c. Tác dụng sinh học
3.3.2.2. Định tính flavonoid trong cao đặc kỳ phụ vƣơng
- Mẫu nghiên cứu: hoàng kỳ nghiên cứu (HK2) và cao đặc kỳ phụ vương - Dung dịch thử: Cân 2 g hoàng kỳ HK2, 1,2 g cao đặc kỳ phụ vương, thêm 30 ml ethanol, đun sôi hồi lưu 20 phút, lọc. Bốc hơi dịch lọc trên cách thủy tới khô. Cắn được hòa tan trong 15 ml dung dịch NaOH 0,3 %, lọc. Điều chỉnh pH bằng dung dịch HCl 2N tới pH 5-6. Dịch này được lắc với 15 ml ethylacetat. Gạn lấy lớp ethylacetat. Lọc dịch chiết qua giấy lọc có sẵn một ít Na2SO4 khan. Bốc hơi dịch lọc trên cách thủy tới khô. Cắn được hòa tan trong 1 ml ethyl acetat làm dịch chấm sắc ký.
- Hệ dung môi khai triển: Chloroform : Methanol (10 : 1)
- Phát hiện: hơi amoniac, bước sóng 254 nm và 366 nm
Sắc ký đồ được trình bày ở hình 3.10, giá trị Rf được trình bày ở bảng 3.6. (trang 50).
- Nhận xét: Trên sắc kí đồ flavonoid của cao đặc kỳ phụ vương có 5 vết, hoàng kỳ (HK2) có 7 vết. Sắc kí đồ của cao có 5 vết Rf tương đương với của hoàng kỳ.
50
A. B.
Hình 3.10. Sắc kí đồ flavonoid của hoàng kỳ HK2 và cao đặc kỳ phụ vương (HK2 (hoàng kỳ), Cao (cao đặc kỳ phụ vương),
A. (UV = 254nm), B. (UV = 366nm))
Bảng 3.6. Giá trị Rf sắc ký đồ flavonoid của hoàng kỳ HK2 và cao đặc kỳ phụ vương
Vết Rf
Màu sắc Mẫu nghiên cứu
UV = 254nm UV = 366nm HK2 Cao đặc KPV 1 0,06 đen xanh + + 2 0,20 xanh + + 3 0.26 đen + - 4 0,34 xanh + + 5 0,40 đen xanh + - 6 0,50 Xanh + + 7 0,56 đen xanh + + 3.3.3. Định tính bằng quang phổ hấp thụ tử ngoại
* Định tính alkaloid trong cao đặc kỳ phụ vương và phụ tử
51
- Tiến hành: Cân 5 g phụ tử, 10 g cao đặc kỳ phụ vương. Thêm 30 ml chloroform và 5 ml dung dịch amoniac, lắc trong 20 phút, lọc. Dịch lọc cho
vào bình gạn, thêm 20 ml dung dịch H2SO4 0,5 N, lắc mạnh, để yên cho tách
lớp, gạn lấy dịch acid. Lấy 1 ml dịch chiết acid pha loãng đến vừa đủ 10 ml, đem đi quét phổ hấp thụ tử ngoại. Quét phổ hấp thụ tử ngoại của các dung dịch từ bước sóng 200 nm đến 400 nm.
- Kết quả quét phổ hấp thụ UV của phụ tử và cao đặc kỳ phụ vương được trình bày ở hình 3.11:
A. B.
Hình 3.11. Phổ hấp thụ UV của alkaloid phụ tử, cao đặc kỳ phụ vương (A. (phụ tử), B. (cao đặc kỳ phụ vương))
- Nhận xét: Phổ tử ngoại của phụ tử có 1 cực đại hấp thụ ở bước sóng 231 nm, cao đặc kỳ phụ vương có 2 cực đại hấp thụ ở bước sóng 231 nm và 274 nm.