Nghiên cứu khả năng kháng khuẩn escherichia coli của curcuminoid thu nhận từ củ nghệ vàng curcuma longa l

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM  ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN ESCHERICHIA COLI CỦA CURCUMINOID THU NHẬN TỪ CỦ NGHỆ VÀNG CURCUMA LONGA L Giảng viên hƣớng dẫn: TS Phan Vĩnh Thịnh Sinh viên thực hiện: Huỳnh Thị Thu Thủy Mã số sinh viên: 58132301 Nha Trang, tháng 08 năm 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM  ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN ESCHERICHIA COLI CỦA CURCUMINOID THU NHẬN TỪ CỦ NGHỆ VÀNG CURCUMA LONGA L GVHD: TS Phan Vĩnh Thịnh SVTH: Huỳnh Thị Thu Thủy MSSV: 58132301 Nha Trang, tháng 08 năm 2020 LỜI CẢM ƠN Sau trình nghiên cứu thực đồ án tốt nghiệp phịng thí nghiệm, đến em hồn thành xong đồ án tốt nghiệp, với nổ lực cố gắng thân với giúp đỡ quý báu từ phía Thầy Cơ, gia đình bạn bè Để hoàn thành tốt đồ án tốt nghiệp này, trước tiên em xin bày tỏ lòng biết ơn đến Thầy Cô Trường Đại học Nha Trang, Thầy Cơ Khoa Cơng nghệ Thực phẩm nói chung Bộ mơn Kỹ thuật Hóa học nói riêng tận tình truyền đạt cho em kiến thức bổ ích suốt thời gian em học tập Trường Em xin chân thành cảm ơn Thầy Cô quản lí phịng thí nghiệm tạo điều kiện thuận lợi cho em dụng cụ, thiết bị để thực đồ án tốt nghiệp Đặc biệt, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS PHAN VĨNH THỊNH tận tình hướng dẫn, TS TRẦN THỊ HỒNG QUN bạn LÊ VĂN HIỆP lớp 58 BHTS góp ý hỗ trợ em suốt thời gian thực đồ án tốt nghiệp Tuy có nổ lực, cố gắng với kiến thức hạn chế, đồ án khơng tránh khỏi sai sót Rất mong nhận lời góp ý q Thầy Cơ để đồ án tốt nghiệp em hoàn thiện chất lượng tốt Em xin chân thành cảm ơn Khánh Hòa, ngày 17 tháng 08 năm 2020 Sinh viên thực Huỳnh Thị Thu Thủy i MỤC LỤC DANH MỤC VIẾT TẮT v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC BẢNG viii MỞ ĐẦU CHƢƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan vi khuẩn Escherichia coli 1.1.1 Escherichia coli 1.1.2 Đặc điểm sinh trưởng Escherichia coli 1.1.3 Tác nhân gây bệnh vi khuẩn Escherichia coli 1.2 Tổng quan curcuminoid thu nhận từ củ nghệ vàng Curcuma longa L 1.2.1 Nghệ thành phần hóa học củ nghệ 1.2.1.1 Giới thiệu nghệ 1.2.1.2 Thành phần hóa học củ nghệ 1.2.2 Các curcuminoid thu nhận từ củ nghệ vàng Curcuma longa L 1.3 Tổng quan phương pháp chiết Soxhlet thu nhận dịch chiết từ thực vật 1.4 Tổng quan khả kháng khuẩn curcuminoid thu nhận từ củ nghệ vàng 1.4.1 Khả kháng khuẩn curcuminoid .9 1.4.2 Tình hình nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn curcuminoid 12 1.4.2.1 Tình hình nghiên cứu nước 12 1.4.2.2 Tình hình nghiên cứu nước 16 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.2 Hóa chất - Dụng cụ - Thiết bị .20 2.2.1 Hóa chất 20 2.2.2 Dụng cụ 20 ii 2.2.3 Thiết bị 21 2.3 Phương pháp nghiên cứu 21 2.3.1 Phương pháp thu nhận dịch chiết từ thực vật .21 2.3.1.1 Quy trình thu nhận dịch chiết từ củ nghệ .21 2.3.1.2 Phương pháp trích ly hệ thống Soxhlet 22 2.3.2 Phương pháp sấy mẫu đến khối lượng không đổi xác định độ ẩm nguyên liệu nghệ 23 2.3.3 Phương pháp xác định hàm lượng curcuminoid tổng số 23 2.3.4 Phương pháp cô quay cân khối lượng xác định hiệu suất trích ly 24 2.3.5 Các phương pháp đánh giá hoạt tính kháng khuẩn .24 2.3.5.1 Phương pháp khuếch tán qua giếng thạch 24 2.3.5.2 Phương pháp đĩa giấy khuếch tán 27 2.3.5.3 Phương pháp hòa tan môi trường lỏng LSB xác định MIC (minium inhibitory concentration) 29 2.3.6 Phương pháp xử lý số liệu 33 CHƢƠNG III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 34 3.1 Kết trích ly curcuminoid từ củ nghệ vàng phương pháp chiết Soxhlet 34 3.1.1 Xác định độ ẩm W ( ) nguyên liệu bột nghệ 34 3.1.2 Xác định thể tích dịch chiết thu 34 3.1.3 Xác định curcuminoid tổng số 35 3.1.3.1 Đồ thị đường chuẩn curcumin 35 3.1.3.2 Đo mẫu tính tốn hàm lượng curcuminoid tổng số 36 3.1.4 Hiệu suất trích ly curcuminoid .36 3.2 Kết nghiên cứu khả kháng khuẩn Escherichia coli dịch chiết curcuminoid thu nhận từ củ nghệ vàng curcumin chuẩn phương pháp khác 37 iii 3.2.1 Kết nghiên cứu khả kháng khuẩn Escherichia coli dịch chiết curcuminoid thu nhận từ củ nghệ vàng 37 3.2.1.1 Khả kháng khuẩn Escherichia coli dịch chiết curcuminoid theo phương pháp khuếch tán giếng thạch 37 3.2.1.2 Khả kháng khuẩn Escherichia coli dịch chiết curcuminoid theo phương pháp đĩa giấy khuếch tán 39 3.2.1.3 Khả kháng khuẩn Escherichia coli dịch chiết curcuminoid theo phương pháp hòa tan môi trường lỏng LSB xác định MIC (minium inhibitory concentration) 41 3.2.2 Kết nghiên cứu khả kháng khuẩn Escherichia coli curcumin thương mại (Himedia, Ấn Độ) 45 3.2.2.1 Khả kháng khuẩn Escherichia coli curcumin thương mại theo phương pháp khuếch tán giếng thạch 45 3.2.2.2 Khả kháng khuẩn Escherichia coli curcumin thương mại theo phương pháp đĩa giấy khuếch tán 47 3.2.2.3 Khả kháng khuẩn Escherichia coli curcumin thương mại theo phương pháp hòa tan môi trường lỏng LSB xác định MIC (minium inhibitory concentration) 48 3.3 Kết so sánh khả khả kháng khuẩn Escherichia coli dịch chiết curcuminoid thu nhận từ củ nghệ vàng curcumin thương mại 52 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .53 Kết luận 53 Kiến nghị 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 55 iv DANH MỤC VIẾT TẮT MIC Minium inhibitory concentration EMB Eosin Methylene Blue LSB Lauryl sulfate - tryptose broth PCA Plate Count Agar E coli Escherichia coli EPEC Enteropathogenic ETEC Enterotxigenic EIEC Enteroinvasive EHEC Enterohemorrhagic EAEC Enteroaggregative ĐK Đường kính vịng ức chế vi sinh vật h Giờ v DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Escherichia coli, quan sát kính hiển vi Hình 1.2 Cây nghệ củ nghệ vàng .5 Hình 1.3 Công thức cấu tạo curcuminoid Hình 1.4 Bộ chiết Soxhlet Hình 1.5 Cơng thức cấu tạo curcumin Hình 2.1 Sơ đồ quy trình thu nhận dịch chiết curcuminoid từ củ nghệ vàng 21 Hình 2.2 Các bước thu bột nghệ 22 Hình 2.3 Cô quay chân không 24 Hình 2.4 Tăng sinh vi khuẩn E coli .25 Hình 2.5 Các bước chuẩn bị thạch PCA .25 Hình 2.6 Các bước tiến hành phương pháp khuếch tán qua giếng thạch .26 Hình 2.7 Mơ đường kính vịng ức chế vi sinh vật 27 Hình 2.8 Các bước tiến hành phương pháp đĩa giấy khếch tán 28 Hình 2.9 Các bước chuẩn bị mơi trường LSB 29 Hình 2.10 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định MIC dịch chiết curcuminoid curcumin thương mại phương pháp hịa tan mơi trường lỏng LSB .30 Hình 2.11 Các bước tiến hành phương pháp hịa tan LSB xác định MIC 31 Hình 2.12 Các bước chuẩn bị đĩa thạch EMB khô 32 Hình 3.1 Thể tích dịch chiết thu sau chiết Soxhlet 34 Hình 3.2 Đồ thị đường chuẩn curcumin 35 Hình 3.3 Kết phương pháp khuếch tán giếng thạch dịch chiết curcuminoid với nồng độ khác 37 Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn đường kính vịng ức chế vi sinh vật độ lệch chuẩn nồng độ curcuminoid khác phương pháp khuếch tán giếng thạch .38 Hình 3.5 Kết phương pháp đĩa giấy khuếch tán dịch chiết curcuminoid nồng độ khác 39 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn đường kính vòng ức chế vi sinh vật độ lệch chuẩn nồng độ curcuminoid khác phương pháp đĩa giấy khuếch tán 40 Hình 3.7 Dãy ống nghiệm vi khuẩn E coli sau nuôi curcuminoid nồng độ tăng dần theo thứ tự từ trái sang phải từ mẫu đến mẫu 41 vi Hình 3.8 Kết xác định MIC dịch chiết curcuminoid sau nuôi sau 24 h với E coli cấy trang thạch EMB 42 Hình 3.9 Kết xác định MIC dịch chiết curcuminoid sau nuôi sau 72 h với E coli cấy trang thạch EMB 42 Hình 3.10 Đĩa xác định MIC dịch chiết curcuminoid E coli 24 h 72 h .43 Hình 3.11 Kết phương pháp khuếch tán giếng thạch curcumin thương mại với nồng độ khác 45 Hình 3.12 Đồ thị biểu diễn đường kính vịng ức chế vi sinh vật độ lệch chuẩn nồng độ curcumin thương mại phương pháp khuếch tán giếng thạch 46 Hình 3.13 Kết phương pháp đĩa giấy khuếch tán curcumin thương mại với nồng độ khác 47 Hình 3.14 Đồ thị biểu diễn đường kính vịng ức chế vi sinh vật độ lệch chuẩn nồng độ khác curcumin thương mại phương pháp đĩa giấy khuếch tán 48 Hình 3.15 Dãy ống nghiệm vi khuẩn E coli sau nuôi curcumin thương mại nồng độ tăng dần theo thứ tự từ trái sang phải từ mẫu đến mẫu 49 Hình 3.16 Kết xác định MIC curcumin thương mại sau nuôi 24 h với E coli cấy trang thạch EMB 50 Hình 3.17 Kết xác định MIC curcumin thương mại sau nuôi sau 72 h với E coli cấy trang thạch EMB 50 Hình 3.18 Đĩa xác định MIC E coli curcumin thương mại sau 24 h sau 72 h 51 vii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần củ nghệ Bảng 1.2 Tình hình nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn curcuminoid nước .12 Bảng 1.3 Tình hình nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn curcuminoid nước .16 Bảng 3.1 Xác định độ ẩm nguyên liệu bột nghệ 34 Bảng 3.2 Kết đo độ hấp thụ dung dịch curcumin thương mại 35 Bảng 3.3 Phương trình đường chuẩn curcumin 35 Bảng 3.4 Kết đo độ hấp thụ mẫu dịch chiết 36 Bảng 3.5 Kết đo khối lượng thể tích để tính tốn hiệu suất trích ly 36 Bảng 3.6 Đường kính vịng ức chế vi sinh vật curcuminoid phương pháp khuếch tán giếng thạch 38 Bảng 3.7 Đường kính vịng ức chế vi sinh vật curcuminoid phương pháp đĩa giấy khuếch tán 39 Bảng 3.8 Nồng độ curcuminoid ống nghiệm chứa mẫu 41 Bảng 3.9 Đường kính vịng ức chế vi sinh vật curcumin thương mại phương pháp khuếch tán giếng thạch 45 Bảng 3.10 Đường kính vòng ức chế vi sinh vật curcumin thương mại với nồng độ khác phương pháp đĩa giấy khuếch tán 47 Bảng 3.11 Nồng độ curcumin thương mại ống nghiệm chứa mẫu 49 viii cao khả kháng khuẩn lớn Từ ta kết luận, đĩa (f) (Hình 3.9) với nồng độ C 26,15 g/ml nồng độ ức chế thiểu MIC dịch chiết curcuminoid từ củ nghệ vàng nghiên cứu So sánh với nghiên cứu giới: Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết củ nghệ (Curcuma longa) curcuminoid (củ nghệ mua thị trường xác định chất lượng Khoa Khoa học Sinh học Đại học Ahmadu Bello, Zairia) J.A Adudu cộng xuất Saudi Journal of Pathology and Microbiology (SJPM) năm 2018, sử dụng nước cất làm dung môi chiết: Kết cho thấy nồng độ ức chế tối thiểu MIC dịch chiết curcuminoid vi khuẩn Escherichia coli 2500 g/ ml [20]  Nghiên cứu ảnh hưởng curcumin (Merck, Đức) đến đặc tính chất lượng mì kê tươi (millet fresh noodle) chế ức chế chống lại lập vi khuẩn gây hư hỏng nhóm nghiên cứu phát triển trọng điểm quốc gia dự án Trung Quốc, tạp chí Wiley periodicals, 2019 cơng bố MIC curcumin vi khuẩn Escherichia coli 500 g/ ml [26] Như có nghiên cứu dịch chiết curcuminoid từ củ nghệ vàng Curcuma longa L cho kết nồng độ ức chế tối thiểu vi khuẩn Escherichia coli sau 72 h 26,15 g/ml nhỏ nghiên cứu so sánh Vì kết luận dịch chiết curcuminoid nghiên cứu có kết kháng khuẩn Escherichia coli tốt nghiên cứu so sánh 44 3.2.2 Kết nghiên cứu khả kháng khuẩn Escherichia coli curcumin thƣơng mại (Himedia, Ấn Độ) 3.2.2.1 Khả kháng khuẩn Escherichia coli curcumin thƣơng mại theo phƣơng pháp khuếch tán giếng thạch Sử dụng phương pháp khuếch tán giếng thạch để xác định hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết curcuminoid với nồng độ khác thể Hình 3.11 Hình 3.11 Kết phƣơng pháp khuếch tán giếng thạch curcumin thƣơng mại với nồng độ khác nhau: [1]: 750 g/ml; [2]: 667 g/ml; [3]: 600 g/ml; [4]: 545 g/ml; [5]: 500 g/ml; Mẫu đối chứng- ethanol 96% Bảng 3.9 Đƣờng kính vịng ức chế vi sinh vật curcumin thƣơng mại phƣơng pháp khuếch tán giếng thạch STT Đƣờng kính vịng ức chế vi sinh vật (mm) Giếng Giếng Giếng Giếng Giếng Control 6,0 5,8 4,3 3,8 1,7 1,3 5,6 5,2 3,8 3,2 1,8 1,4 6,1 5,8 4,5 3,5 1,6 1,5 Trung bình 5,9 0,3 5,6 0,3 4,2 45 0,4 3,5 0,3 1,7 0,1 1,4 0,1 Đƣờng kính vòng ức chế vi sinh vật (mm) [1] [2] [3] [4] [5] Control Các giếng thạch Hình 3.12 Đồ thị biểu diễn đƣờng kính vịng ức chế vi sinh vật độ lệch chuẩn nồng độ curcumin thƣơng mại phƣơng pháp khuếch tán giếng thạch: [1]: 750 g/ml; [2]: 667 g/ml; [3]: 600 g/ml; [4]: 545 g/ml; [5]: 500 g/ml; Control: mẫu đối chứng - ethanol 96% Đối với curcumin thương mại kết nghiên cứu cho thấy (Hình 3.11): từ giếng số đến giếng số đường kính rộng nhiều so với giếng chứa mẫu control Bước đầu cho thấy curcumin thương mại có khả ức chế khuẩn E coli Dựa vào Bảng 3.9 Hình 3.12 giếng ĐK lớn nồng độ lớn C 5,9 0,3 mm đường kính 750 g/ml dãy nồng độ khác curcumin thương mại, sau đường kính giảm dần theo nồng độ, giếng có đường kính ức chế vi khuẩn nhỏ dãy nồng độ giếng với nồng độ C đường kính ĐK 1,7 500 g/ml 0,1 mm Còn giếng chứa mẫu đối chứng control ethanol 96% có đường vịng ức chế vi khuẩn bé ĐK 46 1,4 0,1 mm Chính kết luận nghiên cứu phương pháp khếch tán giếng thạch, curcumin thương mại có khả ức chế vi khuẩn E coli cao ethanol 96% Nồng độ curcumin thương mại cao, khả kháng khuẩn lớn 3.2.2.2 Khả kháng khuẩn Escherichia coli curcumin thƣơng mại theo phƣơng pháp đĩa giấy khuếch tán Sử dụng phương pháp đĩa giấy khuếch tán để xác định hoạt tính kháng khuẩn curcumin thương mại với nồng độ khác thể Hình 3.13 Hình 3.13 Kết phƣơng pháp đĩa giấy khuếch tán curcumin thƣơng mại với nồng độ khác nhau: [1]: 571 g/ml; [2]: 500 g/ml; [3]: 444 g/ml; [4]: 400 g/ml; [5]: 364 g/ml; Control: mẫu đối chứng - ethanol 96% Bảng 3.10 Đƣờng kính vịng ức chế vi sinh vật curcumin thƣơng mại với nồng độ khác phƣơng pháp đĩa giấy khuếch tán Đƣờng kính vịng ức chế vi sinh vật (mm) STT Giếng Giếng Giếng Giếng Giếng Control 8,2 7,7 7,0 6,2 6,4 1,3 7,8 7,3 6,3 6,0 5,7 0,8 8,0 8,1 6,5 6,1 5,9 1,2 Trung bình 8,0 0,2 7,7 0,4 6,6 47 0,4 6,1 0,1 6,0 0,4 1,1 0,3 Đƣờng kính vịng ức chế vi sinh vật (mm) [1] [2] [3] [4] [5] Control Các đĩa giấy Hình 3.14 Đồ thị biểu diễn đƣờng kính vịng ức chế vi sinh vật độ lệch chuẩn nồng độ khác curcumin thƣơng mại phƣơng pháp đĩa giấy khuếch tán: [1]: 571 𝜇g/ml; [4]: 400 𝜇g/ml; [2]: 500 𝜇g/ml; [5]: 364 𝜇g/ml; [3]: 444 𝜇g/ml; Control: mẫu đối chứng - ethanol Hình 3.13 kết đường kính vịng ức chế vi khuẩn E coli qua lần thử nghiệm curcumin thương mại bước đầu nhìn thấy cho kết đường kính vịng ức chế đĩa theo nồng độ tương ứng Kết cho thấy (Hình 3.14, Bảng 3.10) đường kính vòng ức chế vi sinh vật lớn nằm đĩa giấy số [1], với C 571 g/ml, ĐK 8,0 mm nồng độ lớn dãy nồng độ curcumin thương mại Đường kính vịng ức chế vi sinh vật bé đĩa giấy chứa mẫu control với ĐK 1,1 mm Đường kính vịng ức chế vi khuẩn tăng dần theo chiều tăng nồng độ curcumin thương mại Kết cho ta thấy chứng minh curcumin thương mại có khả kháng khuẩn cao 3.2.2.3 Khả kháng khuẩn Escherichia coli curcumin thƣơng mại theo phƣơng pháp hịa tan mơi trƣờng lỏng LSB xác định MIC (minium inhibitory concentration) 48 Sử dụng phương pháp hịa tan mơi trường lỏng LSB xác định MIC để xác định hoạt tính kháng khuẩn curcumin thương mại với nồng độ khác thể Hình 3.15; Hình 3.16 Hình 3.17 Hình 3.15 Dãy ống nghiệm vi khuẩn E coli sau đƣợc nuôi curcumin thƣơng mại nồng độ tăng dần theo thứ tự từ trái sang phải từ mẫu đến mẫu Bảng 3.11 Nồng độ curcumin thƣơng mại ống nghiệm chứa mẫu Nồng độ curcumin thƣơng mại STT mẫu ( g/ml) (control: mẫu đối chứng – LSB) 27,50 30,00 31,00 31,50 0,00 32,50 32,70 0,29 35,00 49 Hình 3.16 Kết xác định MIC curcumin thƣơng mại sau nuôi 24 h với E coli đƣợc cấy trang thạch EMB: b) 27,50 𝜇g/ml; e) 31,50 𝝁g/ml; h) 35,00 𝜇g/ml; c) 30,00 𝜇g/ml; f) 32,00 𝜇g/m; a) Control: mẫu đối chứng – LSB d) 31,00 𝜇g/ml; g) 32,50 𝜇g/ml; Hình 3.17 Kết xác định MIC curcumin thƣơng mại sau nuôi sau 72 h với E coli đƣợc cấy trang thạch EMB b) 27,50 𝜇g/ml; e) 31,50 𝜇g/ml; h) 35,00 𝜇g/ml; c) 30,00 𝜇g/ml; f) 32,00 𝜇g/ml; a) Control: mẫu đối chứng – LSB d) 31,00 𝜇g/ml; g) 32,70 𝝁g/ml; 50 Hình 3.18 Đĩa xác định MIC E coli curcumin thƣơng mại sau 24 h sau 72 h: a) 24 h; b) 72 h Theo kết Hình 3.16 Bảng 3.11 ta thấy MIC curcumin thương mại ban đầu xác định 24 h với đĩa (e) nồng độ độ C = 31,50 g/ml với khuẩn lạc Từ đĩa (f) trở nồng độ C = 32 g/ml vi khuẩn chết, mặt thạch khơng cịn khuẩn lạc Nhưng sau tiếp tục nuôi vi khuẩn E coli đến 72 h trang EMB (Hình 3.17) MIC cần tìm xác định đĩa (g) với nồng độ C = 32,70 g/ml với có mặt khuẩn lạc E coli, đĩa (h) với nồng độ 35,00 g/ml tồn vi khuẩn mặt thạch bị ức chế chết Như kết nghiên cứu cho kết nồng độ ức chế tối thiểu MIC curcumin thương mại (Himedia, Ấn Độ) vi khuẩn E coli sau 72 h 32,70 g/ml Và thời gian để xác định xác nồng độ ức chế tối thiểu vi khuẩn E coli đủ 72 h (Hình 3.18) So với kết nghiên cứu MIC curcumin vi khuẩn E coli giới:  Nhóm nghiên cứu trung tâm nghiên cứu Đại học Y khoa Bushehr (2008) [23] cho kết MIC curcumin (Merck, Đức) vi khuẩn E coli 93,8 g/ml  Nghiên cứu năm 2013 [22], MIC curcumin (Himedia, Mumbai, Ấn Độ) vi khuẩn Escherichia coli 163 g/ml Thông qua nghiên cứu trên, ta thấy kết nghiên cứu tốt nghiên cứu so sánh, curcumin thương mại (Himedia, Ấn Độ) nghiên cứu có khả ức chế vi khuẩn E coli cao với nồng độ ức chế nhỏ hơn, nồng độ ức chế tối thiểu MIC 32,70 g/ml 51 Kết luận, curcumin thương mại nghiên cứu chủng vi khuẩn E coli, nồng độ curcumin thương mại cao, khả ức chế vi khuẩn lớn 3.3 Kết so sánh khả khả kháng khuẩn Escherichia coli dịch chiết curcuminoid thu nhận từ củ nghệ vàng curcumin thƣơng mại  Dựa theo kết phương pháp áp dụng để nghiên cứu khả kháng khuẩn dịch chiết curcuminoid curcumin thương mại chủng Escherichia coli:  Phương pháp khuếch tán giếng thạch;  Phương pháp đĩa giấy khuếch tán;  Phương pháp hịa tan mơi trường lỏng LSB xác định MIC  Đối với phương pháp khuếch tán giếng thạch phương pháp đĩa giấy khuếch tán, curcumin thương mại có đường kính vịng ức chế vi sinh vật qua thí nghiệm ổn định dịch chiết curcuminoid, độ lệch chuẩn nhỏ Đối với phương pháp hịa tan mơi trường LSB xác định MIC, kết Bảng 3.8 Bảng 3.11 ta thấy nồng độ ức chế tối thiểu MIC curcumin thương mại C cao MIC dịch chiết curcuminoid C 26,15 32,70 0,29 g/ml 0,17 g/ml  Kết luận, khả kháng khuẩn Escherichia coli dịch chiết củ nghệ (Curcuma longa L.) curcuminoid cao curcumin thương mại (Himedia, Ấn Độ) 52 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Trích ly thành công curcuminoid từ củ nghệ vàng phương pháp Soxhlet với hiệu suất trích ly hàm lượng curcuminoid thu nhận cao:  Hàm lượng curcuminoid tổng số: 4,293 0,011 g/100g TLK;  Hiệu suất trích ly 6,614% Nghiên cứu khả kháng khuẩn Escherichia coli dịch chiết curcuminoid thu nhận từ củ nghệ vàng phương pháp khác cho kết sau:  Phương pháp khuếch tán giếng thạch: dịch chiết curcuminoid có khả kháng khuẩn E coli cao ethanol 96% vòng kháng khuẩn rộng nồng độ curcuminoid thử nghiệm ĐK 6,9 0,4 mm với C 460 g/ml nồng độ lớn thử nghiệm  Phương pháp đĩa giấy khếch tán: đường kính vịng kháng khuẩn E coli rộng, ĐK = 9,4 0,5 mm với nồng độ C 350 g/ml đường kính rộng nồng độ thử nghiệm Chứng minh dịch chiết curcuminoid có khả kháng khuẩn E coli cao  Phương pháp hịa tan mơi trường lỏng LSB xác định nồng độ ức chế tối thiểu MIC (minium inhibitory concentration): Nồng độ dịch chiết curcuminoid yếu tố định khả ức chế vi khuẩn Escherichia coli Nồng độ lớn khả ức chế E coli cao Tại xác định MIC dịch chiết curcuminoid với nồng độ C 26,15 0,17 g/ml Nồng độ ức chế tối thiểu curcumin thương mại C nồng độ ức chế tối thiểu MIC dịch chiết curcuminoid C 32,70 g/ml lớn 26,15 g/ml Như vậy, khả kháng khuẩn Escherichia coli dịch chiết curcuminoid cao curcumin thương mại (Himedia, Ấn Độ) Trong nghiên cứu để xác định rõ khả ức chế E coli phương pháp hịa tan mơi trường lỏng LSB xác định nồng độ ức chế tối thiểu MIC (minium inhibitory concentration) phương pháp tối ưu rõ ràng nhất, cho kết có độ xác tin cậy cao 53 Kiến nghị Nếu có điều kiện nghiên cứu sau này, tiến hành: Trích ly curcuminoid phương pháp khác (có hỗ trợ sóng siêu âm vi sóng) từ củ nghệ vàng (Curcuma longa L.), tối ưu q trình trích ly curcuminoid Sau đó, nghiên cứu xác định hoạt tính kháng khuẩn E coli dịch chiết thu Từ đó, so sánh với khả kháng khuẩn E coli dịch chiết thu nhận phương pháp Soxhlet nghiên cứu Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn ức chế vi khuẩn dịch chiết curcuminoid thu nhận từ nghệ chủng vi khuẩn gây bệnh nguy hiểm khác như: Staphylococcus, Streptoccoccus, … 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt: Lê Thanh Bình (2012) Cơ sở vi sinh vật học thực phẩm, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, 45-49 Trần Thị Hoàng Quyên, Phan Vĩnh Thịnh, Hoàng Thị Thu Thảo (2019) Tài liệu hướng dẫn thực hành tách chiết hợp chất thiên nhiên, Trường Đại học Nha Trang Phạm Thị Hà Vân, Lê Sĩ Ngọc (2016) Nghiên cứu tính kháng sinh tinh dầu nghệ (Curcuma longa L.) ứng dụng bảo quản tôm Tạp chí Khoa học Đại học Đồng Tháp, 18, 1-3 Trần Thị Nguyệt (2015) Nghiên cứu tạo vật liệu kháng khuẩn AgNP – Curcumin – Chitosan có khả trị bỏng Luận văn Thạc sĩ Khoa học, Trường Đại học Đà Nẵng Trần quang Huy, Đào Hùng Cường (2012) Nghiên cứu trích ly hợp chất curcumin củ nghệ vàng huyện Krông Bông, tỉnh Đak Lak Tuyển tập Báo cáo Hội nghị Sinh viên Nghiên cứu Khoa học, Trường Đại học Đà Nẵng Lương Thị Mỹ Ngân, Lê Thị Kim Lan, Nguyễn Thị Thùy Linh, Nguyễn Ngọc Quý, Lê Thị Thanh Loan, Trương Thị Huỳnh Hoa, Trần Trung Hiếu (2018) Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn cao chiết hoa dâm bụt Hibiscus rosasinensis L lên Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa Klebsiella pneumonia Tạp chí phát triển Khoa học & Cơng nghệ, 2(1), 19-25 7.Tống Thị Ngọc Bé (2019) Nghiên cứu chiết tách hợp chất polyphenol chè xanh trồng tỉnh Bà Rịa Vũng Tàu nghiên cứu ứng dụng dược mỹ phẩm Nghiên cứu Khoa học cấp Trường, Trường Đại học Bà Rịa- Vũng Tàu Trần Mỹ Linh, Vũ Hương Giang, Lê Quỳnh Liên, Nguyễn Tường Vân, Ninh Khắc Bản, Châu Văn Minh (2013) Đánh giá hoạt tính ức chế vi khuẩn kiểm định số loài thực vật ngập mặn vườn quốc gia Xuân Thủy, Nam Định Sở Khoa học & Công nghệ thành phố Hồ Chí Minh, 3, 342-347 55 Nguyễn Thị Hồng Lan, Bùi Quang Thuật, Lê Danh Tuyên, Nguyễn Thị Ngọc Duyên (2015) Khả kháng khuẩn tinh dầu tía tơ Tạp chí Khoa học & Phát Triển, 13(2), 245-250 10 Trần Phạm Tuệ Hưng, Nguyễn Thị Mỹ Hạnh, Quách Ngô Diễm Phương (2014) Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn, kháng oxi hóa, ức chế tyrosinase cao ethanol chiết xuất từ Huỳnh Anh (Allamanda neriifolia) Science & Technology Development, 17(T3-2014), 62-68 Tài liệu Tiếng Anh 11 Monika Nagpall, Shaveta Sood (2013) Role of curcumin in systemic and oral health: An overview Journal of Natural Science, 1(4), 3-5 12 Reema F Tayyem , Dennis D Heath, Wael K Al-Delaimy, Cheryl L Rock (2006) Curcumin content of turmeric and curry powders Nutrition and Cancer, 55(2), 126-131 13 Praveenkumar S Mandroli and Kishor Bhat (2013) An in-vitro evaluation of antibacterial activity of curcumin against common endodontic bacteria Journal of Applied Pharmaceutical Science, 3(10), 106-108 14 Ishita Chattopadhyay, Kaushik Biswas, Uday Bandyopadhyay and Ranajit K Banerjee (2004) Turmeric and curcumin: Biological actions and medicinal applications Curent science, 82(1), 48-49 15 Parastoo Karimi Alavijeh, Parisa Karimi Alavijeh and Devindra Sharma (2012) A study of antimicrobial activity of few medicinal herbs Asian Journal of Plant Science and Research, 2(4), 498-499 16 S Sandikci Altunatmaz, F Yilmaz Aksu1, G.Issa, B Basaran Kahraman, D Dulger Altiner, S K.Buyukunal (2016) Antimicrobial effects of curcumin against L monocytogenes, S aureus, S Typhimurium and E coli O157:H7 pathogens in minced meat Veterinarni Medicina, 61(5), 256-262 56 17 Anindya Bagchi, Proenjit Mukherjee, Sarmistha Bhowmick and Anusree Raha (2015) Synthesis, Characterization and Antibacterial Activity of a Novel Curcumin Methal Complex International Journal of Drug Development and Research, 7(2), 1-4 18 Soheil Zorofchian Moghadamtousi, Habsah Abdul Kadir, Pouya Hassandarvish, Hassan Tajik, Sazaly Abubakar, Keivan Zand (2014) A Review on Antibacterial, Antiviral, and Antifungal Activity of Curcumin Hindawi Publishing Corporation, 2014), 1-3 19 J A Adudu, R A Sangodare, U O Edem, S Shittu, M O Otori, E H Odeke, O.O Owolabi, U.I Idio, V C Okzie, P B Anyim (2018) Phytochemical Screening and Antibacterial Activity of the Aqueous Extract of Curcuma longa Rhizome Saudi Journal of Pathology and Microbiology, 3(10), 412-415 20 Keivan Zandi, Elisa Ramedami, Khosro Mohammadi, Saeed Tajbakhsh, Iman Deilami, Zahra Rastian, Moradali Fouladvand, Forough Yousefi, Fatemeh Farshadpour (2010) Evaluation of Antiviral Activities of Curcumin Derivatives against HSV-1 Vero Cell Line Natural Product Communications, 5(12), 1935-1938 21 Hayati Gunes, Dumrul Gulen, Reyhan Mutlu, Abdullah Gumus ,Tekin TAS, Aynur Eren Topkaya (2013) Antibacterial effects of curcumin: an in vitro minium inhibitory concertration study Toxicology and industrial Health, 10, 1-3 22 Saeed Tajbakhsh, Khosro Mohammadi, Iman Deilami, Keivan Zandi, Moradali, Elisa Ramedami, Golandam Asayesh (2008) Antibacyerial activity of indium curcumin and diacetylcurrcumin African Journal of Biotecchnology, 7(21), 3833-3835 23 Arunava Kali, Devaraj Bhuvaneshwar, MV Pravin Charles, Kunigal Srinivasaiah Seetha (2016) Antibacterial synergy of curcumin with antibiotics against biofilm producing clinical bacterial isolates Journal of bacic and Clinical Pharmacy, 7(3) 93-95 57 24 W Chearwae, S Anuchapreedac, K Nandigama, S.V Ambudkar, P Limtrakul (2004) Biochemical mechanism of modulation of human P- glycoprotein (ABCD1) by curcumin I, II, and III purified from Turmeric powder Biochem Pharmacol, 68(10), 2043-2052 25 Ziyuan Wang, Yating Jia, Min Zhang (2019) Effect of curcumin on the quality properties of millet fresh noodle and its inhibitory mechanism against the isolated spoilage bacteria Food Science & Nutrition, 10, 1-5 Trang Web: 26 (11/2019) Escherichia coli Wikipedia https://vi.wikipedia.org/wiki/Escherichia_coli 27 (10/2019) Nghệ Wikipedia http://vi.wikipedia.org/wiki/Nghệ 28 (06/2020) Curcumin Wikipedia https://vi.wikipedia.org/wiki/Curcumin 29 (06/2020) Demethoxycurcumin Wikipedia https://vi.wikipedia.org/wiki/Desmethoxycurcumin 30 (06/2020) Bisdemethoxycurcumin Wikipedia https://vi.wikipedia.org/wiki/Bisdemethoxycurcumin 31 (07/2020) Soxhlet extractor Wikipedia https://en.wikipedia.org/wiki/Soxhlet_extractor 58 ... tài ? ?Nghiên cứu khả kháng khuẩn Escherichia coli curcuminoid thu nhận từ củ nghệ vàng Curcuma longa L.? ?? Mục tiêu nghiên cứu  Thu nhận dich chiết curcuminoid từ củ nghệ vàng (Curcuma longa L.) ... dung nghiên cứu  Trích ly curcuminoid từ củ nghệ vàng (Curcuma longa L.)  Nghiên cứu khả kháng khuẩn Escherichia coli dịch chiết curcuminoid thu nhận từ củ nghệ vàng phương pháp khác  Nghiên cứu. .. L.)  Xác định khả kháng khuẩn Escherichia coli dịch chiết curcuminoid thu nhận từ củ nghệ vàng  So sánh khả kháng khuẩn Escherichia coli dịch chiết curcuminoid thu nhận từ củ nghệ vàng curcumin