Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của terazosin hydrochlorid
Trang 1BỘ Y TẾ
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI
TRAN THI HUE
NGHIEN CUU XAY DUNG
Trang 2HP MeCN RSD SIT USP
DANH MUC CAC CHU VIET TAT * Durge dién Anh (British Pharmacopoeia)
Sắc kí lỏng hiểu nang cao (High Performance Liquid Chromatography) : Hong ngoai (Infrared) : Microgram : Mililit : Acetonitril
:- Hệ số tương quan hồi qui
Trang 3DANH MỤC CÁC HÌNH
Hình Nội dung Trang
Hinh 2.1 | Sắc đồ dung dịch mẫu trắng xác định độ chọn lọc 18 Hinh 2.2 | Sắc đồ dung dịch terazosin hydrochlorid chuan is Hinh 2.3 | Đường chuẩn định lượng terazosin hydrochlorid 19 Hinh 2.4 | Sắc đỗ dung địch terazosin hydrochlorid chuan 23
Hinh2.5 | Sac dé dung dich terazosin hydrochlorid thir 23 Hinh 2.6 ' phả [R của mẫu terazosin hydrochlorid chuẩn 24 Hinh 2.7 | Phd IR cla mau terazosin hydrochlorid thir 24
Hinh 2.8 ' Sắc đồ dung dịch mẫu trắng xác định giới hạn của I- 36 [(tetrahydro-2-furanyl)carbonyl]piperazin Hình 2.9 | Sắc đồ dung dịch mẫu chuẩn I- a [(tetrahydro-2-furany!)carbonyl ]piperazin Hình 2.10 | sắc đồ dụng địch mẫu thử terazosin hydrochlorid xác định | so I- [(tetrahydro-2-furanyl)carbony] |piperazin
Hinh 2.11 | Sa đồ dung dịch mẫu trắng xác định tạp liên quan 30
Hinh 2.12 | Sa đồ dung dịch mẫu thử xác định tạp liên quan 31
Trang 4DAT VAN DE
Ngày nay bệnh tăng huyết áp là một bệnh phỏ biến trên toàn thể giới Tï lệ
người mắc bệnh tăng huyết áp rất cao Theo nghiên cứu của TS BS Trương Quang Bình [2] năm 2009 tại Hoa Kì có 50 triệu người mắc bệnh, ở các nước phát triển tỉ lệ là 20-25%, các nước đang phát trién ti lé 1a 11-15% Ở nước ta hiện nay theo ước
tính tỉ lệ tăng huyết áp hiện vào khoảng 16% và đang có xu hướng gia tăng nhanh chóng Toàn thể giới là l tỷ người tăng huyết áp Hảng năm trên thế giới có
7,1 triệu người chết vi bệnh tăng huyết áp, ngoài ra bệnh còn gây ra hàng loạt những
biến chứng trắm trọng khác như tai biến mạch máu não, suy tim, suy thận , Không
chỉ có thể bệnh còn ảnh hưởng tới chất lượng cuộc sống cá nhân, gia đình và xã hội
Chính vì thể bệnh tăng huyết án đỗi với sức khỏe là vấn đẻ ngày cảng được xã hội
quan tâm, nhu câu về thuốc chồng tăng huyết ấp ngày càng lớn
Bệnh tăng huyết áp là một bệnh mạn tỉnh cần phải được điều trị lâu dai, vi the
chỉ phí cho điều trị là rất cao Trong khi đó, ở nước ta phản lớn các chế phẩm vả
nguyên liệu thuốc chẳng tăng huyết áp chủ yếu được nhập từ nước ngoài, giá cả rất
can Đặc hiệt, các chế phẩm cla terazosin hydrochlorid chưa được sản xuất ở Việt
Nam
Với mục tiều góp phản tạo ra các chế phẩm chất lượng tốt đồng thời hạ giá
thành sản phẩm, việc nghiên cứu tổng hợp để sản xuất nguyên liệu làm thuốc trong
nước thay thể các nguyên liệu nhập khẩu đặc biệt được chủ trọng Dóng góp vào
vẫn để này, Bộ môn Hóa được - Trường đại học Dược Hà Nội đã tổng hợp thành
công một trong các nguyên liệu thuốc chống tăng huyết áp đó là terazosin hydrochlorid Để nguyễn liệu này được đưa vào sản xuất nhằm tạo ra các dạng bảo
Trang 5chúng tôi tiền hành thực hiện đẻ tài “ Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng
cla terazosin hydrochlorid” với 2 mục tiểu:
1 Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng và phương pháp kiểm nghiệm nguyễn liệu
terazosin hydrochlorid
Trang 6Chuong 1: TONG QUAN
1.1 VAI NET VE TERAZOSIN HYDROCHLORID ø Công thức phân tử: C;¿H;zN:O:.HCI.2H;O,
Khôi lượng phân tử: M = 459,92 g/mol
® Cơng thức cầu tạo [H3, [15], [19], [20] N ok 9 *HCi*2H,0 N N tt 0 ) —
se Tên khoa học: l-(4-amino- 6,7-dimethoxy-2-quinazolinyl}-4-(tetrahydro-2- furoyl) piperazin monohydrochlorid dehydrat
ø Dược động học [3], [L7]
- Hắp thu: Hắp thu ít qua đường tiêu hóa do chuyên hỏa qua gan lân đâu, nên sinh khả dụng đường uống thắp
- Terazosin được chuyển hóa trong gan, một trong những chất chuyển hóa được ghi nhận là có hoạt tính chống tăng huyết áp Thời gian bán thải trong huyết tương là khoảng l2 giờ Terazosin hydrochlorid được thải trừ trong phần, qua đường mật và trong nước tiểu ở dạng thuốc không bị chuyển hóa và chất chuyển hóa
e Cơ chế tác dụng [3], [14], [17]
Terazosin ire ché chon loc receptor a, - adrenergic
Trang 7® Tác dụng khong mong muon [3], [8], [12], [14]
- Hay gây hạ huyết áp liễu đầu: Bệnh nhân xỉu đột ngột khi dùng liêu đâu lớn
hơn 2 mg, nên bắt đầu liễu thấp (uỗng 0.5-1 mg/lắn) năm ngay sau uống
- Nhẹ và thoáng qua: Ngủ gà, hạ huyết áp tư thể, mệt mỏi, nhủ, nhịp nhanh,
đánh trỗng ngực, đau ngực tăng cân, thở nông
- Hiểm: Dau co, nhìn mờ, nghẹt mũi, đau dạ dày, giảm khoái cảm, bất lực
e Chế phẩm [3], [9], [14]
- Hiện nay trên thị trường Việt Nam mới chỉ có các chế phẩm terazosin hydrochlorid của nước ngoài Sau đây là một số chế nhằm đang lưu hành ở Việt Nam:
Bảng 1.1: Một số chế phẩm của terazosin hydrochlorid dang
lưu hành ở Việt Nam
Chế phẩm Dang bao ché “Nha san xuất Số đăng kỉ
: Viennén img, | Abbott Laboratories., Ltd Hytrin VN-7756-03 2 mg, 5 mg - Anh Hytrin Abbott Australia Pty., Vién nén | mg, 2 mg VN-5719-01 starter Ltd - Ue Setegis Vién nén | mg, 2 mg, Epis Pharma., Ltd - oe sử " VN 9043-04 3 mg, 5 mg, 10 mg HUNGGARY
Korea United Pharm Inc
Teranex Vién nén 2 meg VN 0456-06
- Hàn Quốc
e Liễu dùng [3|, [8] [12], [14], [17]
Tăng huyết áp: Ì mg lúc đi ngủ, có thể tăng liều hàng tuần đến khi đạt liêu
điều trị thưởng từ 1-5 mg, ngảy 1 lẳn
Phi đại lành tính tuyến tuyên liệt: mg, lúc đi ngủ, duy trì 5-10 mg, ngày Ì
a
Trang 812 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG TERAZOSIN
HYDROCHLORID
1.2.1 Phé héng ngogi (IR) [5], [13|, [15|, [20]
- Phổ hồng ngoại của chế phẩm phải phù hợp với phổ hồng ngoại của
terazosin hydrochlorid chuẩn Làm film voi KBr - Ung dung: Dinh tinh
1.2.2 Phương phản HPLC [5], [13], [15], [20]
Thời gian lưu của pic chính trong sắc kí đồ của dung dịch thử phải tương đương với thời gian lưu của pic chính thu được từ sắc đỏ của dung dịch chuẩn
- _ Điều kiện sắc ki: + Cột: C8 (150 x 4,6 mm; 5 pm)
+ Pha động: Dung dịch đệm citrat ; acctonitril (84:16)
+ Tốc độ dòng: 1,1 ml/phút
+ Thời gian phân tích: 10 phúi
+ Thể tích tiêm mẫu: 20 ul
+ Bước sóng: 254 nm
Dung dịch đệm citrat: Hòa tan l2 g natri citrat dihydrat va 31,2 g acid citric
monohydrat trong 1,95 L nước Điều chỉnh bằng acid citrie monohydrat hoặc natri
citrat tới nH 3,3 + 0,1 Thêm nước cho vừa đủ 2 L và trận đều
- Yêu cấu: Hàm lượng terazosin hydrochlorid phải năm trong khoảng 98,09% - 102,09 của C¿H›;zN:O¿.HCI tính theo chế phẩm khan
1.2.3 Phản ứng cia ion CT [5], [13], [15], [20]
Thém 5 giot AgNO, 5% vào dung dịch terazosin hydrochlorid 0,1 2 trong 10 ml dung dich methanol - nude (1:1) sé xudt hién két tha mau tring, tia nay tan trong dung dich NH,OH 6 N nhưng không tan trong dung dịch HND)+
- Ứng dụng: Định tỉnh
1.3.4 Phương pháp chuẩn dé do thé [5], [13], [15], [20]
- Chuẩn độ bằng NaOH 0,1 M Xác định điểm kết thúc bằng chuẩn độ do thé
Trang 913 MOT SO PHUONG PHAP PHAN TÍCH SỬ DỤNG TRONG KHÓA LUAN
1.3.1 Phổ hấp thy hong ngoai (IR) [4], [6] 13.1.1, Vai nét vé phé hap thu hong ngoại
Bức xạ hẳng ngoại bắt đầu từ vùng nhìn thấy đến vùng vi sóng, được kéo dài
tir 0,5 - 1000 um Tuy nhiên người ta quan tâm và sử dụng nhiều bức xạ thuộc vùng
| - 25 um
Năng lượng của bức xạ hồng ngoại không đủ làm thay đổi trạng thái năng
lượng của electron mà chỉ đủ để thay đổi trạng thái đao động nên phố [R còn được
gọi là phd dao dong
Trong phân tử, khi nhóm nguyên tử nào đó hấp thụ năng lượng và thay đổi
trạng thái dao động thì tạo nên một dải hấp thụ (đỉnh hap thy) trên phố IR
Dựa vào sự tương quan giữa nhóm nguyên tử và dai hap thụ, người ta có thể
thông qua sự có mặt của dải hắp thụ đẻ nhận biết một nhóm chức nào đỏ
Có nhiều nhóm chức có dải hắp thụ đặc trưng, đây là cơ sở cho việc phân
tích cầu tric bang phé IR
Trong vùng từ 1000 - 6000 cm”, cé nhiéu dinh hap thụ nhưng khó gắn cụ thé
cho một nhóm chức nào đó, tuy nhiên sự có mặt của tập thể nhóm chức giúp chúng ta định tỉnh, nhận điện một chất
13.1.2 Ung dụng phổ hỗng ngoại
e Phổ hông ngoại cho thông tin về nhóm chức (dựa vào đỉnh hắp thụ tương
ứng với đao động của nhóm chức đó), góp phần vào việc nghiên cứu cấu trúc nhân
tử
® Phuong pháp quang phỏ IR được dùng chủ yếu trong việc định tỉnh các
chất hữu cơ Việc định tính dựa vào sự phủ hợp giữa phỏ chất thử với chất chuẩn
tiên hành đẳng thời hoặc phổ chuẩn cho sẵn trong sách tra cứu hoặc thư viện pho
Trang 101.3.1.3 Một số chủ ý khi ghỉ và xử lý phố hông ngoại
Không có qui tắc nghiêm ngặt nào trong biện luận phổ IR, tuy nhiên có một số yêu câu đẻ ra trước khi biện luận như sau:
- Phổ phải có độ phân giải và cường độ thích hợp
- Chất đo phải tỉnh khiết
- Thiết bị phải được chuẩn héa đúng số sóng (tắn số, bước sóng) thường với bản film polystyren chuẩn (có thể kết hợp kiểm tra độ phẫn giải)
- Chuẩn bị mẫu đo phải thực hiện đúng kĩ thuật, nễu đùng đến dung môi thì
cần phải ghi rõ tên dung mỗi, nằng độ và hề dày cốc đo
- Cin chủ ÿ các đỉnh yếu (như là đỉnh của alkyl và nitril) nếu cần thiết phải
ghi lại phê với nồng độ cao hơn
1.3.3 Vải nét về sắc kí lũng hiệu nang cao (HPLC) 1.3.2.1 Dinh nghia [4], {6}, {1 6), [18]
HPLC là một kĩ thuật tách trong đó các chất phân tích đi chuyển qua cột
chứa các hạt pha tĩnh Tốc độ di chuyển khác nhau liên quan đến hệ số phân bố của
chúng giữa hai pha, tức là liên quan đến ái lực tương đối của các chất này với pha
tĩnh và pha động
1.3.2.2 Cae théng sé dae trung cho sac ki [4], [6], [16], [18]
* Thai gian luru (tg)
Thời gian lưu là thời gian cắn thiết (phút, giây) để một chất tan dịch chuyển
tử lúc nó được nạn vào đầu cột sắc kí đến thời điểm được phát hiện ở nông độ cực đại
Việc so sánh thời gian lưu của chất phân tích trong mẫu thử và mẫu chuẩn
Trang 11Trong đá:
W: Chiêu rộng day pic
Wo: Chiều rộng pic đo ở nữa chiều cao của pic
Yêu cẩu cụ thể về số đĩa lý thuyết sẽ được quy định trong từng phép phan
tích Thông thường một cột sắc kí dùng phân tích thường có N > 1000 * Độ phân giải Là đại lượng đo mức độ tách hai chất liên kẻ trên một cột sắc kí 2(f; —f, LI77ứ; —t,) 4 i’ +Ƒ, : R ae +H 1⁄ [1] Trong đó:
to, ty: thời gian lưu của hai pic liên kê nhau (t; > tị)
W›, W,: độ rộng các pic trong img do o cac day pic
Wtgzz, Winn: 4 rộng pic tương ứng đo ở nửa chiều cao các pic
Đổ tách riêng hai chất, yêu cầu R, tôi thiểu phải đạt 1,5 (khi hai pie có độ lớn
củng cỡ)
1.3.3.3 Sắc ki nhân bỗ pha liên két [5], [15]
a Pha tinh
Loại pha tĩnh phổ biến nhất được chế tạo từ silic đioxyd (silica), nhém -OH
trên bẻ mặt silica phản ứng với dẫn chất clorosilan tạo dẫn chất
siloxan
[" CH, CHa §
=T OH +c Ï R = j oO oo + HO
R có thể là mạch thắng có 18 hoặc 8 carbon, hoặc các nhóm chức hữu cơ
khác như: amin mạch thăng nitril, hydrocarbon thơm
Dựa vào gốc R người ta chia làm 2 nhóm: - Pha tĩnh không phần cực:
Trang 12Octy! -CH;-(CH;„-CH;,
Phenyl -CH:-(CH;);-C,H:
- Pha tinh phan cyc: cyano, amino, diol
Sắc kí pha thuận, sắc kí pha đảo: Hai dạng sắc kí này khác nhau phụ thuộc vào độ phân cực tương đổi của pha động và pha tĩnh
Sắc kí pha thuận: R là nhóm khá phân cực như amin, cyano.,.dung méi it phần cực như hexan
Sắc kí pha đảo: R là một nhóm ít phân cực như Cy, C)s hay 1- phenylpropyl
và dung mỗi nhân cực như methanol, acetonitril
b Dung mỗi sử dụng trong sắc kí pha đảo
Ba dung mỗi thường dùng trong sắc kí pha dao la acetonitril (MeCN),
methanol (MeOH), va tetrahydrofuran (THF)
Pha động thường là hỗn hợn 1-2 dung mỗi trên với nước hoặc dung dịch đệm
nhằm đảm bảo quá trình tách mẫu phân tích cụ thể
Hon hợp thường dùng nhất là MeCN với nước MeCN có ưu điểm là độ nhớt
thấp nên có thể sắc kí ở áp suất thấp, mặt khác có thé do dé hap thy UV ở 190 nm
Mcthanol được lựa chọn thứ hai vì độ nhớt cao hơn và giới hạn đo ở 205 nm
THF it ding hon vi dé Gn dinh kém hơn (dễ bị axy hóa), cân băng với pha
tĩnh chậm hơn
!.3.2.4 Các nhương phún định lưựng thường dùng trang HPLC [4j, [6| Trong HPLC, hay dùng các phương pháp sau:
œ Chuẩn ngoại
œ Chuẩn nội e Thêm chuẩn
e Chuẩn hóa điện tích
Trong đó, các nhương phán được sử dụng trong đẻ tài là phương pháp chuẩn
Trang 13lũ
a Phương phản chuẩn ngoại
Sơ sánh trực tiếp độ lớn tín hiệu (diện tích hoặc chiều cao pic) thu được của
chất phân tích, Đó là một phương pháp phố biến trong sắc kí, Phương pháp này yêu cau tién hành sắc kí dung dịch chuẩn vả thử trong cùng điều kiện Dung dịch chuẩn và thử có nẵng độ xắp xỉ nhau (chuẩn hóa một điểm) hoặc dung dịch thử có nông độ
nằm trong khoảng nông độ của dung địch chuẩn (chuẩn hóa nhiều điểm) Trong phương pháp chuẩn hóa một điểm, nông độ của mẫu thử được tính như sau:
=8:
tẲt
Trong đó:
C,,C.: Néng độ mẫu thử và mẫu chuẩn,
S, Sc: Dién tich (chiéu cao) pic của mẫu thử và mẫu chuẩn
Với phương pháp chuẩn hóa nhiều điểm, phương trình đường chuẩn phải
được xác định đầu tiên, và được mỗ tả băng đường chuẩn thu được từ các điểm đo,
cùng phương pháp hài quy tuyến tính
y=ax +b Trong đỏ:
b; Là giao điểm của đường chuẩn với trục tung
a: Độ đốc của đường chuẩn
Trong trường hợp nảy, nông độ mẫu thử được tính theo công thức sau:
y-6 a
Độ lớn của pie mẫu thử S„ phải nằm trong khoảng giữa độ lớn của pic chuẩn
thắp nhất và cao nhất bởi vì đường chuẩn được xác định trong vùng nông độ đã
nghiên cứu này,
b Phirong nhún thêm chuẩn
Dung dịch mẫu thử được thêm một lượng xác định chất chuẩn Các pic thu
được của hai dung dịch mẫu thử và mẫu thử đã thêm chất chuẩn phải được đo trong x=
cùng điều kiện sắc kí Phương pháp thêm chất chuẩn có thể được thực hiện một, hai
Trang 14H
thêm chất chuẩn, nằng độ chưa biết của mẫu C, được tính băng sự chênh lệch nằng
độ Ác (lượng chất chuẩn thêm vào} và độ tăng của độ lớn pic As theo công thức:
C= Sa
As
® LUụ điểm của phương pháp thêm chuẩn:
- Độ chỉnh xắc cao, loại trừ được các yếu tổ ảnh hưởng khác
- Sự thay đổi về nhiệt độ, áp suất đã được mô tả bù trừ trong đỗ thị chuẩn và
không ảnh hưởng đến kết quả đo đạc, không bị ảnh hưởng của quá trình xử lí mẫu
® Nhược điểm:
- Đôi hỏi nhiều thời gian phản tích vì phải chuẩn hóa đổi với từng mau ma
không chuẩn hóa định kì như phương pháp chuẩn ngoại e Phương pháp chuẩn héa diện tích
Kỹ thuật nảy đơn giản, nhưng trong HPLC thì việc ứng dụng bị hạn chế,
thường hay được sử dụng trong sắc kí khí Nó đôi hỏi mọi câu tử trong hỗn hợp chất
cản phãn tích đêu được rửa giải và được nhát hiện
%* X= _ “4 ening
A, +A, +A,
Trong dé
% X: Gia tr] % clla cau tir X trong hén hgp X, Y, Z
A,, Ay, Az: Dién tich pic cla cau ti X, Y, Z
Trong HPLC, công thức này chỉ đúng khi sy dap img cua detector trén các
cầu tử X, Y, Z là như nhau Thực tế, hay áp dụng khi xác định tạp chất liên quan mà
Trang 1512
Chương 2: ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP
NGHIÊN CỨU
2.1 NGUYEN VAT LIEU, THIET BI
2.1.1 Đối trợng nghiên cứu
- Mẫu thử: Nguyên liệu terazosin hydrochlorid được tổng hợp tại bộ môn Hóa
được - Trường đại học Dược Hà Nội
- Chất đổi chiều: Terazosin hydrochlorid — hàm lượng 99.4% - độ ẩm 7,54% (Rohdea - Trung Quốc)
4.1.2 Nguyên vật liệu
- Acetomitril (Merck - Đức - loại HPL.C]
- Acid citric monohydrat, natn citrat dihydrat, natri hydrophosphat dihydrat, kali
dihydrophosphat, methanol, kali bromid, acid sulfuric diac, acid nitric, acid acetic,
amoninitric, acid hydrochlorid (merck — Đức — loại PA}
2.1.3 Thiét bi
- Cân phần tích Metller (Thụy Sĩ) - Cân kĩ thuật Sartorius (Đức)
- May do pH Metrohm (Thyy Si) - May siéu 4m Bransonic (M9)
- Máy lắc xoáy (Hà Lan)
- Tủ sấy chân không Shellab (Mỹ)
- Hệ thông HPLC Thermo Finnigan (Mỹ): + Bộ phận loại khí SCM 1000,
+ Bơm cao án P 4000 + Detector UV - DAD 6000,
+ Phan mém diéu khién ChromQuest - Bộ màng lọc, dau lọc đường kinh lễ lọc 0,45 tam
- Bình định mức, pipct, chén sứ, và dụng cụ thủy tỉnh đạt tiêu chuẩn dùng cho
Trang 1613
2.2 NOI DUNG NGHIÊN CỨU
s* Xây dựng các chỉ tiêu chất lượng cho nguyên liệu terazosin hydrochlorid s* Xây dựng phương pháp thử để đánh giá các chỉ tiêu chất lượng đưa ra
* Ứng dụng các phương pháp đã xây dựng để kiểm tra, đánh giá chất lượng
của nguyên liệu terazosin thử nhằm hoàn thiện qui trình tổng hợp
2.3 PHƯƠNG PHÁP THUC NGHIEM
1⁄ Tính chất
Tiên hành băng cảm quan
2/ Phương pháp phổ hẳn thụ hỗng ngoại
Theo chỉ dẫn của Dược điển Việt Nam IV, phụ lục 4.3 Ứng dụng: Định tỉnh
3⁄/ Mắt khỗi lượng do làm khô
Tiên hành theo chỉ dẫn trong Dược điển Việt Nam IV, phụ lục 9.6
4/ Phương phán HPLC
Tiến hành theo chỉ dẫn dược điển Việt Nam IV, phụ lục 5.3
- Phương pháp chuẩn hóa diện tích: Xác định tạp chất liên quan
Nguyên tắc đảnh giá: Dựa vào %% điện tích pic của từng tạp thành phản so với tổng diện tích của cdc pic thu trên sắc đỗ trừ pic dung mỗi
- Phương pháp so sánh với chuẩn: Định lượng, tạp chất có chất chuẩn tạp
- Phương pháp thêm chuẩn: Xác định tính đúng của phương pháp định lượng
4/ Tro sulfat
Tiên hành theo chỉ dẫn trong Dược điển Việt Nam IV, phụ lục 9.9, phương
pháp 2
Nguyên tắc: nung một lượng chính xác nguyên liệu đã làm ẩm với acid
sulfuric và tro hóa đến khỏi lượng không đổi ở điều kiện qui định (chênh lệch giữa 2 lần cần kế tiếp không vượt quá 0,5 mg) Tính % cẵn thu được,
Gy Kim loai nding
Tién hanh theo chi din trong dược điển Việt Nam IV, phụ lục 9.4.8, phương
Trang 17l4
Ngujyên tắc: So sánh màu của 2 ông thử và chuẩn được tiền hành đông thời
theo chỉ dẫn thử giới hạn kim loại nặng Qua đó xác định được giới hạn kim loại
nặng có đạt hay không dat
?⁄ Định lượng: Sử dụng phương nhán HPLC
Lựa chọn điều kiện sắc kí
Tiên hành trên máy sắc kí lỏng hiệu năng cao
Khảo sát thực tÉ dựa vào tải liệu tham khảo và lựa chọn điều kiện sắc ki phù
hợp: Bước sóng, pha động, cột, tốc độ dòng, thẻ tích tiêm mẫu, thời gian phân tỉch
b Thẩm định phurơng pháp phân tích
Phép phân tích được đánh giả theo các chỉ tiểu sau: * Tỉnh chụn lạc
Tinh chon loc (selectivity) cla ] phương pháp phản tích là khả năng phân
biệt các chất trong mẫu thử dùng khi tách hoặc định lượng hai hoặc nhiều thành
phan trong một hỗn hợp của phương pháp đó
Cách đánh giá: Tại vị trí ứng với tụ của terazosin hydrochlorid mẫu trắng
không xuất hiện pic
* Khoảng nẵng độ tuyỄn tỉnh
Dé dam bảo phép định lượng cho kết quả chỉnh xác, thường chọn khoảng
nông độ có sự phụ thuộc tuyến tính giữa đáp ứng phân tích (diện tích pic) với nồng
độ chất phân tích Triển khai sắc kí 5 — 7 nỗng độ của chất phân tích Mối tương quan giữa diện tích pie với nồng độ chất phân tích được biểu điễn bằng phương
trình hỏi qui và hệ số tương quan hỏi qui
Yêu câu đường hỏi qui thu được phải có dạng đường thăng và giả trị hệ số tương quan xắp xi 1
* Độ chính xác của ph:ưững nhân
Tiên hành phân tích ở một mức nồng độ năm trong khoảng nông độ tuyến tính Tiển hành 5 mẫu thử độc lận, đánh giá độ lặp lại của kết quả thu được thông
Trang 18IS
Yêu cầu chênh lệch kết quả giữa các mẫu thử, biểu thị bảng độ lệch chuẩn
tương đối không được lớn hơn 3 %
* Độ đúng của phương nhản
Xác định bằng nhương pháp thêm chuẩn
Nguyên tắc: Thêm từng lượng chỉnh xác terazosin hydrochlorid chuẩn vào
mẫu thử Tính độ tìm lại lượng chất chuẩn đã thêm vào thông qua tương quan giữa
nông độ chất chuẩn thêm vào với chênh lệch của điện tích pic thu được ở dung dịch
thử sơ với dung địch hỗn hợp (thử + chuẩn)
Cách xác định:
- Dung địch thử: Mẫu thử được pha thành dung địch có nồng độ năm trong khoảng tuyến tính
- Dung dịch thử + chuẩn: Mẫu thử + một lượng xác định chất chuẩn
- Goi $7, Stic 14 diện tích pic thu được lan luot cua dung dịch thử và dung
địch thử + chuẩn =>(Sy„c -8y) là phần điện tích pic tương ứng của lượng chất
chuẩn thêm vào Từ đó ta sẽ tính ra được %4 tìm lại của terazosin hydrochlorid
chuẩn thêm vào:
%c “im
- Khảo sát với mức thêm vào của chất chuẩn là 10% và 209 Và thực hiện
với 5 phép thử riêng biệt
* Độ ấn định của terazosin hydrochlorid trong dung méi pha động
Để đánh giá độ ổn định của terazosin hydrochlorid trong quá trình định
lượng Chúng tôi tiến hành khảo sát độ ổn định của terazosin hydrochlorid trong điều kiện sắc kí đã lựa chọn
Xác định độ ôn định bằng cách pha một dung dịch chuẩn có nồng độ nằm trong khoảng tuyến tính Cử sau I giờ thì tiêm lặp lại dung dịch một lẫn, tiễn hành
tiém 5 lần
Trang 19lũ
Chương 3 THỰC NGHIỆM, KÉT QUÁ VÀ BÀN LUẬN
3,1 XÂY DỰNG TIỂU CHUAN CHAT LUQNG VA PHUONG PHAP KIEM
NGHIEM NGUYEN LIEU TERAZOSIN HYDROCHLORID
3.1.1 Tinh chat
+ Tiển hành: Lẫy một lượng bột trải trên một tờ giấy, dân đẻu, mỏng Cảm quan
cho thấy bột kết tỉnh trăng, không mùi
+ Yêu cảu: Bột kết tỉnh trăng hoặc vàng nhạt, không mùi,
> Kết luận: Đạt yêu cầu
3.1.2 Mat khoi lượng do làm khô
+ Tiển hành: Dùng chén cân thủy tỉnh có nắp mài làm bì đựng mẫu thử, Làm
khô chén đến khối lượng không đổi ở điều kiện chân không, 105”C trong 3 giờ
Dem can chén được khỏi lượng mạ Cần ngay vào các bì này một lượng chính xác
khoảng 2.0 g mẫu Sau đỏ cân cả mẫu và bì được (mu), lượng mẫu được dàn mỏng
thành một lop có độ dày không quá Š mm
Tiên hành làm khô mẫu trong chân không ở 105”C trong 3 giờ Cân (m) Thực hiện với hai mẫu thử song song
Trang 2017
Dựa vào đặc tính của terazosin hydrochlarid, qua tham khảo tải liệu và khảo
sát thực tế, chúng tôi tiễn hành sắc kí theo điều kiện sau: - Cot: C8 (150 « 4,6 mm; 5 um) - Pha động: Dung dịch đệm citrat: acetonitril (84:16) - Tắc độ dòng: 1,10 ml/phút - Thời gian phần tích: LŨ phút - Thẻ tích tiêm mẫu: 20 pl - Bude song: 254 nm 3.1.3.2 Đảnh gid phirong phap 1⁄/ Độ phù hợp của hệ thẳng sắc kí
Tiên hành sắc kí lặp lại 6 lan một dung dịch chuẩn theo các điều kiện đã lựa
chọn Kết quả được trình bay & bang 2.1
Bảng 2.1: Kết quả đánh giá độ phù hợp của hệ thống STT Diện tích pic (mAU.giây) Thời gian lưu (phút) |g 5471635 5.917 a | 5483525 | 5,918 3 5470386 5,855 4 5462649 5,817 § 5482223 5,858 6 5457538 5,807 TB 5472326 5,862 RSD% 0,178 0,739
® Nhân xét: Đáp ứng thu được (diện tích pic, thời gian lưu) sau 6 lân tiêm
lặp lại một dung dịch chuẩn có độ lệch chuẩn tương đối RSD là 0,178 %4 (điện tích
Trang 2118
2/ Tinh chon floc
Chuẩn bị 3 mẫu trăng không có terazosin hydrochlorid và 3 mẫu thử có terazosin hydrochlorid nông độ L0 ug/ml
Tiên hành phân tích trong điều kiện sắc kí nhu myc 2.2.1.3 So sánh sắc kí do
Trang 2219
e Nhdn xét; Trén sic ki dé mau tring tai vị trí trơng ứng với thời gian lưu
của terazosin hydrochlorid (tạ = § - 7 phút) không xuất hiện pic lạ, pic can déi, sac nét, tách riễng biệt Vậy phương pháp phân tích có tính chọn lọc cao
3/ Khodng néng dé tuyén tinh
Chuan bj mét diy 5 dung dich chuan co néng độ chỉnh xác khoảng 8,0; 9,0;
10,0; 11,0; 12,0 pg/ml
Tién hanh sac ki & điều kiện như trên Mỗi dung dịch chuẩn được tiễn hành 2 lần Kết quả thu được ở bảng sau:
Bảng 2.2: Kết quả khảo sát khoảng tuyến tinh Nong dé (g/ml) 8 g lũ 11 12 Dién tich pic | 4671914 | 5061976 | 5472326 | 5894460 | 6298373 (mAU.giãy) PT hỗi qui Y = 408540x + 1000000 Hệ số tương quan r =(I 9999 68500000 — 6000000 1 — ¬ 5500000 - L Ð 5000000 _— S ©& 4500000 - =— =1= 4000000 +——————————+ ; : ' l 8 §- i0 11 12 13 Nong d6 (ug/ml)
Hình 1.3: Đường chuẩn định lượng terazosin hydrochlorid
ø Nhân xét: Với điều kiện sắc kí đã chọn, trong khoảng nồng độ khảo sát,
Trang 2320)
4/ Dé chính xúc của phuong phap
Tién hanh 5 phép thử song song trên một mẫu che phim terazosin
hydrochlorid bằng cách: Cân một lượng chính xác khoảng 50 mg chế phẩm, cho
vào bình định mức 100 ml Thêm pha động lắc tan hoàn toản, sau đó hỗ sung băng
nha động vừa đủ đến vạch, lắc đều Lấy 1,00 ml dung dich này cho vào bình định mức 50 ml, Thêm pha động vừa đủ đến vạch, lắc đều
Tiến hành sắc kí song song với mẫu chuẩn Kết quả được trình bày trong bang sau: Bảng 2.3: Kết quả khảo sát độ lặp lại của phương pháp phân tích (trong ngày) STT 1 2 3 4 5 Khôi lượng (mg) 0/0504 | 0/0507 | 0/0499 | 0/0498 | 0.0499 Diện tích (mAULI.giây) | 5418249 | 5442059 | 5340567 | 5335237 | 5396159 Hàm lượng(%) 99,73 99,57 99,28 99,39 101,31 RSD % 0,408 Bảng 2.4: Kết quả khảo sát độ lặp lại của phương pháp phân tích (trong ngày phần tích khác) SIT l 2 3 4 3 Khôi lượng (mg) 0.0503 0,0506 0,0499 0,0501 0,0498 | Diện tích (mALI.giãy) | 5410657 | 5439875 | 5346532 | 5406743 | 5339743 Hảm lượng(%} 99,78 99,73 99,39 100,11 99,46 RSD% 0.286 ® Nhân xét: Kết quả ở bảng 2.3 và 2,4 cho thấy ở nông độ khảo sát, độ lặp
lại của 5 phép thử song song là khá tốt, RSD là 0,408 và (1,286 nhỏ hơn giới hạn
quy định (33), chứng tô phương pháp đạt yêu cầu vẻ độ lặp lại trong ngày và trong
Trang 242l
5/ Dé ding
© Tién hành:
- Pha dung dịch chuẩn: Căn chính xác khoảng 5Ú mg terazosin hydrochlorid chuẩn vào bình định mức 100 ml, thêm pha động vừa đủ đến vạch, lắc đều Lấy
1,00 mÌ dung dịch này cho vào bình định mức 50 ml, thêm pha động đến vạch, lắc
đều
- Pha dung dịch thử: Cân một lượng chính xác khoảng 50 mg chế phẩm, cho
vào bình định mức 100 ml Thêm pha động vừa đủ đến vạch, lãc đều
- Lấy 1,00 mÌ dung dịch thử + V ml dung dịch chuẩn (ứng với 2 mức thêm
vào của chất chuẩn là 10% và 209%) cho vào bình định mức 50 ml, thêm pha động
đến vạch, läc đều Tiễn hành sắc kí Kết quả được trình bày ở bảng sau;
Bảng 2.5: Kết quả khảo sát độ đúng của phương pháp
biết Luong thém 14 10% (1 pe) Luong thém 14 20% (2 pg)
Lượng tìm lại (iug) %4 tìm lại Luong tim lai (ug) % tìm lại | 1,015 101,5 2,009 100,45 2 1,005 100,5 2,023 101,15 3 1,012 101,2 2,022 101,10 4 1,004 100,4 2,024 101,20 5 1,011 101,1 2,006 100,30 TB 1,009 100,90 2,016 100,80 ® Nhân xét: = Kết quả ở bảng trên chứng tỏ phương pháp có độ đúng cao với tỉ lệ tìm lại 100.3 đến 101,2 %4
6/ Độ ẫn định của terazosin hydrochlorid
Pha 1 dung dich cd néng d6 10 pg/ml, tiến hành sắc kỉ ở điều kiện như trên
Cứ sau l giờ tiêm lặp lại một lẫn, trong vòng 5 giờ Kết quả được trình bày ở
Trang 2522 Bảng 2.6: Kết quả độ ôn định của terazosin hydrochlorid STT | Thdigian (gid) | DiệnHchímAU3) P (%) i 0 5406717 2 5419708 0,240 3 2 5390552 0,299 4 3 5400357 0,118 5 4 54013449 - 0,099 6 5 5397832 0,164
Trong dé: P(%): Phan tram chénh lệch đán ứng của pic terazosin hydrochlorid sau thời gian bảo quản so với mẫu mới chuẩn bị
® Nhận xét?
Kết quả nghiên cứu cho thấy nông độ terazosin hydrochlorid trong mẫu bảo
quản thay đổi không đáng kẻ so với mẫu mới pha P (%) < 2% Như vậy terazosin
hydrochlorid ấn định trong thời gian phân tích
® Nhận xét chung;
Chương trình sắc kí đã lựa chọn phân tích terazosin hydrochlorid được đánh
giá thông qua tính thích hợp của hệ thông sắc kí Độ lệch chuẩn tương đối của các
thông số sắc ki: Thời gian lưu, diện tích pic của chất phản tích đều nhỏ hơn 2%,
chứng tỏ hệ thẳng sắc kí có tính thích hợp cao Phương pháp được thắm định vẻ tính chọn lọc, khoảng nông độ tuyến tính, độ chính xác, độ đúng, độ tìm lại và độ én định cho kết quả tốt chứng tỏ phương pháp nảy phù hợp trong định lượng terazosin hydrochlorid với độ tin cậy cao Ứng dụng điều kiện phân tích nảy, định
lượng mẫu thử terazosin hydrochlorid, kết quả thu được như sau: Lần 1: 99,6% Lân 2: 99,59
Trang 260 300 - +200 200 4 T00 3 = 100 - +100 ty, 4 ` —— lể “i No 0 or T r T TU ra cung a ự qt Ỹ 7 1 ' 0 i 4 6 $ id Minutes : a a ` " Hình 2.4: Sắc đồ dung dịch terazosin hydrochlorid chuẩn 00 — 200 + 200 a 3 E to - -tũ0 a4 ——te | - rũ ũ 2 go AR gM er 6 tũ httrrres Hình 1.5: Sắc đồ đung dịch terazosin hydrochlarid thử 3.1.4 Định tính * Phương pháp phẳ hẳn thụ hồng ngoại
So sánh phố terazosin hydrochlorid thử với terazosin chuẩn đối chiếu
- Chuẩn bị mẫu: Nghiễn trộn 1-2 mg mẫu thử với 0,3 - 0,4 g bột mịn kali
Trang 27thận và rải đều trong một khuôn thích hợp Nén khuôn có hỗn hợp chất thử, làm 24 thành viên trong suốt bằng dụng cụ thích hợp 4000 - 4 ! |
- Chuẩn bị một mẫu chuẩn đổi chiều song song
- Tiền hành: Mẫu thử và chuẩn đã chuẩn bị ở trên được ghi phổ từ 670 cm với những điều kiện đo như nhau
Trang 2825
@ Nhan xét:
Từ kết quả ở hình trên ta thấy phỏ IR thu được & mau thir va chuan tring
nhau, cực đại hấp thụ trong phố của mẫu thử hoàn toàn tương ứng về vị trí tương
đổi như phổ của chất chuẳn
Đỗi chiều với yêu cầu: Phổ IR của mẫu thử phải trùng với phổ chất chuẩn đổi
chiếu trong khoảng bước sóng từ 2,5 tm - 15 pm
> Kết luận: Chế phim IR dương tính với terazosin hydrochlorid
® Phản ứng cia ion CT
Tiến hành như mục 1.3.4
Kết guả: Xuất hiện kết tủa mau tring, tia nay tan trong dung dich NH,OH 6 N
nhưng không tan trong dung dịch acid HNO): ® Phương nhún HPLC'
Tiến hành như trong phản định lượng Kết quả ở hình 2.4 va 2.5 cho thấy tại te = 5,9 phút trên sắc kí đồ mẫu thử có l pie trùng với pic trên sắc kí đồ của mẫu
chuẩn
> Kết luận: Chế pham HPLC dương tính với terazosin hydrochlorid
3.1.5 Tro sulfat
+ Nung một chén sử tới đỏ trong lò nung đến khối lượng không đổi, Làm nguội trong bình hút ẳm Cắn trên cân phân tích ta được m;
+ Cân một lượng chính xác khoảng 1,00 g terazosin hydrochlorid tha (m,)
cho vào cốc sử Làm ẩm bằng l ml dung dịch sulfurie đặc Đết nóng nhẹ đến khi
mẫu tra hóa hoàn toàn, để nguội, rồi lại làm ẩm với dung dich sulfuric dic va dot nóng đến khi bay hơi hết khỏi trang Sau dé dem nung & 600°C + 50°C đến khi cắn
được vơ cơ hóa hồn toàn, để nguội, đem cân được m
Trang 2936
- Đổi chiều yêu cẩu: Lượng tro sulfat không được quá (0,59%
>_ Kết luận: Đại yêu câu
3.1.6 Kim loại nặng
+ Chuẩn bị dung dịch chuẩn: Lấy 2 ml dung dịch Pb”” chuẩn (20 ng Pb] vào
ống so màu thẻ tích 5Ù ml, thêm nước tới thẻ tích 25 ml, điều chỉnh băng dung dịch
acid acetic 1 N hodc dung dich NH,NO, 6 N tai pH 3 - 4, thêm nước tới the tich 40
mi, tron lin
+ Chuẩn hị dung địch thử: Lượng mẫu thử được tỉnh theo công thức sau:
2,0 1000x L
Cho chất thử vào chén sứ phủ hợp, thêm dung dịch H;SO¿ vừa đủ làm am
chế phẩm, đốt ở nhiệt độ thấp đến khi tro hóa hoàn toàn, thêm 2 ml dung dich HNOQ; và 5 giọt dung dịch H;SO,, đốt đến khi không còn khỏi trăng bay ra nữa
Bem nung ở 500 - 600°C cho tới khi earbon bị đốt cháy hoàn toàn, làm nguội, thêm
4 ml dung dich HCI 6N đậy lại, đun cách thủy 15 phút, mở nắn ra và cho bay hơi
từ từ đến khơ hồn toàn Làm 4m phản căn bảng 1 giọt dung dịch HCI, thêm 10 ml
nước nóng, đun trong 2 nhút, thêm dung dịch NH¿ NO); 6 N cho tới khi dụng dịch có
tính kiểm với giấy qui, thêm nước tới thẻ tích 35 ml, diéu chinh bang dung dich acid
acetic tới pH 3 - 4, lọc, rửa bình với lũ mÌ nước và lọc
Kết hợp nước lọc và nước rửa vào ống so màu thẻ tích 50 ml, thêm nước tới
(Với L: CHứi hạn kim loại nặng (%4)
thể tích 40 ml, trận đều
- Tiển hành:
+ Lay 2 ống thủy tính trong suốt giống nhau vẻ chiều đãi và đường kính Mỗi ông chứa 40 ml dung dịch thử và chuẩn, Thêm vào mỗi bình 2 ml dung dịch đệm
acetat pH 3,5; 1,2 ml dung địch thuốc thử thioacetamid - glvcerin, thêm nước tới
50 ml, trộn đều, để yên 2 phút
+ §o gánh màu trong ông thử và trong ông chuẩn
- Kết quả: Màu trong ông thử nhạt hơn trong ống chuẩn
_—
Trang 30Zt 3.1.7 Giới hạn của I-|(tetrahydro-2-furanyl) carbonyl| piperazin * Điều kiện sắc kí Dựa vào tải liệu tham khảo và khảo sát thực tế, chúng tôi tiến hành sắc kỉ theo điều kiện sau: - Cột: C8 (150x 4,6 mm; 5 tim) - Pha động: Thời gian (phút) H30 (%) ACN (%) Rita giai 0-35 82 18 Đăng dòng 35-40 82-10 18-90 | — Gradient tuyến tính 40-75 10 90 Đăng đỏng 75-80 10-82 90-18 Gradient tuyén tinh 80-100 82 18 Đăng dòng - Tốc độ dòng: 1,5 ml/phút - Thẻ tích tiêm mẫu: 20 pl - Bước sóng: 254 nm * Tiển hành - Dung dịch thuốc thử: Hòa tan 0,2 g 3,5-dinitrobenzoyl chlorid trong 25 ml acetonitril
- Dung dich dém phosphat pH = 7,8: Hoa tan 1,1 ¢ Na;HPO,.2H;0 va 0,78 g
KH;PO, trong 95 mÌ nước, điều chỉnh pll = 7,8 + 0,02 bằng dung dich acid phosphoric đậm đặc hoặc dung dịch natri hydroxyd 10 N, thêm nước vừa đủ đến thé
tích 100 ml, lắc đều
- Dung dich mau trang: Acetonitril
- Dung dịch chuẩn: Cân chính xác 25 mg I-[(tetrahydro-2-furanyl) carbonyl] piperazin cho vào hình định mức 100 ml, thêm acetonitril đến vạch, lắc đều Hút
1,00 ml dung dich này cho vào bình định mức 50 ml, thêm acetonitril đến vạch, lắc
đều
Trang 31- Quá trình dẫn chất hóa: Lấy 5,00 ml mỗi dung dịch mẫu trắng, dung dịch thử và dung dịch chuẩn cho vào các bình định mức 100 ml và tiền hành như sau:
Thêm 5,00 ml dung dịch đệm phosphat pH 7,8; 5,00 ml dung dich thuốc thử Lắc
xoáy l phút Để ở nhiệt độ phòng trong 30 phút Sau đó thêm hỗn hợp acetonitril : nước (1:1) đến vạch, lắc đều
Tiên hành sắc kí hỗn hợp dung dịch mẫu trăng dung dịch chuẩn và dung
địch thử trong cùng điều kiện
Hàm lượng % 1|-[(tetrahydro-2-furanyl)carbonyl|piperazin trong mau thir
được tỉnh theo công thức: Am, Alm ci = Xo = x 100 ¬¬ Trong đủ:
Á„ A, lan lượt là điện tích pic của dung dịch thử và dung dịch chuẩn
m,, m, Min lượt là khối lượng của mẫu chuẩn và mẫu thử,
f., f- lần lượt là độ nha loãng của dung dịch thử và dung dịch chuẩn
Trang 3330
Nhận xét Tại thời gian lưu img với pic của 1-[(tetrahydro-2-
furanyl)carbonyl]piperazin trên sắc đồ của mẫu thử không xuất hiện pic chứng tỏ
không có tạp Vì vậy giới hạn tap chất mẫu thử đạt yêu cầu
3.1.8 Tạp chất liên quan: Phương pháp HPLC * Điều kiện sắc kí Như phản định lượng
+ Chuan bj dung dich thir: Sử đụng dung dịch thử trong mục định lượng
+ Triển khai sắc kí dung dịch thử trong thời gian gap 5 lẳn thời gian lưu của
terazosin hydrochlarid để tắt cả các thành phân trong mẫu thử đều được rửa giải Lượng (94) của từng tạp vả tổng lượng (3⁄4) tạp chất được tỉnh theo công thức sau:
A
Yo timg tap = đi x LOO % tổng = 22T xi00
vA, i=] >4, fxl
Trong đỏ: A; la dién tich cua tap i
5” 4; là diện tích pic của tất cả các pic trừ pic ứng với terazosin
hydrochlorid và pic của dung môi
Trang 3431 q r xo - aul : 75 L 4 ì : l0 | 4 L 200 3 3 ae [PM ì E ; F a -Ủ - ị +4 5 200 200 : 2 1 = 4 7 - l 100 - = r lứu : | ng | 4 oI = 2 ce 7 op xi ~ vi Lủ ơ Đ 10 15 7 15 30 lârr.ie=z
Hình 2.12: Sắc đồ dung dịch mẫu thử xác định tạp liên quan
Trên sắc kí đồ của dung dịch thử ta thu được l pic có tạ = 11,2 phút,
% tep = —— 17487627 + 48738 re _100 = 0.278%
* Doi chiéu yéu cau
+ Các tạp xuất hiện trước pie của terazosin hydrochlorid không được quá
0,3%
+ Các tap con lại không quả 0,1%
+ Tổng các tạp không quá 0.69 > Nếi luận: Mẫu thử đạt
Từ các kết quả thực nghiệm thu được, chúng tôi để xuất tiêu chuẩn và
phương pháp thứ của nguyễn liệu terazosin hydrochlorid như sau:
YÊU CẢU KỸ THUẬT 1⁄ Tính chất: Bột kết tỉnh, màu trắng hoặc hơi vàng
2/ Định tỉnh: Có phản ứng đương tỉnh với terazosin hydrochlorid
3⁄/Mất khi lượng do làm khô: Không quả 9,09%
Trang 3532
3⁄/ Tạp chất liên quan: Tong cdc tap khéng qua 0.6% 6/ Kim logi nang: Khong qua 0,002%
7⁄ Tro sulfat: Khong qua 0,5%
&/ Định lượng: Không được nhỏ hơn 98,09% và không được lớn hơn 102,0%
C¡¿H;:N;O,.HCI tính theo chế phẩm khan PHƯƠNG PHÁP THỨ 1⁄ Tính chất Lấy một lượng bột trải lên một tờ giấy, dàn đều, mỏng, thử băng cảm quan 2/ Định tinh * Phương pháp phổ hấp thụ hẳng ngoại Làm viên với KBr tiền hành theo chí dẫn của Dược điển Việt Nam IV, phụ lục 4.2 Yêu cẳu: Phổ của mẫu thử phải trùng với phổ của chất chuẩn đối chiều * Phương nháp HPLC
Trong sắc kỉ đỗ thu được ở phần định lượng thời gian lưu của pic chính trong sắc kí đỗ của dung dịch thử phải tương đương với thời gian lưu của pic chính thu được từ sắc đỏ của dung dịch chuẩn
* Phản ng của tan CT
Tiên hành theo Dược điện Việt Nam IV, phụ lục 8.1
Yêu cầu: Xuất hiện kết tủa màu trắng tan trong dung djch NH,OH 6 N nhưng không tan trong dung dich HNO
3⁄ Mất khối lượng do làm khö
Tiến hành theo chỉ dẫn của Dược điển Việt Nam IV, phụ lục 9.6, phương
pháp sảy chân không ở 105°C trong 3 giờ 4/ Định lượng: Phương nhân HPLC
* Điều kiện sắc kí
- Cột: CR (150 x 4,6 mm; 5 um)
Trang 3633 - Tốc độ dòng: 1,10 ml/phút - Thời gian phản tích: 10 phút - Thẻ tích tiêm mau: 20 ul - Bước sóng: 254 nm
* Dung dich dém citrat: Hoa tan Ì2 g natri citrat dihydrat va 31,2 g acid
citric monohydrat trong 1,95 L nước Điều chỉnh bảng dung dich acid citric
monohydrat hoặc dung dich natri citrat tới pH 3,2 + 0,1 Them nước cho vừa đủ
2 L và lắc đều
* Tiển hành
Chuẩn bị dung dịch thử và chuẩn
- Dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 50 mg terazosin hydrochlorid chuẩn, cho vào bình định mức 100 ml Hòa tan và pha loãng bảng pha động vừa đủ đến vạch, lắc đêu Lấy 1,00 mÌ dung dịch này cho vào bình định mức 5 ml, Thêm
pha động vừa đủ đến vạch, lắc đẻu,
- Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 5Ú mg mẫu terazosin hydrochlarid thử, cho vào bình định mức 100 ml Hỏa tan và pha loãng băng pha động vừa đủ
đến vạch, lắc đều Lấy 1.00 ml dung dịch này lần cho vào bình định mức 50 ml Thêm pha động vừa đủ đến vạch, lắc déu
Mỗi dung dịch làm 2 lẳn song song
Tién hành chạy sắc kí dung dịch thử và chuẩn, ghi lại sắc đỗ với thông số
điện tích pic của dung dịch thử vả chuẩn
Trang 3734
m,„m, là khôi lượng mẫu thử và mẫu chuẩn (mg)
C là hàm lượng phần trăm của chất chuẩn
N., N, là lượng nước (%4) trong mẫu chuẩn và mẫu thử
3⁄ Tạp liên quan: Phương phap HPLC
* Điều kiện sắc k#: Như phần định lượng
Chuẩn bị dung dịch thử: Dùng dung địch thử trong mục định lượng
Triển khai sắc kí dung dịch thử trong thời gian gắn 5 lin thời gian lưu của terazosin hydrochlorid Lượng (%4) của từng tạp và tông lượng (%⁄4} tạp chất được tính theo công thức sau: , A A x 100 % tong tap = LAr 109 S4 a=] Ÿ4 % ting tap = Trong đỏ:
A, la diện tích pic của tạp i
x là điện tích pic của tất cả các pic trừ pic ứng với terazosin hydrochlorid và pic cua dung mdi
Trang 3835 Thời gian (phút HạO (9%) MeCN (%) Rửa giải 0-35 §2 18 Đăng dòng 35-40 82-10 18-90 Gradient tuyén tinh 40-75 10 90) Đăng dòng 75-80 10-82 90-18 Gradient tuyeén tinh 80-100 82 18 Đăng dòng * Tiển hành - Dung địch thuốc thử: Hòa tan 0,2 g 3,5-dinitrobenzoyl chlorid trong 25 ml acetonitril
- Dung dịch đệm phosnhat pH = 7,8: Hỏa tan l,l g Na;HPO,.2H;O và 0,78 g
KH:PO, trong 95 ml nước, điều chỉnh pH = 7,8 + 002 bảng dung dịch acid
phosnhoric đậm đặc hoặc dung dịch natri hydroxyd LŨ N, thêm nước vừa đủ 100
ml, lắc đều
- Dung dich mau tring: Acetonitril
- Dung dịch chuẩn: Cân chính xác 25 mg |-[(tetrahydro-2-furanyl)carbonyl] piperazin cho vào bình định mức 100 ml, thêm acetonitril đến vạch Hút 1.00 mÌ
dung dich nay cho vào bình định mức 50 mÏ, thêm acetonitril đến vạch
- Dung dịch thử: Căn chính xác 5Ú mg terazosin hydrochlorid vào bình định
mức 10 ml, thêm hỗn hợp acetonitril : nước (1:1) đến vạch
- Quá trình đẫn chất hóa: Lấy 5,00 mÌ từng dung dịch mẫu trắng, dung dịch
thir va dung dịch chuẩn cho vào các bình định mức 100 ml và tiến hành với mỗi dung dịch như sau: Thêm 5.00 mi dung dịch đệm phosphat: 5,00 ml dung dich
thuốc thử Lắc xoáy 1 phút Để ở nhiệt độ phòng trong 30 phút Sau đó thêm hỗn
hợp acetonitril ; nude (1:1) đến vạch
Tiển hảnh sắc kí hỗn hợp dung dịch mẫu trắng, dung dịch chuẩn và dung
địch thử trang cùng điều kiện
Ham lượng % 1-[(tetrahydro-2-furanyl)carbonyllpiperazin trong mẫu thử
Trang 3936
x% = Ams, lũn
Am, ƒ,
Trong đó: A, A, lan lượt là điện tích pic của dung dịch thử và dung dịch chuẩn
m m, lần lượt là khối lượng của mẫu chuẩn và mẫu thử
f„ f; lẫn lượt là độ pha loãng của dung dich thir va dung dich chuan
7 Kim lui nặng
Tiên hành theo chỉ dẫn trong Dược điển Việt Nam IV, phụ lục 9.4.8, phương
pháp |
+ Chuẩn bị dung dịch thử: Cho 1,00 g chất thử vào chén sứ phù hợp, thêm
dung dịch H;SO; vừa đủ làm ẩm chế phẩm đốt ở nhiệt độ thắn đến khi tro hóa
hoàn toàn, thêm 2 ml dung dịch HNO¿ và 5 giọt dung dịch H;SO¿, đốt đến khi
không còn khói trắng bay ra nữa Đem nung ở 500 - 600°C cho tới khi carbon bị đốt cháy hoàn toàn, làm nguội, thêm 4 mÌ dung dịch HCI 6 N, đậy lại, đun cách thủy 15 phút, mở nắp ra và cho bay hơi từ từ đến khơ hồn tồn Làm dm phan can bang |
giọt dung dịch HCI, thêm 10 mÌ nước nóng, đun trong 2 phúi, thêm dung dich
NH¿NO; 6N cho tới khi dung dịch có tính kiềm với giấy qui, thêm nước tới thẻ tích
25 ml, điều chỉnh bảng dung dich acid acetic téi pH 3 - 4, lọc, rửa bình với 10 mÏ
nước vả lạc
Kết hợp nước lọc và nước rửa vào ông so màu thể tích 50 ml, thêm nước tới
thẻ tích 40 ml, trộn đẻu
&/ Tro sulfat
Tién hanh theo chỉ dẫn trong Dược điển Việt Nam IV, phụ lục 9.9, phương
Trang 4037
3.2 KIEM NGHIEM MOT SO MAU TERAZOSIN HYDROCHLORID
Nguyên liệu terazosin hydrochlorid được bộ môn Hóa dược - Trường đại học
Dược Hà Nội tổng hợp Bao gồm 6 mẫu được tiễn hành kiểm nghiệm theo tiêu
chuẩn đã xây dựng Kết quả được trình bày ở bảng sau:
Bảng 2.7: Kết quả kiểm nghiệm một số mẫu terazosin hydrochlorid Yêu câu Mẫu! | Mẫu2 | Mẫu3 | Mẫu4 | Mẫu§ | Mẫu6 1 Tính chất: bột kết tỉnh trăng không mùi Đạt Dat Đạt Dạt Đại Đạt + Định tính: có phản img dương tỉnh với Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Dúng terazosin hydrochlorid 3 Mắt khói lượng do lam khó: không qua ` | on Đụ "ụ ne 9.0% (6,90%) | (7,60%) | (7,90%) | (7,40%) | (7,01%) | (7,05%) 4 Giới hạn I-
[(tetrahydro-2- furanyl)carbonyl] Dat r Đạt : Đạt r Đạt : Đạt ' Đạt