nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn in vitro của dịch chiết tỏi trong một số dung môi hữu cơ ứng dụng trong chăn nuôi gia cầm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM --- --- PHẠM THỊ MAI PHƯƠNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN IN VITRO CỦA DỊCH CHIẾT TỎI TRONG MỘT SỐ DUNG M

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM

- -

PHẠM THỊ MAI PHƯƠNG

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN

IN VITRO CỦA DỊCH CHIẾT TỎI TRONG MỘT SỐ

DUNG MÔI HỮU CƠ ỨNG DỤNG TRONG

CHĂN NUÔI GIA CẦM

LUẬN VĂN THẠC SĨ

HÀ NỘI - 2015

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM

- -

PHẠM THỊ MAI PHƯƠNG

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN

IN VITRO CỦA DỊCH CHIẾT TỎI TRONG MỘT SỐ

DUNG MÔI HỮU CƠ ỨNG DỤNG TRONG

CHĂN NUÔI GIA CẦM

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan: Luận văn “Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn in vitro của dịch chiết tỏi trong một số dung môi hữu cơ Ứng dụng trong chăn nuôi gia cầm” là công trình nghiên cứu của riêng tôi Những số liệu, kết quả nghiên cứu

nêu trong luận văn này là trung thực, khách quan và chưa từng được ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ trong quá trình thực hiện luận văn này đã được cám ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đều được chỉ rõ nguồn gốc

Hà Nội, ngày 9 tháng 11 năm 2015

Tác giả luận văn

Phạm Thị Mai Phương

LỜI CẢM ƠN

Trong suốt quá trình thực hiện đề tài và hoàn thành bản luận văn, tôi luôn nhận được sự giúp đỡ của nhiều tổ chức và cá nhân Nhân dịp này, tôi xin cảm ơn Ban Giám đốc Học viện Nông nghiệp Việt Nam, Bộ môn Nội - Chẩn - Dược - Độc chất khoa Thú y, Bộ môn Công nghệ sinh học thực vật khoa Công nghệ sinh học đã tạo điều kiện cho tôi được theo học chương trình đào tạo sau đại học tại trường Tôi xin chân thành cảm ơn gia đình ông Phạm Văn Thuận chủ gia trại đã tạo mọi điều kiện thuận lợi trong suốt quá trình thực nghiệm tại cơ sở để tôi thực hiện

và hoàn thành đề tài

Đặc biệt, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Bùi Thị Tho và T.S Nguyễn Thanh Hải - Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã trực tiếp hướng dẫn khoa học, giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn

Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc nhất tới gia đình, các bạn đồng nghiệp, bạn bè

đã đồng hành, đóng góp công sức, động viên, giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn

Hà Nội, ngày 9 tháng 11 năm 2015

Tác giả luận văn

Phạm Thị Mai Phương

MỤC LỤC

1.1.2 Vai trò và hướng nghiên cứu của dược liệu trên thế giới 5 1.1.3 Vai trò và hướng nghiên cứu của dược liệu ở Việt Nam 6 1.1.4 Một số thành tựu trong nghiên cứu ứng dụng thảo dược 6

1.2.6 Các dạng chế phẩm của tỏi dùng làm gia vị và thuốc 18

1.3.2 Đặc điểm về hình thái, nuôi cấy, đặc tính sinh hóa 21

1.3.5 Những hiểu biết về khả năng kháng kháng sinh của vi khuẩn E coli 24

Chương 2 NGUYÊN LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28

2.2.1 Sử dụng dịch chiết tỏi trong 7 dung môi hữu cơ được chiết xuất

2.3.1 Tách chiết dịch chiết tỏi theo phương pháp ngâm lạnh rồi cô quay

2.5.1 Thời gian nghiên cứu 36

3.1 Tác dụng kháng khuẩn của dịch chiết tỏi trong phòng thí nghiệm chiết

xuất bằng phương pháp ngâm lạnh rồi cô quay chân không trên E coli

3.1.1 Kết quả kiểm tra đặc tính cảm quan của các dịch chiết tỏi thu được

3.1.2 Kết quả tác dụng kháng khuẩn của các dịch chiết tỏi trong phòng thí

nghiệm chiết xuất bằng phương pháp ngâm lạnh rồi cô quay chân

không đối với E coli 044 phân lập được từ phân vịt bị tiêu chảy 38 3.1.3 Kết quả tác dụng kháng khuẩn của các dịch chiết tỏi trong phòng

thí nghiệm được chiết xuất bằng phương pháp ngâm lạnh rồi cô

quay chân không với E coli có chứa gen kháng thuốc 41

3.2.1 Ảnh hưởng của tỏi bổ sung vào thức ăn đến khả năng phòng một

3.2.2 Ảnh hưởng của tỏi bổ sung vào thức ăn đến năng suất của vịt nuôi thịt 49

DANH MỤC BẢNG

1.2 Những thay đổi về thành phần trong thời gian lưu trữ chất chiết tỏi

3.1 Kết quả kiểm tra độ mẫn cảm của 7 dịch chiết tỏi với E coli O44

3.2 Hoạt tính kháng khuẩn của 7 dịch chiết tỏi trên chủng vi khuẩn

3.3 Hoạt tính kháng khuẩn của 7 dịch chiết tỏi trên chủng vi khuẩn

3.4 Ảnh hưởng của tỏi bổ sung vào thức ăn đến tỷ lệ nuôi sống của vịt

3.5 Kết quả mổ khám bệnh tích vịt chết trong các lô theo dõi 48 3.6 Ảnh hưởng của tỏi bổ sung vào thức ăn đến khả năng tăng trọng

3.7 Ảnh hưởng của tỏi bổ sung vào thức ăn đến tốc độ sinh trưởng

3.8 Ảnh hưởng của tỏi bổ sung vào thức ăn đến tốc độ sinh trưởng

3.9 Ảnh hưởng của tỏi bổ sung vào thức ăn đến năng suất thịt vịt CV-

3.10 Ảnh hưởng của tỏi bổ sung vào thức ăn đến hiệu quả kinh tế của

DANH MỤC HÌNH

3.1 Mầu sắc của dịch chiết tỏi trong 7 loại dung môi khác nhau 38 3.2 Hoạt tính kháng khuẩn của 7 dịch chiết tỏi, kháng sinh kanamycin

3.3 Hoạt tính kháng khuẩn của 7 dịch chiết tỏi, kháng sinh ampicillin

3.4 Hoạt tính kháng khuẩn của 7 dịch chiết tỏi với E coli O44 gây bệnh 39 3.5 Hoạt tính kháng khuẩn của 7 dịch chiết tỏi, kháng sinh ampicillin

3.6 Hoạt tính kháng khuẩn của 7 dịch chiết tỏi trên chủng vi khuẩn

3.7 Hoạt tính kháng khuẩn của 7 dịch chiết tỏi, kháng sinh kanamycin

3.8 Hoạt tính kháng khuẩn của 7 dịch chiết tỏi trên chủng vi khuẩn

3.9 Khối lượng cơ thể vịt qua các tuần tuổi ở lô đối chứng và lô thí nghiệm 51 3.10 Sinh trưởng tuyệt đối giữa lô đối chứng và lô thí nghiệm 53 3.11 Tốc độ sinh trưởng tương đối của lô thí nghiệm và đối chứng 54

MỞ ĐẦU

1.1 Đặt vấn đề

Hiện nay chăn nuôi gia cầm nước ta đã và đang phát triển, lớn mạnh không ngừng, mang lại nguồn thu không nhỏ cho nền nông nghiệp nước nhà Áp dụng các biện pháp kỹ thuật vào công tác lai tạo giống mới song song với áp dụng các biện pháp kỹ thuật tiên tiến nhằm đáp ứng nhu cầu ngày càng tăng về số lượng, chất lượng thịt mang lại nguồn thu nhập cao cho người chăn nuôi

Những năm gần đây, chăn nuôi gia cầm nói chung và chăn nuôi thuỷ cầm nói riêng phát triển nhanh chóng, cung cấp cho thị trường ngày càng nhiều sản phẩm Bên cạnh sự phát triển mạnh mẽ đó, ngành chăn nuôi thuỷ cầm gặp không

ít khó khăn đặc biệt sau đại dịch cúm gia cầm Từ đó công tác vệ sinh phòng bệnh ngày càng được chú trọng

Trong đó, bệnh do E coli gây ra trên vịt là bệnh phổ biến Bệnh thường

gặp trên vịt thịt từ 1-8 tuần tuổi với tỷ lệ chết từ 5-15% Trên vịt đẻ thường gây chết phôi (vịt sát) (Nguyễn Xuân Bình và cs, 2002)

Do người chăn nuôi, bác sỹ thú y và ngay cả các nhà quản lý cũng chưa tuân thủ đúng nguyên tắc sử dụng kháng sinh: thuốc kháng sinh sử dụng sai mục đích (phòng bệnh, kích thích tăng trưởng…), sai liều lượng, liệu trình… Đó chính là nguyên nhân dẫn đến hiện tượng kháng thuốc của các vi khuẩn Hơn nữa việc sử dụng kháng sinh còn dẫn đến sự tồn dư thuốc trong các sản phẩm có nguồn gốc từ động vật: thịt, trứng, sữa,… tạo ra các sản phẩm chất lượng kém, không đảm bảo an toàn vệ sinh thực phẩm cho người tiêu dùng

Thực tế cũng chứng minh sự gia tăng các bệnh nguy hiểm khác ở người như: khối u, ung thư, rối loạn nội tiết, bệnh mạn tính không rõ nguyên nhân,…

Việc sử dụng các chế phẩm có nguồn gốc thảo dược để khắc phục tồn lưu trong các sản phẩm chăn nuôi đã và đang tập trung sự chú ý của nhiều nhà khoa học châu Á Ưu điểm nổi bật của thuốc đông dược là không để lại chất tồn dư có hại trong các sản phẩm chăn nuôi

Kháng sinh thảo dược vừa an toàn với vật nuôi lại vừa thân thiện với môi

trường Kháng sinh thảo dược cũng có hiệu quả điều trị bệnh cao và không gây tồn dư trong các sản phẩm chăn nuôi Vì vậy, dược liệu thảo mộc trở thành nguồn thuốc quan trọng, góp phần vào việc phòng và chữa bệnh cho vật nuôi, với mục đích sẽ cung cấp cho người tiêu dùng những sản phẩm sạch có nguồn gốc động vật đảm bảo an toàn vệ sinh thực phẩm Trong số các dược liệu quí phải kể đến tỏi - cây thuốc có nhiều tác dụng tốt

Xuất phát từ những thực tế trên, để tìm ra một giải pháp thay thế các thuốc kháng sinh truyền thống bằng các kháng sinh có nguồn gốc thảo mộc,

chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn

in vitro của dịch chiết tỏi trong một số dung môi hữu cơ Ứng dụng trong chăn nuôi gia cầm”

1.2 Mục đích của đề tài

Đánh giá tác dụng kháng khuẩn in vitro của dịch chiết tỏi trong một số dung môi hữu cơ với E coli gây bệnh tiêu chảy trên gia cầm và E coli có gen

kháng thuốc kháng sinh

Thông qua các kết quả nghiên cứu trong phòng thí nghiệm chúng tôi thử

nghiệm sử dụng tỏi để phòng, trị bệnh do E coli gây ra trên vịt

1.3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài

1.3.1 Ý nghĩa thực tiễn

Sự thành công của đề tài sẽ góp phần giảm thiểu tình trạng bệnh do E coli

gây ra trên đàn vịt cũng như tình trạng kháng thuốc trong chăn nuôi hiện nay Mở

ra một hướng chăn nuôi mới an toàn sinh học, giảm thiểu ô nhiễm môi trường và

sẽ cung cấp thực phẩm sạch, an toàn cho người tiêu dùng

Ngoài ra khi dùng các chế phẩm có nguồn gốc thiên nhiên trong phòng và trị bệnh nói chung, bệnh tiêu chảy nói riêng sẽ góp phần làm phong phú thêm

phác đồ điều trị bệnh do E coli gây ra trên vật nuôi, hạn chế dùng kháng sinh tổng hợp,

giảm bớt nguy cơ gây hại cho con người, thân thiện với môi trường

1.3.2 Ý nghĩa khoa học

Để phát triển nông nghiệp an toàn và bền vững, một trong những hướng đi đã

và đang được nhiều nhà khoa học trên thế giới, trong nước quan tâm đó là việc sử

dụng các hoạt chất có nguồn gốc từ thảo dược trong phòng, trị bệnh cho người và vật nuôi trong đó có kháng sinh thảo mộc Sử dụng các hoạt chất này thay thế dần các hóa dược và kháng sinh thông thường Kháng sinh thảo dược sẽ không gây tồn lưu, không ô nhiễm môi trường và trước mắt cũng chưa thấy hiện tượng kháng thuốc của vi khuẩn mặc dù chúng đã được sử dụng từ rất lâu

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Những hiểu biết chung về dược liệu

1.1.1 Cơ sở khoa học trong nghiên cứu dược liệu học

Thiên nhiên ban tặng cho loài người món quà vô cùng quý giá đó là nguồn thảo dược làm thuốc Các bài thuốc dân tộc được lưu truyền từ thế hệ này sang thế hệ khác hình thành nên bề dầy của nền y học cổ truyền Dựa vào những kinh nghiệm cổ truyền đã có nhiều tác giả tiến hành những nghiên cứu khác nhau về Đông dược nhằm tìm hiểu cơ sở khoa học của các bài thuốc trên rồi áp dụng vào việc phòng trị bệnh cho vật nuôi Thuốc vừa có tác dụng phòng độc cho vật nuôi lại vừa có hiệu quả điều trị cao

Tài nguyên dược liệu của nước ta rất phong phú Theo Nguyễn Thượng Dong (2002), Việt Nam có 3.830/10.368 loài thực vật có khả năng sử dụng làm thuốc Trong đó có khoảng 300 loài đang được khai thác, trồng và kinh doanh với

số lượng lớn Bên nhân y, công nghiệp dược sản xuất thuốc từ dược liệu hay hoạt chất từ dược liệu đang được Đảng và Nhà nước quan tâm, phát triển rất mạnh

Trong chăn nuôi, có thể nói lịch sử sử dụng thuốc thảo mộc trong thú y còn

do kinh nghiệm mang tính truyền miệng hoặc áp dụng tương tự như người

Việc dùng các loại thuốc hóa dược phòng trị bệnh cho vật nuôi: bệnh truyền nhiễm; nội ngoại khoa; nội ngoại ký sinh trùng tuy có mang lại hiệu quả cao nhưng cũng gây nhiều tác dụng phụ: đột biến gen, tăng nguy cơ gây ung thư, gây ô nhiễm môi trường Trong khi đó nguồn thuốc thảo mộc lại rất phong phú,

dễ kiếm, dễ sử dụng; ít hoặc không độc; giá thành rẻ; Đặc biệt không để lại tồn

dư trong sản phẩm động vật, đảm bảo vệ sinh an toàn thực phẩm; ít gây ảnh hưởng hoặc không gây ảnh hưởng tới môi trường Song song với những việc trên, trong lĩnh vực chăn nuôi – thú y cần phải kết hợp với việc tìm ra dạng bào chế, liều lượng thích hợp cho từng đối tượng vật nuôi để ứng dụng vào thực tiễn Tuy nhiên việc nghiên cứu tác dụng dược lý của vị thuốc không đơn giản và nhanh chóng Khó khăn này không chỉ đối với nước ta mà là tình hình chung của

nhiều nước có nền khoa học tiên tiến vì đối tượng nghiên cứu là cây, động vật làm thuốc là những sinh vật còn chứa đựng nhiều bí ẩn chưa khám phá được (Đỗ Tất Lợi, 1999) Do đó việc đi sâu tìm hiểu, nghiên cứu, khai thác, sử dụng thế mạnh của thảo dược là hướng đi hết sức đúng đắn, cần thiết hiện nay và trong tương lai

1.1.2 Vai trò và hướng nghiên cứu của dược liệu trên thế giới

Thuốc phòng trị bệnh cho người và thú nuôi hầu hết được bào chế từ hai nguồn: dược liệu và hóa chất Riêng thảo dược theo thống kê của tổ chức Y tế thế giới đạt tới 20.000 loài Việc sử dụng thảo dược hiện không chỉ các nước Á Đông

mà các nước phương Tây cũng tiêu thụ một lượng khá lớn Ở các nước có nền công nghiệp phát triển có tới 1/4 số thuốc kê trong đơn đều chứa hoạt chất từ thảo dược Riêng ở Mỹ năm 1980 con số thuốc này đã có giá trị 8 tỷ USD Trong những năm gần đây xu hướng thế giới dùng thuốc thảo mộc tự nhiên (không tách hoạt chất) ngày càng nhiều Hiện có rất nhiều biệt dược, đông dược của Trung Quốc được tiêu thụ mạnh ở các nước châu Âu Hiện nay dược liệu có vai trò sau:

+ Dược liệu là nguồn cung cấp nguyên liệu cho việc bán tổng hợp một số hóa dược: từ chất diosgenin của củ mài để bán tổng hợp lên thuốc steroid được

sử dụng nhiều trong lâm sàng

+ Nhiều hoạt chất quan trọng: quinin, morphin, ajmalin, vincaleucoblastin, emetin, strychnin… đều phải chiết ra từ dược liệu vì chưa tổng hợp được

+ Dược liệu mở đường cho ngành công nghiệp hóa dược phát triển:

- Biết được công thức của ephedrin hoá dược đã ngưng tụ acetyl carbinol với methylamin để có ephedrin tổng hợp

L-1-phenuy-1 Dựa vào công thức của quinin trong vỏ canhL-1-phenuy-1 kiL-1-phenuy-1 na để tổng hợp rất nhiều dẫn chất trị ký sinh trùng sốt rét

- Dựa vào artemisinin của cây thanh hao hoa vàng, các dẫn chất artesunat, arteether, artemether được bán tổng hợp cũng để trị ký sinh trùng sốt rét

+ Từ 1950-1980 thế giới đã thử tác dụng chống ung thư như: taxol (paclitaxe) của cây Taxus brevfolia Nutt, họ Taxaceae có tác dụng chữa ung thư buồng trứng ở thời kỳ tiến triển Năm 1992 ở Mỹ, Canada và Pháp đã sử dụng taxol trên lâm sàng Hiện nay người ta đang nghiên cứu tổng hợp các dẫn chất mới từ taxol

1.1.3 Vai trò và hướng nghiên cứu của dược liệu ở Việt Nam

Với nước ta, dược liệu có một vị trí quan trọng Nước ta nằm trong vùng nhiệt đới, chịu ảnh hưởng của gió mùa, độ ẩm cao, tạo điều kiện thuận lợi cho cây cối phát triển Rừng chiếm 2/3 diện tích đất tự nhiên Hệ thực vật đa dạng và phong phú, hiện cả nước có khoảng 20.000 loài, trong đó có trên 10.000 loài cây thuốc Nếu biết cách khai thác, nuôi trồng cây dược liệu một cách hợp lý chắc chắn sẽ có nhiều đóng góp cho ngành Y - Dược nói chung

Dân tộc ta cũng như Trung Quốc, Đài Loan, Nhật và một số nước Đông Nam Á khác đã có truyền thống chữa bệnh theo lối y học cổ truyền từ lâu đời nên rất cần dược liệu Về mặt kinh tế, nhà nước ta đã xếp cây thuốc vào loại cây công nghiệp cao cấp Dược liệu hàng năm không chỉ đã cung cấp nguồn hàng cho các công ty chế biến thuốc trong nước mà còn để cho xuất khẩu như: hoa hòe, quế, hồi, sa nhân, dừa cạn và các loại tinh dầu: hồi, quế, tràm, bạc hà…

1.1.4 Một số thành tựu trong nghiên cứu ứng dụng thảo dược

* Trong nhân y

Bên Y tế, việc nghiên cứu cây làm thuốc đã và đang được rất nhiều trường, viện quan tâm Do đó những tiến bộ trong công tác nghiên cứu và áp dụng vào lâm sàng ngày càng phong phú với nhiều mục đích khác nhau Sau đây chúng tôi chỉ liệt kê các công trình mới trong phòng, trị các bệnh nguy hiểm: lao, hủi, ung thư…

Lee I R, Song J.Y, 1992 Nghiên cứu tác dụng của dịch chiết toàn cây quyền bá – Selaginella tamariscina Beauv trên tế bào ung thư dòng P388 và MKN 45 invitro Các tác giả đã cho biết các chất có trong dịch chiết cây bá quyền có tác dụng làm giảm tế bào sống và làm tăng tế bào chết rất rõ so với lô đối chứng của tế bào ung thư dòng tế bào P388, còn dòng tế bào MKN 45 chưa

rõ lắm

Theo A.P.Alineida và cs, 2000 Nghiên cứu tác dụng ức chế sự phát triển của tế bào lympho và làm giảm tính miễn dịch invivo của cây thuốc bỏng - Kalanchoe pinnata

Theo Phạm Kim Mãn và cs, 2001 Nghiên cứu thuốc panacrin chế từ dịch

chiết lá đu đủ, trinh nữ hoàng cung và bột tam thất trong điều trị ung thư

Theo y học cổ truyền, hạt sầu đâu rừng Brucea javanica dùng làm thuốc

có tác dụng chữa lỵ, sốt rét, mụn cơm, chai chân, tay Người ta đã phân lập được hơn 50 hoạt chất thuộc nhóm quassinoid Nhưng theo Bao - Ning Su và cs (2002), khi nghiên cứu tác dụng của chất chiết từ hạt cây sầu đâu rừng tác giả đã tìm thêm được một chất mới là yadanzio S có tác dụng biệt hóa trên tế bào tiền tủy bao vây ung thư bạch cầu

Từ cây Đại (Plumeria rubra Linn var acutifolia Baill) chiết được chất fulvoplumierin có tác dụng ức chế vi khuẩn lao ở nồng độ 1-5µg/ml (Vũ Xuân Quang, 1993)

Tác dụng chống trứng làm tổ của alcaloid từ rễ cây nguyệt quì - Maraya panicullata L Fitoterpia, 1988

Tác dụng trị nấm, Alfonso carotenuto và cs, 1999 Nghiên cứu tác dụng của các Spirostanol saponin chế từ cây tỏi tây trên nấm Fusarinum culmorum

Nyunt Phay và cs, 1999 Nghiên cứu tác dụng của fistulosin và fusarinium của rễ cây hành ta trên nấm Fusarium oxysporum Với nồng độ 1,62 - 6,5µg/ml của fistulosin ức chế tổng hợp protein, ức chế nhẹ tổng hợp ARN

* Trong thú y

Tuy số lượng các công trình nghiên cứu chưa nhiều nhưng kết quả đạt được đã cho thấy tiềm năng lớn của cây thuốc tự nhiên trong điều trị bệnh thú y nói chung cũng như điều trị bệnh ngoại ký sinh trùng nói riêng, thảo dược đã dần khẳng định được những ưu điểm, công dụng đặc biệt Những công trình nghiên cứu tìm ra những đặc tính quý báu của thảo mộc cũng như cây thuốc mới có thể kể ra dưới đây:

Phạm Khắc Hiếu và Phạm Ngọc Viễn 1989, đã điều tra và khẳng định được 10/40 cây dược liệu chứa kháng sinh thảo mộc ở Việt Nam có tác dụng trị bệnh thối ấu trùng ong mật Trong số đó có những cây đang được áp dụng rộng rãi trong qui trình phòng chống bệnh này do Varroa jacobsoni và Tropilaelaps clareae - ngoại ký sinh trên ong ý Apis mellifera

Lê Minh Hoàng và Phạm Khắc Hiếu 2001, đã chọn được một số dược

liệu Việt Nam: bạc hà, kinh giới, mần tưới có tác dụng tốt trong phòng trị bệnh ngoại ký sinh trùng ong Dựa trên kết quả nghiên cứu của đề tài, các tác giả đã xây dựng được qui trình phòng trị bệnh ngoại ký sinh trùng tối ưu cho các đàn ong mật nuôi tại tỉnh Đăk Lăk

Phạm Khắc Hiếu và Lê Thị Ngọc Diệp (1997) cho biết: cây Actiso (Cynara scolymus L.) chứa nhiều hoạt chất có tác dụng chống viêm, lợi tiểu, thông mật, bổ gan Hiện đã chế được thành thuốc áp dụng để hỗ trợ điều trị tăng sức đề kháng cho vật nuôi

Phạm Khắc Hiếu và Bùi Thị Tho (1996) theo dõi tính kháng thuốc kháng

sinh và phytoncid của hai loại vi khuẩn E coli và Salmonella đã cho biết: Các vi

khuẩn này kháng lại thuốc hóa học trị liệu (streptomycin, neomycin, tetracyclin…) rất nhanh, đồng thời giữa chúng lại có hiện tượng kháng chéo

Trong khi đó hiện nay chưa thấy E coli và Salmonella kháng lại phytoncid của

tỏi, hẹ mặc dù cha ông ta đã sử dụng hai loại dược liệu này từ xa xưa và rất thường xuyên

Trong phòng thí nghiệm, thời gian để tạo được các chủng vi khuẩn liệu Khi tăng nồng độ phytoncid lên 5 lần nồng độ tạo kháng, toàn bộ vi khuẩn đã kháng lại tỏi và hẹ đã bị tiêu diệt Trong khi đó đối với các thuốc hóa học trị liệu, mặc dù đã tăng nồng độ lên 120 lần (thậm chí cao hơn) so với nồng độ tạo kháng mà vi khuẩn vẫn sống

Theo Trần Quang Hùng (1995) trong thuốc lá và thuốc lào có chứa các ancaloid - kiềm thực vật: Nicotin và Nornicotin, chế phẩm nicotin trừ được ngoại ký sinh trùng thú y và côn trùng hại rau màu và cây công nghiệp Nicotin nhanh chóng phân giải trong môi trường nên không gây ô nhiễm môi trường

Dịch chiết lá thuốc lào khô 0,4%, dịch chiết hạt na 8% trong môi trường kiềm yếu; dịch chiết củ bách bộ trong môi trường acid yếu trị ve, ghẻ của chó và

bò có hiệu quả cao (Nguyễn Văn Tý, 2002)

Từ cây cà gai leo (Solanum hainanense Hanse) đã tinh chế được hoạt chất Haina có tác dụng chống viêm (Nguyễn Văn Tý, 2002)

Theo Nguyễn Hữu Nhạ và Hoàng Quang Nghi 1978, dùng cây nghể răm

tươi giã nát, sát lên chỗ ghẻ của gia súc ngày 1 - 2 lần hoặc có thể nấu nước nghể răm tắm cho gia súc chữa ghẻ

Bùi Ngân Tâm, 2003 Từ cây chè (Thea cinensis) có hoạt chất như cafein, men oxy hóa theaza ngoài tác dụng thông thường như giải cảm, giải độc, lợi tiểu, người ta còn phát hiện một giá trị đặc biệt là làm tăng sức đề kháng của trẻ em đối với virus gây bệnh viêm não B Nhật Bản

Edne Cave 1997, đã công bố về tác dụng ức chế khối u, ức chế miễn dịch của hạt và lá na

Theo Brander và cs 1991, đã tìm ra được các hoạt chất của trong hoa cúc trừ trùng có hiệu quả rất tốt trên ngoại ký sinh trùng và côn trùng, ít độc đối với động vật có vú

Trần Quang Hùng (1995), từ hai thập niên cuối của thế kỷ 20 các nhà khoa học vùng Đông Nam Á đã sử dụng hoạt chất của hoa Cúc trừ trùng để chế những chế phẩm có hiệu lực cao đối với ngoại ký sinh trùng và côn trùng hại rau màu (chế phẩm Dilatian chứa khoảng 1% Pyrethrin)

Bùi Thị Tho và cs (2007), đã bước đầu nghiên cứu thử nghiệm tác dụng trị nội, ngoại ký sinh trùng của một số dược liệu Việt Nam Chế thử nghiệm được dạng thuốc mỡ từ cây thuốc cá và hạt củ đậu nồng độ 20% và 30% trị ghẻ chó và

ve, ghẻ của bò có hiệu nghiệm

Bùi Thị Tho và cs (2009) đã sử dụng dược liệu chứa kháng sinh thực vật trong phòng bệnh cho vật nuôi với mục đích tăng sức đề kháng phi đặc hiệu và chống tồn lưu kháng sinh trong chăn nuôi gà thịt

Cũng nghiên cứu về hoạt chất Pyrethrin, Kate A.W Roby và Leny Southm 1998, cho biết Pyrethrin tự nhiên và tổng hợp có tác dụng ức chế hoạt động của hệ thần kinh làm cho ký sinh trùng bị tê liệt rồi chết

Một hợp chất khác cũng được các nhà khoa học chú ý nghiên cứu và sử dụng nhiều là rotenone Rotenone trong tự nhiên được chiết xuất từ rễ cây thuốc

cá (Derris elliptica Benth) và một số cây khác thuộc họ đậu (Leguminosae) được

sử dụng làm thuốc bảo vệ thực vật, diệt cá tạp trong ao Sản phẩm chứa rotenone hoặc kết hợp với các chất khác sử dụng phổ biến với những biệt dược: Chem-

Fish, Cuberol, Noxfire, Rotacide, Rotenone 1% Insecticide, Bonide liquid rotenone, Pyrethrin spray

1.2 Tỏi và các dạng chế phẩm của nó

Loài người biết dùng củ tỏi là gia vị và làm thuốc từ thời kỳ đồ đá Y học dân gian cổ truyền của các dân tộc cũng có nhiều kinh nghiệm dùng tỏi chữa bệnh Các nhà khoa học cũng có hàng ngàn công trình nghiên cứu về tác dụng chữa bệnh và các chế phẩm làm thuốc từ củ tỏi ta (hiện nay vẫn tiếp tục nghiên cứu)

Hình 1.1 Tỏi thí nghiệm (minh họa)

Theo Vũ Xuân Quang (1993) Cây tỏi ta, tên khoa học Allium sativum Linn, họ hành tỏi (Liliaceae) Cùng với tên tỏi có rất nhiều loại tỏi khác nhau như tỏi voi, tỏi Trung Quốc, tỏi Pháp, tỏi gấu, tỏi ngọc v.v Nhưng chỉ có củ tỏi ta là được ưa chuộng dùng làm gia vị và làm thuốc, không chỉ ở Việt Nam mà trên toàn thế giới Vì tỏi ta củ nhỏ, thơm và có nhiều công dụng quý, tiếng Anh gọi tỏi

ta là Garlic để phân biệt với các loại tỏi khác gọi là Leek Trong tỏi tươi có chất alliin, nhờ tác dụng của men allinaza sẽ thủy phân thành allixin là chất kháng sinh bay hơi Năm 1948 còn phân lập được từ tỏi một chất gọi là allistalin, có tính kháng sinh giống như allixin Năm đó cũng phân lập được từ tỏi chất gacxin

màu vàng, không độc, có tác dụng với cả vi khuẩn Gram (-) và Gram (+) như:

Bacillus subtilis, Diplocococus pneumoniae, Escherichia coli, Salmonella typhi, Shigella flexneri, Shigella dysenteriae, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus 20gp, Streptococcus haemolytycus

1.2.1 Phân bố và mô tả cây

Tỏi có nguồn gốc ở Sibêri, hiện nay đang được trồng khắp châu Âu, Á Ở Việt Nam, tỏi được trồng khắp mọi nơi và có nhiều vùng trồng tỏi nổi tiếng Lý Sơn, Phan Rang, Bắc Giang, Hải Dương… Ngoài mục đích làm thuốc, làm gia vị tỏi cũng là mặt hàng xuất khẩu lấy ngoại tệ Tỏi là cây thân nhỏ, mọc từ thân củ lên, cao 20-40cm Thân giả mang nhiều lá dài hẹp Giữa củ mọc nên cuống mang một số hoa ở đỉnh, bọc trong một mô mỏng Hoa tỏi màu trắng hay phớt hồng Nước ta trồng tỏi vào khoảng tháng 10 - 11 dương lịch trên nền đất tơi xốp, nhiều mùn Tỏi củ sẽ được thu hoạch vào tháng 1 năm sau, phơi khô dùng dần

Bộ phận dùng: ánh tỏi (Bulbus allii) Củ tỏi có nhiều tép Từng tép tỏi cũng như cả củ tỏi đều có lớp vỏ mỏng bảo vệ Tuy nhiên tỏi mồ côi (tỏi cô đơn) khác với loại tỏi thường khác, mỗi củ tỏi mồ côi chỉ có một tép tỏi Loại tỏi này chỉ được trồng ở trên đất đảo Lý Sơn - Quảng Ngãi, đây là vùng đất được hình thành do quá trình hoạt động của núi lửa và bồi đắp của cát biển, san hô tạo nên Với đặc trưng về thổ nhưỡng, khí hậu nên tỏi mồ côi Lý Sơn có hương vị riêng Đây không phải là một giống tỏi chuyên biệt mà do tự nhiên hình thành trong quá trình sinh trưởng của cây tỏi trên đảo Lý Sơn Loại tỏi này chỉ có nhiều khi đất đai cằn cỗi, hạn hán, mất mùa, mỗi sào thu hoạch 600 kg thì chỉ có từ 2-3 nhiều nhất là 5 kg tỏi loại này Do khan hiếm, nhưng bù lại tỏi mồ côi lại có hàm lượng tinh dầu cao, được xem là dược liệu quý có lợi cho sức khỏe người sử dụng

1.2.2 Thành phần hoá học:

+ Trong tỏi có một ít iốt, protein và tinh dầu Cứ 100g tỏi sẽ thu được 60 - 200g tinh dầu Trong củ tỏi khô có 50 - 60% nước, 2% chất vô cơ, lượng glucid khá nhiều, có khoảng 10 - 15% đường khử và saccharoza, chủ yếu là polysaccharid loại fructosan Ngoài ra trong tỏi còn một lượng nhỏ các vitamin (A, B1, B2, B3 và C), bình thường củ tỏi chứa 3,7% Allixin

+ Hoạt chất dùng làm thuốc của tỏi là Allixin C6H10OS2 Trong tỏi tươi, không có Allixin ngay mà chỉ có tiền chất là alliin Allixin (do alliin thuỷ phân)

là chất lỏng không màu, d=1,112, nD20=1,561, có mùi tỏi mạnh, độ tan trong nước 2,5% ở 10oC, dễ tan trong benzen và ether

+ Alliin là thành phần quan trọng nhất về mặt tác dụng sinh học trong ánh tỏi Alliin là hợp chất chứa sunfua (S-alky cystein sulfoxid) Alliin là chất kết tinh không màu, tan trong nước, hầu như không có mùi Chỉ khi bị thuỷ phân mới chuyển thành Allixin (alkyl thiosunfinat) có tác dụng diệt vi khuẩn rất mạnh Alliin là một acid amin, dưới tác dụng của men alliinaza (cũng có trong củ tỏi) alliin bị thuỷ phân cho ra Allixin Quá trình thuỷ phân alliin chỉ xảy ra khi gặp men alliinaza trong môi trường nước Điều này giải thích tại sao khi sử dụng tỏi buộc phải nghiền hay giã nát rồi ngâm trong nước cất lạnh Ngoài ra trong tỏi còn

có một số thành phần quan trọng khác sau:

Bảng 1.1 Thành phần của tỏi - H.KOCH, L.LAWSWSON (2000)

Amino acid cysteinessulfoxides 0,6-1,9

1.2.3 Tác dụng dược lý

Theo Vũ Xuân Quang (1993), trong tỏi tươi có chất alliin, nhờ tác dụng của men allinaza biến thành allixin là kháng sinh chủ yếu gây nên tác dụng đối với vi khuẩn Năm 1948 đã phân lập được từ tỏi một chất khác được đặt tên là allistalin, chất này có tính chất giống như allixin Ngoài ra còn phân lập được từ tỏi gacxin là chất kháng khuẩn màu vàng, không độc, có tác dụng đến cả vi khuẩn gram (-) và gram (+) Nước ép của tỏi tươi có tác dụng với nhiều loại vi khuẩn gram (-) và gram (+) như sau:

Allixin có hoạt phổ kháng sinh rộng và mạnh, có tác dụng với nhiều loại

vi khuẩn lẫn virus và cả nguyên sinh động vật

- Với vi khuẩn: có tác dụng diệt khuẩn rất mạnh với Staphylococcus,

gây thối…

Hầu hết các loại vi khuẩn gây bệnh cho người và gia súc ở giai đoạn dinh dưỡng đều bị tỏi tiêu diệt Tác dụng diệt khuẩn của Allixin rất mạnh Trong ống nghiệm Allixin pha loãng ở nồng độ 1/85000, 1/125000 đã đủ sức ức chế sự phát

triển của cầu trùng, Staphylococus, Salmonella,…Cùng trong điều kiện như vậy

chloramphenicol pha loãng ở nồng độ 1/50000 đã không có tác dụng với

cho động vật và người

- Với nguyên sinh động vật: Nước tỏi 5% ức chế rất nhanh sự hoạt động của Amip Amip co lại thành một khối tròn, mất khả năng vận động và bám vào thành ruột Dưới tác dụng của nước tỏi 5% những con Amip còn sống sót cũng mất hết khả năng sinh sản Những năm gần đây Trung Quốc dùng tỏi chữa lỵ amip kết quả đạt tới 80%

Trong ống nghiệm, nước tỏi 3% đủ diệt các trực trùng lỵ và trực trùng gây bệnh đường ruột Trong lâm sàng, dùng tỏi chữa lỵ trực trùng kết quả đạt tới 85% không kém dùng sunfaguanidin

- Với gia cầm, gia súc: Tỏi được coi như một vị thuốc bổ, nó có tác dụng kích thích sự tiêu hóa do làm tăng khả năng tiết dịch vị, dịch mật, dịch ruột Tỏi

làm tăng hấp thu vitamin B1 theo cơ chế:

Allixin + Thiamin Allithiazin được hấp thu nhanh chóng qua thành ruột Với gia súc, gia cầm, ăn tỏi thường xuyên còn có tác dụng kích thích tăng trọng và đề phòng được một số bệnh: tụ huyết trùng, thương hàn, bạch lỵ…

1.2.4 Cơ chế kháng sinh

Allixin là một kháng sinh thảo mộc rất mạnh là do: nguyên tử oxy hoạt động có trong phân tử Allixin Allixin cạnh tranh với axit amin cystein - yếu tố sinh trưởng và phát triển của hầu hết các vi khuẩn gây bệnh ở người và gia súc

Vi khuẩn bị mất yếu tố sinh trưởng nên không phát triển được

* Đặc điểm của kháng sinh Allixin

+ Dễ bị nhiệt và ánh sáng phân hủy, làm mất nguyên tố oxy hoạt động, vì thế nên mất tác dụng kháng sinh Nhiệt độ cao, khả năng diệt khuẩn của tỏi càng giảm Trong khi chế biến, không cho tỏi tiếp xúc với nhiệt độ cao

+ Allixin tinh khiết là một chất không màu hòa tan trong cồn, benzen, ether, trong nước không ổn định, dễ bị kiềm phá hủy, trong môi trường axit nhẹ ít

bị ảnh hưởng Khi pha chế thuốc để tiêm hay dung dịch nhỏ mũi tốt nhất nên pha trong môi trường axit nhẹ

+ Allixin dễ kích ứng da và niêm mạc Ta có thể dùng tỏi hay cồn tỏi xoa bóp ngoài da, điều trị các ổ viêm thời kỳ: sưng - nóng - đỏ - đau

+ Allixin không bị PABA cạnh tranh, dùng tỏi điều trị các vết thương có mủ

1.2.5 Ứng dụng trong phòng, trị bệnh cho vật nuôi

Tỏi có vị cay, mùi hắc, tính nồng nên có tác dụng thông khiếu, tiêu mụn nhọt, trừ đờm, lợi tiểu, sát trùng Lâm sàng dùng tỏi trị ho có đờm, cảm cúm, ung nhọt, viêm phế quản mãn, ho gà, cúm và lỵ trực trùng Nước ép tỏi pha loãng 1/160 còn có tác dụng với amip thực nghiệm (Enta - moeba inosh kovkii) Tỏi còn dùng chữa tăng huyết áp, rắn rết cắn

+ Chữa các chứng viêm đường tiêu hóa: Dạ dày và ruột do vi khuẩn và Amip gây ra cả thể cấp và mãn tính, đều có kết quả tốt

+ Chứng liệt dạ cỏ, chướng bụng đầy hơi, táo bón, của mọi động vật nuôi + Chữa các bệnh về hô hấp: Viêm họng, viêm phế quản, viêm phổi do

Allixin được bài tiết qua đường hô hấp

+ Chữa các ổ viêm, áp xe, chín mé, vết thương nhiễm trùng đều cho kết quả tốt Nếu so sánh với việc chữa bằng penicillin, tỏi chữa vết thương nhanh lành hơn

a, Một số nghiên cứu trên thế giới

Theo New Scientist 2001, các nhà nghiên cứu Thụy Sĩ đã thử nghiệm dược tính của tỏi cho nhóm 128 con lợn con sau khi chúng được cai sữa Sau 5 tuần thí nghiệm, kết quả cho thấy bột tỏi có một tác dụng tích cực lên sự tăng trưởng, giảm tỷ lệ chết và tiêu chảy

Nghiên cứu của A.B Omojola, S.S Fagbuaro and A.A Ayeni 2009, chứng minh bột tỏi bổ sung vào thức ăn có khả năng làm giảm cholesterol, cải thiện tỷ lệ nước trên thịt heo khi thí nghiệm trên 48 con heo 6 tuần tuổi Kết quả này cũng phù hợp với nghiên cứu của Raghuveer Choudhary 2008, khi nghiên cứu lợi ích của tỏi đối với bệnh máu nhiễm mỡ và xơ vữa động mạch Ông thấy rằng tỏi có tác dụng làm giảm cholesterol, tryglicerate, LDL-c trong máu heo thí nghiệm (p<0,01)

S.P Cullen, F.J Monahan, J.J Callan và J.V O’Doherty 2005; Y.J Chen, I.H Kim, J.H Cho, J.S Yoo, Q Wang, Y Wang, Y Huang 2008, cho biết việc

bổ sung bột tỏi (1g bột tỏi/kg thức ăn) vào khẩu phần heo giai đoạn vỗ béo đã nâng cao hệ số tiêu hóa và hiệu quả sử dụng thức ăn (p<0,05), đồng thời chất lượng thịt heo được cải thiện

Một số nhà nghiên cứu thuộc đại học Novi Sad (Serbia) đã nghiên cứu ảnh hưởng của tỏi trong thức ăn của gà trong 6 tuần và khẳng định tỏi có tác dụng thúc đẩy tăng trọng của gà

b, Một số nghiên cứu trong nước

Theo Nguyễn Thị Kim Loan và cs (2007) Bổ sung 0,2 và 0,1% bột tỏi cho heo từ 30 - 90 ngày tuổi đã làm giảm tỷ lệ lợn con bị bệnh từ 7,17 đến

10,05% trong khi lô đối chứng tỷ lệ này là 18,87%

Nguyễn Thị Kim Loan và cs (2010) đã thí nghiệm trên heo từ ngày tuổi 30 đến 90, kết quả cho thấy các chỉ số về sức đề kháng trên heo khi cho ăn thức ăn

bổ sung bột tỏi (chiếm 0,1-0,2% khẩu phần ăn) cao hơn lô đối chứng Cũng theo Nguyễn Thị Kim Loan và cs (2012), heo sử dụng thức ăn bổ sung 3 kg tỏi/tấn thức ăn hoặc kết hợp với bột nghệ sẽ cải thiện tốc độ tăng trưởng cũng như hệ số chuyển hóa thức ăn, tăng số lượng vi khuẩn sinh acid lactic, ít tổn thương phổi, giảm số lượng tế bào dịch rữa trong phế quản - phế nang, số lượng vi khuẩn gây

bệnh cơ hội (Colform và Enterococus) cũng giảm đồng thời, đồng thời giảm chi

phí trên 1kg tăng trọng

Theo Nguyễn Sỹ Khương (2010) Dùng chế phẩm từ tỏi phòng và trị bệnh lợn con phân trắng cho ta thấy, dấm tỏi phòng bệnh tỷ lệ lợn con không mắc bệnh là 86,67%, rượu tỏi là 68,89% Trong điều trị bệnh, chế phẩm tỏi ngâm dấm kết quả chữa bệnh đạt 81,10% và thời gian điều trị trung bình là 3,33 ± 0,13 ngày Tỏi ngâm rượu tỷ lệ khỏi bệnh là 72,55%, thời gian khỏi bệnh trung bình là 3,9 ± 0,25 ngày

Nông dân một số địa phương tại Bình Dương (2004) dùng nước tỏi phòng

và chữa bệnh cúm cho gà rất hữu hiệu Năm 2010 Trạm Khuyến nông Khuyến ngư Mỏ Cày Nam (Bến Tre) đã thực hiện thí nghiệm trên 1000 con gà Sau 4 tháng thí nghiệm đã chứng minh tỏi giúp hạn chế bệnh đường hô hấp mãn tính trên đàn gà, giảm được chi phí thuốc, tỷ lệ chết, nâng cao hiệu quả chăn nuôi Huỳnh Thái Sơn (2008), Nguyễn Dương Trọng (2006), Huỳnh Thị Thu Nga (2005), Trần Thị Đoan Oanh (2004) sử dụng hỗn hợp tỏi – gừng – nghệ có tác dụng tốt trên sức sinh trưởng, sức sống và năng suất trên gà thịt cũng như gà đẻ (trích dẫn bởi Lâm Minh Thuận và cs, 2012)

Lâm Minh Thuận (2006) trộn bột gừng, tỏi và nghệ vào thức ăn không những giúp gà nuôi tăng sức đề kháng, tăng trọng lượng mà còn làm tăng tỷ lệ đẻ trứng Tỏi, nghệ bổ sung vào khẩu phần heo thịt giúp giảm tỷ lệ tiêu chảy và ho, giảm tổn thương nhu mô phổi, giúp tăng trọng tốt (Nguyễn Thị Kim Loan, 2010) Cây xuân hoa từ năm 2003 đã được Huỳnh Kim Diệu (Đại học Cần Thơ)

áp dụng trong việc phòng trị tiêu chảy lợn con theo mẹ và sau cai sữa rất hiệu quả, tương đương với các kháng sinh (như norfloxacine phối hợp với gentamicine, colistin và trimethoprim; trimethoprim phối hợp sulfamethoxazole;

apramycin phối hợp colistin và trimethoprim) Để phòng tiêu chảy ở lợn con, có thể trộn bột lá xuân hoa vào thức ăn lợn mẹ như dạng thức ăn bổ sung, hiệu quả tương đương với chủng ngừa vắc-xin phòng tiêu chảy Như kháng sinh, chất kháng khuẩn trong xuân hoa cũng giúp kích thích tăng trọng nếu được trộn vào thức ăn cho lợn

Năm 1993, phòng Bệnh thủy sản - Viện nuôi trồng thủy sản I kết hợp với phòng Dược liệu - Viện sinh thái tài nguyên sinh vật đã dùng bột tỏi khô phối chế với một số cây thuốc thành thuốc chữa bệnh cho đốm đỏ, xuất huyết, nấm mang cho tôm Kết quả thuốc đã phòng, trị được bệnh trên 90% (http://www.agroviet.gov.vn Thành Công)

Theo Nguyễn Ngọc Yến và cs (2003) Selenium (Se) là một nguyên tố vi lượng quan trọng cho các hoạt động sống của cơ thể con người Đó là vì Se có khả năng ngăn chặn quá trình oxy hoá - quá trình huỷ diệt tế bào diễn trong cơ thể sống Khả năng này gấp 10 lần Vitamin E, cũng như cao hơn các chất chống oxy hoá khác Một số loài tỏi Việt Nam có hàm lượng Se khoảng từ 0,003 (µg/g) đến 0,06 (µg/g) và tồn tại chủ yếu dưới dạng hợp chất hữu cơ

Từ những năm cuối thập niên 70, các nhà khoa học đã khám phá ra Se còn làm tăng sức đề kháng giúp chống lại những cơn đau tim, truỵ tim mạch, tăng huyết áp và ung thư

Nhu cầu dinh dưỡng Se cho cơ thể người mỗi ngày theo Current UK Reference Nutrient Intake như sau: trẻ em từ 10-45 µg/ngày (phụ thuộc cân nặng

và chiều cao), phụ nữ 60µg/ngày, nam giới 75µg/ngày

Một trong những nguồn cung cấp Se từ thiên nhiên vừa hiệu quả vừa kinh

tế đó là tỏi, đây cũng là một trong những thực vật chứa hàm lượng Se khá cao Qua khảo sát một số loại tỏi Việt Nam, ta thấy hàm lượng Se có trong ánh tỏi từ 0,003 – 0,06 µg/g Se tồn tại trong tỏi chủ yếu dưới dạng hợp các hợp chất hữu

cơ Nếu được xử lý với đất hiếm trong thời gian canh tác hàm lượng Se có khả năng tăng gấp 2 lần Hàm lượng Se có trong tỏi còn phụ thuộc vào thành phần khoáng có trong đất trồng, nguồn nước v.v

Trong quá trình canh tác, việc tác động tích cực của các yếu tố kỹ thuật đã

làm thay đổi hàm lượng Se trong củ tỏi, điều này mở ra hướng ứng dụng những thực phẩm giàu Se vào ngành thực phẩm chức năng Vai trò của Se trong sinh học đang được các nhà khoa học nghiên cứu ở nhiều nước, đặc biệt các hợp chất hữu cơ có chứa Se của tỏi

Theo agroveth.com Sử dụng tỏi hạn chế bệnh đường hô hấp mãn tính (CRD) trên đàn gà, giảm tỷ lệ thuốc, tỷ lệ chết, nâng cao hiệu quả chăn nuôi Giảm tỷ lệ chết từ 14% còn 2%, giảm chi phí thuốc 445đ/con Thời gian xuất chuồng sớm hơn 15 ngày, trọng lượng cao hơn 90g/con

1.2.6 Các dạng chế phẩm của tỏi dùng làm gia vị và thuốc

Tỏi có thể dùng ở dạng tỏi tươi, nếu phơi khô tép tỏi chỉ bảo quản không quá 6-8 tháng Trong dân gian, để tiện dùng và bảo quản được lâu người ta thường bảo quản tép tỏi hay dạng tinh dầu trong dấm, trong rượu hay trong dầu thực vật (tùy dạng có thể đạt được từ 3-5 năm) và có thể chế sang dạng bột tỏi khô (bảo quản được 1 năm)

1.2.6.1 Tỏi ngâm dấm:

Tỏi ngâm dấm là một dạng tỏi dùng làm gia vị quen thuộc ở nhiều nơi trên thế giới Tỏi ngâm dấm là phương pháp chế biến và bảo quản xưa nhất Tỏi được giã nát hoặc để nguyên tép ngâm trong dấm, trong môi trường axit, tác dụng của tỏi tăng lên Tuy nhiên, hàm lượng alliin giảm dần trong quá trình ngâm

1.2.6.2 Tỏi ngâm rượu:

Theo Heinrich P.Koch, Larry D Lawson, 2000 Chỉ gần đây những biến đổi hóa học mới được nghiên cứu trong các chất chiết tỏi để lâu trong những thời gian dài (Lawson và Wang, 1995) Nghiên cứu này xác định hàm lượng các hợp chất sulfur và các axit amin tự do có trong các chất chiết ethanol 20% và nước của các tép tỏi thái nhỏ hoặc thái lát ngang được ủ đến 24 tháng Các kết quả với tỏi thái nhỏ trong ethanol 20% được trình bày ở bảng sau:

Bảng 1.2 Những thay đổi về thành phần trong thời gian lưu trữ chất

chiết tỏi (mg/g chất chiết khô) Hợp chất Tuổi của chất chiết tỏi (ngày)

Tổng các hợp chất sulfur 48,3 45,6 34,1 26,0 23,1 21,0

1.2.6.3 Tỏi ngâm dầu:

Theo Heninrich P Koch, Larry D Lawson, 2000 Độ ổn định của các hợp chất có trong dầu ngâm đã được xét nghiệm Độ ổn định chung của một sản phẩm được ghi nhận tối thiểu 3 năm (Voigt and Wolf, 1986) Kết quả nghiên cứu gần đây được trình bày ở bảng sau: Tỏi ngâm trong dầu: phần trăm chuyển hóa của allicin

Bảng 1.3 Thành phần allicin trong tỏi theo thời gian

mù, do đó làm biến đổi một số thành phần trong tỏi

Tính ổn định, lâu dài của các hợp chất sulfur trong các sản phẩm bột tỏi đã được phát hiện là rất cao Bột tỏi bảo quản tốt được ghi nhận là chỉ mất đi 10%

lượng allicin trong 3 năm bảo quản ở nhiệt độ phòng Tuy nhiên bột tỏi được chế thành gia vị bán trên thị trường thường có lượng allicin nhỏ hơn (3-5mg/g bột) so với được chế làm viên thuốc bột tỏi (6-14mg/g bột)

1.3 Hiểu biết về vi khuẩn E coli

1.3.1 Giới thiệu chung về vi khuẩn Escherichia coli

loài vi khuẩn chính ký sinh trong đường ruột của động vật máu nóng (bao gồm chim và động vật có vú) chiếm khoảng 80% Vi khuẩn này cần thiết trong

quá trình tiêu hóa thức ăn và là thành phần của khuẩn lạc ruột E coli tổng hợp một số vitamin B, E, K và tạo quần thể vi khuẩn cân bằng ở ruột E coli nhiễm vào đất, nước… từ phân của động vật Sự có mặt của E coli trong nước ngầm là một chỉ thị thường gặp cho ô nhiễm phân E coli cũng là nguyên nhân gây nên

một số bệnh Chúng gây bệnh khi gặp điều kiện thuận lợi để phát triển

sinh vật mô hình cho các nghiên cứu về vi khuẩn và được đặc trưng bởi tính chất: + Có enzym β-galactosidase và β-glucoronidase

+ Phát triển ở nhiệt độ 44-45oC trên môi trường tổng hợp

+ Lên men đường lactose, mannitol, sinh hơi, sinh axit và sinh Indol từ Tryptophan

+ Tuy nhiên một số chủng có thể phát triển ở 37oC chứ không phát triển ở 44-45oC và một số thì không sinh hơi

+ E coli không sinh oxidase hoặc thủy phân ure

*Phân loại khoa học

Vi khuẩn E coli thuộc vực (domain): Bacteria; ngành (phylum):

họ (familia): Enterobacteriaceae; chi (genus): Escherichia; Loài (species): E coli

Hình 1.2 Vi khuẩn E coli dưới kính

hiển vi điện tử

Hình 1.3 Cấu tạo vi khuẩn E coli

1.3.2 Đặc điểm về hình thái, nuôi cấy, đặc tính sinh hóa

- Hình thái học: là một vi khuẩn hình gậy ngắn, kích thước 0,6x2-3µm,

trong cơ thể có hình cầu trực khuẩn, đứng riêng lẻ hoặc xếp chuỗi ngắn, phần lớn

di động do có lông xung quanh thân Vi khuẩn không có nha bào, có thể hình thành giáp mô, bắt màu gram (-)

- Nuôi cấy: Vi khuẩn dễ nuôi cấy trên các môi trường thông thường, đơn

giản nên chúng được chọn làm mẫu để nghiên cứu về sinh vật học Vi khuẩn hiếu khí tùy tiện, nhiệt độ thích hợp 37oC, pH=7,2-7,4

+ Trên môi trường nước thịt: phát triển tốt, môi trường rất đục, có cặn lắng ở đáy ống môi trường có mùi thối của phân

+ Trên môi trường thạch thường: sau 24h nuôi cấy, khuẩn lạc dạng S, tròn ướt trong suốt, màu tro trắng, hơi lồi, r =2-3mm

+ Thạch máu: phát triển tốt, một số chủng gây bệnh gây dung huyết + Môi trường MacConkey: khuẩn lạc có màu hồng cánh sen

+ Không mọc trên Muller Koffman, lục Malasit

+ Endo, SS: khuẩn lạc có màu đỏ

+ EMB: Khuẩn lạc màu tím đen

+ Kligler: môi trường có màu vàng

+ Simmon citrat: khuẩn lạc không màu trên nền xanh lục

- Các phản ứng sinh hóa: Indole dương tính, Methyl Red (phản ứng MR) dương tính, Voges-Proskauer (phản ứng VP) âm tính và Citrate (Simmons) âm tính,

H2S âm tính, hoàn nguyên nitrat thành nitrit, Lysine decarboxylase dương tính

1.3.3 Đặc điểm kháng nguyên và độc tố

Gồm 4 loại kháng nguyên: kháng nguyên thân O (somatic), kháng nguyên giáp mô K (capsular), kháng nguyên lông H (flagella), kháng nguyên bám dính F (fimbriae) và nội độc tố gây tiêu chảy, ngoại độc tố gây tan huyết và phù thũng

- Độc tố của E coli: Loại E coli có giáp mô (kháng nguyên K) gây ngộ

độc mạnh hơn loại không giáp mô Kháng nguyên K có 13 loại KA, KB, KL Ví

dụ công thức kháng nguyên của một E coli là: O55K5H21F5 Nội độc tố đường ruột: Gồm 2 loại chịu nhiệt và không chịu nhiệt Cả hai loại này đều gây tiêu chảy Loại chịu nhiệt ST (Thermostable): gồm các loại STa, STb Loại không chịu nhiệt LT (Thermolabiles): gồm các loại LT1, LT2

Những dòng E coli sản sinh độc tố (ETEC) gồm nhiều type huyết thanh

khác nhau nhưng thường gặp nhất là các type O6H16, O8H9, O78H12, O157.

1.3.4 Cơ chế gây ngộ độc của E coli

Cơ chế gây ngộ độc: khi cơ thể bị nhiễm vi khuẩn với số lượng nhiều kèm

theo độc tố của chúng

- Nhóm EPEC (Enteropathogenic E coli): gồm các type thường gặp

O26:B6, O44, O55:B5, O112:B11, O124, O125:B5, O142 là nguyên nhân gây tiêu chảy ở trẻ em dưới 2 tuổi

- Nhóm ETEC (Enterotoxigenic E coli): gây tiêu chảy cho bò, lợn, cừu và

cho trẻ em, người lớn do tiết ra 2 độc tố ruột ST và LT

+ LT hoạt hóa men adenyl cyclase trong tế bào ruột làm gia tăng yếu tố C.AMP (cyclicadenozin 5’ monophosphat) Yếu tố này sẽ kích thích ion Cl- và bicarbonat tách ra khỏi tế bào đồng thời ức chế Na+ bên trong tế bào Hậu quả là gây tiêu chảy mất nước

+ Độc tố ST: hoạt hóa men Guanyl Cyclase làm tăng yếu tố C.GMC (cyclic guanosin 5’ monophosphat) bên trong tế bào dẫn đến kích thích bài tiết

muối và nước gây ra tiêu chảy

Những dòng E coli có cả 2 loại nội độc tố LT và ST sẽ gây ra tiêu chảy

trầm trọng và kéo dài

- Nhóm EIEC (Enteroinvasine E coli): những E coli này bám lên niêm

mạc và làm tróc niêm mạc gây loét niêm mạc do đó gây tiêu chảy có đám lẫn máu (giống Shigella) Các chủng này có thể lên men hay không lên men đường lactose và có phản ứng lysin decarboxylaza âm tính Thường gặp các type O125, O144…

- Nhóm VETEC (Verocytoxin produccing E coli): Vừa gây tiêu chảy

vừa là nguyên nhân gây viêm đại tràng xuất huyết (hermorrhagic colilic) và làm tổn thương mao mạch gây hiện tượng sưng phù (ederma) rất nguy hiểm đến tính mạng (do biến chứng) Nhóm VETEC bao gồm các type: O26, O11, O113, O145,

O157; đây là ngoại độc tố vetec gây tiêu chảy Các biến chứng trên do vi khuẩn tiết ra một trong 2 loại ngoại độc tố VT1 (verocytoxin) và VT2 gây tác động thần kinh

- Nhóm APEC (Avian Pathogenic Escherichia coli): gây bệnh cho gia

cầm, gồm nhiều thể bệnh như nhiễm trùng huyết, viêm các mô liên kết, hội chứng phù đầu, viêm phúc mạc, viêm vòi trứng, viêm tủy xương, viêm màng hoạt dịch, viêm mắt, nhiễm trùng túi lòng đỏ Các type gây bệnh quan trọng cho gia cầm là 01, 02, 035 và 078 (Dho – Moulin và cs, 1999)

Gần đây người ta phát hiện chủng E coli mới ký hiệu là E coli O157:H7 Chủng này đã gây ra những vụ ngộ độc lớn trên thế giới trong những năm gần đây với các hội chứng tiêu chảy, viêm ruột xuất huyết, hội chứng urê huyết (theo CDC, Center for Disease Control and prevention của Mỹ): Năm 1982, lần đầu

tiên người ta ghi nhận được nguồn bệnh do E coli O157:H7 Năm 1985, người ta nhận thấy triệu chứng hoại huyết có liên quan đến chủng O157:H7 Năm 1990,

bùng nổ trận dịch từ nguồn nước nhiễm chủng E coli O157:H7 Năm 1996, xảy ra trận dịch khá phức tạp ở Nhật Bản do uống nước táo chưa diệt khuẩn

Thịt bò và các sản phẩm chế biến từ bò là loại thực phẩm có nguy cơ cao

nhiễm vi khuẩn E coli O157:H7, thịt bò ở vùng Nam Mỹ nhiễm vi khuẩn E coli

O157 :H7 Ở châu Á, các chủng E coli O157:H7 đã được phát hiện ở Nhật Bản, Trung Quốc, Ấn Độ, Malaysia Ở Việt Nam, vi khuẩn này được phát hiện thấy trong phân bò với tỷ lệ 2%

Khác với hầu hết các chủng E coli khác E coli O157:H7 không lên men đường D-sorbitol, do đó môi trường thạch sorbitol Mackonkey được sử dụng làm môi trường đặc biệt để phân biệt vi khuẩn này Trên môi trường SMAC, vi

khuẩn E coli O157:H7 có màu nâu nhạt trong khi các chủng vi khuẩn E coli

khác có màu hồng cánh sen Trong phòng thí nghiệm: Có thể gây bệnh cho thỏ

và chuột lang

1.3.5 Những hiểu biết về khả năng kháng kháng sinh của vi khuẩn E coli

Yếu tố quy định khả năng kháng kháng sinh của E coli nằm trong

plasmid Các plasmid trong nguyên sinh chất tế bào vi khuẩn lại có khả năng tồn tại, nhân lên và chuyển giao giữa các chủng vi khuẩn với nhau theo cả chiều dọc

và chiều ngang (Bùi Thị Tho, 1996)

Kết quả đề tài điều tra khảo sát thực trạng nhờn thuốc của một số loại vi khuẩn gây bệnh tiêu chảy và hội chứng hô hấp trên lợn thịt ở miền Đông nam bộ (2005) cho thấy: Hầu hết các vi khuẩn gây bệnh đường tiêu hóa và hô hấp đề kháng với các loại kháng sinh thông thường sử dụng trong chăn nuôi lợn ở khu

vực Đồng Nai, Bình Dương và TP Hồ Chí Minh Đã có 77,8% vi khuẩn E coli, 66,7% vi khuẩn Salmonella, 50% vi khuẩn Streptoccocus kháng lại chlotetracyclin Đã có 11,1% vi khuẩn Staphyloccocus và 100% vi khuẩn

100% vi khuẩn Streptoccocus kháng lại streptomycin

Theo Tô Liên Thu (2004) Các chủng vi khuẩn E coli phân lập được từ thịt gà

kháng lại các loại kháng sinh thông thường như streptomycin, ampicillin, tetracyclin, chloramphenicol với tỷ lệ cao Các chủng phân lập được từ thịt lợn có tỷ lệ đề kháng với các loại kháng sinh thấp hơn so với vi khuẩn phân lập được từ thịt gà Nhiều

chủng E coli có đặc tính đa kháng, có những chủng kháng lại 8 loại kháng sinh

Kết quả kiểm tra sự mẫn cảm với kháng sinh của vi khuẩn E coli gây bệnh ở thủy cầm (2008) tại trung tâm nghiên cứu vịt Đại Xuyên Vi khuẩn E coli

hoàn toàn không mẫn cảm với enzofloxacin, tetraxyclin, sunfamethazole

trimethoprim, colistin, clindamycin, gentamycin; Vi khuẩn Salmonella không mẫn

cảm với sunfamethoxazole, trimethoprim, clindamycin, mẫn cảm yếu với các kháng sinh còn lại

Theo Võ Thành Thìn (2011) vi khuẩn E coli phân lập được từ lợn con

mắc bệnh tiêu chảy có khả năng đề kháng cao với nhiều loại kháng sinh thông dụng như oxacillin, tetraxyclin, colistin, trimethoprim, sulphamethoxazole, streptomycin, nalidixic acid

Trương Hà Thái (2009) trong các loại kháng sinh kiểm tra thì 84% các

chủng E coli mẫn cảm với enzofloxacin, 82% mẫn cảm với colistin, 70% mẫn cảm với norfloxacin Các loại kháng sinh còn lại bị các chủng E coli kiểm tra

kháng với tỷ lệ cao

Nguyễn Thị Liên Hương (2009) kết quả xác định khả năng mẫn cảm của kháng sinh cho thấy: chỉ duy nhất cefriaxon còn có khả năng mẫn cảm mạnh (100%) với các chủng kiểm tra Các kháng sinh có tỷ lệ kháng cao (>80%) là tetraxyclin, sunfamethoxazol/trimethoprim, apramycin, ceftiofour và streptomycin Hai loại kháng sinh là spectinomycin và gentamycin vẫn có thể dùng như một sự

lựa chọn để điều trị các bệnh nhiễm khuẩn do E coli gây ra ở thủy cầm như vịt,

ngan… (Đối với vịt, ngan thương phẩm lịch phòng bệnh và vaccin được áp dụng tới 60 ngày tuổi)

1.4 Một số hiểu biết về bệnh E coli trên vịt

1.4.1 Nguyên nhân

Bệnh E coli ở vịt do vi khuẩn E coli xâm nhập qua vết thương ở đường

hô hấp, tiêu hoá và có thể đi thẳng vào máu gây bại huyết làm vịt chết đột ngột

mà chưa biểu hiện bệnh tích gì

Nguyễn Như Thanh (1997), E coli là loài vi khuẩn luôn hiện diện trong đất, nước, không khí, … Ở môi trường bên ngoài các chủng E coli độc có thể tồn tại đến 4 tháng Trong khi đó, bệnh nhiễm trùng E coli là bệnh nhiễm khuẩn phổ

biến nhất ở các loài gia cầm (Nguyễn Đức Hiền, 2009)

1.4.2 Triệu chứng

Vịt từ 1-8 tuần tuổi chết đột ngột với trạng thái thần kinh quay đầu tỷ lệ

chết từ 5-15%, phân một số đàn thể hiện cấp tính có hiện tượng tiêu chảy phân trắng, vịt đẻ một số con bị bại liệt do viêm khớp, trứng đẻ ra có vết máu và phôi thường bị chết (vịt sát)

1.4.3 Bệnh tích

Màng bao tim viêm trắng, đôi khi viêm dính vào cơ tim Trên cơ tim có điểm xuất huyết lấm tấm Gan sưng đen, có trường hợp thấy xuất huyết chấm đỏ Lách sưng có đốm trắng hoặc đỏ Màng bụng viêm, có sợi fibrin dính vào xoang bụng và ruột Màng túi khí viêm trắng và có chất nhầy vàng Ống dẫn trứng viêm

có dịch nhầy trắng

1.4.4 Chẩn đoán: Căn cứ vào triệu chứng lâm sàng và bệnh tích

Phân biệt với một số bệnh có triệu chứng lâm sàng giống E coli như

viêm gan do virus, dịch tả, cầu trùng và nhiễm độc tố thức ăn do Aflatoxin

Lấy bệnh phẩm tim, gan, phân lập vi khuẩn gây bệnh

1.4.5 Phòng bệnh và điều trị bệnh

- Phòng bệnh bằng vệ sinh, dinh dưỡng: định kỳ tẩy uế, sát trùng chuồng nuôi, xung quanh khu vực ao nơi chăn thả Thức ăn đầy đủ dinh dưỡng, không ôi thiu, nấm mốc…

- Phòng bệnh bằng vacxin: Dùng vacxin avicolivac hay neotyphomix (Pháp) Chủng lần 1: lúc 2 tuần tuổi

Chủng lần 2: sau lần 1 từ 3-5 tuần tuổi

Chủng lần 3: cho vịt trước lúc vào đẻ 2 tuần

- Phòng bằng kháng sinh: neotesol, spectam W.S, cosumix, anticoli B, …

- Điều trị bằng kháng sinh: dùng các kháng sinh trên với liều gấp 2 liều phòng

1.4.6 Tình hình nhiễm E coli trên vịt

Theo Nguyễn Thị Liên Hương (2009), tại Trung tâm nghiên cứu gia cầm Thụy

Phương Tỷ lệ ngan mắc bệnh Colibacillosis là 7,78-8,97% trong 3 năm và tỷ lệ chết

là 2,04-2,52% Kết quả phân lập vi khuẩn từ phủ tạng ngan nghi mắc Colibacillosis cho thấy, tỷ lệ E coli từ gan là cao nhất (100%), tiếp tới là lách (97,54%), phổi và túi

khí lần lượt là 83,61% và 82,79%, thấp nhất là máu tim 30,33%

Nghiên cứu của tác giả Nguyễn Trọng Phước (1997) về tình hình nhiễm

khuẩn E coli trên đàn vịt tại tỉnh Long An và các trại tại quận Gò Vấp, quận Thủ Đức – thành phố Hồ Chí Minh, tỷ lệ dương tính với vi khuẩn E coli là 74,50%;

tác giả Nguyễn Xuân Bình và cộng sự (2000) về tình hình vịt nhiễm bệnh do vi

khuẩn E coli xảy ra tại Long An tỷ lệ dương tính là 64,9% và tỷ lệ chết có đàn

lên đến 40-50%, gây thiệt hại rất lớn cho người chăn nuôi