Nghiên cứu một số tác dụng và xây dựng tiêu chuẩn của cao đặc bài thuốc kỳ phụ vương theo hướng cải thiện tuần hoàn não

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM THÁI HÀ VĂN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ TÁC DỤNG VÀ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CỦA CAO ĐẶC BÀI THUỐC KỲ PHỤ VƯƠNG THEO HƯỚNG CẢI THIỆN TUẦN HOÀN NÃO LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM THÁI HÀ VĂN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ TÁC DỤNG VÀ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CỦA CAO ĐẶC BÀI THUỐC KỲ PHỤ VƯƠNG THEO HƯỚNG CẢI THIỆN TUẦN HOÀN NÃO LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ 60720406 Người hướng dẫn khoa học: TS. BÙI HỒNG CƯỜNG TS. TRẦN VIỆT HÙNG HÀ NỘI 2013 LỜI CẢM ƠN Sau một thời gian nghiên cứu thực nghiệm, được sự giúp đỡ tận tình của các thầy cô, gia đình và bạn bè, tôi đã hoàn thành luận văn: “Nghiên cứu một số tác dụng và xây dựng tiêu chuẩn của cao đặc bài thuốc kỳ phụ vương theo hướng cải thiện tuần hoàn não”. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn trân trọng tới TS. Bùi Hồng Cường - Bộ môn Dược học cổ truyền, Trường Đại học Dược Hà Nội, TS. Trần Việt Hùng - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, là những người thầy đã trực tiếp hướng dẫn, chỉ bảo tôi hoàn thành luận văn này. Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Phùng Hòa Bình - Bộ môn Dược học cổ truyền, Trường Đại học Dược Hà Nội đã góp ý nhiều ý kiến quý báu trong quá trình luận văn được hoàn thiện. Tôi cũng xin cảm ơn Công ty Cổ phần Phùng Gia Phương đã hỗ trợ kinh phí nghiên cứu cho đề tài. Đồng thời, tôi cũng xin cảm ơn tới các thầy cô, cán bộ, kỹ thuật viên Bộ môn Dược học cổ truyền; các thầy cô Phòng Sau đại học; Ban giám hiệu Trường đại học Dược Hà Nội; các anh chị Khoa Dược lý - Sinh hoá, Viện Dược liệu; Viện Kiểm nghiệm đã góp phần giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong suốt thời gian thực hiện luận văn. Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình và bạn bè đã động viên tôi hoàn thành luận văn này. Hà Nội, tháng 10 năm 2013 Học viên, DS. Phạm Thái Hà Văn MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Chƣơng 1. TỔNG QUAN 2 1.1. Thiểu năng tuần hoàn não 2 1.1.1. Lƣu lƣợng máu não và các yếu tố ảnh hƣởng 2 1.1.2. Nguyên nhân 2 1.1.3. Triệu chứng lâm sàng 3 1.1.4. Điều trị 3 1.2. Bài thuốc kỳ phụ vƣơng 4 1.2.1. Phụ tử 4 1.2.2. Hoàng kỳ 8 1.2.3. Tác dụng sinh học của phƣơng thuốc kỳ phụ 16 1.3. Xây dựng tiêu chuẩn chất lƣợng cao thuốc 17 1.3.1. Khái niệm 17 1.3.2. Yêu cầu tiêu chuẩn chất lƣợng cao thuốc 18 1.3.3. Tình hình xây dựng tiêu chuẩn dƣợc liệu và sản phẩm từ dƣợc liệu 18 Chƣơng 2. NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1. Nguyên vật liệu, trang thiết bị 21 2.1.1. Nguyên liệu 21 2.1.2. Thiết bị và dụng cụ 21 2.1.3. Hoá chất, vật tƣ tiêu hao 21 2.1.4. Động vật thí nghiệm 22 2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu 22 2.2.1. Bào chế cao 22 2.2.2. Định tính 22 2.2.3. Định lƣợng 27 2.2.4. Phƣơng pháp khảo sát một số chỉ tiêu của cao đặc 28 2.2.5. Thử tác dụng dƣợc lý 32 2.2.6. Đặc điểm vi học của bột dƣợc liệu 34 2.2.7. Phƣơng pháp xử lý số liệu 34 Chƣơng 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 35 3.1. Kiểm tra dƣợc liệu 35 3.1.1. Phụ tử 35 3.1.2. Hoàng kỳ 37 3.2. Bào chế cao đặc kỳ phụ vƣơng 45 3.3. Định tính một số hợp chất hữu cơ trong cao đặc kỳ phụ vƣơng 45 3.3.1. Định tính một số nhóm chất hữu cơ trong cao đặc kỳ phụ vƣơng bằng phản ứng hóa học 45 3.3.2. Định tính một số nhóm chất bằng sắc ký lớp mỏng 47 3.3.3. Định tính bằng quang phổ hấp thụ tử ngoại 50 3.4. Định lƣợng một số thành phần trong cao đặc kỳ phụ vƣơng 51 3.4.1. Định lƣợng alkaloid toàn phần 51 3.4.2. Định lƣợng flavonoid toàn phần 52 3.5. Khảo sát một số chỉ tiêu khác của cao đặc kỳ phụ vƣơng 54 3.5.1. Xác định tính chất vật l ‎ ý của cao đặc kỳ phụ vƣơng 54 3.5.2. Cắn, tro toàn phần, pH 55 3.5.3. Thử độ nhiễm khuẩn 56 3.5.4. Giới hạn kim loại nặng 57 3.6. Xây dựng dự thảo tiêu chuẩn cao đặc kỳ phụ vƣơng 58 3.7. Thử tác dụng dƣợc lý 59 3.7.1. Độc tính cấp 59 3.7.2. Thử tác dụng trên tim 60 3.7.3. Tác dụng trên mạch máu 62 Chƣơng 4. BÀN LUẬN 65 4.1. Công thức phƣơng thuốc 65 4.2. Phân biệt hoàng kỳ - hồng kỳ 65 4.3. Xây dựng tiêu chuẩn chất lƣợng 66 4.4. Thử nghiệm dƣợc lý 67 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT g dl/kg g dược liệu / kg HPLC High Performace Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hiệu năng cao) HK1 Hoàng kỳ đối chiếu HK2 Hoàng kỳ nghiên cứu KPV Kỳ phụ vương MNC Mẫu nghiên cứu SKLM, TLC Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography) TT Thuốc thử UV Ultra Violet (Tử ngoại) YHCT Y học cổ truyền DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1. Giá trị Rf sắc ký đồ flavonoid hoàng kỳ đối chiếu (HK1), hoàng kỳ nghiên cứu (HK2) 42 Bảng 3.2. Giá trị Rf sắc ký đồ saponin của hoàng kỳ đối chiếu (1), hoàng kỳ nghiên cứu (2), astragalosid IV (AGS-IV) 44 Bảng 3.3. Tỷ lệ (%) cao đặc kỳ phụ vương thu được 45 Bảng 3.4. Kết quả định tính cao đặc kỳ phụ vương 46 Bảng 3.5. Giá trị Rf sắc ký đồ của aconitin, phụ tử và cao đặc kỳ phụ vương 48 Bảng 3.6. Giá trị Rf sắc ký đồ flavonoid của hoàng kỳ HK2 và cao đặc kỳ phụ vương 50 Bảng 3.7. Hàm lượng alkaloid toàn phần trong phụ tử và cao đặc kỳ phụ vương 52 Bảng 3.8. Độ hấp thụ quang của các dung dịch rutin 52 Bảng 3.9. Khảo sát độ lặp lại của phương pháp đo quang 53 Bảng 3.10. Hàm lượng flavonoid toàn phần trong cao đặc kỳ phụ vương 54 Bảng 3.11. Tính chất cảm quan của cao đặc kỳ phụ vương 55 Bảng 3.12. Tỷ lệ cắn, tro toàn phần và độ pH của cao đặc kỳ phụ vương 56 Bảng 3.13. Độ nhiễm khuẩn của cao đặc kỳ phụ vương 56 Bảng 3.14. Độc tính cấp của cao đặc kỳ phụ vương 58 Bảng 3.15. Tác dụng của cao đặc kỳ phụ vương trên tim thỏ cô lập 61 Bảng 3.16. Tỷ lệ (%) thay đổi (tăng, giảm) các thông số tim trước - sau truyền kỳ phụ vương trên tim thỏ cô lập 61 Bảng 3.17. Lưu lượng máu (ml/phút) qua động mạch cảnh mèo trước và sau khi truyền kỳ phụ vương 63 Bảng 3.18. Tỷ lệ (%) tăng lưu lượng máu qua động mạch cảnh mèo sau truyền và trước truyền kỳ phụ vương 63 Bảng 3.19. Lượng dịch (ml) chảy ra ở tai thỏ trước và sau khi truyền kỳ phụ vương 64 Bảng 3.20. Tỷ lệ (%) tăng lượng dịch chảy ra ở tai thỏ sau truyền và trước truyền kỳ phụ vương 64 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1. Công thức cấu tạo của aconitin 5 Hình 1.2. Công thức cấu tạo của một số hợp chất trong hoàng kỳ (A.membranaceus, A.membranaceus var. mongholicus) 9 Hình 1.3. Công thức cấu tạo của một số saponin trong hồng kỳ (H.polybotrys) 14 Hình 3.1. Ảnh chụp rễ phụ tử (A.carmichaeli) 36 Hình 3.2. Đặc điểm vi học bột phụ tử 36 Hình 3.3. Ảnh chụp rễ hoàng kỳ đối chiếu (HK1) (A.membranaceus, A.membranaceus var. mongholicus) 38 Hình 3.4. Ảnh chụp rễ hoàng kỳ nghiên cứu (HK2) (H.polybotrys) 38 Hình 3.5. Đặc điểm vi học bột hoàng kỳ đối chiếu (HK1) 40 Hình 3.6. Đặc điểm vi học bột hoàng kỳ nghiên cứu (HK2) 40 Hình 3.7. Sắc ký đồ flavonoid của hoàng kỳ dưới ánh sáng tử ngoại 42 Hình 3.8. Sắc ký đồ saponin của hoàng kỳ dưới ánh sáng khả kiến 44 Hình 3.9. Sắc kí đồ alkaloid của cao đặc kỳ phụ vương, phụ tử 48 Hình 3.10. Sắc kí đồ flavonoid của hoàng kỳ HK2 và cao kỳ phụ 50 Hình 3.11. Phổ hấp thụ UV của alkaloid phụ tử, cao đặc kỳ phụ vương 51 Hình 3.12. Đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa độ hấp thụ quang và nồng độ của dung dịch rutin 53 [...]... tuần hoàn não Vì vậy, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài Nghiên cứu một số tác dụng và xây dựng tiêu chuẩn của cao đặc bài thuốc kỳ phụ vương theo hướng cải thiện tuần hoàn não với các mục tiêu: 1 Bào chế và xây dựng được tiêu chuẩn chất lượng cao đặc kỳ phụ vương 2 Khảo sát một số tác dụng dược lý của cao đặc kỳ phụ vương 1 Chƣơng 1 TỔNG QUAN 1.1 Thiểu năng tuần hoàn não Thiểu năng tuần hoàn não. .. tế bào tim do adriamycin [75], [76] Như vậy, các nghiên cứu dược lý đã công bố về tác dụng cải thiện miễn dịch, chống viêm và bảo vệ tim của phương thuốc kỳ phụ, và chưa có 16 công bố nào đề cập đến vấn đề nghiên cứu tác dụng của phương thuốc kỳ phụ theo hướng cải thiện tuần hoàn não 1.3 Xây dựng tiêu chuẩn chất lƣợng cao thuốc 1.3.1 Khái niệm * Cao thuốc là chế phẩm điều chế bằng cách cô hoặc sấy... lượng và hiệu quả của các đối tượng này Tiêu chuẩn do một tổ chức công bố dưới dạng văn bản để tự nguyện áp dụng - Hệ thống tiêu chuẩn và ký hiệu tiêu chuẩn Hệ thống tiêu chuẩn và ký hiệu tiêu chuẩn của Việt Nam bao gồm + Tiêu chuẩn quốc gia, ký hiệu TCVN + Tiêu chuẩn cơ sở, ký hiệu TCCS 17 - Căn cứ xây dựng tiêu chuẩn Tiêu chuẩn được xây dựng dựa trên một hoặc những căn cứ sau: + Tiêu chuẩn quốc tế, tiêu. ..ĐẶT VẤN ĐỀ Kỳ phụ vương là bài thuốc có xuất xứ từ cổ phương gồm phụ tử và hoàng kỳ [15] được Công ty Cổ phần Phùng Gia Phương đề xuất nghiên cứu sản phẩm theo hướng trị thiểu năng tuần hoàn não Phụ tử có tác dụng bổ hoả, hồi dương cứu nghịch; hoàng kỳ có tác dụng bổ khí, thăng dương khí [14], [15], [22], [42], [55] Các nghiên cứu dược lý hiện đại đã chứng minh, phụ tử có tác dụng cường tim, giãn... ứng dụng trong điều trị thiểu năng tuần hoàn não - một bệnh lý có cơ chế bệnh sinh là thiếu máu nuôi não Trên thế giới, nhiều nghiên cứu đã công bố về tác dụng của nước sắc kỳ phụ như tác dụng tăng cường miễn dịch, chống lão suy [24], [25], [26], [28], bảo vệ tim [75], [76], chống viêm [36] Tuy nhiên chưa có công bố nào đề cập đến vấn đề nghiên cứu sử dụng phương thuốc kỳ phụ theo hướng cải thiện tuần. .. mạch ngoại vi, cải thiện tuần hoàn toàn thân, chống viêm, giảm đau, hạ đường huyết [4], [14], [17]; hoàng kỳ có tác dụng cường tim, giãn mạch ngoại vi và mạch vành, cải thiện miễn dịch, tăng cường sức đề kháng của cơ thể, bảo vệ gan, hạ đường huyết [14], [18], [22], [42] Một số nghiên cứu trong nước đã chứng minh một số dược liệu có tác dụng cải thiện tình trạng thiếu máu lên não như phụ tử, đan sâm... tạo của một số saponin và flavonoid trong hoàng kỳ được trình bày ở hình 1.2 (trang 9) 8 Hình 1.2 Công thức cấu tạo của một số hợp chất trong hoàng kỳ (A.membranaceus, A.membranaceus var mongholicus) 9 c Tác dụng dƣợc lý * Tác dụng trên tim, mạch và huyết áp - Cao chiết ethanol hoàng kỳ cường tim cóc cô lập, tăng co bóp và biên độ co của tim ếch cô lập Saponin hoàng kỳ làm tăng sức co cơ tim cô lập của. .. (Dilpavan), cao bạch quả Ginkgo biloba (Tanakan- Ipsen) + Coumarin: proviamin (Vibeline) + Alkaloid: papaverin và dẫn chất (Kaldil), Rauvolfia (raubasine), nấm cựa gà (ergotamin) - Các chất khác: Agyrax, Suloctidil … [10], [11] 1.2 Bài thuốc kỳ phụ vƣơng Bài thuốc kỳ phụ vương gồm phụ tử và hoàng kỳ - Hoàng kỳ vị ngọt, tính ấm, có tác dụng tăng cường vệ khí; phụ tử vị cay, tính nhiệt có tác dụng làm ấm và mạnh... chất lượng của cao thuốc chiết xuất từ hai dược liệu trên cũng chưa có nghiên cứu nào được công bố 20 Chƣơng 2 NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, trang thiết bị 2.1.1 Nguyên liệu - Dược liệu đối chiếu: Hoàng kỳ HK1 (Hoàng kỳ đối chiếu) do Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương cung cấp - Dược liệu nghiên cứu: Hoàng kỳ HK2 (Hồng kỳ, hoàng kỳ nghiên cứu) , phụ tử do... chuyên luận và hơn 220 phương pháp định tính và định lượng chung, trong đó cũng có khoảng 40 chuyên luận đưa ra tiêu chuẩn về các loại cao khô và sản phẩm từ dược liệu, trong đó có hơn 20 chuyên luận đưa ra tiêu chuẩn của các cao khô từ dược liệu [66] Như vậy, hiện nay, trên thế giới cũng như ở Việt Nam, đã có nghiên cứu công bố về tiêu chuẩn của cao khô phụ tử, cao khô hoàng kỳ, tuy nhiên tiêu chuẩn chất . tình của các thầy cô, gia đình và bạn bè, tôi đã hoàn thành luận văn: Nghiên cứu một số tác dụng và xây dựng tiêu chuẩn của cao đặc bài thuốc kỳ phụ vương theo hướng cải thiện tuần hoàn não nghiên cứu sử dụng phương thuốc kỳ phụ theo hướng cải thiện tuần hoàn não. Vì vậy, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài Nghiên cứu một số tác dụng và xây dựng tiêu chuẩn của cao đặc bài thuốc. kỳ phụ vương theo hướng cải thiện tuần hoàn não với các mục tiêu: 1. Bào chế và xây dựng được tiêu chuẩn chất lượng cao đặc kỳ phụ vương. 2. Khảo sát một số tác dụng dược lý của cao đặc kỳ