Nghiên cứu này nhằm xây dựng các chỉ tiêu đánh giá để kiểm soát chất lượng của Táo nhân chế (Semen Ziziphi mauritianae Preparata) lưu hành trên thị trường.
Trang 1NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG
CỦA TÁO NHÂN CHẾ (SEMEN ZIZIPHI MAURITIANAE PREPARATA)
Trần Thị Hồng Phương, Phạm Văn Hải
TÓM TẮT
Giới thiệu: Táo nhân (Semen Ziziphi mauritianae) đã được mô tả trong Dược Điển Việt Nam, tuy
nhiên trên thị trường phần lớn sử dụng Táo nhân chế (Semen Ziziphi mauritianae Preparata) để điều trị cho bệnh nhân
Mục tiêu: Nghiên cứu này nhằm xây dựng các chỉ tiêu đánh giá để kiểm soát chất lượng của Táo
nhân chế (Semen Ziziphi mauritianae Preparata) lưu hành trên thị trường
Phương pháp nghiên cứu: Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của Táo nhân chế (Semen Ziziphi
mauritianae) theo những tiêu chí chung của Dược điển Việt Nam IV (DĐVN IV), bao gồm các chỉ tiêu:
Cảm quan; Định tính; Chất chiết được trong dược liệu; Độ ẩm, Tro toàn phần, Kim loại nặng
Kết quả: Đã xây dựng được cụ thể các tiêu chí: cảm quan, định tính, chất chiết được trong dược liệu,
độ ẩm, tro toàn phần, kim loại nặng Chỉ tiêu định tính bằng sắc ký lớp mỏng yêu cầu trên sắc ký đồ của dung dịch thử phải có các vết phát quang cùng giá trị R f cùng giá trị R f và màu sắc với các vết trên sắc ký
đồ của dung dịch đối chiếu
Từ khóa: Táo nhân chế, sắc ký lớp mỏng
ABSTRACT
DEVELOPMENT OF CRITERIA SET FOR QUALITY CONTROL OF SEMEN ZIZIPHI
MAURITIANAE PREPARATA
Tran Thi Hong Phuong, Pham Van Hai
* Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement of Vol 20 - No 2 - 2016: 451 - 455
Introduction: Semen Ziziphi mauritianae has been prescribed in the Viet Nam Pharmacopoeia IV
However, in medical usage, Semen Ziziphi mauritianae Preparata is used for treatment
Objective: To develop the criteria set for quality control of Semen Ziziphi mauritianae Preparata in
the market
Method: Develop the criteria set for quality control of Semen Ziziphi mauritianae Preparata
according to the criteria listed in the Viet Nam Pharmacopoeia IV
Results: The result has provided the following detailed criteria: descriptive quality; qualitive quality;
extract content; humidity; whole ash; heavy metal The spots from the test solution and the spots showed the same color and the same R f value by thin layer chromatography.
Keywords: Semen Ziziphi mauritianae Preparata, thin layer chromatography
ĐẶT VẤN ĐỀ
Táo nhân (Semen Ziziphi mauritianae) là
vị thuốc YHCT có công dụng dưỡng tâm, an
thần, sinh tân dịch, chữa mất ngủ, tâm thần
bất an, thần kinh suy nhược, tim hồi hộp, đánh trống ngực, chóng mặt, suy giảm tân dịch, háo khát(4) Theo Y học cổ truyền, táo nhân chế có vị chua, tính bình, quy vào các kinh tâm, can, đởm và tỳ, có tác dụng tĩnh
* Vụ Y học cổ truyền – Bộ Y tế Việt Nam
Tác giả liên lạc: BS Trần Thị Hồng Phương ĐT: 0905856608 Email: hongphuong_ma@yahoo.com
Trang 2tâm, an thần, trị tâm huyết bất túc, tâm thần
bất an, tim đập hồi hộp, mất ngủ, chóng
mặt(5) Táo nhân chưa chế có tác dụng liễm
hãn, chữa ra mồ hôi trộm, gây mất ngủ(4)
Táo nhân chứa 2,52% saponin, rutin và
quexetin(4) Táo nhân là vị thuốc thường sử
dụng chế, vì vậy, chúng tôi tiến hành nghiên
cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho Táo
nhân chế
ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Đối tượng nghiên cứu
Táo nhân chế: 400g, được chế biến theo
quy định tại Quyết định 3759/QĐ – BYT của
Bộ trưởng Bộ Y tế ngày 8/10/2010 về ban hành
phương pháp chế biến đảm bảo chất lượng
đối với 85 vị thuốc YHCT tại Công ty cổ phần
dược phẩm Khang Minh
Táo nhân chế (Táo nhân sao đen) được
chế biến như sau: Đun nóng dụng cụ, cho táo
nhân vào đảo đều đến khi mặt ngoài có màu
đen, bên trong có màu nâu hơi vàng Lấy ra,
để nguội
Phương pháp nghiên cứu
Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng của Táo
nhân chế (Semen Ziziphi mauritianae) theo
những tiêu chí chung của Dược điển Việt
Nam IV (DĐVN IV)(1), bao gồm các chỉ tiêu:
Cảm quan; Định tính; Chất chiết được trong
dược liệu; Độ ẩm, Tro toàn phần, Kim loại
nặng
Cảm quan: Kiểm tra hình thái, màu sắc,
mùi vị bằng cảm quan, kiểm tra kích thước
bằng cách đo
Định tính: Phương pháp hóa học và
Phương pháp sắc ký lớp mỏng
Chất chiết được trong dược liệu: Tiến
hành theo phương pháp ngâm lạnh (DĐVN
IV, phụ lục 12.10), dùng ethanol làm dung
môi
Độ ẩm: Theo DĐVN IV (phụ lục 12.13,
dùng 10g dược liệu, phương pháp cất với
dung môi toluen)
Tro toàn phần: Tiến hành thử theo DĐVN
IV, phụ lục 9.8
Kim loại nặng: Tiến hành thử theo DĐVN
IV, 9.4.8, phương pháp 3
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN
Mô tả
Táo nhân sao đen là hạt hình đĩa, một đầu hơi nhọt, một mặt khum hình thấu kính, có mặt ngoài đen, bên trong có màu nâu hơi vàng, mùi thơm, vị đắng nhẹ
Nhận xét: Mẫu dược liệu Táo nhân chế có các đặc điểm về hình thái giống với mô tả đặc điểm về hình thái của Táo nhân trong chuyên luận Táo nhân của DĐVN IV, tuy nhiên đặc điểm phân biệt giữa Táo nhân chế và Táo nhân là Táo nhân chế có màu mặt ngoài đen còn Táo nhân thì mặt ngoài màu nâu đỏ hoặc nâu vàng, đôi khi có màu nâu thẫm
Định tính
Phản ứng hóa học:
Táo nhân chứa 2,52% saponin, ngoài ra còn có rutin và quexetin(4,5) Vì vậy, chúng tôi chọn dung môi chiết là ethanol và thực hiện phương pháp chung để định tính saponin:
Lấy 2g bột dược liệu, thêm 20ml ethanol (TT) Lắc đều, đun hồi lưu trên cách thủy trong 1 giờ, để nguội Lọc, dịch lọc đem cô cách thủy đến khi còn lại 5ml đến 6ml, dùng dung dịch này làm các phản ứng sau:
Lấy 2 ống nghiệm, cho vào mỗi ống 1ml dung dịch trên Ống 1 thêm 1ml dung dịch natri hydroxyd 10% (TT) và đun nhẹ Sau đó cho vào mỗi ống 5ml nước Dung dịch trong ống 1 trong suốt hoặc ít đục hơn ống 2 Sau
đó cho vào ống 1 hai giọt dung dịch acid
kết tủa bông lắng xuống
Phương pháp sắc ký lớp mỏng:
Bản mỏng: Silica gel G
Trang 3Dung môi khai triển: Toluen – acid acetic
– nước (7:5:1)
Dung dịch thử: Lấy 1g bột dược liệu, thêm
30ml ether dầu hỏa (40 – 60o
C) (TT), đun hồi lưu trên cách thủy trong 2 giờ, lọc bỏ dịch
ether dầu Bã còn lại được loại bỏ hết dung
môi bằng cách đặt trên cách thủy nóng, thêm
30ml methanol (TT), đun hồi lưu trên cách
thủy trong 2 giờ, để nguội, lọc Cô dịch lọc
trên cách thủy đến cạn Hòa tan cặn trong 2ml
ethanol (TT)
Dung dịch đối chiếu: Lấy 1g bột Táo nhân
(mẫu chuẩn) hoặc chất chuẩn đối chiếu
Jujuboside A tiến hành chiết như đối với
dung dịch thử
Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên bản
mỏng 10l mỗi dung dịch thử và dung dịch
đối chiếu Sau khi khai triển, lấy bản mỏng ra
để khô trong không khí, phun dung dịch
vanilin 1% trong acid sulfuric (TT), sấy bản
mỏng ở 110oC cho đến khi hiện rõ vết Quan
sát dưới ánh sáng tự nhiên Sắc ký đồ của
dung dịch thử phải có các vết có cùng màu
sắc và cùng giá trị Rf với các vết trên sắc ký
đồ của dung dịch đối chiếu
Chuẩn bị mẫu:
Mẫu thử Táo nhân chế:
T1 = 1,5019g
T2 = 1,5216g
T3 = 1,5066g
T4 = 1,5035g
Mẫu dược liệu chuẩn Táo nhân: 1,5042g
Mẫu Jujuboside A đối chiếu: 10mg
Kết quả:
Kết quả thể hiện ở hình 1 cho thấy, sắc ký
đồ của tất cả các dung dịch thử của mẫu dược
liệu Táo nhân chế đều cho vết có cùng màu và
cùng Rf so với vết trong sắc ký đồ của dung
dịch đối chiếu Jujuboside A và dược liệu Táo
nhân chế So sánh với phương pháp tiến hành
và kết quả định tính Táo nhân bằng phương
pháp sắc ký lớp mỏng theo DĐVN IV, cũng
phải có các vết có cùng màu sắc và Rf với các vết trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu
Hình 1 Sắc ký đồ bản mỏng định tính dược liệu
Táo nhân chế Hệ dung môi : n-butanol bão hòa Thuốc thử phát hiện: Vanilin 1% 1 Chuẩn Jujuboside A 2 Dược liệu Táo nhân chế 3 Dược liệu Toan táo nhân 4 Dược liệu chuẩn
Độ ẩm
Tiến hành: Theo DĐVN IV (phụ lục 12.13,
dùng 10g dược liệu, phương pháp cất với dung môi toluen)
Kết quả: Kết quả được thể hiện ở bảng 1 Bảng 1 Kết quả kiểm tra độ ẩm mẫu dược liệu
Khối lượng mẫu thử (g) 10,0418 10,0640 10,0083 Thể tích nước cất sau lần
cất đầu V 1 (ml)
1,90 1,90 1,90 Thể tích nước cất sau lần
cất hai V 2 (ml)
2,70 2,70 2,70
Độ ẩm (%) 7,97 7,95 7,99
Nhận xét: Bảng 1 cho thấy độ ẩm trung
bình của các mẫu Táo nhân chế là 7,97% Theo DĐVN VI, tiêu chuẩn độ ẩm của Táo nhân là không quá 8,00%, vì vậy đưa ra giới hạn hàm
ẩm cho Táo nhân chế không quá 9,00%
Tro toàn phần
Tiến hành
Theo DĐVN IV (phụ lục 9.8) Dùng 1g dược liệu để thử
Kết quả
Hàm lượng tro toàn phần của các mẫu
Trang 4dược liệu Táo nhân chế trung bình là 4,62%
Theo DĐVN IV chỉ tiêu tro toàn phần của Táo
nhân không quá 5,00%; Theo Dược điển
Trung Quốc 2010 chỉ tiêu tro toàn phần của
Táo nhân (Ziziphus jujuba) là không quá
7,00% Vì vậy, tiêu chuẩn của Táo nhân chế
quy định độ tro toàn phần không quá 5,00%
Bảng 2 Kết quả kiểm tra tro toàn phần mẫu dược
liệu Táo nhân chế
Khối lượng bì (g) 36,2585 38,7754
Khối lượng mẫu thử (g) 1,0344 1,0075
Khối lượng sau nung (g) 36,3066 38,8216
Tro toàn phần (%) 4,65 4,58
Chất chiết được trong dược liệu
Tiến hành: Theo DĐVN IV (phụ lục 12.10)
Tiến hành theo phương pháp chiết lạnh, dùng
ether dầu hỏa (40oC đến 60oC) làm dung môi
Cân chính xác khoảng 4g bột dược liệu,
thêm chính xác 100ml ether dầu hỏa chiết
lạnh theo PL 12.10 Lấy chính xác 30ml dịch
lọc, cô trên cách thủy đến cặn, sấy cặn ở 70°C
trong 3 giờ
Kết quả: Kết quả được thể hiện ở bảng 3
Bảng 3 Kết quả kiểm tra chất chiết được trong
mẫu dược liệu Táo nhân chế tính theo khô kiệt
Khối lượng bì (g) 16,9662 18,3816
Khối lượng mẫu thử (g) 4,0300 4,0082
Khối lượng sau sấy (g) 17,1098 18,5274
Chất chiết được (%) 11,89 12,13
Nhận xét: Kết quả xác định hàm lượng
chất chiết được của mẫu dược liệu Táo nhân
chế trung bình là 12,01% Theo DĐVN IV,
không có yêu cầu về chất chiết được trong
dược liệu Táo nhân Vì vậy, đề xuất yêu cầu
về chỉ tiêu chất chiết được trong Táo nhân chế
là không ít hơn 10,00% tính theo dược liệu
khô kiệt
Kim loại nặng
Tiến hành: Theo DĐVN IV (phụ lục 9.4.8 -
phương pháp 3, lấy 1g bột dược liệu)
Kết quả: Các ống thử của mẫu dược liệu
Táo nhân chế có màu nhạt hơn ống chì chuẩn
có nồng độ 20ppm
Nhận xét: Kết quả về chỉ tiêu kim loại
nặng của Táo nhân chế đáp ứng yêu cầu chung đối với tiêu chuẩn chất lượng của dược liệu, vì thế, đề xuất tiêu chuẩn chất lượng về kim loại nặng của Táo nhân chế là không quá 20ppm
KẾT LUẬN
Đã xây dựng được tiêu chuẩn chất lượng
của Táo nhân chế (Semen Ziziphi mauritianae)
với các chỉ tiêu sau:
Cảm quan
Táo nhân chế là hạt hình đĩa, một đầu hơi nhọt, một mặt khum hình thấu kính, có mặt ngoài đen, bên trong có màu nâu hơi vàng, mùi thơm, vị đắng nhẹ
Định tính
Phản ứng hóa học
Lấy 2g bột dược liệu, thêm 20ml ethanol (TT) Lắc đều, đun hồi lưu trên cách thủy trong 1 giờ, để nguội Lọc, dịch lọc đem cô cách thủy đến khi còn lại 5ml đến 6ml, dùng dung dịch này làm các phản ứng sau: Lấy 2 ống nghiệm, cho vào mỗi ống 1ml dung dịch trên Ống 1 thêm 1ml dung dịch natri hydroxyd 10% (TT) và đun nhẹ Sau đó cho vào mỗi ống 5ml nước Dung dịch trong ống 1 trong suốt hoặc ít đục hơn ống 2 Sau đó cho vào ống 1 hai giọt dung dịch acid hydrocloric 10% (TT), lập tức có vẩn đục rồi kết tủa bông lắng xuống
Phương pháp sắc ký lớp mỏng (DĐVN IV, Phụ lục 5.4)
Bản mỏng: Silica gel G
Dung môi khai triển: Toluen – acid acetic
– nước (7:5:1)
Dung dịch thử: Lấy 1g bột dược liệu, thêm
30ml ether dầu hỏa (40 – 60oC) (TT), đun hồi lưu trên cách thủy trong 2 giờ, lọc bỏ dịch
Trang 5ether dầu Bã còn lại được loại bỏ hết dung
môi bằng cách đặt trên cách thủy nóng, thêm
30ml methanol (TT), đun hồi lưu trên cách
thủy trong 2 giờ, để nguội, lọc Cô dịch lọc
trên cách thủy đến cạn Hòa tan cặn trong 2ml
ethanol (TT)
Dung dịch đối chiếu: Lấy 1g bột Táo nhân
(mẫu chuẩn) hoặc chất chuẩn đối chiếu
Jujuboside A tiến hành chiết như đối với
dung dịch thử
Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên bản
mỏng 10l mỗi dung dịch thử và dung dịch
đối chiếu Sau khi khai triển, lấy bản mỏng ra
để khô trong không khí, phun dung dịch
vanilin 1% trong acid sulfuric (TT), sấy bản
mỏng ở 110oC cho đến khi hiện rõ vết Quan
sát dưới ánh sáng tự nhiên Sắc ký đồ của
dung dịch thử phải có các vết có cùng màu
sắc và cùng giá trị Rf với các vết trên sắc ký
đồ của dung dịch đối chiếu
Chất chiết được trong dược liệu
Không dưới 10,0%, tính theo dược liệu
khô kiệt
Phương pháp thử: Tiến hành theo DĐVN
IV, phụ lục 12.10 Cân chính xác khoảng 4g
dược liệu, tiến hành theo phương pháp ngâm
lạnh Dùng ether dầu hỏa (40oC đến 60oC) làm
dung môi Dịch thu được đem cô ở áp suất
giảm đến cặn Sấy cặn ở 70oC trong 3 giờ, lấy
ra để nguội trong bình hút ẩm 30 phút, cân nhanh để xác định khối lượng cặn
Độ ẩm
Không quá 9,00% (DĐVN IV, phụ lục
12.13; 10g)
Tro toàn phần
Không quá 5,0 % (DĐVN IV, phụ lục 9.8)
Kim loại nặng
Không quá 20ppm (DĐVN IV, phụ lục
9.4.8, pp3)
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Bộ Y Tế Dược Điển Việt Nam IV 2010 NXB Y Học p859
2 Chineses pharmacopoeia commission Pharmacopoeia of the people’s republic of China 2010 China Medical Science Press pp120-425
3 Ministry of Health, Labour and Welfare Japanese Pharmacopoeia Sixteenth Edition 2006
4 Đỗ Huy Bích, Tô Đăng Hải, Phạm Kim Mân, Nguyễn Thượng Dong, Đặng Quang Chung Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam – Tập I 2006 NXB Khoa Học
& Kỹ Thuật p885
5 Đỗ Tất Lợi Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam
1999 NXB Y Học p834
Ngày nhận bài báo: 15/03/2016 Ngày phản biện nhận xét bài báo: 01/04/2016 Ngày bài báo được đăng: 15/04/2016