cầm máu giúp bác sĩ trong việc chẩn đoán

và điều trị các bệnh liên quan tới chảy máu bao gồm: xét nghiệm giai đoạn cầm máu ban đầu, xét nghiệm đông máu, xét nghiệm giai đoạn phân huỷ fibrin

1.3.1 Xét nghiệm của giai đoạn cầm máu ban đầu

Giai đoạn cầm máu ban đầu bao gồm giai đoạn thành mạch và hình thành nút tiểu cầu Để đánh giá giai đoạn cầm máu ban đầu, người ta dựa trên thời gian máu chảy và số lượng tiểu cầu

1.3.1.1 Thời gian máu chảy

Đây là một xét nghiệm cơ bản nhất, dễ làm nhất để đánh giá giai đoạn đầu cầm máu

Xét nghiệm được tiến hành bằng phương pháp Ivy: quấn băng huyết áp, bóp bóng đến mức huyết áp trung bình là 40mmHg, sau đó rạch ở cơ gấp cẳng tay, máu chảy ra được thấm bằng cạnh của giấy thấm

Thời gian máu chảy bình thường từ 3 - 9 phút Thời gian máu chảy tăng

do giảm số lượng hoặc chất lượng của tiểu cầu, thành mạch [19]

1.3.1.2 Số lượng tiểu cầu

Số lượng tiểu cầu bình thường 150 - 400 x 109 Số lượng tiểu cầu được xác định cùng với công thức máu toàn phần qua máy đếm tự động Trong những trường hợp khẩn cấp khi mà không đếm được thì có thể nhìn trên tiêu bản máu [19]

1.3.1.3 Chức năng tiểu cầu

Đánh giá chức năng tiểu cầu bằng cách chống đông bằng citrat khối huyết tương giàu tiểu cầu Máy đo ngưng tập tiểu cầu được sử dụng để kiểm tra đáp ứng của tiểu cầu với những chất ngưng tập bao gồm collagen, ADP,

acid arachidonic để kiểm tra đáp ứng kết tụ tiên phát và thứ phát, phản ứng giải phóng của tiểu cầu [19]

1.3.2 Xét nghiệm đông máu

1.3.2.1 Thời gian thrombin (Thrombin Time: TT)

Xác định PT nhằm đánh giá sự chuyển dạng từ fibrinogen sang fibrin bởi hệ thống nội sinh và ngoại sinh khi có thrombin trong hệ thống thử Thrombin được pha loãng cho vào huyết tương chống đông bằng citrat

Thời gian TT bình thường từ 10 - 15 giây PT kéo dài trong các trường hợp: giảm fibrinogen máu, rối loạn fibrinogen máu

1.3.2.2 Thời gian prothrombin (Prothrombin Time: PT)

Xác định PT nhằm đánh giá con đường đông máu ngoại sinh PT là thời gian đông huyết tương đã được chống đông bằng natri citrat hoặc oxalat, nay được phục hồi calci và thêm yếu tố của tổ chức (thromboplastin) [12]

PT kéo dài trong các trường hợp thiếu hụt yếu tố II, V, VII, X

1.3.2.3 Thời gian Thromboplastin hoạt hoá từng phần (APTT)

Xác định APTT nhằm đánh giá con đường đông máu nội sinh APTT là thời gian phục hồi calci của huyết tương citrate hoá sau khi ủ với một lượng thừa kaolin (hoạt hoá yếu tố tiếp xúc) và cephalin (thay thế yếu tố 3 tiểu cầu) [23]

APTT kéo dài trong các trường hợp thiếu hụt yếu tố II, V, VIII, IX, X,

XI, XII [19]

1.3.3 Xét nghiệm giai đoạn phân huỷ fibrin

1.3.3.1 Sản phẩm phân huỷ fibrin (FDP)

Khi fibrin bị phân giải bằng plasmin hoạt động thì những mảnh vỡ được giải phóng tạo FDP FDP đo được trong huyết tương bằng phương pháp miễn dịch

Tăng FDP trong các trường hợp sau hậu phẫu, chấn thương, suy thận, nhiễm khuẩn, huyết khối tĩnh mạch [19]

1.3.3.2 Thời gian phân giải Euglobulin

Xét nghiệm thời gian phân giải Euglobulin nhằm đánh giá sự có mặt của yếu tố hoạt hoá plasminogen

Thời gian phân giải Euglobulin bình thường trên 90 phút Thời gian này ngắn lại khi có sự phân huỷ fibrin hệ thống [19]

1.4 Các thuốc cầm máu

1.4.1 Các thuốc tân dược

Thuốc cầm máu có thể chia thành 2 loại: thuốc cầm máu toàn thân và thuốc cầm máu tại chỗ [14]

1.4.1.1 Thuốc cầm máu toàn thân

 Nhóm vitamin K

Cơ chế: các tiền chất của yếu tố đông máu II, VII, IX, X - gọi là PIVKA (protein induced by vitamin K absence) chỉ có hoạt tính khi gốc glutamat trong cấu trúc hoá học của nó được carboxyl hoá bởi hệ enzym ở microsom gan Khi huyết tương chưa đủ vitamin K, các tiền chất đó chưa chuyển thành các yếu tố đông máu có hoạt tính được Khi có mặt vitamin K thì vitamin K hoạt hoá hệ thống enzym ở microsom gan, nên PIVKA được carboxyl hoá, chuyển thành các yếu tố đông máu II, VII, IX, X có hoạt tính và kết hợp được với Ca2+ trên bề mặt tiểu cầu, chuyển fibrinogen thành fibrin cùng với xúc tác của thrombin tạo nên quá trình đông máu

 Calci clorid

Ca2+ cần để hoạt hoá các yếu tố đông máu nhất là các yếu tố VIII, IX, X

và chuyển prothrombin thành thrombin để tham gia vào quá trình đông máu

 Coagulen

Coagulen là tinh chất máu toàn phần, đặc biệt có tinh chất của tiểu cầu

có tác dụng làm đông và cầm máu

 Carbazochrom

Carbazochrom làm tăng sức đề kháng của mao mạch, giảm tính thấm thành mạch nên giảm thời gian chảy máu Carbazochrom không tác dụng lên quá trình đông máu [14]

 Ethamsylat và dobesylat calci

Cơ chế: làm tăng sức đề kháng của mao mạch, giảm tính thấm thành mạch nên giảm thời gian chảy máu

1.4.1.2 Các thuốc cầm máu tại chỗ

Các thuốc cầm máu tại chỗ bao gồm các enzyme làm đông máu (thrombinase, thrombin), keo cao phân tử (pectin, albumin), gelatin, fibrin dạng xốp, thuốc làm săn (tanin, muối nhôm, chì, kẽm, KMnO4 pha loãng,.)

 Thrombin

Thrombin xúc tác cho chuyển fibrinogen thành fibrin đơn phân, sau đó fibrin đơn phân kết hợp thành fibrin polyme không tan trong huyết tương Thuốc chỉ dùng tại chỗ, không dùng tiêm tĩnh mạch, tránh đông máu trong lòng mạch

 Thrombinase

Thrombinase là tinh chất não và phổi của động vật có thrombokinase

và các yếu tố đông máu khác Thuốc được dùng trong trường hợp chảy máu

ít, tại chỗ và thường xuyên như: chảy máu cam, răng miệng Nếu chảy máu nhiều kết hợp với băng chặt [14]

1.4.2.Các thuốc đông dược

Thuốc cầm máu trong đông y còn được gọi là thuốc chỉ huyết bao gồm các vị thuốc có thể dùng trong các bệnh xuất huyết của tạng như vị xuất huyết, phế xuất huyết; gây nôn ra máu, ho ra máu, hoặc trĩ xuất huyết Trong

loại này cũng có loại vừa có tác dụng chỉ huyết lại có tác dụng tiêu huyết ứ như tam thất; cũng có thể dùng để đắp, rắc vào vết thương để cầm máu bên ngoài [9]

1.4.2.1 Tam thất

Tam thất có tác dụng hoá ứ chỉ huyết, hoá ứ chỉ thống, hoá ứ tiêu ung nhọt dùng để điều trị các chứng xuất huyết ở bên trong và bên ngoài cơ thể, trong trường hợp xuất huyết do huyết ứ thì thường dùng kết hợp với huyết dư thán; ngoài ra tam thất còn dùng để điều trị chấn thương sưng nề [1], [9]

1.4.2.2 Hoè hoa

Hoè hoa có tác dụng lương huyết chỉ huyết dùng trong các trường hợp huyết nhiệt gây xuất huyết như chảy máu cam, trĩ chảy máu, phụ nữ băng huyết, đại tiểu tiện ra máu [9]

1.4.2.3 Trắc bách diệp

Trắc bách diệp có tác dụng lương huyết chỉ huyết điều trị các chứng

xuất huyết do huyết nhiệt, thường dùng phối hợp với các vị thuốc khác [1] 1.4.2.4 Bạch cập

Bạch cập có tác dụng chỉ huyết, dùng trong các bệnh ho ra máu, xuất

huyết đường tiêu hoá, chảy máu ngoài [7]

1.4.2.5 Tông lư

Tông lư là bẹ của cây móc có tác dụngchỉ huyết, dùng trong các bệnh xuất huyết bên trong, chảy máu cam, thổ ra huyết, phụ nữ băng huyết, đại tiểu tiện ra huyết, lỵ, chảy máu mủ [6]

1.5 Các phương pháp xác định thời gian chảy máu trên động vật

1.5.1 Xác định thời gian chảy máu trên đuôi chuột

Phương pháp này được tiến hành lần đầu tiên do Dottl và Ripke năm

1936 và được sử dụng phổ biến để nghiên cứu tác dụng cầm máu trong các thí

nghiệm dược lý Phương pháp này dùng để đánh giá những khiếm khuyết của

hệ thống đông máu và ảnh hưởng của thuốc lên quá trình cầm máu [30]

Tiến hành: thí nghiệm có thể tiến hành trên chuột cống trắng và chuột nhắt trắng Gây mê chuột, dùng dao lam sắc cắt 1 đoạn đuôi chuột 2 - 4mm [3], [30], [34], [37], [38], [39] Ngay sau khi cắt, nhúng đuôi chuột vào nước cất, dung dịch nước muối sinh lí hoặc dùng giấy lọc thấm máu Xác định thời gian từ khi giọt máu đầu tiên chảy ra đến khi máu ngừng chảy, tối đa là 600 giây [30]

Xác định thời gian chảy máu đuôi chuột là phương pháp được sử dụng phổ biến trong các nghiên cứu về cầm máu do kĩ thuật đơn giản, dễ tiến hành nhưng cũng có thể bị ảnh hưởng bởi một số yếu tố như: nhiệt độ, môi trường,

vị trí cắt đuôi

1.5.2 Xác định thời gian chảy máu trên da chuột

Phương pháp này do Rustu Kose và cộng sự tiến hành năm 2012 dùng

để đánh giá tác dụng cầm máu của thuốc nghiên cứu [13]

Tiến hành: chuột cống trắng (180 – 260g) chia nhóm ngẫu nhiên, gây

mê với 30mg/kg ketamin hydrochlorid và 5mg/kg xylazin Dùng dao mổ nhẹ nhàng tạo vết cắt trên da dài 5cm và rộng 3cm ở phía trước của vùng thắt lưng Sau 1 – 2 giây, máu bắt đầu chảy, dùng 1ml nước muối hoặc thuốc nghiên cứu tưới lên vết cắt và dùng bông ấn nhẹ nhàng vào vết cắt khoảng 1 phút để hoạt hoá hệ thống cầm máu Thời gian chảy máu được xác định từ khi máu bắt đầu chảy tới khi máu ngừng chảy [33]

1.5.3 Xác định thời gian chảy máu động mạch màng ruột

Phương pháp đã được Angelo cùng cộng sự tiến hành [28] dùng để đánh giá sự ức chế hình thành huyết khối của các thuốc, phát hiện ảnh hưởng của các yếu tố can thiệp vào cầm máu [30]

Tiến hành: chuột cống trắng đực nặng từ 180 – 240g dùng thuốc qua đường uống, tiêm màng bụng hoặc tiêm tĩnh mạch Sau khi đủ thời gian hấp thu thuốc, gây mê chuột bằng 60mg/kg pentobarbital sodium tiêm màng bụng, giữ ấm chuột ở 37°C Rạch một đường giữa bụng, nâng màng ruột lên để lộ động mạch ruột Màng ruột được treo trên một đĩa nhựa và vẫn duy trì hoạt động bình thường bằng dung dịch Tyrode ổn định ở 37°C Thời gian chảy máu xác định với một động mạch ruột tại chỗ nối của màng ruột với ruột

Dùng một cây kim đâm vào động mạch, quan sát thời gian chảy máu động mạch màng ruột qua một kính hiển vi 40X Thời gian chảy được xác định từ khi đâm kim tới khi máu ngừng chảy [30]

1.5.4 Xác định thời gian chảy máu trên khe mũi thỏ

Phương pháp này do Hanifi Kurtaran cùng cộng sự tiến hành năm 2010

để đánh giá tác dụng cầm máu của thuốc nghiên cứu [35]

Tiến hành: thỏ cái trưởng thành được gây mê với 5mg/kg xylocain hydrochlorid and 50mg/kg ketamin chlorid Dùng 1 thiết bị gây tổn thương dài 3 mm tạo vết thương trên khe mũi của thỏ Sau 1 – 2 giây từ khi tạo vết thương thì máu bắt đầu chảy, các vết thương được điều trị ngẫu nhiên bằng thuốc nghiên cứu hoặc dung dịch nước muối sinh lí Dùng tăm bông ấn nhẹ nhàng vào vết thương 1 giây trong vòng 30 giây đến khi máu ngừng chảy Thời gian chảy máu được xác định từ khi máu bắt đầu chảy tới khi máu ngừng chảy [35]

1.5.5 Xác định thời gian chảy máu trên niêm mạc miệng chó

Foresythe và Willis (1989) đã mô tả một phương pháp có thể cho phép xác định thời gian chảy máu trên niêm mạc miệng của chó để phát hiện những

bất thường của cầm máu

Tiến hành: đặt chó ở tư thế nằm nghiêng hoặc nằm ngửa Dùng một mảnh gạc buộc chặt xung quanh cả hàm trên và hàm dưới của chó Dùng thiết

bị gây tổn thương đặt áp vào niêm mạc miệng chó song song với mép và gây tổn thương niêm mạc miệng chó Máu chảy ra từ vết thương được thấm bằng giấy thấm tròn đặt ngay dưới miệng nhưng không chạm vào vết thương Sau

15 giây thay đổi vị trí giấy thấm một lần Thời điểm kết thúc chảy máu được

xác định khi không còn máu trên giấy thấm nữa Thời gian chảy máu được

xác định từ khi bắt đầu gây tổn thương cho đến khi máu không còn xuất hiện

trên giấy thấm nữa Thời gian chảy máu trung bình từ 2 – 4 phút [30]

1.6 Tổng quan về cây móc

1.6.1 Mô tả

Cây móc có tên khoa học là Caryota urens L., họ Cau (Arecaceae)

Ngoài ra cây móc còn có tên khác: móc đen, đùng đình ngứa, đùng đình, đủng đỉnh, mạy khuông (Tày) [15], [16], [18], [25]

Cây móc có thân dạng cột thẳng, thường mọc đơn đọc, cao 10 – 15m, đường kính 40 – 50cm Lá to dài, hai lần lông chim, có thùy lông chim hơi dài, có hình tam giác với mép ngoài dài hơn, có răng không đều về phía trước Khi trưởng thành cây bắt đầu ra hoa Hoa mọc thành cụm ở nách lá, thành bông mo phân nhánh, dài 30 – 40cm, bao bởi 4 mo, dài 30cm, lợp lên nhau, các nhánh trải ngang, dài 30 – 40cm Cụm hoa ở phần ngọn cây mọc ra trước, sau đó thì các cụm hoa ở phía dưới mọc và theo thứ tự từ trên xuống dưới Bông mo có cuống chung to lớn, mo bao bọc lấy hoa đực và hoa cái Hoa tập trung trên các cuống dài , mềm, rủ xuống Cuống hoa ngắn Hoa đực thường mọc đơn độc hay cứ 2 hoa đực thì lại có một hoá cái xếp sát nhau Hoa đực có

lá đài dài, xếp lợp, cánh hoa thuôn hình dải, nhị rất nhiều Hoa cái nhỏ bé, gần hình cầu, bầu 3 ô, noãn đính gốc Quả hình cầu lõm, đường kính 12 – 15mm, màu đỏ khi chín, có vỏ quả ngoài hơi dày, vỏ quả trong nạc ngọt, dễ chịu Hạt

1 – 2, hình khối, có nội nhũ sừng [13], [15], [16], [25]

Mùa hoa: tháng 3 – 4, mùa quả : tháng 10 – 11 [25]

1.6.2 Phân bố, sinh thái

Caryota L là một chi lớn gồm các loài phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt

đới Nam Á và Đông – Nam Á Ở Việt Nam có 6 loài, đều là cây mọc tự nhiên

Móc là loại cây nhiệt đới tương đối điển hình Cây phân bố rải rác khắp các nước Ấn Độ, Xrilanca đến Malayxia, Thái Lan, Lào, Campuchia, Indonesia và Việt Nam Ở Việt nam cây cũng phân bố rải rác ở các tỉnh từ vùng núi thấp (dưới 1000m) đến vùng trung du và đồng bằng, tập trung nhiều nhất ở Phú Thọ, Vĩnh Phúc, Hà Tây, Bắc Giang, Tuyên Quang và các tỉnh khu 4 cũ Cây thường mọc rải rác ở ven rừng thứ sinh, trong các lùm bụi gần khu dân cư Móc còn được trồng ở nhiều nơi để làm cảnh

Móc ra hoa quả hàng năm hoặc cách năm Tuy nhiên, lượng cây con mọc ra từ hạt rất ít Cây có khả năng sinh chồi khoẻ từ gốc Một năm cây mẹ

có thể tạo 3 – 5 cây con, sau 10 năm trồng đã thành bụi lớn [13], [16], [18],

Theo Nambiar và cộng sự trong quả của Caryota urens có chứa rất

nhiều acid ascorbic với hàm lượng có thể so sánh với lượng acid ascorbic trong quả cam [36]

Quả móc có chứa rất nhiều đường [31], [32], [36] Bằng phương pháp sắc kí (phương pháp Giri và Rao), Gopinathan và cộng sự thấy rằng trong quả

Caryota urens có chứa trên 10% saccharose, glucose, fructose và ít inositol

[31]

Ngoài ra, quả của Caryota urens còn chứa rất nhiều các acid amin như:

glycin, tyrosin, leucin, histidin, valin, isoleucin, prolin, hydroxy prolin [36]

Tinh thể calci oxalate hình kim có ở loài Caryota urens [16], vì vậy cần

tránh tiếp xúc trực tiếp với vỏ quả này vì đây chính là thành phần gây ngứa khi tiếp xúc với quả chín

Hiện nay, chúng tôi chưa thấy có nghiên cứu nào về thành phần hoá học của rễ và bẹ móc

có tác dụng làm sít ruột, tan hòn cục Quả móc vị cay, tính mát, có tác dụng giải khát và chống mệt mỏi Rượu móc có tác dụng nhuận tràng [13], [25]

1.6.6 Công dụng

Bẹ móc được dùng làm thuốc chữa đái ra máu, đái rắt, tiểu tiện không thông, lỵ ra máu,bạch đới, rong kinh, rong huyết, ho ra máu Liều dùng: 20g đốt tồn tính tán bột uống hoặc sắc thuốc Nhân quả giã nát, đắp chữa đau nửa đầu [13], [25]

Nõn thân 20 – 30g sắc với 400ml nước, còn 100ml uống có tác dụng nhuận tràng [25]

1.6.7 Một số bài thuốc có móc

- Chữa băng huyết: bẹ móc phơi khô, phối hợp xơ mướp, lượng bằng nhau, đốt thành tro Mỗi lần uống 6g với ít rượu hoặc nước muối vào lúc đói (Nam dược thần hiệu)

- Chữa rong huyết có đau bụng: bẹ móc 80g, kinh giới 80g, hương phụ 40g Bẹ móc đốt tồn tính, kinh giới sao đen, hương phụ tứ chế (chế với giấm, nước muối, nước tiểu trẻ em và rượu, phơi khô) Tất cả tán nhỏ, rây lấy bột mịn Mỗi lần uống 8 – 16g, ngày 2 – 3 lần

- Chữa khí hư: rễ móc, rễ cau, rễ tre, rễ cọ, mỗi thứ 12g Thái nhỏ, sắc đặc, còn 1 bát, chia 2 lần uống trong ngày dùng 4 – 5 ngày

- Chữa động thai: rễ móc, rễ chuối rừng, rễ chuối hột, lượng bằng nhau, sao vàng, sắc uống

- Chữa ho ra máu: bẹ móc đốt tồn tính 10g, qua lâu nhân 12g [25].

Chương 2

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu và thiết bị

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu

Chuột cống trắng, cả 2 giống, trọng lượng 120 – 150g khoẻ mạnh do Học viện Quân y cung cấp

Chuột nhắt trắng, cả 2 giống, trọng lượng 22 – 25g khoẻ mạnh do Học viện Quân y cung cấp

Chuột sau khi mua về được nuôi tại phòng thí nghiệm của Bộ môn

Dược lực trường Đại học Dược Hà Nội 3 ngày trước khi thí nghiệm Chuột được ăn thức ăn chuẩn do Viện Vệ sinh dịch tễ trung ương cung cấp và uống nước đun sôi để nguội

2.1.2 Nguyên liệu nghiên cứu

2.1.2.1.Nguyên liệu

Rễ và bẹ cây móc (Caryota urens L., Arecaceae) Nguyên liệu sau khi

thu hái, rửa sạch, thái nhỏ, phơi se rồi sấy khô ở nhiệt độ 60-70oC

Hình 2.1: Ảnh cây móc (Caryota urens L., Arecaceae) chụp tại Phù Ninh,

Phú Thọ

Chế phẩm nghiên cứu: Các chế phẩm bẹ và rễ móc đều được bào chế

dưới dạng cao lỏng theo phương pháp sắc cao thuốc ghi trong Dược điển Việt Nam III [28] sau đó cô thành cao đặc 6:1 để bảo quản

- Chế phẩm cho chuột uống được pha loãng với nước cất từ cao 6:1 đến

tỉ lệ thích hợp

- Chế phẩm dùng trong thí nghiệm dùng ngoài: cao lỏng 6:1 được pha loãng với nước cất đến tỉ lệ thích hợp rồi ly tâm bỏ cặn, lấy dịch

Liều dùng được qui ra theo dược liệu khô

2.1.2.2 Hoá chất và trang thiết bị

- Máy đo độ phù chân chuột (phù kế Plethysmometer) do hãng LETiCA sản xuất

- Máy xét nghiệm đông máu cơ bản CA50 do hãng Symex, Nhật Bản sản xuất

- Carbazochrom dihydrat (biệt dược Adrenoxyl 10mg) do Sanofi – Synthelabo, US sản xuất

- Diclofenac dimethylamin, emulgel 1% (biệt dược Voltaren emulgel)

do Norvatis, S.A – Spain sản xuất

- Indomethacin 25mg do Minimed Laboratories Pvt Ltd sản xuất

Các hoá chất khác đạt tiêu chuẩn thí nghiệm do phòng giáo tài trường đại học Dược cung cấp

2.2 Nội dung nghiên cứu

- Đánh giá tác dụng cầm máu của rễ và bẹ móc

- Đánh giá tác dụng chống viêm cấp của bẹ móc

- Độc tính cấp của bẹ móc 2.3 Phương pháp nghiên cứu

Sơ đồ phương pháp nghiên cứu được trình bày trong sơ đồ 2.2

Phương pháp nghiên cứu

Tác dụng cầm máu Chống viêm Độc tính cấp

Tại chỗ Đường uống Tại chỗ Đường uống

Khảo sát liều dùng của bẹ móc trên thời gian chảy máu

Hình 2.2: Sơ đồ thiết kế nghiên cứu

2.3.1 Phương pháp nghiên cứu tác dụng cầm máu của cây móc

2.3.1.1 Phương pháp nghiên cứu tác dụng cầm máu đường uống

 Khảo sát liều dùng của bẹ móc trên thời gian chảy máu

Chuột nhắt trắng được chia thành 5 lô, mỗi lô 10 con:

Lô chứng: uống nước muối sinh l ý

Lô carbazochrom: uống carbazochrom liều 24 mg/kg chuột

Lô bẹ 1,5: uống cao bẹ móc mức liều 1,5g/kg chuột

Lô bẹ 3: uống cao bẹ móc mức liều 3g/kg chuột

Lô bẹ 6: uống cao bẹ móc mức liều 6g/kg chuột

Cho chuột uống nước muối sinh lý hoặc thuốc nghiên cứu trong 5 ngày liên tục Ngày thứ 5, sau khi uống thuốc 2 giờ, cắt đuôi chuột 2mm tính từ chóp đuôi, xác định thời gian máu chảy bằng đồng hồ bấm giây Thời gian chảy máu được tính từ khi có giọt máu đầu tiên cho tới khi máu ngừng chảy

So sánh thời gian chảy giữa các lô thử và lô chứng, lô thử và lô carbazochrom

So sánh tác dụng của rễ

và bẹ móc trên thời gian

chảy máu

Ảnh hưởng của số lần dùng bẹ móc tới thời gian

chảy máu

Ảnh hưởng của bẹ móc trên tiểu cầu và các chỉ

số đông máu

và giữa các mức liều khác nhau của bẹ móc và tính độ giảm thời gian chảy máu giữa lô thử so với lô chứng bằng công thức (1):

T0: thời gian chảy máu trung bình của lô chứng

Tt: thời gian chảy máu trung bình của lô thử

 So sánh tác dụng của bẹ và rễ móc trên trên thời gian chảy máu

Chuột nhắt trắng chia thành các lô ngẫu nhiên

Lô chứng: uống nước muối sinh lí

Lô carbazochrom: uống carbazochrom mức liều 24mg/kg chuột

Lô bẹ: uống cao bẹ mức liều 6g/kg chuột

Lô rễ: uống cao rễ mức liều 6g/kg chuột Cho chuột uống thuốc 5 ngày Sau 2 giờ uống thuốc liều cuối cùng, tiến hành cắt đuôi chuột, xác định thời gian chảy máu đuôi chuột So sánh thời gian chảy máu giữa lô thử và lô chứng, lô thử và lô carbazochrom, giữa lô

bẹ và lô rễ

 Nghiên cứu ảnh hưởng của số lần dùng thuốc đến thời gian chảy máu

Chuột nhắt trắng được chia ngẫu nhiên thành các lô, mỗi lô 10 con:

Lô chứng : uống nước muối sinh l ý

Lô bẹ 1 (dùng 1 lần): uống cao bẹ móc mức liều 6g/kg chuột Sau 2 giờ uống thuốc, xác định thời gian chảy máu đuôi chuột

Lô bẹ 2 (dùng nhiều lần): uống cao bẹ móc mức liều 6g/kg chuột

Cho chuột uống thuốc 5 ngày liên tục Ngày thứ 5, sau 2 giờ uống thuốc liều cuối cùng, xác định thời gian chảy máu đuôi chuột

 Nghiên cứu ảnh hưởng của bẹ móc đến số lượng tiểu cầu và một số chỉ

số đông máu cơ bản

Chuột nhắt trắng được chia thành các 2 lô, mỗi 8 con

Lô chứng: uống nước muối sinh l ý

Lô bẹ 6: uống cao bẹ móc mức liều 6g/kg chuột