Nghiên cứu tác dụng của các cao chiết khác nhau từ bẹ cây móc theo hướng làm thuốc cầm máu

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ HOÀNG ANH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA CÁC CAO CHIẾT KHÁC NHAU TỪ BẸ CÂY MÓC THEO HƯỚNG LÀM THUỐC CẦM MÁU KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2015.

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

ĐỖ HOÀNG ANH

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA CÁC CAO CHIẾT KHÁC NHAU TỪ BẸ CÂY MÓC THEO HƯỚNG LÀM THUỐC

CẦM MÁU

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI - 2015

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

ĐỖ HOÀNG ANH

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA CÁC CAO CHIẾT KHÁC NHAU TỪ BẸ CÂY MÓC THEO HƯỚNG LÀM THUỐC

HÀ NỘI - 2015

LỜI CẢM ƠN

Bằng tất cả sự chân thành và lòng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn tới

PGS.TS Đào Thị Vui, người thầy đã luôn tận tình giúp đỡ, hết lòng chỉ bảo em từ

những bước đầu nghiên cứu đến khi hoàn thành khóa luận

Em xin gửi lời cảm ơn tới TS Nguyễn Thu Hằng, Bộ môn Dược liệu,

ThS Ngô Thanh Hoa, Bộ môn Dược lực, trường Đại học Dược Hà Nội đã cho em

những góp ý quý báu và giúp đỡ em trong quá trình thực hiện đề tài

Em xin gửi lời cám ơn tới tới các thầy, cô giáo và các anh chị kỹ thuật viên

Bộ môn Dược lực, Bộ môn Y học cơ sở, Bộ môn Dược liệu đã tạo mọi điều kiện, giúp đỡ em hoàn thành khóa luận này

Em xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu nhà trường, các phòng ban, cùng toàn thể các thầy cô giáo, các bộ môn trường Đại học Dược Hà Nội đã tận tình dạy

dỗ, giúp đỡ em trong quá trình học tập tại trường

Cuối cùng, em xin bày tỏ lòng cảm ơn chân thành tới những người thân trong gia đình, những người bạn đã luôn kịp thời động viên, ủng hộ em trong suốt quá trình học tập tại trường cũng như trong thời gian thực hiện khóa luận

Em xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, tháng 5 năm 2015

Sinh viên

Đỗ Hoàng Anh

MỤC LỤC

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

Chương 1:TỔNG QUAN 2

1.1 Các bệnh liên quan tới chảy máu 2

1.1.1 Chảy máu do rối loạn chức năng thành mạch 2

1.1.2 Chảy máu do tiểu cầu 3

1.1.3 Chảy máu do rối loạn các yếu tố đông máu 5

1.2 Một số mô hình nghiên cứu tác dụng của thuốc lên thành mạch 8

1.2.1 Mô hình nghiên cứu tác dụng co mạch trên tai thỏ cô lập 8

1.2.2 Mô hình gây tăng tính thấm thành mạch 9

1.3 Cây Móc và các nghiên cứu về tác dụng dược lý của cây Móc 12

1.3.1 Một số đặc điểm của cây Móc 12

1.3.2 Các nghiên cứu về tác dụng dược lý của cây Móc 13

Chương 2:ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17

2.1 Đối tượng nghiên cứu 17

2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 17

2.1.2 Động vật nghiên cứu 19

2.1.3 Hóa chất và trang thiết bị 19

2.2 Nội dung nghiên cứu 20

2.3 Phương pháp nghiên cứu 20

2.3.1 Định tính thành phần hóa học của bẹ cây móc 21

2.3.2 Nghiên cứu tác dụng theo hướng cầm máu của các cao chiết bẹ móc 21

2.3.3 Nghiên cứu tác dụng cầm máu của các phân đoạn của cao chiết có tác dụng tốt nhất 24

2.4 Phương pháp xử lý số liệu 24

Chương 3:THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 25

3.1 Kết quả nghiên cứu 25

3.1.1 Định tính sơ bộ thành phần hóa học trong bẹ móc 25

3.1.2 Tác dụng của các cao chiết khác nhau của bẹ cây móc 34

3.1.3 Tác dụng cầm máu của các phân đoạn từ dịch chiết có tác dụng tốt nhất 38

3.2 Bàn luận 39

3.2.1 Định tính thành phần hóa học của bẹ móc 39

3.2.2 Tác dụng của các cao chiết khác nhau từ bẹ cây móc 41

3.2.3 Tác dụng cầm máu đường uống của các phân đoạn cao chiết methanol từ bẹ móc 44

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

(Thời gian thromboplastin hoạt hóa từng phần )

(Xuất huyết giảm tiểu cầu tự miễn)

(Phức hợp prothrombin)

(Các tiền chất đông máu)

DANH MỤC CÁC BẢNG

khác nhau của bẹ móc trên thời gian chảy máu

34

nhau của bẹ móc

35

các cao khác nhau của bẹ cây móc

36

cô lập

37

phân đoạn cao chiết methanol

38

ĐẶT VẤN ĐỀ

Chảy máu là một hội chứng tương đối phổ biến, có thể xảy ra ở mọi cơ quan trong cơ thể như chảy máu cam, chảy máu chân răng, chảy máu dưới da, chảy máu các tạng, chảy máu não…thường do va chạm, chấn thương Các bệnh liên quan đến chảy máu rất đa dạng và nguy hiểm nếu không được phát hiện và điều trị kịp thời Trong khi đó các thuốc điều trị các bệnh chảy máu hiện có trên thị trường chưa nhiều, có nhiều tác dụng không mong muốn và ít được đầu tư để nghiên cứu tìm ra thuốc mới Vì vậy, việc phát triển các thuốc có tác dụng cầm máu là vấn đề rất cấp thiết hiện nay

Việt Nam có nền y học cổ truyền từ lâu đời với nguồn dược liệu vô cùng phong phú và đầy tiềm năng phát triển, trong đó có rất nhiều dược liệu có tác dụng

cầm máu Bẹ cây móc (Caryota mitis) hay còn gọi là Tông lư, là một vị thuốc cầm

máu được nhân dân ta sử dụng từ lâu và cho tác dụng tốt [11], [12] Tuy nhiên chưa

có nghiên cứu nào về tác dụng cầm máu của bẹ móc trên thực nghiệm nên việc sử dụng dược liệu này còn hạn chế Trong mấy năm gần đây, nhóm nghiên cứu đã tập trung vào đánh giá tác dụng cầm máu của bẹ móc trên chuột bình thường và chuột gây rối loạn đông máu và kết quả cho thấy thuốc có tác dụng cầm máu và cơ chế của tác dụng này có lẽ liên quan đến tác dụng trên thành mạch[14] Để tiếp tục nghiên cứu về bẹ móc, hướng tới việc xác định hoạt chất có tác dụng cầm máu và

dung môi chiết xuất tốt nhất, chúng tôi thực hiện đề tài: “Nghiên cứu tác dụng của

các cao chiết khác nhau từ bẹ cây móc theo hướng làm thuốc cầm máu” với các

mục tiêu sau:

1 Định tính sơ bộ thành phần hóa học của bẹ cây móc

2 Đánh giá tác dụng theo hướng cầm máu của các cao chiết khác nhau của

bẹ cây móc để xác định cao chiết có tác dụng tốt nhất

3 Đánh giá tác dụng cầm máu của các phân đoạn từ cao chiết có tác dụng tốt nhất

Chương 1 TỔNG QUAN

Cầm máu là một quá trình diễn ra nhằm hạn chế hoặc ngăn cản máu chảy ra khỏi thành mạch khi thành mạch bị tổn thương

Quá trình cầm máu là một chuỗi các phản ứng gồm năm giai đoạn: co mạch, hình thành nút tiểu cầu, đông máu, co cục máu đông và tan cục máu đông [6] Để các giai đoạn của quá trình cầm máu diễn ra liên tục cần có sự tham gia của rất nhiều thành phần trong cơ thể như thành mạch máu, tiểu cầu, các yếu tố đông máu, các enzym… Chỉ cần một rối loạn nhỏ nhất của các yếu tố trên cũng sẽ gây ra sự bất thường trong quá trình cầm máu dẫn đến các bệnh lý xuất huyết với các triệu chứng khác nhau trên lâm sàng

1.1 Các bệnh liên quan tới chảy máu

Chảy máu có thể do các nguyên nhân: do rối loạn chức năng thành mạch, do tiểu cầu, do rối loạn các yếu tố đông máu [7]

1.1.1 Chảy máu do rối loạn chức năng thành mạch

Thành mạch đóng vai trò rất quan trọng trong quá trình cầm máu Khi mạch máu bị tổn thương, phản xạ đầu tiên của cơ thể là các tế bào nội mạc sẽ giải phóng

ra các chất trung gian hóa học như angiotensin II,… có tác dụng co mạch Trong bệnh lý chảy máu do rối loạn chức năng thành mạch, tình trạng máu vẫn bình thường nhưng các mạch máu bị tổn thương làm thay đổi tính thấm thành mạch và trương lực mạch máu khiến mạch máu không thực hiện trọn vẹn được vai trò của nó [30] Một số bệnh lý chảy máu thường gặp do nguyên nhân này là:

1.1.1.1 Hội chứng Scholein – Henoch (Xuất huyết do dị ứng)

Cơ chế bệnh sinh: Do vi khuẩn hoặc các chất gây dị ứng tạo ra phản ứng kháng nguyên – kháng thể ở lớp niêm mạc thành mạch gây phản ứng viêm cấp tính, dẫn đến tăng tính thấm thành mạch và gây xuất huyết Bệnh xảy ra ở mọi lứa tuổi nhưng thường gặp nhất ở trẻ em và người trẻ

Triệu chứng lâm sàng: Các ban xuất huyết (không có mảng xuất huyết) thường ở các chi; viêm khớp (đầu gối, mắt cá, cổ tay); đau bụng; rối loạn thận gây

đi tiểu ra máu, albumin niệu

Điều trị: corticoid (chỉ làm giảm triệu chứng)[27], tìm nguyên nhân để loại

bỏ, dùng vitamin C và PP [1]

1.1.1.2 Bệnh Rendu – osler

Bệnh có tính di truyền theo tính trội trên nhiễm sắc thể thường khiến mao mạch bị giãn hoặc xuất hiện u máu xuất huyết Bệnh hiếm gặp, xuất hiện ở cả hai giới

Triệu chứng lâm sàng: chảy máu thường xuyên, hay gặp chảy máu cam Các triệu chứng phát triển theo thời gian, hay gặp ở khoảng tuổi 12 cũng có khi muộn hơn U mạch máu thường xuất hiện sau 20 tuổi ở da và niêm mạc, rất kín đáo, chỉ khám kỹ mới phát hiện được

Các xét nghiệm đông máu, số lượng tiểu cầu đều bình thường

Điều trị: cầm máu tại chỗ, truyền máu hoặc huyết tương khi cần, dùng vitamin C liều cao [1],[27]

1.1.1.3 Chảy máu do thành mạch dễ vỡ do thiếu vitamin C

Vitamin C tham gia tạo colagen và một số thành phần khác tạo nên mô liên kết ở xương, răng, mạch máu Do đó thiếu vitamin C thành mạch máu sẽ không bền, dễ chảy máu

Triệu chứng lâm sàng: chảy máu dưới da dưới dạng lấm tấm, chảy máu chân răng, chảy máu trong xương, ổ tụ máu dưới cốt mạc

Điều trị: Vitamin C liều cao [27]

Ngoài các bệnh trên, một số bệnh khác làm giảm sức bền thành mạch dẫn đến chảy máu khá phổ biến như: đái tháo đường (chảy máu võng mạc), bệnh thận (đái ra máu); bệnh Cushing; cao huyết áp,…[1]

1.1.2 Chảy máu do tiểu cầu

Khi chảy máu, tiểu cầu sẽ được huy động tới vị trí tổn thương, tại đây chúng được gắn vào tế bào nội mạc bị tổn thương; mặt khác chúng cũng tiếp tục được các

yếu tố khác hoạt hóa để tiếp tục kết tụ các tiểu cầu trong huyết tương, tạo thành nút tiểu cầu để sơ bộ bịt kín vết thương Các bệnh làm ảnh hưởng tới số lượng và chất lượng tiểu cầu đều gây ra các bệnh chảy máu

1.1.2.1 Bệnh tăng tiểu cầu tiên phát (Thromobcytocis)

Bệnh hiếm gặp, gặp ở cả 2 giới, thường trên tuổi 50

Triệu chứng lâm sàng: xuất huyết dưới da, niêm mạc, xuất huyết tiêu hóa, não, màng não; thường không xảy ra tắc mạch

Điều trị: dùng phóng xạ P33 hoặc myleran, nếu có tắc mạch phải sử dụng thuốc chống đông (thận trọng) [1]

1.1.2.2 Bệnh suy nhược tiểu cầu Glanzman

Bệnh di truyền lặn trên nhiễm sắc thể thường Số lượng tiểu cầu bình thường nhưng rối loạn tập trung tiểu cầu do không có hoặc rối loạn chức năng của receptor gắn tiểu cầu

Biểu hiện lâm sàng: Chảy máu mức độ nhẹ như chảy máu cam, chảy máu chân răng, xuất huyết dưới da và niêm mạc

Điều trị: Truyền huyết tương tươi hoặc truyền tiểu cầu Desmopressin hoặc các thuốc ức chế ly giải cục máu đông cũng có tác dụng tốt [27]

1.1.2.3 Giảm tiểu cầu thứ phát

hoặc giảm trên 50% so với giá trị ban đầu

Giảm tiểu cầu thứ phát có thể là do mất máu, nhiễm trùng hay sử dụng một

số thuốc (VD: quinidin, quinin, kháng sinh sufonamid,…) hoặc phơi nhiễm với hóa chất kéo dài (thuốc trừ sâu, dung môi hữu cơ) Các thuốc làm giảm tiểu cầu có thể

do một số cơ chế: thuốc gây độc tính trực tiếp, ức chế tủy xương, các tác nhân hóa học trị liệu thường theo cơ chế này; hoặc theo cơ chế miễn dịch, thuốc làm cơ thể sinh ra kháng thể kháng tiểu cầu

Triệu chứng lâm sàng: bầm tím, chấm xuất huyết, chảy máu cam

Điều trị: tìm nguyên nhân gây bệnh để loại bỏ; truyền tiểu cầu hoặc huyết tương [23]

1.1.2.4 Xuất huyết giảm tiểu cầu tự miễn (ITP)

Xuất huyết giảm tiểu cầu tự miễn là một bệnh tự miễn, trong đó một tự kháng thể IgG được tạo thành và gắn vào tiểu cầu; phần Fc của tự kháng thể này bị đại thực bào ở lách nhận diện (do chúng có thụ thể Fc) Các đại thực bào ở lách sẽ gắn với tiểu cầu có phủ kháng thể làm tiểu cầu bị tiêu hủy Mặc dù có sự gắn bổ thể vào tự kháng thể nhưng quá trình này không gây tiêu hủy tiểu cầu trực tiếp [7]

Bệnh đặc trưng bởi xuất huyết da và niêm mạc như niêm mạc miệng, tiêu hóa; rong kinh; hiếm khi chảy máu nội sọ hay xuất huyết võng mạc; số lượng tiểu cầu rất thấp, có thể tiểu cầu lớn, hình thái khác thường

Điều trị: corticoid, các globulin miễn dịch, khi cần thiết sử dụng các thuốc ức chế miễn dịch, nếu xuất huyết nặng có thể truyền máu hoặc tiểu cầu [27]

1.1.3 Chảy máu do rối loạn các yếu tố đông máu

Có 13 yếu tố đông máu tham gia vào quá trình cầm máu Chúng vô cùng quan trọng cho giai đoạn hình thành đông máu Các yếu tố này hầu hết được tổng hợp ở gan và giải phóng vào huyết tương dưới dạng tiền chất không hoạt động, chỉ khi nào được hoạt hóa chúng mới tham gia vào quá trình đông máu Một số bệnh gây giảm số lượng và chức năng của các yếu tố này sẽ gây chảy máu

1.1.3.1 Bệnh Hemophilia

Hemophilia là một rối loạn chảy máu mà kết quả từ sự thiếu hụt bẩm sinh một yếu tố đông máu của huyết tương Bệnh Hemophilia A gây ra do sự thiếu hụt yếu tố VIII, bệnh Hemophilia B gây ra do sự thiếu hụt yếu tố IX Hemophilia B ít gặp hơn 4-5 lần so với Hemophilia A Bệnh Hemophilia di truyền trên gen lặn của nhiễm sắc thể X nên di truyền từ mẹ sang con trai

Triệu chứng lâm sàng: chảy máu dưới da, xuất hiện mảng máu sau chấn thương nhẹ, tụ máu (đặc biệt là đầu gối, mắt cá chân, khuỷu tay), sưng đau khớp (do chảy máu vào khoang khớp), chảy máu quá nhiều sau khi phẫu thuật hoặc chấn thương

Xét nghiệm cận lâm sàng: kéo dài aPTT, giảm yếu tố VIII (Hemọhilia A) hoặc yếu tố IX (Hemophilia B), số lượng tiểu cầu, PT, kháng nguyên yếu tố von Willebrand và thời gian chảy máu đều bình thường

Điều trị:

Hemophilia A: Truyền máu tươi, huyết thanh tươi, yếu tố VIII kết tủa hoặc yếu tố VIII tái tổ hợp, ngoài ra có thể sử dụng desmopressin acetat (thuốc này làm tăng sản sinh yếu tố von Willebrand và yếu tố VIII) Các thuốc ức chế ly giải cục máu đông như acid aminocaproic và acid tranxenamic cũng có tác dụng tốt khi điều trị các bệnh máu khó đông

Hemophilia B: Truyền máu, yếu tố IX tái tổ hợp hoặc yếu tố VIII kết tủa, hoặc PCCs (phức hợp chứa yếu tố IX và các yếu tố phụ thuộc vit K khác như yếu tố

II, VII, X)

Việc sử dụng các yếu tố đã tinh chế khuyến khích được sử dụng hơn so với việc truyền máu hay huyết thanh do hạn chế được việc lây nhiễm chéo các bệnh qua đường máu như viêm gan B, HIV…[23]

1.1.3.2 Bệnh von Willebrand

Yếu tố von Willebrand là yếu tố quan trọng của quá trình cầm máu, nó cần cho sự kết dính tiểu cầu và đồng thời là phân tử vận chuyển yếu tố VIII trong tuần hoàn, giúp yếu tố này không bị phân hủy Vì vậy von Willebrand trong quá trình cầm máu ảnh hưởng đến cả chức năng tiểu cầu và đông máu

Bệnh von Willebrand có tính chất gia đình, di truyền theo tính trội, gặp ở cả

2 giới, gồm có 3 loại: loại 1 và loại 3 liên quan tới các khuyết tật về số lượng yếu tố von Willebrand; loại 1 phổ biến nhất, đặc trưng bởi sự giảm nhẹ đến trung bình yếu

tố von Willebrand và giảm tương tự yếu tố VIII; loại 3 rất hiếm gặp, yếu tố von Willebrand và yếu tố VIII rất thấp, hầu như không thấy; loại 2 liên quan tới các đột biến về chức năng của yếu tố von Willebrand

Triệu chứng lâm sàng: rất thay đổi, một số bệnh nhân không có triệu chứng; chảy máu cam, chảy máu chân răng, rong kinh, dễ bầm tím, chảy máu sau phẫu thuật

Điều trị: sử dụng desmopressin, hoặc yếu tố VIII tái tổ hợp; truyền máu, truyền huyết tương hoặc tiểu cầu trong trường hợp chảy máu nhiều hoặc sử dụng thuốc không hiệu quả[23],[27]

1.1.3.3 Chảy máu do bệnh gan

Gan là cơ quan tổng hợp các yếu tố đông máu và các chất ức chế đông máu (antithrombin…) Tất cả các yếu tố đông máu (trừ yếu tố VIII) đều giảm ở người suy gan (cấp tính hoặc mãn tính) Số lượng và chức năng tiểu cầu giảm ở người bị bệnh gan Do đó, ở những người mắc bệnh gan thường rất dễ chảy máu

Điều trị (trong trường hợp có chảy máu hoặc trước thủ thuật xâm lấn): vitamin K, truyền tiều cầu, truyền huyết trương tươi đông lạnh, có thể sử dụng PCCs, desmopressin, yếu tố VIIa tái tổ hợp [23]

1.1.3.4 Chảy máu do thiếu các yếu tố phụ thuộc vitamin K

Các tiền chất của các yếu tố đông máu II, VII, IX – gọi là PIVKA (Protein induced by vitamin K absence) chỉ có hoạt tính khi gốc glutamat trong cấu trúc hóa học của nó được carboxyl hóa bởi hệ enzym ở gan Khi huyết tương đủ vitamin K, vitamin K sẽ hoạt hóa hệ thống enzym ở gan nên PIVKA được carboxyl hóa, chuyển thành các yếu tố đông máu II, VII, IX, X có hoạt tính và tham gia vào quá trình đông máu [9]

Bệnh có biểu hiện đặc trưng bầm tím dưới da, chảy máu chân răng, chảy máu nhẹ sau chấn thương Xét nghiệm thấy thiếu hụt các yếu tố II, VII, X

Điều trị: Vitamin K liều cao; chảy máu nặng có thể sử dụng PCCs hoặc truyền máu tươi hoặc huyết tương [27]

1.1.3.5 Bệnh đông máu rải rác trong lòng mạch (DIC)

Nguyên nhân của bệnh thường gặp nhất là nhiễm trùng huyết do vi khuẩn, bệnh bạch cầu cấp, khối u rắn hoặc sản khoa gây ra Bệnh làm tăng quá mức hoạt tính của thrombin dẫn đến tăng quá trình tạo fibrin từ fibrinogen Do đó, các yếu tố đông máu bị lôi cuốn, sử dụng hết vào việc hình thành thrombin và fibrin, mặt khác

do fibrin tăng lên quá nhiều sẽ làm khởi động hệ thống tiêu fibrin Như vậy ở bệnh này xảy ra 2 hội chứng: hội chứng chảy máu và hội chứng đông máu

Biểu hiện lâm sàng: bầm tím, các chấm xuất huyết, có thể nặng hơn như xuất huyết tiêu hóa, phổi hay xuất huyết nội sọ, huyết khối, tím tái ngoại vi

Điều trị: truyền huyết tương tươi đông lạnh, có thể kết hợp heparin[23],[27]

1.2 Một số mô hình nghiên cứu tác dụng của thuốc lên thành mạch

Có rất nhiều mô hình có thể sử dụng để nghiên cứu tác dụng cầm máu của thuốc trên động vật thực nghiệm tùy theo mục đích sử dụng Cụ thể, để sàng lọc tác dụng của thuốc, ban đầu thường sử dụng mô hình cắt đuôi hoặc chi trên động vật bình thường Để đánh giá khả năng cầm máu của thuốc trong các mô hình gây chảy máu các mức độ khác nhau thường sử dụng các mô hình gây chảy máu bằng tổn thương: mô hình gây tổn thương tạng, tổn thương não, tổn thương mạch máu hoặc tổn thương da và niêm mạc Để định hướng cơ chế tác dụng của thuốc lên các yếu

tố của quá trình cầm máu có thể sử dụng các mô hình: mô hình nghiên cứu tác dụng

co mạch, mô hình gây tăng tính thấm thành mạch (để nghiên cứu tác dụng của thuốc lên thành mạch); mô hình giảm số lượng tiểu cầu, mô hình giảm chất lượng tiểu cầu (để nghiên cứu tác dụng của thuốc lên tiểu cầu); mô hình gây rối loạn đông máu bằng heparin, mô hình gây thiếu vitamin K, mô hình gây bệnh gan, mô hình gây Hemophilia (để nghiên cứu tác dụng của thuốc lên các yếu tố đông máu) [19]

Tuy nhiên trong phạm vi của khóa luận này, chúng tôi chỉ trình bày tổng quan về các mô hình nghiên cứu tác dụng của thuốc lên thành mạch gồm có mô hình nghiên cứu tác dụng co mạch và mô hình gây tăng tính thấm thành mạch

1.2.1 Mô hình nghiên cứu tác dụng co mạch trên tai thỏ cô lập

Nguyên tắc: Cho dung dịch thuốc nghiên cứu (được đặt ở độ cao thích hợp

để tạo áp suất thủy tĩnh hằng định) chảy qua hệ mạch tai thỏ cô lập Một thuốc có tác dụng co mạch sẽ làm giảm lượng dịch chảy qua hệ mạch và ngược lại, một chất giãn mạch sẽ làm tăng lượng dịch chảy qua hệ mạch Thuốc có tác dụng co mạch sẽ làm giảm lượng máu chảy, giảm thời gian chảy máu do đó có tác dụng cầm máu

Tiến hành:

Thỏ cả 2 giống, trọng lượng 2 – 3 kg Cô lập tai thỏ khỏi cơ thể

Luồn kim vào động mạch tai thỏ, bơm dung dịch ringer cho sạch máu rồi cố định tai thỏ vào bàn cố định

Nối kim vào bình chứa dung dịch ringer (dung dịch này được đặt ở độ cao thích hợp để tạo áp suất, bình nối với kim bằng dây truyền có khóa để điều chỉnh tốc độ chảy), để dung dịch ringer chảy qua hệ mạch tai thỏ Đếm số giọt chảy qua phễu hứng trong thời gian 1 phút Khi lưu lượng chảy đã ổn định (số giọt chảy/ phút không đổi), thêm thuốc nghiên cứu vào, chờ sau khoảng 1- 3 phút (để thuốc có tác dụng) đếm lại số giọt chảy qua hệ mạch tai

Đánh giá:

So sánh số giọt chảy ra trước và sau khi thêm thuốc, số giọt giảm chứng tỏ thuốc có tác dụng co mạch và ngược lại Thuốc có tác dụng co mạch sẽ có tác dụng

cầm máu [5], [33]

1.2.2 Mô hình gây tăng tính thấm thành mạch

Các mô hình này sử dụng tác nhân vật lý hoặc hóa học để kích thích cơ thể giải phóng các chất trung gian hóa học như histamin, prostaglandin, leucotrien…gây giãn các tiểu động mạch và tiểu tĩnh mạch, làm tăng tính thấm thành mạch dẫn đến máu di chuyển từ thành mạch ra các mô xung quanh gây xuất huyết Thuốc có tác dụng giảm tính thấm thành mạch sẽ là chất gây co mạch và có tác dụng cầm máu

1.2.2.1 Mô hình gây phù bàn chân chuột bằng carrageenan [5], [33]

Nguyên tắc: Mô hình này sử dụng chất gây phù là carrageenan Khi tiêm chất

này vào bàn chân chuột sẽ kích thích giải phóng các chất trung gian hóa học như histamin, prostaglandin,…gây tăng tính thấm thành mạch với các biểu hiện sưng, phù Các thuốc có tác dụng co mạch sẽ làm giảm tính thấm thành mạch, giảm mức

độ phù chân chuột do đó sẽ giảm bớt khả năng chảy máu

Lô đối chiếu: dùng thuốc đã biết rõ tác dụng (có thể sử dụng các thuốc: indomethacin, diclofenac…)

Lô thử: dùng thuốc đang nghiên cứu

Cho chuột uống thuốc hoặc dung môi Sau 30 phút, tiêm 0,05mL dung dịch carrageenan 1% vào gan bàn chân trái sau của chuột Đo thể tích chân chuột tại các thời điểm: trước khi tiêm và sau khi tiêm carrageenan 1giờ, 3 giờ, 5 giờ, 7 giờ và 24 giờ

Đánh giá:

- Tính độ phù chân chuột (tỷ lệ % tăng thể tích bàn chân của chuột so với thời điểm trước khi tiêm carrageenan)

- Tỷ lệ % ức chế phù của lô thử so với lô chứng

1.2.2.2 Mô hình gây tăng tính thấm thành mạch bằng phenethylamin [33]

Nguyên tắc: Mô hình này gây tăng tính thấm thành mạch bằng cách tiêm

phenethylamin, sự tăng tính thấm thành mạch sẽ thể hiện qua sự thoát mạch của dung dịch xanh Evan ra mô xung quanh Thuốc có tác dụng giảm tính thấm thành mạch sẽ làm giảm mức độ thoát mạch của dung dịch xanh Evan và có tác dụng cầm máu

vị trí phải, trái và trên bụng Sau 90 phút, giết chuột bằng ether rồi tiến hành đo đường kính vùng da bị nhuộm xanh hoặc cắt vùng da bị nhuộm xanh đem ngâm vào dung dịch natri clorid 0,09%, sau khoảng 24 giờ lọc lấy dịch rồi đem đo quang

Đánh giá:

Đo đường kính để tính diện tích vùng da bị nhuộm màu xanh hoặc tính nồng dung dịch xanh Evan đã thoát mạch (tính dựa vào đường chuẩn nồng độ dung dịch

xanh Evan – mật độ quang) Tính giá trị trung bình cho từng lô Tính tỷ lệ % ức chế

sự thoát mạch xanh Evan của lô thử so với lô chứng theo công thức:

Trong đó:

I%: % ức chế tăng tính thấm thành mạch

dịch xanh Evans thoát mạch ở lô chứng

dịch xanh Evans thoát mạch ở lô thử

Để gây tăng tính thấm thành mạch, ngoài tác nhân phenethylamin có thể sử dụng một số tác nhân khác như hợp chất 48/80, acid acetic…

1.2.2.3 Mô hình gây ban đỏ

Nguyên tắc: Mô hình sử dụng tác nhân gây tăng tính thấm thành mạch là tia

UV Tia này khi chiếu vào vùng da sẽ gây tổn thương thành mạch, gây tăng tính thấm thành mạch khiến máu thoát ra khỏi thành mạch gây hiện tượng ban đỏ Thuốc

có tác dụng làm giảm mức độ xuất hiện ban đỏ là thuốc có tác dụng co mạch và có tác dụng cầm máu

UV chỉ chiếu vào vùng này Sử dụng đèn tử ngoại nguyên bản Hanau 600W, làm nóng đèn trong 30 phút trước khi dùng và đặt đèn cố định, cách các con vật 20cm Chiếu tia UV trong 2 phút rồi cho chuột uống nốt 1/2 lượng thuốc hoặc dung môi còn lại Ban đỏ được ghi lại tại thời điểm 2 giờ và 4 giờ sau khi chiếu tia UV

Đánh giá

Dựa vào phương pháp tính điểm để đánh giá mức độ ban đỏ trên mỗi chuột

0 = không ban đỏ 2 = ban đỏ mạnh

Tính điểm trung bình mỗi lô, sau đó tính tỷ lệ % ức chế ban đỏ của lô thử so với lô chứng

Những chuột với kết quả là 0 và 1 được xem là đã được bảo vệ Các kết quả thu được sau 2 và 4 giờ có thể sơ bộ cho biết khoảng thời gian tác dụng

1.3 Cây Móc và các nghiên cứu về tác dụng dược lý của cây Móc

1.3.1 Một số đặc điểm của cây Móc

1.3.1.1 Đặc điểm thực vật

Cây Móc có tên khoa học là Caryota mitis Lour., thuộc họ Cau – Arecaceae

Ngoài ra, cây móc còn có tên khác: đùng đình, đủng đỉnh, mạy khuông [11], [20]

Cây phân bố chủ yếu ở các nước Đông Nam Á Tại Việt Nam, cây tập trung

ở nhiều ở vùng trung du và đồng bằng Bắc Bộ Thường sử dụng bẹ, rễ, ngoài ra còn dùng quả [11], [12], [20]

1.3.1.2 Thành phần hóa học

Dịch của bông mo thu hái vào lúc còn non chứa sucrose 13,6%, vết của đường khử Dịch đã lên men chứa đường khử 1%, alcol 3-4,5%, acid acetic 0,3% [20]

Bông mo có chứa các nhóm chất: anthranoid, coumarin, flavonoid, tanin, saponin, chất béo, đường khử, acid amin (acid aspartic và acid glutamic là 2 thành phần có hàm lượng cao nhất) [10]

Quả chín có chứa tinh thể calci oxalate hình kim Vì vậy cần tránh tiếp xúc với vỏ quả này vì đây là thành phần gây ngứa khi tiếp xúc với quả chín [11],[31]

Phấn hoa của cây Caryota mitis có chứa một protein với cấu trúc 131 – 134

acid amin (gọi là profilin) được coi là tác nhân chính khiến phấn hoa của cây này gây ra các phản ứng dị ứng[26]

1.3.1.3 Công dụng

Bẹ móc phơi khô được sử dụng trong y học cổ truyền với tên Tông lư Dược liệu vị đắng, sít, tính bình, có tác dụng thu liễm, chỉ huyết, làm sít ruột, tan hòn cục

Quả móc vị cay, tính mát, có tác dụng giải khát, chống mệt mỏi [20]

Bẹ móc được dùng làm thuốc chữa đái ra máu, đái rắt, tiểu tiện không thông,

lỵ ra máu, bạch đới, rong kinh, rong huyết, ho ra máu Ngày 20g đốt tồn tính tán bột uống hoặc sắc uống Nhân quả giã nát đắp chữa đau nửa đầu Nõn thân sắc với nước

có tác dụng nhuận tràng [20]

Khối sợi mềm ở nách các bẹ được sử dụng để làm lành vết thương bằng cách đắp bên ngoài [11]

Tua Móc có tác dụng làm tăng lực trên mô hình chuột bơi [10]

Theo nghiên cứu trên mô hình chuột gây hen suyễn dị ứng, sản phẩm tạo

thành từ sự tái tổ hợp Caryota mitis profilin với các tiểu phân nano PLGA – poly

acid lactic-co-glycolic (rCmP - PLGA) có tác dụng làm giảm các triệu chứng hen

mở ra hướng mới trong việc sản xuất vacxin để phòng ngừa và điều trị các bệnh hen suyễn [35]

1.3.2 Các nghiên cứu về tác dụng dược lý của cây Móc

1.3.2.1 Nghiên cứu trên động vật bình thường[13]

Nghiên cứu tác dụng theo hướng cầm máu trên động vật bình thường cho thấy:

Về tác dụng cầm máu đường uống:

Liều dùng: Nghiên cứu khảo sát liều dùng của bẹ móc ở 3 mức liều 1,5g; 3g; 6g/kg chuột nhắt trắng tính theo dược liệu khô Kết quả cho thấy bẹ móc ở mức liều 3g và 6g/ kg chuột đều có tác dụng làm giảm thời gian chảy máu lần lượt là 37,67%; 56,09% so với lô chứng (p<0,05) Trong đó liều 6g/kg chuột nhắt có làm giảm thời gian chảy máu nhiều nhất (56,09%) trong các mức liều nghiên cứu

So sánh tác dụng của bẹ móc và rễ móc: Bẹ móc và rễ móc mức liều 6g/kg chuột đều làm giảm thời gian chảy máu lần lượt là 56,09% và 40,12% so với lô chứng (p<0,05) Bẹ móc và rễ móc có tác dụng giảm thời gian chảy máu tương

đương nhau (p>0,05) Vì vậy, các nghiên cứu về sau chọn bẹ móc làm nguyên liệu nghiên cứu để vừa dễ thu hái vừa bảo tồn được nguồn dược liệu

Số lượng tiểu cầu và một số chỉ số đông máu: Nghiên cứu cho thấy bẹ móc liều 6g/kg chuột nhắt không làm thay đổi số lượng tiểu cầu, PT, aPTT, fibirinogen, thời gian đông máu so với lô chứng (p > 0,05)

Về tác dụng chống viêm đường uống:

Bẹ móc liều 3g/kg chuột cống trắng làm giảm 23,53% phù so với chứng (p < 0,05) tại thời điểm 5 giờ sau khi gây viêm bằng carrageenan

Về độc tính cấp:

Như vậy, đây là nghiên cứu đầu tiên về tác dụng theo hướng cầm máu của cây móc trên thực nghiệm Nghiên cứu đã xác định được liều dùng đường uống của

bẹ móc (6g/kg chuột nhắt), sự tương đương giữa tác dụng cầm máu của bẹ móc và

rễ móc Bẹ móc có tác dụng cầm máu nhưng không ảnh hưởng đến số lượng tiểu cầu và quá trình đông máu của chuột bình thường Bên cạnh tác dụng cầm máu, bẹ móc có tác dụng giảm mức độ phù chân chuột cả đường uống và đường dùng tại chỗ

1.3.2.2 Nghiên cứu trên động vật gây rối loạn đông máu [14]

Trên chuột gây rối loạn đông máu bằng aspirin:

Aspirin là thuốc gây giảm chức năng tiểu cầu thông qua làm giảm khả năng kết tập tiểu cầu do đó có tác dụng chống đông máu

Kết quả nghiên cứu cho thấy: bẹ móc liều 6g/kg chuột nhắt làm giảm thời gian chảy máu 37,36% so với lô chứng bệnh (lô được gây rối loạn đông máu bằng

aspirin đường uống liều 26mg/kg chuột nhắt nhưng không dùng cao bẹ móc),

p < 0,05 Bẹ móc liều 6g/kg chuột nhắt không làm thay đổi thời gian đông máu và

số lượng tiểu cầu so với lô chứng bệnh (p > 0,05)

Trên chuột gây rối loạn đông máu bằng acenocoumarol:

Acenocoumarol là dẫn xuất dicoumarol có tác dụng kháng vitamin K Vì cấu trúc gần giống vitamin K nên ức chế cạnh tranh enzym epoxid – reductase (enzym khử vitamin K – epoxid thành vitamin K cần cho sự hoạt hóa các yếu tố đông máu

II, VII, IX, X) dẫn đến ức chế quá trình hoạt hóa các yếu tố đông máu vì vậy thuốc

có tác dụng chống đông

Kết quả nghiên cứu cho thấy: bẹ móc liều 6g/kg chuột nhắt làm giảm thời gian chảy máu 38,77% so với chứng bệnh (lô dùng acenocoumarol liều 2mg/kg chuột) có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Trên thời gian đông máu, PT, aPTT, bẹ móc liều 6g/kg chuột không làm thay đổi các chỉ số trên so với chứng bệnh (p > 0,05)

Trên chuột gây rối loạn đông máu bằng heparin

Heparin là thuốc gây chống đông máu do thuốc tạo phức với Antithrombin III (có tác dụng chống đông do làm mất hiệu lực của thrombin và các yếu tố đông máu IX, X, XI, XII), phức này làm tăng cường hiệu lực của Antithrombin III lên nhiều lần do đó ức chế mạnh thrombin và các yếu tố đông máu

Kết quả nghiên cứu: bẹ móc liều 6g/kg chuột nhắt làm giảm thời gian chảy máu 30,16% so với lô chứng bệnh (dùng heparin tiêm dưới da liều 1200IU/kg x 2 lần/ ngày) có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Trên thời gian đông máu, PT, aPTT, bẹ móc liều 6g/kg chuột không làm thay đổi các chỉ số trên so với chứng bệnh (p > 0,05)

Như vậy, bẹ móc liều 6g/kg chuột nhắt không chỉ có tác dụng cầm máu trên

chuột bình thường mà còn có tác dụng cầm máu trên chuột gây rối loạn đông máu bằng aspirin, acenocoumarol và heparin Điều này đem lại nhiều lợi ích trên lâm sàng bởi các thuốc trên được sử dụng ngày càng nhiều để điều trị huyết khối, tuy nhiên tác dụng phụ hay gặp nhất là chảy máu, vì vậy kết quả này gợi ý việc sử dụng

bẹ móc sẽ hạn chế được tình trạnh chảy máu trên các bệnh nhân đang sử dụng

những thuốc trên Bên cạnh đó, bẹ móc liều 6g/kg chuột không làm ảnh hưởng đến

số lượng tiểu cầu, các chỉ số PT, aPTT, thời gian đông máu chứng tỏ tác dụng cầm máu của bẹ móc có lẽ không liên quan đến tiểu cầu và quá trình đông máu

1.3.2.3 Nghiên cứu tác dụng của bẹ móc trên thành mạch[14]

Với mô hình trên hệ mạch tai thỏ cô lập: sau khi truyền cao bẹ móc với dãy nồng độ tăng dần từ 0,05% đến 1%, bắt đầu từ nồng độ 0,08% số giọt chảy ra từ tĩnh mạch rìa tai thỏ giảm so với khi chưa truyền dịch có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Ở nồng độ cao nhất 1%, sự giảm số giọt chảy ra từ hệ mạch tai thỏ là nhiều nhất (39,00%) so với ban đầu Kết quả này cho thấy cao bẹ móc có tác dụng làm co mạch

Tóm lại: Các nghiên cứu đi trước đã cho thấy, bẹ cây móc có tác dụng cầm

máu, cơ chế của tác dụng này có lẽ không liên quan đến số lượng tiểu cầu và quá trình đông máu mà có lẽ do ảnh hưởng lên giai đoạn thành mạch Tuy nhiên các nghiên cứu trên chưa xác định được thành phần hoạt chất có tác dụng cầm máu và đều thực hiện với cao chiết nước của bẹ cây móc, đây là dung môi chiết ít tốn kém

và không độc hại nhưng dịch chiết nhiều tạp và khó bảo quản do vi khuẩn dễ phát triển và đây chưa chắc là dung môi chiết tốt nhất cho dược liệu này Vì vậy, xác định thành phần hoạt chất và tìm ra dung môi chiết có tác dụng tốt nhất là định hướng của chúng tôi trong khóa luận này

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Đối tượng nghiên cứu

2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu

Bẹ cây móc được thu hái tại thành phố Thái Bình, tỉnh Thái Bình vào tháng 9/2014 Mẫu nghiên cứu được ThS.Nghiêm Đức Trọng, Bộ môn Thực vật, Trường

Đại học Dược Hà Nội thẩm định tên khoa học là Caryota mitis Lour., Arecaceae và

lưu tiêu bản tại phòng tiêu bản của Bộ môn Nguyên liệu sau khi thu hái, rửa sạch,

trong phụ lục 1.1, Dược điển Việt Nam IV [8] Cân dược liệu với khối lượng thích hợp, cho vào bình cầu, cho dung môi lượng vừa phải, chiết nóng bằng cách sử dụng thiết bị chiết hồi lưu, với mỗi dung môi đều chiết 3 lần, đem lọc dịch chiết thu được

để loại tạp Cô dịch chiết thành cao đặc để bảo quản Hiệu suất chiết và hàm ẩm của các cao được trình bày trong bảng 2.1

Bảng 2.1: Hiệu suất chiết và hàm ẩm của các cao chiết

Cao chiết Khối lượng dược

liệu khô (g)

Khối lượng cao (g)

Hiệu suất chiết (%)

Hàm ẩm (%)

phân đoạn, bốc hơi hoàn toàn dung môi, thu lấy cắn Sơ đồ chiết xuất thể hiện ở

hình 2.1 Hiệu suất chiết phân đoạn và hàm ẩm của cắn được thể hiện ở bảng 2.2

Chế phẩm cho chuột uống: cao đặc được pha loãng với nước cất đến tỷ lệ

thích hợp

Chế phẩm dùng trong thí nghiệm dùng ngoài và thí nghiệm trên tai thỏ cô

lập: Cao đặc bẹ móc được pha loãng với nước (thí nghiệm dùng ngoài) hoặc dung

dịch ringer (thí nghiệm trên tai thỏ) đến tỷ lệ thích hợp (cao lỏng 1:5) rồi ly tâm ở

tốc độ 3000 vòng/phút trong 10 phút, lọc để loại cắn hoàn toàn, thu lấy phần dịch

trong suốt làm dịch gốc, sau đó tiếp tục pha loãng với nước hoặc dung dịch ringer

để tiến hành thí nghiệm

Hình 2.1: Sơ đồ chiết phân đoạn cao chiết có tác dụng tốt nhất

Bột dược liệu Methanol

Dung dịch nước

Cắn Ethylacetat

Cắn metanol toàn phần trong nước

Nước

Bảng 2.2: Hiệu suất chiết và hàm ẩm của các cắn phân đoạn cao methanol

Cắn phân

đoạn

Khối lượng dược liệu (g)

Khối lượng cắn (g)

Hiệu suất chiết (%)

Hàm ẩm (%)

Chuột cống trắng chủng Wistar, cả hai giống, trọng lượng 120 – 160g khỏe

mạnh, do Học viện Quân y cung cấp

Thỏ cả 2 giống, khối lượng 2 – 3 kg do Học viện Quân y cung cấp

Động vật sau khi mua về được nuôi tại phòng thí nghiệm của Bộ môn Dược lực, trường Đại học Dược Hà Nội 5 ngày trước khi tiến hành thí nghiệm Chuột được ăn thức ăn tiêu chuẩn do Viện Vệ sinh dịch tễ trung ương cung cấp, uống nước

tự do

2.1.3 Hóa chất và trang thiết bị

Hóa chất:

- Ethanol tuyệt đối do Công ty cổ phần hóa chất Đức Giang, Hà Nội sản xuất

- Methanol do Xilong Chemical Co.,Ltd, Trung Quốc sản xuất

- Adrenalin ống tiêm 1mg/1mL do Công ty Dược – VTYT Thanh Hóa sản xuất

- Carbazochrom dihydrat (biệt dược Adrenoxyl 10mg) do Sanofi-Synthelabo, Việt Nam sản xuất

- Indomethacin do Công ty cổ phần Dược phẩm TW 2 sản xuất

- Carrageenan do hãng Sigma Aldrich, US sản xuất

Các hóa chất, dung môi khác đạt tiêu chuẩn thí nghiệm do phòng vật tư - trang thiết bị Trường Đại học Dược Hà Nội cung cấp

Trang thiết bị:

- Tủ sấy do hãng Memmert, Đức sản xuất

- Dụng cụ cất quay Rotavapor R – 200 do hãng Buchi, Thụy Sĩ sản xuất

- Máy li tâm EBA - 20 do hãng Hettich, Đức sản xuất

- Máy đo độ phù chân chuột (phù kế Plethysmometer) do hãng Letica, US sản xuất

Các máy móc, dụng cụ thí nghiệm khác do phòng vật tư - trang thiết bị Trường Đại học Dược cung cấp

2.2 Nội dung nghiên cứu

- Định tính sơ bộ thành phần hóa học của bẹ cây móc

- Đánh giá tác dụng theo hướng cầm máu của các cao chiết từ bẹ cây móc để xác định cao chiết có tác dụng tốt nhất

 Đánh giá tác dụng cầm máu của các cao chiết khác nhau từ bẹ cây móc bằng

mô hình cắt đuôi chuột

 Đánh giá tác dụng giảm tính thấm thành mạch của các cao chiết khác nhau

từ bẹ cây móc bằng mô hình gây phù bằng carrageenan

 Đánh giá tác dụng co mạch của các cao chiết từ bẹ cây móc bằng mô hình trên hệ mạch tai thỏ cô lập

- Đánh giá tác dụng cầm máu của các phân đoạn từ dịch chiết có tác dụng tốt nhất bằng mô hình cắt đuôi chuột

2.3 Phương pháp nghiên cứu

Sơ đồ phương pháp nghiên cứu được trình bày trong hình 2.2

Hình 2.2 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu

2.3.1 Định tính thành phần hóa học của bẹ cây móc

Chiết xuất và định tính các nhóm chất hữu cơ: glycosid tim, saponin, anthranoid, flavonoid, anthocyanidin, coumarin, tanin, alkaloid, chất béo, carotenoid, sterol, đường khử, acid hữu cơ, polysaccharid trong bẹ cây móc bằng các phản ứng hóa học đặc trưng theo các tài liệu [2], [4],[16]

2.3.2 Nghiên cứu tác dụng theo hướng cầm máu của các cao chiết bẹ móc của các dung môi khác nhau

2.3.2.1 Nghiên cứu tác dụng cầm máu

● Đánh giá tác dụng cầm máu đường uống [13], [14]

Chuột cống trắng được chia thành 8 lô Mỗi lô 10 con

Lô chứng: uống nước muối sinh lý

Lô chứng dương: uống carbazochrom liều 12mg/kg chuột

Các lô thử: chuột ở các lô lần lượt uống các cao chiết từ bẹ móc với liều 3g/kg chuột cống tính theo dược liệu khô

Cho chuột uống nước muối sinh lý hoặc thuốc trong 5 ngày Đến ngày thứ 5, sau khi các lô đã được uống thuốc 2 giờ, gây mê cho chuột bằng thiopental với liều

Phương pháp nghiên cứu

Định tính

thành phần

hóa học

Tác dụng theo hướng cầm máu của các cao chiết khác nhau

Tác dụng cầm máu của các phân đoạn của cao chiết có tác dụng tốt nhất

Tác dụng cầm máu đường uống

Tác dụng cầm

máu đường

uống và tại chỗ

Tác dụng giảm tính thấm thành mạch

Tác dụng trên hệ mạch tai thỏ cô lập

20mg/kg sau đó tiến hành cắt đuôi chuột 2mm tính từ chóp đuôi, nhúng vào cốc

máu được tính từ khi có giọt máu đầu tiên sau khi cắt đuôi chuột cho tới khi máu ngừng chảy So sánh thời gian chảy máu giữa các lô

Tính % độ giảm thời gian chảy máu của các lô bẹ móc thử so với lô chứng theo công thức (1)

Trong đó:

A(%): độ giảm thời gian chảy máu của lô thử so với lô chứng

● Đánh giá tác dụng cầm máu tại chỗ

Chuột cống trắng được chia ngẫu nhiên thành 8 lô Mỗi lô 10 con

Lô chứng: nhúng đuôi chuột vào nước muối sinh lý

cồn tuyệt đối và methanol nồng độ 2 % (tính theo dược liệu khô)

Chuột được gây mê bằng thiopental với liều 20mg/kg chuột Cắt đuôi chuột 2mm tính từ chóp đuôi Nhúng ngay đuôi chuột vào nước muối sinh lý hoặc dung dịch adrenalin hoặc dung dịch nước muối có pha thêm cao bẹ móc chiết bằng các

đuôi chuột bằng đồng hồ bấm giây Thời gian chảy máu được tính từ khi có giọt máu đầu tiên sau khi cắt đuôi chuột cho tới khi máu ngừng chảy

So sánh thời gian chảy máu giữa các lô Tính % độ giảm thời gian chảy máu của lô thử với lô chứng theo công thức (1)

2.3.2.2 Nghiên cứu tác dụng giảm tính thấm thành mạch

Nghiên cứu tác dụng giảm tính thấm thành mạch trên mô hình gây phù bằng carrageenan Chuột cống trắng được chia thành 7 lô Mỗi lô 10 con

Lô chứng: uống nước muối sinh lý