Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng bột cao khô thống phong khang

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm xây dựng được tiêu chuẩn chất lượng của bột cao khô Thống phong khang (TPK). Phương pháp: các chỉ tiêu chất lượng của bột cao khô TPK theo phương pháp chung của Dược điển Việt Nam (DĐVN) IV.

TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2016 NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƢỢNG BỘT CAO KHÔ THỐNG PHONG KHANG Trịnh Nam Trung*; Nguyễn Tú Anh**; Vũ Bình Dương* TĨM TẮT Mục tiêu: xây dựng tiêu chuẩn chất lượng bột cao khô Thống phong khang (TPK) Phương pháp: tiêu chất lượng bột cao khô TPK theo phương pháp chung Dược điển Việt Nam (DĐVN) IV Kết quả: khảo sát tiêu chất lượng bột cao khô TPK Từ đưa tiêu chuẩn chất lượng sản phẩm, bao gồm tiêu sau: hình thức cảm quan, độ ẩm, độ mịn, định tính, định lượng độ nhiễm khuẩn Kết luận: với tiêu chuẩn chất lượng xây dựng được, kiểm nghiệm bột cao khô TPK dùng làm nguyên liệu sản xuất thuốc thực phẩm chức * Từ khóa: Thống phong khang; Cao khô; Tiêu chuẩn chất lượng Standardization of the Dry Extract Powder of Thong Phong Khang Summary Objectives: To establish the quality criteria for the dry extract powder of Thong phong khang Subjects: The quality standards of the dry extract powder of Thong phong khang Results: Quality criteria for the dry extract powder of Thong phong khang were evaluated and established, including standards as follows: description, loss on drying, fineness, identification, astilbin content and bacterial contamination Conclusion: The established quality criteria can be used for quality controlling of the dry extract powder of Thong phong khang which is used as feedstock in manufacturing of drug and functional food * Key words: Thong phong khang; Dry extract; Quality criteria ĐẶT VẤN ĐỀ Thống phong khang thuốc cổ phương gia giảm gồm thành phần chủ yếu vị thuốc có tác d ng h trợ, u trị bệnh gout tăng axít uric máu (Thổ ph c linh, Ngưu tất, T giải, Hoàng k , Thương tru t, Thiên niên kiện…) Hiện nay, thuốc TPK sử d ng hiệu u trị bệnh gout Học viện Quân y dạng thuốc sắc Tuy nhiên, dạng thuốc có nhi u nhược điểm như: thể tích cơng k nh, khó bảo quản sử d ng Học viên Quân y nghiên cứu chiết xuất, bào chế bột cao khô [3, 4] đánh giá tác d ng hạ axít uric động v t thực nghiệm [2] Để bột cao khơ TPK phun sấy sử d ng bào chế dạng, cần phải tiêu chuẩn hóa sản phẩm Vì v y, tiến hành nghiên cứu nhằm: Xây dựng tiêu chuẩn cở sở (TCCS) bột cao khô TPK * Học viện Quân y ** Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Người phản hồi (Corresponding): Vũ Bình Dương (vbduong2978@gmail.com) Ngày nhận bài: 20/02/2016; Ngày phản biện đánh giá báo: 14/03/2016 Ngày báo đăng: 21/03/2016 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2016 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên vật liệu thiết bị - Bột cao khô TPK u chế phương pháp phun sấy Trung tâm Nghiên cứu sản xuất thuốc, Học viện Quân y cung cấp (số lơ: 010815) Quy trình chiết xuất gồm: dung môi chiết ethanol 50%; tỷ lệ dung môi/dược liệu 10:1, thời gian chiết 60 phút, nhiệt độ chiết 500C [3] Từ dịch chiết, tiến hành phun sấy thành cao khô u kiện: sử d ng tá dược h trợ phun sấy maltodextrin:aerosil (70:30); tỷ lệ tá dược/chất rắn 0,3; tỷ lệ chất rắn dịch phun 10%; nhiệt độ đầu vào 1400C [4] - Hóa chất: acetonitril (Merck), methanol (Merck); chất chuẩn astilbin (Sigma), silicagel GF254 hóa chất dung mơi khác đạt tiêu chuẩn tinh khiết phân tích - D ng c : cân phân tích Sartorius (độ xác 0,1 mg); cân kỹ thu t (độ xác 0,01 g); máy ly tâm lạnh Universal - Độ ẩm: tiến hành theo DĐVN IV, ph l c 9.6, với khoảng - g bột cao khô TPK - Độ mịn: tiến hành theo DĐVN IV, ph l c 3.5 Cân xác 5,0 g bột cao khô TPK, xác định lượng bột qua cỡ rây 355: a-b Lượng bột rây (%) = x 100 a Trong đó: a khối lượng bột ban đầu (g), b khối lượng bột lại (g) - Định tính: + Định tính astilbin sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC): so sánh thời gian lưu sắc ký đồ mẫu thử mẫu chuẩn astilbin [1] + Định tính số vị (Ngưu tất, Phá cố chỉ, Ích mẫu, Thương tru t) bột cao khô TPK phương pháp sắc ký lớp mỏng theo DĐVN IV - Định lượng: định lượng astilbin bột cao khô TPK phương pháp HPLC [1] - Độ nhiễm khuẩn: tiến hành theo DĐVN IV, ph l c 13.6 Thử giới hạn nhiễm khuẩn, phương pháp đĩa thạch 320 (Hettich, Đức); máy lắc siêu âm (Soniclean, Úc); máy sắc ký lỏng hiệu cao (Waters - 2695D, Mỹ) số trang thiết bị khác Phƣơng pháp nghiên cứu Tiến hành khảo sát tiêu chất lượng bột cao khô TPK theo phương pháp chung DĐVN IV [5], bao gồm: - Tính chất: thử cảm quan (quan sát, màu sắc, mùi vị, độ tơi xốp) KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Kết đánh giá hình thức cảm quan Bột cao khơ TPK có dạng bột khơ tơi, màu vàng, mùi thơm đặc trưng dược liệu, vị đắng, dễ hút ẩm ngồi khơng khí Mẫu cao khơ qt kính hiển vi điện tử (SEM) để xác định hình dạng kích thước tiểu phân bột TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2016 H nh 1: Mẫu ch p SEM bột cao khơ TPK Bột cao khơ TPK có tiểu phân dạng hình cầu với kích thước từ 50 - 200 μm Kết đánh giá đ hối lƣ ng làm h Xác định khối lượng làm khô bột cao khô TPK thiết bị MOC 63U Bảng 1: Kết đánh giá tỷ lệ khối lượng làm khô bột cao khô TPK Mẫu XTB ± SD Tỷ lệ khối lượng (%) 4,8 4,12 4,25 4,37 4,63 4,91 4,51 ± 0,32 Như v y, tỷ lệ khối lượng làm khô bột cao khô TPK 4,51 ± 0,32 (%), đạt yêu cầu chất lượng quy định DĐVN IV v tỷ lệ khối lượng cao khô (< 5%) Kết đánh giá đ mịn b t cao h TPK Đánh giá độ mịn bột cao khô TPK qua rây số 355 Bảng 2: Kết đánh giá độ mịn bột cao khô TPK Mẫu Khối lượng bột lúc đầu (g) 5,0013 5,1922 4,9914 5,3091 5,2045 5,3381 Khối lượng bột lại (g) 0 0 0 100 100 100 100 100 100 Bột qua rây (%) XTB ± SD 100 ± 100% lượng bột qua rây số 355 đạt yêu cầu v độ mịn bột cao khô theo quy định DĐVN IV Kết phù hợp với kết đánh giá kích thước tiểu phân bột cao khơ TPK (hình 1) TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2016 Kết định tính b t cao h TPK - Định tính astilbin bột cao khơ TPK phương pháp HPLC b a Hình 2: Sắc ký đồ astilbin cao khô TPK (Mẫu cao khô TPK (a) mẫu chuẩn astilbin (b)) Sắc ký đồ mẫu bột cao khơ TPK có thời gian lưu píc astilbin (tR = 19,719 phút) trùng với thời gian lưu mẫu chuẩn astilbin (tR = 19,639 phút) - Định tính số vị thuốc (Ích mẫu, Ngưu tất, Phá cố chỉ, Thương tru t) cao khô TPK phương pháp sắc ký lớp mỏng a b c d Hình 3: Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng bột cao khô TPK dược liệu chuẩn (quan sát đèn tử ngoại bước sóng 254 nm) Ích mẫu (a); Ngưu tất (b); Phá cố (c); Thương truật (d) Kết phân tích sắc ký lớp mỏng cao khô TPK cho thấy: thành phần cao khô TPK xuất vết hoạt chất giống với dược liệu chuẩn (Phá cố chỉ, Ngưu tất, Ích mẫu, Thương tru t) Quan sát vết hoạt chất ánh sáng tử ngoại bước sóng 254 nm cho thấy: giá trị Rf vết sắc ký đồ dược liệu chuẩn cao khô TPK tương đương nhau, c thể: 10 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2016 - Ích mẫu: Rf1 = 0,4; Rf2 = 0,6; Rf3 = 0,7 - Ngưu tất: Rf = 0,75 - Phá cố chỉ: Rf1= 0,32; Rf2 = 0,36; Rf3 = 0,48 - Thương tru t: Rf1= 0,08; Rf2 = 0,13; Rf3 = 0,23 Kết định lƣ ng astilbin b t cao h TPK Định lượng astilbin mẫu bột cao khô TPK phương pháp HPLC Bảng 3: Kết định lượng astilbin bột cao khô TPK Mẫu Hàm lượng astilbin (µg/g) 12,85 12,16 11,87 12,47 13,01 12,09 XTB ± SD 12,41 ± 0,45 Hàm lượng astilbin bột cao khô TPK đạt 12,41 ± 0,45 (µg/g) Kết xác định giới hạn nhiễm huẩn Đánh giá độ nhiễm khuẩn bột cao khô TPK phương pháp đĩa thạch theo DĐVN IV Bảng 4: Kết đánh giá độ nhiễm khuẩn bột cao khô TPK Thứ tự Chỉ tiêu Kết Yêu cầu Kết luận Tổng số vi khuẩn hiếu khí 296 ≤ 10 /g Đạt Tổng số Enterobacteria không 500 g bột cao khô 145 ≤ 500/g Đạt Nấm mốc nấm men không 100 g bột cao khô 21 ≤ 100/g Đạt Khơng có E coli, P aeruginosa, S aureus, Salmonella g bột cao khô Không có Khơng có Đạt Bột cao khơ TPK đáp ứng yêu cầu v độ nhiễm khuẩn mức chuyên lu n phép thử giới hạn nhiễm khuẩn (ph l c 13.6, DĐVN IV) Mức chất lượng áp d ng cho sản phẩm thuốc dùng theo đường uống - Tính chất: bột khơ tơi, màu vàng, khơng có nấm mốc, mùi thơm, vị ngọt, dễ bị hút ẩm để ngồi khơng khí Từ kết đánh giá trên, vào quy định chung theo DĐVN IV, đưa TCCS bột cao khô TPK gồm tiêu sau: - Định tính: phải thể phép thử định tính vị thuốc Ngưu tất, Thương tru t, Ngưu tất, Ích mẫu Phải thể phép thử định tính astilbin sắc ký đồ - Độ ẩm: không 5,0% - Độ mịn: lượng bột qua rây số 355 không 95,0% 11 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2016 - Định lượng: hàm lượng astilbin chế phẩm phải khơng 10 µg/g, tính theo chế phẩm khô kiệt - Độ nhiễm khuẩn: đạt yêu cầu mức 4, ph l c 13.6, “Thử giới hạn nhiễm khuẩn” - DĐVN IV Như v y, sử d ng TCCS để kiểm nghiệm nguyên liệu bột cao khô TPK trước sử d ng bào chế sản phẩm khác KẾT LUẬN Đã đánh giá tiêu chất lượng bột cao khô TPK Từ đó, đưa tiêu chất lượng sản phẩm bao gồm: hình thức cảm quan, độ ẩm, độ mịn, định tính, định lượng, độ nhiễm khuẩn Trong đó, có tiêu chất lượng quan trọng đặc trưng bột cao khô TPK như: hàm lượng astilbin bột cao khơ khơng 10 µg/g, độ ẩm khơng q 5% Các tiêu chuẩn chất lượng sử d ng để kiểm nghiệm bột cao khô TPK sản xuất thuốc thực phẩm chức từ nguyên liệu 12 TÀI LIỆU THAM KHẢO Le Viet Duc, Vu Binh Duong, Trinh Nam Trung, Pham Thi Thanh Huong Quantitative study of determination of astilbin in Smilax glabra by HPLC J Military Pharmaco-Medicine 2015, 40 (7), pp.8-12 Vũ B nh Dương, Nguyễn Hoàng Ngân, Lê Việt Đức, Phạm Xuân Phong, Nguyễn Duy Bắc Đánh giá tác d ng hạ axít uric máu cao khô TPK động v t thực nghiệm Tạp chí Y học Việt Nam 2015, số 2, tháng 9, tr.117-122 Lê Việt Đức, Lê Minh Hoàng, Phạm Xuân Phong, Vũ B nh Dương Nghiên cứu tối ưu hóa quy trình chiết xuất astilbin từ thuốc TPK Tạp chí Y học Việt Nam 2015, số 2, tháng 12, tr.132-137 Lê Việt Đức, Vũ B nh Dương, Nguyễn Trọng Điệp, Nguyễn Hoàng Hiệp, Lê Minh Hoàng Nghiên cứu bào chế bột cao khô TPK phương pháp phun sấy Tạp chí Y học Việt Nam 2015, số 1, tháng 3, tr.124-130 Bộ Y tế Dược điển Việt Nam IV Nhà xuất Y học 200, tr.PL9-10  ... lệ khối lượng làm khô bột cao khô TPK 4,51 ± 0,32 (%), đạt yêu cầu chất lượng quy định DĐVN IV v tỷ lệ khối lượng cao khô (< 5%) Kết đánh giá đ mịn b t cao h TPK Đánh giá độ mịn bột cao khô TPK... tính, định lượng, độ nhiễm khuẩn Trong đó, có tiêu chất lượng quan trọng đặc trưng bột cao khô TPK như: hàm lượng astilbin bột cao khơ khơng 10 µg/g, độ ẩm khơng q 5% Các tiêu chuẩn chất lượng sử... TCCS để kiểm nghiệm nguyên liệu bột cao khô TPK trước sử d ng bào chế sản phẩm khác KẾT LUẬN Đã đánh giá tiêu chất lượng bột cao khô TPK Từ đó, đưa tiêu chất lượng sản phẩm bao gồm: hình thức