Bẹ cây móc từ lâu đã được sử dụng trong dân gian làm thuốc cầm máu, đồng thời cũng đã có một số nghiên cứu trên thực nghiệm về tác dụng của dược liệu. Tuy nhiên chưa có tài liệu nào nghiên cứu về thành phần hóa học của bẹ cây móc (Caryota mitis Lour., Arecaceae). Vì vậy, để tìm hiểu thành phần có tác dụng cầm máu, đồng thời để làm cơ sở cho việc lựa chọn dung môi chiết xuất, chúng tôi thực hiện các phản ứng định tính để sơ bộ xác định thành phần hóa học có trong bẹ móc.
3.1.1.1. Định tính glycosid tim ● Chiết xuất:
Cân khoảng 10g bột bẹ móc. Thêm 100mL cồn 25%, ngâm trong 24 giờ. Gạn thu dịch chiết. Thêm vào dịch chiết 3mL chì acetat 30%, khuấy đều. Lọc qua giấy lọc. Nhỏ vài giọt dịch lọc đầu tiên vào ống nghiệm, thêm một giọt chì acetat. Nếu xuất hiện tủa thì ngừng lọc, thêm khoảng 1mL chì acetat 30% vào dịch chiết, khuấy đều, lọc lại và tiếp tục thử đến khi dịch lọc không còn tủa với chì acetat.
Chuyển toàn bộ dịch lọc vào một bình gạn. Chiết glycosid tim bằng cách lắc với cloroform: ethanol (4-1) 2 lần, mỗi lần 8 mL. Gạn lấy lớp cloroform. Gộp các dịch chiết chloroform và loại nước bằng natrisulfat khan.
Chia đều dịch chiết vào 6 ống nghiệm nhỏ đã được sấy khô, bốc hơi trên nồi cách thủy đến khô. Cắn thu được đem tiến hành làm các phản ứng định tính.
● Tiến hành phản ứng định tính Phản ứng Liberman
Cho vào ống nghiệm có chứa cắn bẹ móc 1 mL anhydrid acetic, lắc đều cho
tan hết cắn. Nghiêng ống 450. Cho từ từ theo thành ống 0,5 mL acid sulfuric đặc,
tránh xáo trộn chất lỏng trong ống. Ở mặt tiếp xúc giữa hai lớp chất lỏng sẽ xuất hiện một vòng màu tím đỏ. Phản ứng dương tính khi lớp chất lỏng phía dưới có màu hồng, lớp trên có màu xanh lá.
Hiện tượng quan sát được: Không xuất hiện vòng tròn tím đổ ở mặt tiếp xúc. Lớp chất lỏng phía dưới màu đỏ, phía trên không màu
Kết quả: Phản ứng âm tính (-)
Phản ứng Baljet
Cho vào ống nghiệm có chứa cắn bẹ móc 0,5 mL ethanol 90%. Lắc đều cho tan hết cắn. Nhỏ từng giọt thuốc thử Baljet mới pha cho đến khi xuất hiện màu đỏ da cam. So sánh màu sắc với ống chứng là ống không có cắn glycosid tim thấy ống thử có màu đỏ cam đậm hơn ống chứng là phản ứng dương tính.
Hiện tượng quan sát được: Khi cho thuốc thử, ống thử màu nâu đỏvà không thay đổi màu khi cho thuốc thử so với ống chứng
Kết quả: Phản ứng âm tính (-)
Phản ứng Keller-Kiliani
Cho vào ống nghiệm chứa cắn bẹ móc 0,5 mL ethanol 90%. Lắc đều cho tan hết cắn. Thêm vài giọt dung dịch sắt (III) clorid 5% pha trong acid acetic. Lắc đều.
Nghiêng ống 450. Cho từ từ theo thành ống 0,5 mL acid sulphuric đặc, tránh xáo
trộn chất lỏng trong ống. Ở mặt tiếp xúc giữa 2 lớp chất lỏng sẽ xuất hiện 1 vòng màu tím đỏ.
Lắc nhẹ, lớp chất lỏng phía trên sẽ có màu xanh lá. Phản ứng dương tính Hiện tượng quan sát được: Ở mặt tiếp xúc giữa 2 lớp chất lỏng không xuất hiện vòng tròn tím đỏ. Lớp chất lỏng phía trên không màu khi lắc nhẹ
Kết quả: Phản ứng âm tính (-)
3.1.1.2. Định tính saponin
Quan sát hiện tượng tạo bọt
Cho vào ống nghiệm lớn 1 g bột dược liệu, thêm 5 mL nước. Lắc mạnh trong 5 phút. Ðể yên và quan sát hiện tượng tạo bọt. Nếu bọt còn bền vững sau 15 phút thì sơ bộ kết luận dược liệu có chứa saponin.
Hiện tượng quan sát được: Ống nghiệm không xuất hiện cột bọt Kết quả: Phản ứng âm tính (-)
3.1.1.3. Ðịnh tính các hợp chất anthranoid trong dược liệu ● Ðịnh tính anthranoid toàn phần (Phản ứng Borntraeger)
Cho vào ống nghiệm 2g bột bẹ móc. Thêm 10 mL dung dịch acid sulfuric 1N. Đun trực tiếp trên nguồn nhiệt đến sôi. Để nguội, lấy dịch lọc. Cho dịch lọc vào
bình gạn, lắc với 10 mL CHCl3.
Lấy 1mL dịch chiết cloroform cho vào ống nghiệm nhỏ. Thêm 1 mL dung dịch NaOH 10%. Lắc nhẹ. Lớp nước sẽ có màu đỏ sim. Phản ứng dương tính
Hiện tượng quan sát được: Lớp nước không màu Kết quả: Phản ứng âm tính (-)
● Vi thăng hoa:
Trải bột dược liệu thành lớp mỏng trong một nắp chai bằng nhôm, đốt nhẹ trên đèn cồn để loại nước. Sau đó đậy lên nắp nhôm một miếng lam kính, bên trên có miếng bông đã thấm nước, tiếp tục đun nóng trong khoảng 5 - 10 phút. Lấy lam kính ra để nguội, soi kính hiển vi thấy tinh thể hình kim màu vàng. Sau khi nhỏ dung dịch natri hydroxyd lên lam kính, dung dịch sẽ có màu đỏ. Phản ứng dương tính.
Hiện tượng quan sát được: Soi kính hiển vi không thấy có tinh thể hình kim màu vàng. Nhỏ dung dịch NaOH lên lam kính không thấy xuất hiện màu đỏ.
Kết quả: Phản ứng âm tính (-)
3.1.1.4. Ðịnh tính flavonoid trong bẹ móc ● Chiết xuất:
Cân 10g bột bẹ móc, thêm 50mL ethanol 90%. Đun cách thủy sôi trong 15 phút. Lọc nóng. Dịch lọc được tiến hành các phản ứng định tính.
● Tiến hành phản ứng:
Phản ứng Cyanidin (phản ứng Shinoda)
Cho vào ống nghiệm nhỏ 1 mL dịch chiết. Thêm một ít bột magnesi kim loại (khoảng 10 mg). Giỏ từng giọt HCl đậm đặc (3-5 giọt). Ðể yên một vài phút, dung dịch sẽ chuyển từ màu vàng sang màu đỏ. Phản ứng dương tính.
Phản ứng với kiềm
1. Cho vào ống nghiệm nhỏ 1 mL dịch chiết . Thêm vài giọt dung dịch NaOH 10%. Sẽ thấy xuất hiện tủa vàng. Thêm 1 mL nước cất, tủa sẽ tan và màu vàng của dung dịch sẽ được tăng thêm.
Kết quả: Phản ứng dương tính (+++)
2. Nhỏ một giọt dịch chiết lên giấy lọc. Hơ khô rồi để lên miệng lọ amoniac đặc đã được mở nút, sẽ thấy màu vàng của vết dịch chiết được tăng lên.
Kết quả: Phản ứng dương tính (+++)
Phản ứng với FeCl3
Cho vào ống nghiệm nhỏ 1 mL dịch chiết. Thêm vài giọt dung dịch
FeCl3 5%. Sẽ xuất hiện tủa xanh đen.Kết quả: Phản ứng dương tính (+++)
Phản ứng diazo hoá
Cho 1 mL dịch chiết vào ống nghiệm, kiềm hoá bằng dung dịch kiềm (dung
dịch NaOH, KOH, Na2CO3 ), thêm vài giọt thuốc thử diazoni, lắc đều (có thể đun
nóng trên nồi cách thuỷ trong vài phút) xuất hiện màu đỏ. Kết quả: Phản ứng dương tính (+++)
3.1.1.5.Ðịnh tính các hợp chất anthoxyan trong bẹ móc
Cho vào ống nghiệm lớn 1 g và 5 mL nước. Ðun sôi trong 5 phút. Gạn lấy dịch chiết.
Cho vào ống nghiệm nhỏ 1 mL dịch chiết, thêm vài giọt HCl 10%, sẽ có màu đỏ, đồng thời cho vào ống nghiệm nhỏ 1 mL dịch chiết, thêm vài giọt NaOH 10%, sẽ có màu xanh. Phản ứng dương tính.
Hiện tượng quan sát được: Khi nhỏ HCl, ống nghiệm không thay đổi màu. Khi nhỏ NaOH, ống nghiệm chuyển màu đỏ
3.1.1.6. Ðịnh tính Coumarin trong bẹ móc ● Chiết xuất coumarin
Cân khoảng 5g bột bẹ móc cho vào bình nón, thêm 50 mL ethanol 90%, quấy đều. Đun cách thủy sôi khoảng 3 - 5 phút. Lọc nóng qua giấy lọc. Dịch chiết thu được để làm các phản ứng định tính.
● Phản ứng mở đóng vòng lacton
- Cho vào 2 ống nghiệm mỗi ống 1 mL dịch chiết
ống 1: thêm 0,5 mL dung dịch NaOH 10%; ống 2: để nguyên - Ðun cả 2 ống nghiệm đến sôi- Ðể nguội
Quan sát: ống1: có màu vàng hoặc tủa đục màu vàng, ống 2: trong - Thêm vào cả 2 ống nghiệm mỗi ống 2 mL nước cất. Lắc đều.
Quan sát: ống 1: trong suốt; ống 2: có tủa đục.
Acid hoá ống 1 bằng vài giọt HCl đặc, ống 1 sẽ trở lại đục như ống 2. Phản ứng dương tính khi hiện tượng xảy ra như ống 1.
Hiện tượng quan sát được: khi cho NaOH vào, ống thử xuất hiện tủa đục màu đỏ. Thêm nước cất, tủa không tan. Thêm HCl, ống 1 vẫn xuất hiện tủa.
Kết quả: Phản ứng âm tính (-)
● Phản ứng diazo hoá
Cho vào ống nghiệm nhỏ 1 mL dịch chiết. Thêm vào đó 2 mL dung dịch NaOH 10%.
Ðun cách thuỷ đến sôi rồi để nguội. Giỏ vài giọt thuốc thử Diazo- sẽ có màu đỏ gạch.
Kết quả: Phản ứng dương tính (+)
● Quan sát huỳnh quang của các vết coumarin dưới ánh sáng tử ngoại khi tác dụng với dung dịch kiềm.
Nhỏ vài giọt dịch chiết lên giấy thấm. Nhỏ tiếp vài giọt dung dịch NaOH 5%. Sấy nhẹ. Che một phần diện tích dịch chiết trên giấy lọc bằng một miếng kim loại, sau đó chiếu tia tử ngoại trong 5 phút. Bỏ miếng kim loại ra, quan sát tiếp dưới đèn tử ngoại sẽ thấy: phần không bị che có huỳnh quang sáng hơn phần bị che. Nếu tiếp
tục chiếu tia tử ngoại, phần bị che sẽ sáng dần lên, sau vài phút cả hai phần đều phát quang như nhau. Phản ứng dương tính.
Hiện tượng quan sát được: Quan sát dưới đèn tử ngoại thấy phần bị che và phần không bị che phát sáng như nhau.
Kết quả: Phản ứng âm tính (-)
3.1.1.7. Ðịnh tính tanin trong bẹ móc
● Chiết xuất
Lấy khoảng 10g bột dược liệu cho vào bình nón, thêm 20mL nước cất, đun sôi trong 2 phút. Ðể nguội, lọc. Dịch lọc được dùng để định tính.
● Phản ứng định tính:
a. Ống 1: lấy 2mL dịch lọc, thêm 2 giọt dung dịch FeCl3 5% (TT) sẽ xuất
hiện màu hoặc tủa màu xanh đen hoặc xanh nâu nhạt. Phản ứng dương tính. Kết quả: Phản ứng dương tính (+++)
b. Ống 2: lấy 2mL dịch lọc, thêm 2 giọt chì acetat 10% (TT) sẽ xuất hiện tủa bông.
Phản ứng dương tính.
Kết quả: Phản ứng dương tính (+++)
c. Ống 3: lấy 2mL dịch lọc, thêm 5 giọt dung dịch gelatin 1% sẽ xuất hiện
tủa bông trắng. Phản ứng dương tính. Kết quả: Phản ứng dương tính (+++)
3.1.1.8. Định tính alkaloid trong bẹ móc ● Chiết xuất
Cân 3 g bột bẹ móc, cho vào bình nón dung tích 50 mL. Thêm 30 mL dung dịch acid sulfuric 1N. Ðun đến sôi. Ðể nguội. Lọc dịch lọc vào bình gạn. Kiềm hoá dịch lọc bằng dung dịch amoniac 6N đến phản ứng kiềm (thử bằng chỉ thị màu vạn năng). Chiết alcaloid base bằng cloroform (chiết 3 lần, mỗi lần 5 mL). Gộp các dịch chiết cloroform để định tính.
●Tiến hành định tính:
Lấy một phần dịch chiết ether đã được chuẩn bị ở trên, đem lắc với acid sulfuric hai lần, mỗi lần 5 mL. Gộp các dịch chiết nước. Chia đều vào các ống
nghiệm nhỏ, mỗi ống 1 mL. Nhỏ vào từng ống nghiệm 2-3 giọt lần lượt các thuốc thử sau:
- Ống 1: thuốc thử Mayer, cho tủa màu từ trắng đến vàng. Phản ứng dương tính. Hiện tượng quan sát được: Không xuất hiện tủa
Kết quả: Phản ứng âm tính (-)
- Ống 2: thuốc thử Bouchardat, cho tủa nâu đến đỏ nâu. Phản ứng dương tính. Hiện tượng quan sát được: Không xuất hiện tủa
Kết quả: Phản ứng âm tính (-)
- Ống 3: thuốc thử Dragendorff, cho tủa vàng cam đến đỏ. Phản ứng dương tính. Hiện tượng quan sát được: Không xuất hiện tủa
Kết quả: Phản ứng âm tính (-)
3.1.1.9. Định tính chất béo, caroten, sterol
Ngâm 5g bột dược liệu trong bình nón dung tích 50mL, đổ ngập ether dầu hỏa, ngâm qua đêm (15 giờ). Lọc lấy dịch lọc, đem làm các phản ứng định tính sau:
● Định tính chất béo:
Nhỏ vài giọt dịch chiết ether dầu hỏa trên một miếng giấy lọc để khô rồi quan sát. Trên miếng giấy lọc không có vết mờ đục thì phản ứng âm tính.
Hiện tượng quan sát được: Không xuất hiện vết mờ đục Kết quả: Phản ứng âm tính (-)
● Định tính caroten
Lấy 2mL dịch chiết ether dầu hỏa cho vào ống nghiệm nhỏ, bốc hơi cách
thủy đến cắn. Cho thêm 2 giọt H2SO4 đặc vào ống nghiệm sẽ chuyển sang màu xanh
da trời.
Hiện tượng quan sát được: Ống nghiệm xuất hiện màu nâu Kết quả: Phản ứng âm tính (-)
● Định tính sterol
Lấy 1mL dịch chiết ether dầu hỏa, bốc hơi cách thủy tới cắn, cho thêm 1mL
dịch H2SO4 đặc theo thành ống nghiệm thấy mặt tiếp xúc giữa 2 lớp chất lỏng có vòng tròn tím.
Hiện tượng quan sát được: Không xuất hiện vòng tròn tím đỏ Kết quả: Phản ứng âm tính (-)
3.1.1.10. Định tính đường khử, acid hữu cơ
Cho 5g bột dược liệu vào ống nghiệm to (15mL), thêm 10mL nước cất, đun cách thủy trong 10 phút. Lấy dịch lọc đem định tính.
● Định tính đường khử
Cho 1mL dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 3 giọt thuốc thử Fehling A và 3 giọt thuốc thử Fehling B. Đun cách thủy 5 phút thấy có kết tủa vàng cam sau chuyển sang nâu đỏ.
Kết quả: Phản ứng dương tính (+++)
● Định tính acid hữu cơ
Cho 2mL dịch chiết ở trên vào ống nghiệm rồi thêm 1 ít tinh thể Na2CO3
thấy có bọt khí nổi lên.
Kết quả: Phản ứng dương tính (+)
3.1.1.11. Định tính polysaccarid
Cho 2g bột dược liệu vào ống nghiệm to, thêm 10mL nước cất, đun sôi cách thủy trong 5 phút, lọc nóng. Cho vào 2 ống nghiệm:
Ống nghiệm 1: 4mL dịch chiết và 5 giọt thuốc thử Lugol Ống nghiệm 2: 4mL nước cất và 5 giọt thuốc thử Lugol Thấy ống 1 xuất hiện màu xanh tím, ống 2 không đổi màu.
Hiện tượng quan sát được: Ống thử có màu đỏ và không đổi màu khi cho thuốc thử lugol
Kết quả: Phản ứng âm tính (-)
Kết quả định tính sơ bộ thành phần hóa học các nhóm chất hữu cơ trong bẹ móc được thể hiện ở bảng 3.1.
Bảng 3.1:Tổng hợp kết quả định tính sơ bộ thành phần hóa học trong bẹ móc
STT Nhóm chất Định tính Kết quả Kết luận
1. Glycosid tim P/ứ Lieberman-Buchardat - Không có
P/ứ Baljet -
P/ứ Legal -
P/ứ Keller-Kiliani -
2. Saponin Quan sát hiện tượng tạo bọt - Không có
3. Anthranoid P/ứ Borntraeger - Không có
Vi thăng hoa -
4. Flavonoid P/ứ Cyanidin +++ Có
P/ứ với kiềm +++
Phản ứng với FeCl3 +++
P/ứ diazo hóa +++
5. Anthoxyan P/ứ với acid - Không có
P/ứ với kiềm -
6. Coumarin P/ứ đóng mở vòng lacton - Không có
P/ứ diazo hóa +
Quan sát hiện tượng huỳnh
quang -
7. Tanin P/ứ với gelatin 1% +++ Có
P/ứ với chì acetat 10% +++
P/ứ với FeCl3 +++
8. Alkaloid P/ứ với TT Mayer - Không có
P/ứ với TT Bouchardat -
P/ứ với TT Dragendoff -
9. Chất béo Nhỏ dịch chiết lên giấy lọc - Không có
10. Carotenoid P/ứ với H2SO4 đặc - Không có
11. Sterol P/ứ Lieberman-Buchardat - Không có
12. Đường khử P/ứ với TT Fehling +++ Có
13. Acid hữu cơ P/ứ với Na2CO3 + Có
14. Polysaccharid P/ứ với TT Lugol - Không có
Chú thích: (+): Phản ứng dương tính nhẹ (+++): Phản ứng dương tính mạnh
(-): Phản ứng âm tính
Như vậy: Trong bẹ móc, sơ bộ có các nhóm chất: flavonoid, tanin, đường khử, acid hữu cơ.