Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng dược liệu cây đơn kim (bidens pilosa l)

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA NGUYỄN VĂN NAM NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG DƯỢC LIỆU CÂY ĐƠN KIM (BIDENS PILOSA L) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC Đà Nẵng – Năm 2017 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG DƯỢC LIỆU CÂY ĐƠN KIM (BIDENS PILOSA L) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC Sinh viên thực hiện: Nguyễn Văn Nam Lớp : 13CHD Người hướng dẫn : TS DS Phạm Văn Vượng Đà Nẵng – Năm 2017 LỜI CẢM ƠN Trong thời gian học trường Đai học Sư Phạm – Đại học Đà nẵng, em xin cảm ơn giúp đỡ cán giảng viên khoa Hóa hết lịng giảng dạy truyền đạt cho em kiến thức bản, tản vững chắc, động viên giúp đỡ em trình làm khóa luận Em xin chân thành cảm ơn TS.DS Phạm Văn Vượng tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện cho em suốt q trình làm khóa luận Đồng thời em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô khoa Sinh – Môi trường tạo điều kiện để em hồn thành khóa luận Xin cảm ơn gia đình bạn bè ln động viên giúp đỡ đóng góp ý kiến quý báu để chúng tơi hồn thành xong đề tài nghiên cứu khoa học Đà Nẵng 20 tháng năm 2017 Sinh viên thực Nguyễn Văn Nam DANH MỤC BẢNG Số hiệu bảng Tên bảng Trang 3.1 Bảng khảo sát số thành phần đơn kim 21 3.2 Kết định lượng hàm lượng chiết cồn 25 3.3 Kết định lượng hàm lượng chiết nước 26 3.4 Kết xác định độ ẩm bột đơn kim 26 3.5 Kết xác định độ tro bột đơn kim 27 3.6 Kết xác định tỷ lệ tạp chất 28 3.7 Kết xác định tỷ lệ vụn nát 28 DANH MỤC CÁC HÌNH Số hiệu hình Tên hình Trang 1.1 Cây đơn kim 1.2 Quả đơn kim 1.3 Bộ khung flavon 1.4 Cấu trúc lutelolin 1.5 Cấu trúc apigenin 1.6 Bộ khung flavonon 1.7 Cấu trúc quercetin 1.8 Cấu trúc keamperol 1.9 Bộ khung auron 1.10 Cấu trúc aureusidin 1.11 Bộ khung chalcon 1.13 Cấu trúc butein 1.14 Cấu trúc morachalcon 1.15 Cấu trúc isookanin 1.16 Cấu trúc hepta-1,3,5-triyn-ylbenzene 1.17 Cấu trúc isoprene 1.18 Cấu trúc oximen 1.19 Cấu trúc axit phytenic 1.20 Cấu trúc campestrol 1.21 Cấu trúc sitgmasterol 1.22 Cấu trúc sitosterol 2.1 Cấu tạo kính hiển vi quang học 14 3.1 Hình ảnh bột dược liệu Đơn kim 20 3.2 Kết sắc ký lớp mỏng 22 3.3 Cấu tạo phiến 23 3.4 Lá có nhiều tế bào lỗ khí 23 3.5 Lát cắt ngang thân Đơn kim 24 3.6 Hình ảnh lát cắt dọc Đơn kim 25 MỤC LỤC LỜI MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY ĐƠN KIM 1.1.1 Đặt tính sinh thái 1.1.2 Đặt điểm thực vật 1.1.3 Thành phần hóa học 1.1.4 Tác dụng dược lý 1.1.5 Một số công dụng Đơn kim 12 CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU, TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Nguyên vật liệu 13 2.1.1 Nguyên liệu 13 2.1.2 Hóa chất 13 2.1.3 Dụng cụ thiết bị 13 2.2 Tiêu chuẩn chất lượng 13 2.3 Phương pháp nghiên cứu 13 2.3.1 Mô tả Đơn kim 13 2.3.2 Mô tả bột dược liệu Đơn kim 14 2.3.3 Phương pháp định tính 14 2.3.4 Phương pháp định lượng 16 2.3.5 Độ ẩm 17 2.3.6 Hàm lượng tro toàn phần 18 2.3.7 Tỷ lệ tạp chất 18 2.3.8 Tỷ lệ vụn nát 19 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 20 3.1 Kết mô tả Đơn kim 20 3.2 Kết mô tả bột dược liệu Đơn kim 20 3.2.1 Hình ảnh soi bột kính hiển vi quang học 20 3.3 Kết nghiên cứu phương pháp định tính 21 3.3.1 Kết khảo sát số thành phần Đơn kim phương pháp hóa học 21 3.3.2 Kết định tính sắc ký lớp mỏng 22 3.3.3 Kết vi phẫu 22 3.4 Kết định lượng 25 3.4.1 Kết định lượng hiệu suất chiết cồn 25 3.4.2 Định lượng hiệu suất chiết nước 26 3.5 Kết khảo sát độ ẩm 26 3.6 Kết khảo sát hàm lượng tro 27 3.7 Kết xác định tỷ lệ tạp chất 27 3.8 Kết xác định tỷ lệ vụn nát 28 CHƯƠNG 4: TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU 29 4.1 Trình bày tiêu chuẩn 29 4.2 Thuyết minh tiêu chuẩn 30 4.2.1 Các tiêu kiểm nghiệm vi học 30 4.2.2 Các tiêu định tính hóa học 31 4.2.3 Tiêu chuẩn độ ẩm, tro toàn phần tỷ lệ vụn nát 31 4.2.4 Tiêu chuẩn định lượng 31 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32 Kết luận 32 Kiến nghị 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng LỜI MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Theo Tổ chức y tế Thế giới, 80% dân số toàn cầu sử dụng loại thảo dược truyền thống để bảo vệ sức khỏe Việt Nam nước có nguồn dược liệu phong phú đa dạng bậc Thế giới, 3800 loài làm thuốc tổng số 10600 loài thực vật Tuy nhiên, theo thống kê cục quản lý Dược Việt Nam, thuốc từ dược liệu chiếm 30% tổng số thuốc đăng ký nước, 90% nguyên liệu sản xuất thuốc phải nhập Vì vậy, để phát huy tiềm nguồn dược liệu, đáp ứng nhu cầu chăm sóc sức khỏe nhân dân địi hỏi quan chức phải có giải pháp hiệu Một số trọng đến việc xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu Để dược liệu làm thuốc, địi hỏi phải có tiêu chuẩn chất lượng cụ thể, đồng thời xây dưng phương pháp thử để đánh giá tiêu chuẩn Ở nước Thế giới, Đơn kim việc sử dụng thực phẩm biết đến với nhiều cơng dụng chữa bệnh phịng ngừa bệnh cúm, cảm lạnh, kháng viêm, cầm máu trị số loại nấm… Ở nước ta có nhiều thuốc dân gian từ Đơn kim cho hiệu bất ngờ Các cơng trình nghiên cứu ngày trọng[1], [3] Các sản phẩm chữa bệnh từ Đơn kim hứa hẹn không xa lạ với người tương lai Với lý trên, đề tài “Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Đơn kim (Bidens Pilosa L) xây dựng tiêu chuẩn dược liệu cụ thể, xây dựng phương pháp định tính, định lượng, tiêu vật lý quan sát, đưa mô tả sinh học giúp người nhận biết kiểm nghiệm tiêu chuẩn dược liệu dễ dàng Mục tiêu nghiên cứu Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm Đơn kim Đối tượng phạm vi nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: Phần mặt đất Đơn kim quận Liên Chiểu, Đà Nẵng - Phạm vi nghiên cứu: Các tiêu chuẩn dược liệu Đơn kim SVTH: Nguyễn Văn Nam Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng Phương pháp nghiên cứu - Tìm hiểu tài liệu, thơng tin Đơn kim - Nghiên cứu thực nghiệm: + Quan sát mô tả bột dược liệu Đơn kim + Khảo sát tiêu hóa lý để đưa tiêu chuẩn chất lượng + Xây dựng phương pháp định tính, định lượng + Thực nghiệm số tiêu khác Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài - Ý nghĩa khoa học: Đề xuất bổ sung tiêu chuẩn dược liệu Đơn kim vào dược điển Việt Nam - Ý nghĩa thực tiễn: Cung cấp thơng tin để nhận dạng xác Đơn kim, tránh nhầm lẫn với loài khác Nâng cao chất lượng dược liệu thuốc chưa bệnh SVTH: Nguyễn Văn Nam Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết mô tả Đơn kim Cây thân cỏ, cao 0,5 – 1m, mọc đứng, phân cành Phiến đơn hay kép có chét, cuống chung dài 1,5 – 2,5 cm, chét hình mũi mác Cụm hoa đầu, dạng đĩa, có 20-40 hoa, cuống chung dài từ 1-9cm, đường kính từ 8-9mm Quả bế, hình thoi, có cạnh, dài 7-12mm, rộng 1mm; đỉnh 2-3 gai móc dài 1,5-2,5mm, khơng mào lơng [4] 3.2 Kết mô tả bột dược liệu Đơn kim 3.2.1 Hình ảnh soi bột kính hiển vi quang học Mảnh mạch điểm (1) Hạt phấn (2) Mảnh phần cứng thân (4) Mảnh bần (3) Hình 3.1: Hình ảnh bột dược liệu Đơn Kim Mơ tả: Bột có màu xanh nhạt, mùi thơm đặc trưng, vị mát nhẹ Quan sát kính hiển vi thấy: SVTH: Nguyễn Văn Nam 20 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng - Phần cứng: mạch gỗ với nhiều hình dạng khác mảnh mạch điểm (4), mảnh bần (3) mảnh phần cứng thân (4) - Phần mềm: Khơng giữ hình dạng sau nghiền mịn hạt phấn (2) 3.3 Kết nghiên cứu phương pháp định tính 3.3.1 Kết khảo sát số thành phần Đơn kim phương pháp hóa học Bảng 3.1 Bảng khảo sát số thành phần đơn kim STT Hợp chất Thuốc thử phản ứng Alkaloid Phản ứng với thuốc thử: Flavonoid Kết Wagner ++ Mayer + Phản ứng với: NaOH 10% +++ FeCl3 5% +++ Carotenoid Phản ứng với H2SO4 đậm đặc +++ Saponin Phản ứng tạo bọt ++ Phản ứng đường khử Phản ứng với thuốc thử + Felling A+ Felling B Chất béo Để lại vết mờ giấy lọc ++ Tinh dầu Mùi thơm ++ Acid hữu Phản ứng với Na2CO3 tinh thể + Ghi chú: +++ phản ứng dương tính rõ ++ phản ứng dương tính rõ + phản ứng dương tính SVTH: Nguyễn Văn Nam 21 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng Nhận xét: Qua bảng khảo sát số thành phần Đơn kim, có hợp chất khảo sát có kết dương tính Đó alkaloid, flavonoid, carotenoid, saponin, đường khử, chất béo, tinh dầu acid hữu So sánh với số tài liệu khảo sát sơ thành phần hóa học Đơn kim thấy có phù hợp 3.3.2 Kết định tính sắc ký lớp mỏng Bước sóng 254nm nm Thuốc thử vanilin/H2SO4 5% Hình 3.2: Kết sắc ký lớp mỏng Nhận xét: Tại bước sóng 254nm có vết, vết vết đậm, vết lại mờ Khi màu thuốc thử vanilin H2SO4 5% cho vết, vết đậm màu vàng xanh, vết lại mờ Các vết trùng với vết soi bước sóng 254 nm 3.3.3 Kết vi phẫu a Kết vi phẫu - Phiến lá: có tế bào hình chữ nhật xếp lại với nhau, có lơng che chở Lơng đa bào dãy (Hình 3.3) - Có nhiều tế bào lỗ khí: tham gia q trình trao đổi khí, giúp cho thực q trình quang hợp ( Hình 3.4) SVTH: Nguyễn Văn Nam 22 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng Các tế bào hình chữ nhật cạnh Lơng đa bào Hình 3.3: Cấu tạo phiến Tế bào lỗ khí Hình 3.4: Lá có nhiều tế bào lỗ khí SVTH: Nguyễn Văn Nam 23 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng b Kết vi phẫu thân - Lát cắt ngang thân 1: Biểu bì 4: Libe cấp 2: Mô dày 3: Mô mềm vỏ 5: Gỗ cấp 6: Mơ mềm ruột Hình 3.5: Lát cắt ngang thân Đơn kim Mô tả đặc điểm vi phẫu: Mặt cắt ngang thân có hình vng, bề mặt mấp mơ khơng phẳng Quan sát kính hiển vi từ ngồi vào thấy: Biểu bì (1) hành chữ nhật nhỏ, xếp đặn, rải rác mang gốc tế bào lơng che chở Sát biểu bì 2-3 hàng tế bào mô dày (2), mô dày tế bào hình chữ nhật kích thuốc lớn tế bào biểu bì Mơ mềm vỏ (3) cấu tạo tế bào hình trứng Lớp libe cấu tạo nhiều lớp Lớp gỗ cấu tạo mạch gỗ Trong mô mềm ruột (6) phát triển SVTH: Nguyễn Văn Nam 24 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng - Lát cắt dọc thân Hình 3.6: Hình ảnh lát cắt dọc thân + Phần mô mềm cấu tạo từ tế bào hình chữ nhật đa giác +Có nhiều loại mạch xếp thành bó, thực q trình vận chuyển nước chất dinh dưỡng 3.4 Kết định lượng 3.4.1 Kết định lượng hiệu suất chiết cồn Khối lượng bột dược liệu: m1 Khối lượng cốc thủy tinh: m2 Khối lương cốc cắn sau trình (25ml dịch chiết): m3 Hiệu suất chiết: H = (m3-m2)x4 x100 m1 Bảng3.2: Kết định lượng hàm lượng chiết cồn m1 (g) m2 (g) m3 (g) H (%) Lần 2.081 48.427 48.456 7.30 Lần 2.091 47.121 47.161 7.65 Lần 1.98 49.350 49.388 7.68 Nhận xét: Hàm lượng chiết trung bình lần 7.54% SVTH: Nguyễn Văn Nam 25 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng 3.4.2 Định lượng hiệu suất chiết nước Khối lượng bột dược liệu: m1 Khối lượng cốc thủy tinh: m2 Khối lượng cốc cắn sau trình(25ml dịch chiết): m3 Hiệu suất chiết: H = (m3-m2)x4 x100 m1 Bảng 3.3: Kết định lượng hàm lượng chiết nước m1 (g) m2 (g) m3 (g) H (%) Lần 2.188 51.548 51.626 14.26 Lần 2.027 49.722 49.798 15.00 Lần 2.069 50.273 50.345 13.92 Nhận xét: - Hàm lượng chiết trung bình là: 14.393% - Khả chiết dung môi nước tốt nhiều so với dung mơi ancol Ngun nhân thành phần hóa học dịch chiết Đơn kim phần lớn flavonoid, hợp chất dễ tan nước 3.5 Kết khảo sát độ ẩm - Bột đơn kim tiến hành xác định độ ẩm, số lượng mẫu xác định độ ẩm mẫu Kết khảo sát độ ẩm trung bình đơn kim trình bày qua bảng 3.1 Bảng 3.4 Kết xác định độ ẩm bột đơn kim Stt m1 m2 m3 Ω (%) 48,407 5,002 53,070 6,77 74,216 5,003 78,875 6,87 57,066 5,005 61,729 6,88 62,439 5,010 67,105 6,86 82,027 5,007 86,698 6,79 SVTH: Nguyễn Văn Nam ωtb (%) 6,83 26 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng Nhận xét: - Từ bảng 3.1 độ ẩm trung bình bột đơn kim tương đối thấp 6,83% Vì giữ chất lượng tốt nguyên liệu trình bảo quản, tránh xâm hại sinh vật nấm mốc 3.6 Kết khảo sát hàm lượng tro Hàm lượng tro trung bình lấy trung bình từ mẫu Kết khảo xác hàm lượng tro bột đơn kim trình bày bảng Bảng 3.5 Kết xác định hàm lượng tro bột đơn kim STT m1 m2 H(%) 5,004 0,469 9,37 5,015 0,468 9,32 5,010 0, 469 9,38 5,002 0,472 9,33 5,003 0,468 9,35 Htb 9,35 Nhận xét - Từ bảng 3.2 cho thấy hàm lượng tro trung bình bột đơn kim 9,35% Đây là hàm lượng chất vô không bay tồn Đơn kim Do điều kiện thổ nhưỡng khác có hàm lượng chất vơ khác 3.7 Kết xác định tỷ lệ tạp chất Bảng 3.6: Kết xác định tỷ lệ tạp chất p a x Lần 10.32 0.12 1.16% Lần 11.4 0.11 0.96% Lần 9.84 0.10 SVTH: Nguyễn Văn Nam 1.02% 27 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng Nhận xét: Tỷ lệ tạp chất trung bình Đơn kim 1.046% Cây Đơn kim thuộc loại mọc nhanh, ưa sáng ưa ẩm thường mọc thành quần thể dày đặc đất sau nương rẫy, bãi hoang dọc theo đường đi…nên thu hái bị lẫn nhiều tạp chất bụi bẩn, xác trùng, cỏ khác… Vì vậy, xử lý nguyên liệu cần loại bỏ kỹ tạp chất 3.8 Kết xác định tỷ lệ vụn nát Cỡ lỗ sàng: 2.5mm Bảng 3.7: Kết xác định tỷ lệ vụn nát p (gam) a (gam) X% Lần 103.20 4.36 4.22 Lần 98.64 4.22 4.23 Lần 97.85 4.31 4.40 Nhận xét: Qua bảng 3.5 ta thấy dược liệu Đơn kim, nghiền thơ rây qua lỗ sàng 2.5 mm có tỷ lệ vụn nát tương đối cao Nguyên nhân phần mặt đất Đơn kim có hoa, phận dễ bị nghiền nát trình xử lý SVTH: Nguyễn Văn Nam 28 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng CHƯƠNG 4: TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU 4.1 Trình bày tiêu chuẩn Từ kết nghiên cứu tổng hợp, tơi đề xuất trình bày tiêu chuẩn dược liệu Đơn kim (Bidens Pilosa L) sau: ĐƠN KIM (Bidens Pilosa L) Bộ phận dùng: toàn phần mặt đất Cây cắt nhỏ, làm sạch, phơi khô xay thành bột mịn Mô tả cây: Cây thân cỏ, cao 0,5 – 1m, mọc đứng, phân cành Phiến đơn hay kép có chét, cuống chung dài 1,5 – 2,5 cm, chét hình mũi mác Cụm hoa đầu, dạng đĩa, có 20-40 hoa, cuống chung dài từ 1-9cm, đường kính từ 8-9mm Quả bế, hình thoi, có cạnh, dài 7-12mm, rộng 1mm; đỉnh 2-3 gai móc dài 1,52,5mm, khơng mào lơng Mơ tả bột: Bột có màu xanh nhạt, mùi thơm đặc trưng, vị mát nhẹ Quan sát kính hiển vi thấy: phần cứng mạch gỗ với nhiều hình dạng khác gồm mảnh mạch điểm, mảnh bần mảnh phần cứng thân, phần mềm khơng giữ hình dạng sau nghiền mịn gồm mảnh vụn hoa, tế bào lá… Định tính: A Lấy 2g bột dược liệu, thêm 5ml cồn, đun cách thủy 10p, lọc lấy dịch chiết Cho 1ml dịch chiết từ đơn kim vào ống nghiệm, thêm giọi dung dịch NaOH 10% thấy xuất kết tủa màu vàng dung dịch đổi từ màu xanh nhạt sang màu vàng B Lấy 2g bột dược liệu, thêm 5ml cồn, đun cách thủy 10p, lọc lấy dịch chiết Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm giọt dung dịch FeCl3 5% vào, thấy màu dịch chiết từ vàng nhạt sang đen đậm C Lượng dược liệu: g bột phần mặt đất SVTH: Nguyễn Văn Nam 29 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng Qui trình chiết: Cân 1,0 g bột phần mặt đất, loại tạp 20 ml n-hexan (bịt kín hở lỗ nhỏ, đun nóng nhẹ, cách thủy, 15 phút) Lọc, bỏ n-hexan, cô đuổi dung mơi Chiết nóng bột thu với 20 ml methanol 30 phút Lọc, thu hồi dung Cắn thu hòa ml methanol dung dịch chấm sắc ký Hệ dung môi: n-hexan: aceton (5:1) Kết quả: Tại bước sóng 254nm có vết, vết vết đậm, vết lại mờ Khi màu thuốc thử vanilin H2SO4 5% cho vết, vết đậm màu vàng xanh, vết lại mờ Các vết trùng với vết soi bước sóng 254 nm Vi phẫu thân: Mặt cắt ngang thân có hình vng, bề mặt mấp mơ khơng phẳng Quan sát kính hiển vi từ ngồi vào thấy: Biểu bì hành chữ nhật nhỏ, xếp đặn, rải rác mang gốc tế bào lơng che chở Sát biểu bì 2-3 hàng tế bào mô dày, mô dày tế bào hình chữ nhật kích thuốc lớn tế bào biểu bì Mơ mềm vỏ cấu tạo tế bào hình trứng Lớp libe cấu tạo nhiều lớp Lớp gỗ cấu tạo mạch gỗ Trong mô mềm ruột phát triển Định lượng: + Hàm lượng dược chất chiết ethanol không nhỏ 7,26% + Hàm lượng dược chất chiết nước không nhỏ 13,786% Độ ẩm: khơng q 13% Tro tồn phần: khơng q 13% Tạp chất: Không 1% Tỷ lệ vụn nát: không 5% 4.2 Thuyết minh tiêu chuẩn 4.2.1 Các tiêu kiểm nghiệm vi học Các tiêu chuẩn vi học đề xuất bao gồm tiêu chuẩn mô tả thực vật, vi phẫu thân, lá, bột dược liệu Nội dung đề xuất dựa kết kiểm nghiệm vi học SVTH: Nguyễn Văn Nam 30 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng mẫu dược liệu tươi bột Đơn kim Đó đặc điểm bật Đơn kim so với thảo dược khác 4.2.2 Các tiêu định tính hóa học Dựa vào kết định tính sơ thành phần hóa học, kết họp việc tham khảo tài liệu nghiên cứu Đơn kim, thấy flavonoid hợp chất chủ yếu có Đơn kim, dễ nhận biết phản ứng thường Nên tôii chọn phản ứng với dung dịch NaOH 10% FeCl3 5% nhằm định tính Đơn kim Đây phản ứng có độ nhạy cao, dễ thực Sắc ký lớp mỏng phương pháp định tính xác hiệu phương pháp định tính Dựa vào hình dạng vệt sắc ký giá trị đặc trưng Rf mô tả phần kết quả, nhận biết Đơn kim cách xác 4.2.3 Tiêu chuẩn độ ẩm, tro tồn phần tỷ lệ vụn nát Hầu chưa có tài liệu đề cập đến tiêu chuẩn Đơn kim Tiêu chuẩn đề xuất dựa có cấu tạo tương tự Đơn kim (họ Cúc) trình bày dược điển Việt Nam IV 4.2.4 Tiêu chuẩn định lượng Qua việc khảo sát phương pháp chiết nóng nước cồn, nhận thấy phương pháp chiết nóng nước có hàm lượng chiết cao, dễ thực dung mơi khó bay Kết tiêu chuẩn hàm lượng chiết đề xuất dựa giá trị trung bình lần chiết Tuy nhiên, điều số địa điểm có khí hậu thổ nhưỡng tương tự địa điểm khảo sát, dó vùng, khí hậu hàm lượng dược chất có khác biệt SVTH: Nguyễn Văn Nam 31 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua trình nghiên cứu tài liệu, kết hợp với thực nghiệm, đề tài xây dựng tiêu chuẩn sở dược liệu Đơn kim với tiêu: - Mô tả cây: Cây thân cỏ, cao 0,5 – 1m, mọc đứng, phân cành Phiến đơn hay kép có chét, cuống chung dài 1,5 – 2,5 cm, chét hình mũi mác Cụm hoa đầu, dạng đĩa, có 20-40 hoa, cuống chung dài từ 1-9cm, đường kính từ 8-9mm Quả bế, hình thoi, có cạnh, dài 7-12mm, rộng 1mm; đỉnh 2-3 gai móc dài 1,52,5mm, khơng mào lơng - Mơ tả bột: Bột có màu xanh nhạt, mùi thơm đặc trưng, vị mát nhẹ Quan sát kính hiển vi thấy: phần cứng mạch gỗ với nhiều hình dạng khác gồm mảnh mạch điểm, mảnh bần mảnh phần cứng thân, phần mềm không giữ hình dạng sau nghiền mịn gồm mảnh vụn hoa, tế bào lá… - Vi phẫu thân: Mặt cắt ngang thân có hình vng, bề mặt mấp mơ khơng phẳng Quan sát kính hiển vi từ ngồi vào thấy: Biểu bì hành chữ nhật nhỏ, xếp đặn, rải rác mang gốc tế bào lơng che chở Sát biểu bì 2-3 hàng tế bào mô dày, mô dày tế bào hình chữ nhật kích thuốc lớn tế bào biểu bì Mơ mềm vỏ cấu tạo tế bào hình trứng Lớp libe cấu tạo nhiều lớp Lớp gỗ cấu tạo mạch gỗ Trong mô mềm ruột phát triển - Độ ẩm: không 13% - Độ tro: không 13% - Tạp chất: không 1% - Tỷ lệ vụn nát: khơng q 5% - Định tính: + Dược liệu Đơn kim phải cho phản ứng dương tính với thuốc thử nhận biết flavonoid, saponin, alkaloid + Sắc ký lớp mỏng: SVTH: Nguyễn Văn Nam 32 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng Lượng dược liệu: g bột phần mặt đất Qui trình chiết: Cân 1,0 g bột phần mặt đất, loại tạp 20 ml n-hexan (bịt kín hở lỗ nhỏ, đun nóng nhẹ, cách thủy, 15 phút) Lọc, bỏ n-hexan, đuổi dung mơi Chiết nóng bột thu với 20 ml methanol 30 phút Lọc, thu hồi dung Cắn thu hòa ml methanol dung dịch chấm sắc ký Hệ dung môi: n-hexan: aceton (5:1) Kết quả: Tại bước sóng 254nm có vết, vết vết đậm, vết lại mờ Khi màu thuốc thử vanilin H2SO4 5% cho vết, vết đậm màu vàng xanh, vết lại mờ Các vết trùng với vết soi bước sóng 254 nm - Định lượng: + Hàm lượng dược chất chiết ethanol không nhỏ 7,26% + Hàm lượng dược chất chiết nước không nhỏ 13,786% Kiến nghị - Tiến hành nghiên cứu dược liệu Đơn kim vùng khác để đưa tiêu chuẩn xác - Nghiên cứu bổ sung số tiêu thiếu như: tính quy vị, cơng chữa trị, cách dùng, liều lượng SVTH: Nguyễn Văn Nam 33 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Luận án tiến sỹ dược học ”Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học Đơn kim (Bidens Pilosa L., Họ Asteraceae)” Phạm Văn Vương – 2014 [2] Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y Học [3] Đỗ Đình Rãng, Lê Thị Thùy (2003) “Những kết bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học Đơn buốt (Bidens Pilosa L) Hà Nội” Tạp chí khoa học ứng dụng [4] Hình thái giải phẫu học thực vật Hoàng Thị Sản, Nguyễn Phương Nga, NXB ĐH Sư Phạm năm 2003 [5] Phạm Văn Vượng (2010) “ Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học Đơn kim (Bidens Pilosa L., Họ Asteraceae)” Luận văn Thạc sỹ Dược học, Học viện Quân Y [6] http://www.tuyengiao.vn/Home/Y-te-cong-dong/Nghien-cuu-traodoi/99211/Duoc-lieu-Viet-Nam-co-co-hoi-vuon-ra-thi-truong-the-gioi [7] http://www.stuartxchange.org/Dadayem.html [8] https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1831956/ [9] http://suckhoedoisong.vn/cay-don-kim-chua-benh-n38001.html [10] https://opeconomica.wordpress.com/2015/02/19/ve-cay-xuyen-chi/ SVTH: Nguyễn Văn Nam 34 ... CHƯƠNG 4: TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU 4.1 Trình bày tiêu chuẩn Từ kết nghiên cứu tổng hợp, tơi đề xuất trình bày tiêu chuẩn dược liệu Đơn kim (Bidens Pilosa L) sau: ĐƠN KIM (Bidens Pilosa L) Bộ phận... chuẩn dược liệu dễ dàng Mục tiêu nghiên cứu Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm Đơn kim Đối tượng phạm vi nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: Phần mặt đất Đơn kim quận Liên Chiểu, Đà Nẵng - Phạm vi nghiên. .. việc xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu Để dược liệu làm thuốc, địi hỏi phải có tiêu chuẩn chất lượng cụ thể, đồng thời xây dưng phương pháp thử để đánh giá tiêu chuẩn Ở nước Thế giới, Đơn kim