Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng viên ngậm dưới lưỡi aslem 1mg

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI LÊ THANH MINH XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƢỢNG VIÊN NGẬM DƢỚI LƢỠI ASLEM 1 mg KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI - 2014 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI LÊ THANH MINH XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƢỢNG VIÊN NGẬM DƢỚI LƢỠI ASLEM 1 mg KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Ngƣời hƣớng dẫn: PGS. TS. Nguyễn Thị Kiều Anh Nơi thực hiện: Phòng Phân tích, kiểm nghiệm và TĐSH – Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia HÀ NỘI - 2014 LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập tại trƣờng đại học Dƣợc Hà Nội, em đã đƣợc các thầy, các cô luôn quan tâm chỉ bảo và tạo mọi điều kiện thuận lợi nhất để em học tập trau dồi kiến thức. Trong thời gian làm khóa luận tốt nghiệp, em đã có cơ hội vận dụng kiến thức cũng nhƣ đƣợc mở rộng vốn hiểu biết của mình để áp dụng cho công việc tƣơng lai. Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn PGS. TS. Nguyễn Thị Kiều Anh, ngƣời đã cống hiến hết mình vì sự nghiệp giáo dục, ngƣời đã tận tình chỉ bảo và hƣớng dẫn em trong suốt quá trình nghiên cứu, hoàn thành khóa luận. Em xin trân trọng cảm ơn PGS. TS. Đào Kim Chi và nhóm nghiên cứu đã cung cấp chất chuẩn, chế phẩm để em có thể thực hiện đề tài. Đồng thời, em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội, các thầy cô, anh chị Phòng kiểm nghiệm, phân tích và tƣơng đƣơng sinh học – Viện Công nghệ dƣợc phẩm Quốc gia đã tạo mọi điều kiện thuận lợi để em thực hiện khóa luận. Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình và bạn bè, những ngƣời luôn động viên, khích lệ và tạo động lực cho em trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài. Hà nội, ngày tháng năm Sinh viên Lê Thanh Minh MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƢƠNG 1. TỔNG QUAN 3 1.1. TỔNG QUAN VỀ ASLEM 3 1.1.1. Hoạt chất Glycyl funtumin 3 1.1.2. Tình hình nghiên cứu hoạt chất Glycyl funtumin 4 1.1.3. Các phƣơng pháp định lƣợng Glycyl funtumin 6 1.2. VÀI NÉT VỀ VIÊN NGẬM DƢỚI LƢỠI 9 1.3. TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 10 1.3.1. Nguyên tắc và phân loại 10 1.3.2. Các thông số đặc trƣng 10 1.3.3. Các phƣơng pháp định lƣợng bằng HPLC 13 CHƢƠNG 2. ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1. NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ THIẾT BỊ 15 2.1.1. Đối tƣợng nghiên cứu 15 2.1.2. Dung môi, hóa chất 15 2.1.3. Thiết bị, dụng cụ, máy móc 15 2.2. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 16 2.2.1. Thẩm định phƣơng pháp định lƣợng viên ngậm dƣới lƣỡi Aslem bằng HPLC 16 2.2.2. Xây dựng tiêu chuẩn và kiểm tra chất lƣợng viên ngậm dƣới lƣỡi Aslem 16 2.3. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.3.1. Thẩm định phƣơng pháp định lƣợng viên ngậm dƣới lƣỡi Aslem bằng HPLC 17 2.3.2. Xây dựng tiêu chuẩn kĩ thuật và phƣơng pháp đánh giá chất lƣợng viên ngậm dƣới lƣỡi Aslem 18 2.3.3. Tính toán và xử lý số liệu 20 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN 22 3.1. CHUẨN BỊ MẪU 22 3.1.1. Mẫu chuẩn 22 3.1.2. Mẫu thử 22 3.2. LỰA CHỌN DUNG MÔI PHA MẪU VÀ ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ 23 3.2.1. Lựa chọn dung môi pha mẫu 23 3.2.2. Lựa chọn điều kiện sắc ký 23 3.3. THẨM ĐỊNH PHƢƠNG PHÁP 25 3.3.1. Độ phù hợp của hệ thống 25 3.3.2. Độ chọn lọc 25 3.3.3. Độ tuyến tính 27 3.3.4. Độ chính xác 29 3.3.5. Độ đúng 32 3.4. XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN VÀ KIỂM TRA CHẤT LƢỢNG VIÊN NGẬM DƢỚI LƢỠI ASLEM 1 mg 34 3.4.1. Tính chất 34 3.4.2. Định tính 34 3.4.3. Độ đồng đều khối lƣợng 35 3.4.4. Độ rã. 36 3.4.5. Độ đồng đều hàm lƣợng 36 3.4.6. Định lƣợng 37 BÀN LUẬN 39 KẾT LUẬN 42 ĐỀ XUẤT 43 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT C Nồng độ DĐVN IV Dƣợc điển Việt Nam IV GF Glycyl funtumin GF.HCl Glycyl funtumin hydroclorid HLTB Hàm lƣợng trung bình HPLC Sắc ký lỏng hiệu năng cao (High Performance Liquid Chromatography) KLTB Khối lƣợng trung bình MeOH Methanol MS Khối phổ (Mass spectrometry) PA Hóa chất tinh khiết dùng trong phân tích (Pure Analysis) r Hệ số tƣơng quan RSD Độ lệch chuẩn tƣơng đối S Diện tích pic SKĐ Sắc ký đồ STT Số thứ tự t R Thời gian lƣu tt/tt Thể tích/thể tích UV Tử ngoại (Ultraviolet) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Nội dung Trang 3.1 Kết quả độ phù hợp hệ thống sắc ký. 25 3.2 Pha dãy chuẩn chạy độ tuyến tính. 27 3.3 Kết qủa khảo sát độ tuyến tính của GF.HCl. 28 3.4 Kết quả đánh giá độ lặp lại của phƣơng pháp. 30 3.5 Kết quả đánh giá độ chính xác khác ngày của phƣơng pháp. 31 3.6 Kết quả thẩm định độ đúng của phƣơng pháp. 33 3.7 Kết quả đánh giá độ đồng đều khối lƣợng. 35 3.8 Kết quả đánh giá độ đồng đều hàm lƣợng. 37 3.9 Kết quả định lƣợng GF.HCl trong viên Aslem. 38 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Nội dung Trang 3.1 Phổ hấp thụ UV của GF.HCl. 24 3.2 Kết quả khảo sát đánh giá độ chọn lọc. 26 3.3 Sắc ký đồ khảo sát độ tuyến tính. 28 3.4 Đồ thị biểu diễn mối tƣơng quan tuyến tính giữa diện tích và nồng độ GF.HCl. 29 3.5 Sắc ký đồ định tính. 34 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Tổ chức Y tế Thế giới đã dự báo về mô hình bệnh tật trong thế kỷ 21, các bệnh không lây nhiễm trong đó có ung thƣ sẽ trở thành nhóm bệnh chủ yếu đe dọa đến sức khỏe con ngƣời, chiếm 54% nguyên nhân gây tử vong. Ở Việt Nam, theo nhận định của Bộ Y tế, các bệnh ung thƣ, tim mạch, tâm thần đang có nguy cơ tăng lên giống với các nƣớc công nghiệp phát triển. Theo số liệu thống kê qua ghi nhận ung thƣ tại Hà Nội, Thành phố Hồ Chí Minh và một số tỉnh, ƣớc tính mỗi năm ở nƣớc ta có khoảng 150.000 bệnh nhân ung thƣ mới mắc và 75.000 ngƣời chết vì ung thƣ, con số này có xu hƣớng ngày càng gia tăng [26]. Chính vì thế xu hƣớng nghiên cứu và sản xuất các thuốc điều trị và điều trị bổ trợ dành cho bệnh nhân ung thƣ đang ngày càng phát triển. Aslem (glycyl funtumin hydroclorid) là một thuốc kích thích miễn dịch [11] đƣợc nghiên cứu bởi Phó giáo sƣ Đào Kim Chi, Giáo sƣ Đặng Hanh Phức và cộng sự trong hơn 30 năm. Năm 2002, chế phẩm thuốc tiêm Aslem ra đời tại Trung tâm Khoa học công nghệ Dƣợc – Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội (Số đăng ký: VD-0105-06) và đƣợc chuyển giao cho công ty cổ phần Dƣợc phẩm Vĩnh Phúc sản xuất – là sản phẩm thuốc tiêm miễn dịch đầu tiên đƣợc sản xuất tại Việt Nam. Aslem có tác dụng tăng cƣờng miễn dịch dùng để điều trị bổ trợ ung thƣ đƣờng tiêu hóa (gan, dạ dày, đại trực tràng, tụy), ung thƣ phổi và ung thƣ vú. Kết hợp hiệp đồng với kháng sinh nhằm mục đích ngăn ngừa nhiễm trùng trƣớc và sau phẫu thuật [12]. Các nghiên cứu lâm sàng về tác dụng của Aslem đã đƣợc thực hiện và cho kết quả hết sức khả quan [1], [20], [22], [25]. Để đáp ứng yêu cầu điều trị ngày một tăng cao, Phó giáo sƣ Đào Kim Chi và nhóm nghiên cứu tại trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội đã nghiên cứu bào [...]... chất lƣợng và hoàn thiện hồ sơ đăng ký thuốc cho viên ngậm dƣới lƣỡi Aslem, chúng tôi tiến hành đề tài: Xây dựng tiêu chuẩn chất lƣợng viên ngậm dƣới lƣỡi Aslem 1 mg” với 2 mục tiêu: 1 Xây dựng và thẩm định phương pháp định tính, định lượng Glycyl funtumin hydroclorid trong viên ngậm dưới lưỡi Aslem bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) 2 Xây dựng tiêu chuẩn và kiểm tra chất lượng viên ngậm dưới lưỡi. .. pháp 2.2.2 Xây dựng tiêu chuẩn và kiểm tra chất lƣợng viên ngậm dƣới lƣỡi Aslem Chúng tôi dự kiến xây dựng tiêu chuẩn cơ sở viên ngậm dƣới lƣỡi Aslem theo hƣớng dẫn DĐVN IV (Phụ lục 1.20) gồm các chỉ tiêu sau:  Tính chất  Định tính  Độ đồng đều khối lƣợng  Độ rã  Độ đồng đều hàm lƣợng  Định lƣợng 17 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3.1 Thẩm định phƣơng pháp định lƣợng viên ngậm dƣới lƣỡi Aslem bằng... bƣớc sau: Cách tiến hành: Chuẩn bị một dãy chuẩn với các nồng độ chất chuẩn tăng dần rồi tiến hành sắc ký Các đáp ứng thu đƣợc là các diện tích hoặc chiều cao pic ở mỗi điểm chuẩn Vẽ đồ thị biểu diễn mối tƣơng quan giữa diện tích S (hoặc chiều cao H) của pic với nồng độ của chất chuẩn Sử dụng khoảng tuyến tính của đƣờng chuẩn để tính toán nồng độ của chất cần xác 14 định Xây dựng phƣơng trình hồi quy... VÀ THIẾT BỊ 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 2.1.1.1 Chất chuẩn Chuẩn GF.HCl (hàm lƣợng: 99,89%, độ ẩm: 0,7%) do Viện kiểm nghiệm thuốc trung ƣơng cung cấp 2.1.1.2 Viên Aslem Viên ngậm dƣới lƣỡi Aslem chứa GF.HCl (hàm lƣợng ghi nhãn 1mg) , chế phấm do bộ môn Hóa sinh trƣờng Đại học Dƣợc Hà nội cung cấp Số lô: 012014, sản xuất ngày: 15/01/2014 2.1.2 Dung môi, hóa chất - Methanol (MeOH) tinh khiết HPLC (Merck... pic mẫu chuẩn sẽ tính dƣợc nồng độ chất trong mẫu thử Có thể sử dụng phƣơng pháp chuẩn hóa một điểm hoặc nhiều điểm  Chuẩn hóa 1 điểm: Chọn nồng độ của mẫu chuẩn xấp xỉ với nồng độ của mẫu thử Tính nồng độ mẫu thử theo công thức: CX = CS CX, CS: nồng độ chất phân tích trong mẫu thử và mẫu chuẩn SX, SS: diện tích pic của chất phân tích trong SKĐ mẫu thử và mẫu chuẩn  Chuẩn hóa nhiều điểm: tiến hành...2 chế thử nghiệm chế phẩm Aslem dƣới dạng viên ngậm dƣới lƣỡi (glycyl funtumin hydroclorid 1mg) Hiện nay, tiêu chuẩn cơ sở để định lƣợng nguyên liệu GF.HCl và dung dịch tiêm Aslem vẫn áp dụng phƣơng pháp đo quang bằng cách tạo cặp ion với heliantin [15] Năm 2009, các tác giả [2] đã xây dựng thành công phƣơng pháp định lƣợng GF.HCl bằng HPLC HPLC là một phƣơng... bằng phƣơng pháp thêm chuẩn vào mẫu placebo Lƣợng chất chuẩn thêm vào tƣơng ứng với khoảng 80%, 100%, 120% lƣợng hoạt chất có trong mẫu thử (đảm bảo nồng độ ở trong khoảng tuyến tính của phƣơng pháp định lƣợng) Ở mỗi nồng độ, tiến hành với 3 lần thử nghiệm riêng biệt - Tính tỷ lệ thu hồi của GF.HCl chuẩn thêm vào mẫu thử - Yêu cầu: tỷ lệ thu hồi đạt 98,0% – 102,0% 2.3.2 Xây dựng tiêu chuẩn kĩ thuật và... sánh với chuẩn có nồng độ tƣơng đƣơng (phƣơng pháp chuẩn hóa một điểm) Công thức tính: %Hàm lƣợng = mC × H × (1 – w) × × ̅ × 100% Trong đó: mt, mc (mg): khối lƣợng mẫu thử, mẫu chuẩn H: hàm lƣợng % của GF.HCl chuẩn w: hàm ẩm của GF.HCl chuẩn St, Sc (mAU.s): diện tích pic GF.HCl trong SKĐ dung dịch thử và dung dịch chuẩn Vt, Vc (ml): thể tích khi chuẩn bị dung dịch gốc trong mẫu thử và mẫu chuẩn ft,... GF.HCl chuẩn c 27 Nhận xét: Trên các sắc kí đồ thu đƣợc, tại thời điểm ứng với thời gian lƣu của GF.HCl trên mẫu chuẩn, thì sắc ký đồ của mẫu trắng (mẫu placebo và mẫu MeOH) không xuất hiện pic nào Vậy phƣơng pháp có tính chọn lọc cao 3.3.3 Độ tuyến tính Với mục tiêu xây dựng phƣơng pháp có khoảng tuyến tính đủ rộng để đánh giá chỉ tiêu trong định lƣợng, xác định hàm lƣợng, chúng tôi tiến hành xây dựng. .. khi tiến hành đối với chỉ tiêu định lƣợng Chuẩn bị 5 bình định mức 20 ml Từ dung dịch chuẩn gốc GF.HCl, pha các dung dịch chuẩn có nồng độ GF.HCl dự kiến từ 25-75 μg/ml Cách pha đƣợc trình bày trong bảng 3.2 Bảng 3.2: Pha dãy chuẩn chạy độ tuyến tính Dung dịch chuẩn C1 C2 C3 C4 C5 Chuẩn gốc (ml) 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 MeOH Vừa đủ 20 ml Tiến hành sắc ký lần lƣợt từng dung dịch chuẩn và ghi lại diện tích . kiểm tra chất lƣợng và hoàn thiện hồ sơ đăng ký thuốc cho viên ngậm dƣới lƣỡi Aslem, chúng tôi tiến hành đề tài: Xây dựng tiêu chuẩn chất lƣợng viên ngậm dƣới lƣỡi Aslem 1 mg” với 2 mục tiêu: . tiêu: 1. Xây dựng và thẩm định phương pháp định tính, định lượng Glycyl funtumin hydroclorid trong viên ngậm dưới lưỡi Aslem bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). 2. Xây dựng tiêu chuẩn và. kiểm tra chất lƣợng viên ngậm dƣới lƣỡi Aslem 16 2.3. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.3.1. Thẩm định phƣơng pháp định lƣợng viên ngậm dƣới lƣỡi Aslem bằng HPLC 17 2.3.2. Xây dựng tiêu chuẩn kĩ