Nghiên cứu này nhằm xây dựng các chỉ tiêu đánh giá để kiểm soát chất lượng của Táo nhân chế (Semen Ziziphi mauritianae Preparata) lưu hành trên thị trường.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG CỦA TÁO NHÂN CHẾ (SEMEN ZIZIPHI MAURITIANAE PREPARATA) Trần Thị Hồng Phương, Phạm Văn Hải TÓMTẮT Giới thiệu: Táo nhân (Semen Ziziphi mauritianae) mô tả Dược Điển Việt Nam, nhiên thị trường phần lớn sử dụng Táo nhân chế (Semen Ziziphi mauritianae Preparata) để điều trị cho bệnh nhân Mục tiêu: Nghiên cứu nhằm xây dựng tiêu đánh giá để kiểm soát chất lượng Táo nhân chế (Semen Ziziphi mauritianae Preparata) lưu hành thị trường Phương pháp nghiên cứu: Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng Táo nhân chế (Semen Ziziphi mauritianae) theo tiêu chí chung Dược điển Việt Nam IV (DĐVN IV), bao gồm tiêu: Cảm quan; Định tính; Chất chiết dược liệu; Độ ẩm, Tro toàn phần, Kim loại nặng Kết quả: Đã xây dựng cụ thể tiêu chí: cảm quan, định tính, chất chiết dược liệu, độ ẩm, tro tồn phần, kim loại nặng Chỉ tiêu định tính sắc ký lớp mỏng yêu cầu sắc ký đồ dung dịch thử phải có vết phát quang giá trị Rf giá trị Rf màu sắc với vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu Từ khóa: Táo nhân chế, sắc ký lớp mỏng ABSTRACT DEVELOPMENT OF CRITERIA SET FOR QUALITY CONTROL OF SEMEN ZIZIPHI MAURITIANAE PREPARATA Tran Thi Hong Phuong, Pham Van Hai * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement of Vol 20 - No - 2016: 451 - 455 Introduction: Semen Ziziphi mauritianae has been prescribed in the Viet Nam Pharmacopoeia IV However, in medical usage, Semen Ziziphi mauritianae Preparata is used for treatment Objective: To develop the criteria set for quality control of Semen Ziziphi mauritianae Preparata in the market Method: Develop the criteria set for quality control of Semen Ziziphi mauritianae Preparata according to the criteria listed in the Viet Nam Pharmacopoeia IV Results: The result has provided the following detailed criteria: descriptive quality; qualitive quality; extract content; humidity; whole ash; heavy metal The spots from the test solution and the spots showed the same color and the same Rf value by thin layer chromatography Keywords: Semen Ziziphi mauritianae Preparata, thin layer chromatography bất an, thần kinh suy nhược, tim hồi hộp, ĐẶTVẤNĐỀ đánh trống ngực, chóng mặt, suy giảm tân Táo nhân (Semen Ziziphi mauritianae) dịch, háo khát(4) Theo Y học cổ truyền, táo vị thuốc YHCT có cơng dụng dưỡng tâm, an nhân chế có vị chua, tính bình, quy vào thần, sinh tân dịch, chữa ngủ, tâm thần kinh tâm, can, đởm tỳ, có tác dụng tĩnh * Vụ Y học cổ truyền – Bộ Y tế Việt Nam Tác giả liên lạc: BS Trần Thị Hồng Phương ĐT: 0905856608 Email: hongphuong_ma@yahoo.com Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2016 451 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 tâm, an thần, trị tâm huyết bất túc, tâm thần bất an, tim đập hồi hộp, ngủ, chóng mặt(5) Táo nhân chưa chế có tác dụng liễm hãn, chữa mồ trộm, gây ngủ(4) Tro tồn phần: Tiến hành thử theo DĐVN IV, phụ lục 9.8 Táo nhân chứa 2,52% saponin, rutin quexetin(4) Táo nhân vị thuốc thường sử dụng chế, vậy, tiến hành nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho Táo nhân chế KẾTQUẢNGHIÊNCỨUVÀBÀNLUẬN ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Táo nhân chế: 400g, chế biến theo quy định Quyết định 3759/QĐ – BYT Bộ trưởng Bộ Y tế ngày 8/10/2010 ban hành phương pháp chế biến đảm bảo chất lượng 85 vị thuốc YHCT Công ty cổ phần dược phẩm Khang Minh Táo nhân chế (Táo nhân đen) chế biến sau: Đun nóng dụng cụ, cho táo nhân vào đảo đến mặt ngồi có màu đen, bên có màu nâu vàng Lấy ra, để nguội Phương pháp nghiên cứu Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng Táo nhân chế (Semen Ziziphi mauritianae) theo tiêu chí chung Dược điển Việt Nam IV (DĐVN IV)(1), bao gồm tiêu: Cảm quan; Định tính; Chất chiết dược liệu; Độ ẩm, Tro toàn phần, Kim loại nặng Cảm quan: Kiểm tra hình thái, màu sắc, mùi vị cảm quan, kiểm tra kích thước cách đo Định tính: Phương pháp hóa học Phương pháp sắc ký lớp mỏng Chất chiết dược liệu: Tiến hành theo phương pháp ngâm lạnh (DĐVN IV, phụ lục 12.10), dùng ethanol làm dung môi Độ ẩm: Theo DĐVN IV (phụ lục 12.13, dùng 10g dược liệu, phương pháp cất với dung môi toluen) 452 Kim loại nặng: Tiến hành thử theo DĐVN IV, 9.4.8, phương pháp Mô tả Táo nhân đen hạt hình đĩa, đầu nhọt, mặt khum hình thấu kính, có mặt ngồi đen, bên có màu nâu vàng, mùi thơm, vị đắng nhẹ Nhận xét: Mẫu dược liệu Táo nhân chế có đặc điểm hình thái giống với mơ tả đặc điểm hình thái Táo nhân chuyên luận Táo nhân DĐVN IV, nhiên đặc điểm phân biệt Táo nhân chế Táo nhân Táo nhân chế có màu mặt ngồi đen Táo nhân mặt ngồi màu nâu đỏ nâu vàng, đơi có màu nâu thẫm Định tính Phản ứng hóa học: Táo nhân chứa 2,52% saponin, ngồi có rutin quexetin(4,5) Vì vậy, chúng tơi chọn dung mơi chiết ethanol thực phương pháp chung để định tính saponin: Lấy 2g bột dược liệu, thêm 20ml ethanol (TT) Lắc đều, đun hồi lưu cách thủy giờ, để nguội Lọc, dịch lọc đem cô cách thủy đến lại 5ml đến 6ml, dùng dung dịch làm phản ứng sau: Lấy ống nghiệm, cho vào ống 1ml dung dịch Ống thêm 1ml dung dịch natri hydroxyd 10% (TT) đun nhẹ Sau cho vào ống 5ml nước Dung dịch ống suốt đục ống Sau cho vào ống hai giọt dung dịch acid hydrocloric 10% (TT), có vẩn đục kết tủa lắng xuống Phương pháp sắc ký lớp mỏng: Bản mỏng: Silica gel G Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2016 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Dung môi khai triển: Toluen – acid acetic – nước (7:5:1) Nghiên cứu Y học phải có vết có màu sắc Rf với vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu Dung dịch thử: Lấy 1g bột dược liệu, thêm 30ml ether dầu hỏa (40 – 60oC) (TT), đun hồi lưu cách thủy giờ, lọc bỏ dịch ether dầu Bã lại loại bỏ hết dung mơi cách đặt cách thủy nóng, thêm 30ml methanol (TT), đun hồi lưu cách thủy giờ, để nguội, lọc Cơ dịch lọc cách thủy đến cạn Hòa tan cặn 2ml ethanol (TT) Dung dịch đối chiếu: Lấy 1g bột Táo nhân (mẫu chuẩn) chất chuẩn đối chiếu Jujuboside A tiến hành chiết dung dịch thử Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 10l dung dịch thử dung dịch đối chiếu Sau khai triển, lấy mỏng để khơ khơng khí, phun dung dịch vanilin 1% acid sulfuric (TT), sấy mỏng 110oC rõ vết Quan sát ánh sáng tự nhiên Sắc ký đồ dung dịch thử phải có vết có màu sắc giá trị Rf với vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu Chuẩn bị mẫu: Mẫu thử Táo nhân chế: T1 = 1,5019g T2 = 1,5216g T3 = 1,5066g T4 = 1,5035g Mẫu dược liệu chuẩn Táo nhân: 1,5042g Mẫu Jujuboside A đối chiếu: 10mg Kết quả: Kết thể hình cho thấy, sắc ký đồ tất dung dịch thử mẫu dược liệu Táo nhân chế cho vết có màu Rf so với vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu Jujuboside A dược liệu Táo nhân chế So sánh với phương pháp tiến hành kết định tính Táo nhân phương pháp sắc ký lớp mỏng theo DĐVN IV, Hình Sắc ký đồ mỏng định tính dược liệu Táo nhân chế Hệ dung mơi : n-butanol bão hòa Thuốc thử phát hiện: Vanilin 1% Chuẩn Jujuboside A Dược liệu Táo nhân chế Dược liệu Toan táo nhân Dược liệu chuẩn Độ ẩm Tiến hành: Theo DĐVN IV (phụ lục 12.13, dùng 10g dược liệu, phương pháp cất với dung môi toluen) Kết quả: Kết thể bảng Bảng Kết kiểm tra độ ẩm mẫu dược liệu Mẫu Khối lượng mẫu thử (g) 10,0418 10,0640 10,0083 Thể tích nước cất sau lần 1,90 1,90 1,90 cất đầu V1 (ml) Thể tích nước cất sau lần 2,70 2,70 2,70 cất hai V2 (ml) Độ ẩm (%) 7,97 7,95 7,99 TB (%) 7,97 Nhận xét: Bảng cho thấy độ ẩm trung bình mẫu Táo nhân chế 7,97% Theo DĐVN VI, tiêu chuẩn độ ẩm Táo nhân khơng q 8,00%, đưa giới hạn hàm ẩm cho Táo nhân chế không 9,00% Tro toàn phần Tiến hành Theo DĐVN IV (phụ lục 9.8) Dùng 1g dược liệu để thử Kết Hàm lượng tro toàn phần mẫu Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2016 453 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học dược liệu Táo nhân chế trung bình 4,62% Theo DĐVN IV tiêu tro tồn phần Táo nhân khơng q 5,00%; Theo Dược điển Trung Quốc 2010 tiêu tro toàn phần Táo nhân (Ziziphus jujuba) khơng q 7,00% Vì vậy, tiêu chuẩn Táo nhân chế quy định độ tro tồn phần khơng q 5,00% Bảng Kết kiểm tra tro toàn phần mẫu dược liệu Táo nhân chế Mẫu Khối lượng bì (g) Khối lượng mẫu thử (g) Khối lượng sau nung (g) Tro toàn phần (%) TB (%) 36,2585 38,7754 1,0344 1,0075 36,3066 38,8216 4,65 4,58 4,62 Chất chiết dược liệu Tiến hành: Theo DĐVN IV (phụ lục 12.10) Tiến hành theo phương pháp chiết lạnh, dùng ether dầu hỏa (40oC đến 60oC) làm dung mơi Cân xác khoảng 4g bột dược liệu, thêm xác 100ml ether dầu hỏa chiết lạnh theo PL 12.10 Lấy xác 30ml dịch lọc, cô cách thủy đến cặn, sấy cặn 70°C Kết quả: Kết thể bảng Bảng Kết kiểm tra chất chiết mẫu dược liệu Táo nhân chế tính theo khơ kiệt Mẫu Khối lượng bì (g) Khối lượng mẫu thử (g) Khối lượng sau sấy (g) Chất chiết (%) TB (%) 16,9662 18,3816 4,0300 4,0082 17,1098 18,5274 11,89 12,13 12,01 Nhận xét: Kết xác định hàm lượng chất chiết mẫu dược liệu Táo nhân chế trung bình 12,01% Theo DĐVN IV, khơng có u cầu chất chiết dược liệu Táo nhân Vì vậy, đề xuất yêu cầu tiêu chất chiết Táo nhân chế khơng 10,00% tính theo dược liệu khơ kiệt Kim loại nặng Tiến hành: Theo DĐVN IV (phụ lục 9.4.8 phương pháp 3, lấy 1g bột dược liệu) 454 Kết quả: Các ống thử mẫu dược liệu Táo nhân chế có màu nhạt ống chì chuẩn có nồng độ 20ppm Nhận xét: Kết tiêu kim loại nặng Táo nhân chế đáp ứng yêu cầu chung tiêu chuẩn chất lượng dược liệu, thế, đề xuất tiêu chuẩn chất lượng kim loại nặng Táo nhân chế không 20ppm KẾTLUẬN Đã xây dựng tiêu chuẩn chất lượng Táo nhân chế (Semen Ziziphi mauritianae) với tiêu sau: Cảm quan Táo nhân chế hạt hình đĩa, đầu nhọt, mặt khum hình thấu kính, có mặt ngồi đen, bên có màu nâu vàng, mùi thơm, vị đắng nhẹ Định tính Phản ứng hóa học Lấy 2g bột dược liệu, thêm 20ml ethanol (TT) Lắc đều, đun hồi lưu cách thủy giờ, để nguội Lọc, dịch lọc đem cô cách thủy đến lại 5ml đến 6ml, dùng dung dịch làm phản ứng sau: Lấy ống nghiệm, cho vào ống 1ml dung dịch Ống thêm 1ml dung dịch natri hydroxyd 10% (TT) đun nhẹ Sau cho vào ống 5ml nước Dung dịch ống suốt đục ống Sau cho vào ống hai giọt dung dịch acid hydrocloric 10% (TT), có vẩn đục kết tủa bơng lắng xuống Phương pháp sắc ký lớp mỏng (DĐVN IV, Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silica gel G Dung môi khai triển: Toluen – acid acetic – nước (7:5:1) Dung dịch thử: Lấy 1g bột dược liệu, thêm 30ml ether dầu hỏa (40 – 60oC) (TT), đun hồi lưu cách thủy giờ, lọc bỏ dịch Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2016 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 ether dầu Bã lại loại bỏ hết dung mơi cách đặt cách thủy nóng, thêm 30ml methanol (TT), đun hồi lưu cách thủy giờ, để nguội, lọc Cơ dịch lọc cách thủy đến cạn Hòa tan cặn 2ml ethanol (TT) Dung dịch đối chiếu: Lấy 1g bột Táo nhân (mẫu chuẩn) chất chuẩn đối chiếu Jujuboside A tiến hành chiết dung dịch thử Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 10l dung dịch thử dung dịch đối chiếu Sau khai triển, lấy mỏng để khơ khơng khí, phun dung dịch vanilin 1% acid sulfuric (TT), sấy mỏng 110oC rõ vết Quan sát ánh sáng tự nhiên Sắc ký đồ dung dịch thử phải có vết có màu sắc giá trị Rf với vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu Chất chiết dược liệu Khơng 10,0%, tính theo dược liệu khơ kiệt Phương pháp thử: Tiến hành theo DĐVN IV, phụ lục 12.10 Cân xác khoảng 4g dược liệu, tiến hành theo phương pháp ngâm lạnh Dùng ether dầu hỏa (40oC đến 60oC) làm dung môi Dịch thu đem cô áp suất Nghiên cứu Y học giảm đến cặn Sấy cặn 70oC giờ, lấy để nguội bình hút ẩm 30 phút, cân nhanh để xác định khối lượng cặn Độ ẩm Không 9,00% (DĐVN IV, phụ lục 12.13; 10g) Tro tồn phần Khơng q 5,0 % (DĐVN IV, phụ lục 9.8) Kim loại nặng Không 20ppm (DĐVN IV, phụ lục 9.4.8, pp3) TÀILIỆUTHAMKHẢO Bộ Y Tế Dược Điển Việt Nam IV 2010 NXB Y Học p859 Chineses pharmacopoeia commission Pharmacopoeia of the people’s republic of China 2010 China Medical Science Press pp120-425 Ministry of Health, Labour and Welfare Japanese Pharmacopoeia Sixteenth Edition 2006 Đỗ Huy Bích, Tơ Đăng Hải, Phạm Kim Mân, Nguyễn Thượng Dong, Đặng Quang Chung Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam – Tập I 2006 NXB Khoa Học & Kỹ Thuật p885 Đỗ Tất Lợi Những thuốc vị thuốc Việt Nam 1999 NXB Y Học p834 Ngày nhận báo: 15/03/2016 Ngày phản biện nhận xét báo: 01/04/2016 Ngày báo đăng: 15/04/2016 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2016 455 ... chất lượng kim loại nặng Táo nhân chế không 20ppm KẾTLUẬN Đã xây dựng tiêu chuẩn chất lượng Táo nhân chế (Semen Ziziphi mauritianae) với tiêu sau: Cảm quan Táo nhân chế hạt hình đĩa, đầu nhọt,... lục 9.8 Táo nhân chứa 2,52% saponin, rutin quexetin(4) Táo nhân vị thuốc thường sử dụng chế, vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho Táo nhân chế KẾTQUẢNGHIÊNCỨUVÀBÀNLUẬN... liệu Táo nhân chế có màu nhạt ống chì chuẩn có nồng độ 20ppm Nhận xét: Kết tiêu kim loại nặng Táo nhân chế đáp ứng yêu cầu chung tiêu chuẩn chất lượng dược liệu, thế, đề xuất tiêu chuẩn chất lượng