c. Tác dụng sinh học
2.2.2.2. Định tính bằng sắc ký lớp mỏng
Sử dụng bản mỏng silicagel 60F254 dày 0,25mm đã hoạt hoá ở 1100C
trong 1 giờ.
* Định tính alkaloid trong phụ tử, cao thuốc và xác định giới hạn aconitin trong cao thuốc:
- Dung dịch thử: Cân 5 g dược liệu hoặc một lượng cao thuốc tương đương, thêm 2 ml amoniac đậm đặc, để yên 20 phút, thêm 30 ml chloroform, lắc trong 30 phút. Thu lấy dịch chiết, lọc qua giấy lọc, cô đuổi dung môi. Cắn còn lại hòa trong 2 ml methanol làm dung dịch thử.
26
- Hệ dung môi khai triển: Chloroform : Aceton : Acid formic (18: 5.5: 3). - Hiện màu: thuốc thử Dragendorff, quan sát ở ánh sáng thường [5], [69].
* Định tính saponin trong hoàng kỳ:
- Dung dịch thử: Cân 3 g dược liệu, thêm 20 ml ethanol, siêu âm 30 phút, lọc. Thêm tiếp vào bã 20 ml ethanol, siêu âm 30 phút, lọc. Làm như vậy 2 lần, gộp dịch lọc. Bốc hơi dịch lọc trên cách thủy tới khô. Hòa tan cắn trong 25 ml nước rồi lần lượt chiết với 15, 10, 10 ml n-butanol đã bão hòa với nước. Gộp các dịch chiết n-butanol lại, bốc hơi trên cách thủy tới khô. Cắn được hòa tan trong 2 ml methanol làm dịch chấm sắc ký.
- Dung dịch chất đối chiếu: Astragalosid IV 0,5 mg/ml methanol. - Hệ dung môi khai triển: CHCl3 : CH3OH : H2O (65 : 35 : 10).
- Hiện màu: dung dịch H2SO4 10% / ethanol, quan sát ở ánh sáng thường [23],
[69].
* Định tính flavonoid trong hoàng kỳ và cao thuốc:
- Dung dịch thử: Cân 2 g dược liệu, hoặc lượng cao thuốc tương đương, thêm 30 ml ethanol, đun sôi hồi lưu 20 phút, lọc. Bốc hơi dịch lọc trên cách thủy tới khô. Cắn được hòa tan trong 15 ml dung dịch NaOH 0,3 %, lọc. Điều chỉnh pH bằng dung dịch HCl 2N tới pH 5-6. Dịch này được lắc với 15 ml ethylacetat. Gạn lấy lớp ethylacetat. Lọc dịch chiết qua giấy lọc có sẵn một ít Na2SO4 khan. Bốc hơi dịch lọc trên cách thủy tới khô. Cắn được hòa tan trong 1 ml ethyl acetat làm dịch chấm sắc ký.
- Hệ dung môi khai triển: Chloroform : Methanol (10 : 1) - Phát hiện: hơi amoniac, bước sóng 254 nm và 366 nm [55].